CN114280296A - 一种新型冠状病毒（2019-nCOV）IgG/IgM抗体检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种新型冠状病毒(2019‑nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，所述试纸条包括：样品垫、结合垫1、结合垫2、硝酸纤维素膜、吸水垫以及底衬；所述N蛋白‑示踪粒子复合物的标记过程包括：将N蛋白与酪蛋白钠混匀后再加入胶体金溶液中；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线T2、检测线T1以及质控线C，所述检测线T2上包被鼠抗人IgM单克隆抗体，所述检测线T1上包被鼠抗人IgG单克隆抗体，所述质控线上包被羊抗鸡IgY抗体。本发明在胶体金与N蛋白标记过程中，通过将N蛋白与酪蛋白钠提前混匀后再加入胶体金溶液中，解决了N蛋白与胶体金溶液标记容易出现聚沉死金现象的问题，同时显著提升了试纸条的检测性能。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
胶体金免疫层析技术(Gold immunichromatogra-phy assay,GICA)是一种将胶体金标记技术、免疫检测技术和层析和层析分析技术等多种方法有机结合在一起的固相标记免疫检测技术。它的原理是：以条状纤维层析材料为固相，通过毛细作用使样品中的待测物与层析材料上针对待测物的受体(抗原或抗体)发生高特异性、高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的一定区域(检测带)，运用可目测的标记物(胶体金)而得到直管的实验现象(显色)。而有力标记物则越过检测带，与结合标记物自动分离。这种分析技术具有操作简单快速，可单份测定，无须特殊仪器等优点，适合于各级医疗单位使用，亦可用于家庭成员的诊断、保健、体检等方面。
胶体金可以和蛋白质等各种生物大分子结合，胶体金颗粒带有一层表面阴性电荷，与蛋白质表面的阳性电荷通过静电感应吸附，因此，环境pH和离子强度是影响吸附的主要因素，其他如胶体金颗粒的大小、蛋白质分子量及蛋白质浓度等也会影响蛋白质吸附。虽然对于大部分蛋白质来说，能够较容易和胶体金结合吸附，但仍然存在部分蛋白质在加入胶体金溶液后出现死金的现象(例如新冠病毒N蛋白)。通常这种情况，会先调整胶体金pH，如果不能改善，则对蛋白质进行简单处理，如稀释、透析等。但对于一些蛋白质，尤其价格昂贵的原料，蛋白质的处理往往会带来较大的损失，或者蛋白质的量很少，不足以进行一次处理。这个时候需要一种有效的解决办法。
发明内容
本发明通过在胶体金与标记蛋白的标记过程中加入适量酪蛋白酸钠，可以有效解决因电荷作用造成的聚沉死金等异常现象，同时通过调节pH值保证了蛋白具有较高的标记效率，显著提升了试纸条的检测性能(包括稳定性、灵敏度以及特异性)。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术手段：一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试纸条以及稀释液，所述试纸条包括：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及底衬，所述样品垫、结合垫1、结合垫2、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次搭接粘贴在所述底衬上；所述标记垫1上包被有RBD蛋白-示踪粒子复合物，所述标记垫2上包被有N蛋白-示踪粒子复合物；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线T2、检测线T1以及质控线C。
优选地，所述示踪粒子为胶体金。
优选地，所述N蛋白-胶体金的标记过程包括：将N蛋白与酪蛋白钠混匀后再加入胶体金溶液中，所述N蛋白与酪蛋白钠的质量比为1.25-5。
优选地，所述胶体金溶液的pH为7.0-9.0，优选为8.0。
优选地，所述检测线T2上包被鼠抗人IgM单克隆抗体，所述检测线T1上包被鼠抗人IgG单克隆抗体，所述质控线上包被羊抗鸡IgY抗体。
优选地，所述稀释液包括0.2-2.0g/L的缓冲液、0.2-10g/L盐离子、1-2g/L的防腐剂；所述缓冲液选自十二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、MOPS、Tris缓冲液中的至少一种，优选为十二水磷酸氢二钠以及磷酸二氢钾的组合；所述盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，优选为氯化钠以及氯化钾的组合；所述防腐剂选自叠氮钠或Proclin-300中的至少一种，优选为Proclin-300。
一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)结合垫1的处理
将RBD蛋白加入胶体金溶液1中，标记10-30min后，加入2-10％封闭剂，搅拌10-30min后，10000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀以胶体金标记复溶液恢复体积，得到RBD蛋白金标复合物，4℃保存；
将上述RBD蛋白金标复合物以OD20-OD50的浓度包被于结合垫1上，随后冷冻干燥处理，即得结合垫1；
(2)结合垫2的处理
将N蛋白与酪蛋白钠混匀后，加入胶体金溶液2中，标记10-30min后，加入2-10％封闭剂，搅拌10-30min后，10000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀以胶体金标记复溶液恢复体积，得到N蛋白金标复合物，4℃保存；
将上述N蛋白金标复合物以OD10-OD40的浓度包被与结合垫2上，随后冷冻干燥处理，即得结合垫2；
(3)硝酸纤维素膜的处理：
在硝酸纤维素膜上包被检测线T2、检测线T1以及质控线C后进行干燥处理：
a.检测线T2的制备
将鼠抗人IgM单克隆抗体以1.0-3.0ul/cm喷涂于硝酸纤维素膜上靠近样本垫端；
b.T1检测线的制备：
将的鼠抗人IgG单克隆抗体以1.0-3.0ul/cm包被于T2检测线侧方，且远离样品垫端；；
d.C质控线的制备：
将的羊抗鸡IgY抗体溶液以1.0-3.0ul/cm包被于T1检测线侧方，且远离样品垫端；
(4)组装：
在底衬上依次粘贴样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，切成3-5mm宽的试纸条。
优选地，在步骤(1)中，所述N蛋白与酪蛋白钠的质量比为1.25-5；在步骤(1)以及步骤(2)中，所述胶体金溶液1的pH值为6.0-8.0，优选为7.0；所述胶体金溶液2的pH值为7.0-9.0，优选为8.0。
优选地，所述胶体金标记复溶液的组分包括：20-50mmol/缓冲液、1-10g/蛋白、10-20g/L表面活性剂、20-60g/L保护剂、大分子物质0.1-0.5g/L、1-2.0g/L防腐剂；所述缓冲液选自甘氨酸、Tris缓冲液、MOPS缓冲液中的至少一种；所述蛋白选自酪蛋白或BSA中的至少一种，优选为酪蛋白和BSA的组合；所述表面活性剂选自Tween-80、Tween-20、Triton X-100或A90中的至少一种；所述大分子物质选自PVP、PEG或PVA中的至少一种；所述防腐剂选自叠氮钠或Proclin-300中的至少一种。
一种用于免疫层析试剂的胶体金与待标记物质的标记方法，其特征在于，所述标记方法中包括将待标记物质与酪蛋白钠混匀后加入胶体金溶液中的步骤。
本发明的有益效果在于：本发明通过将新冠病毒N蛋白与酪蛋白钠提前混匀后再加入胶体金溶液中的这种方式，有效解决了新冠病毒N蛋白与胶体金颗粒标记困难，且标记过程中极易出现聚沉死金等异常现象的问题，同时通过调节胶体金溶液的pH至特定范围以及配合本发明的试剂制备体系，可以有效提升试剂的各项检测性能，充分满足临床检测需求。
附图说明
图1为本发明试纸条的结构示意图。
附图标记为：
1-PVC底板；1-样品垫；3-结合垫1；4-结合垫2；5-硝酸纤维素膜；6-吸水纸；7-检测线T2；8-检测线T1；9-质控线C。
具体实施例
本文包括以下的实施例，用于以例证的方式更清楚、明确地阐述本发明的技术方案。本领域技术人员根据本文的公开应当理解，可以在所公开的特定的实施方式中进行许多改变但是仍然获得相似或类似的结果，而不偏离本发明的思想和范围。本发明的具体实施方式仅用于解释本发明，而非意图通过任何方式限制本发明。
实施例1新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒(胶体金法)的制备方法
(1)稀释液的制备
按照下述配方进行配置，充分搅拌混匀后，放于2-8℃保存。
(2)胶体金标记复溶液的制备
按照下述配方进行配置，充分搅拌混匀后，放于2-8℃保存。
(3)胶体金-抗体复合物的制备
取1ml胶体金，用0.2mol/L的K2CO3溶液调节胶体金的pH至7.4，将标记用RBD抗原20ug加入到调整pH后的胶体金中，标记20分钟，加入30ul 5％酪蛋白钠，封闭搅拌20分钟，随后10000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀以胶体金标记复溶液恢复体积，得到RBD蛋白金标复合物，4℃保存。
取1ml胶体金，用0.1mol/L的NaOH溶液调节胶体金的pH至8.0，将标记用N蛋白抗原20ug和1ul 5％酪蛋白钠混匀后加入到调整pH后的胶体金溶液中，标记20分钟，加入30ul5％酪蛋白钠，封闭搅拌20分钟，随后10000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀以胶体金标记复溶液恢复体积，得到N蛋白金标复合物，4℃保存。
(4)结合垫垫的制备
将纯化的RBD蛋白金标复合物稀释后浓度为OD30时包被于玻纤垫上置于冷冻干燥机处理，制得结合垫1；
将纯化的N蛋白金标复合物稀释后浓度为OD15时包被于玻纤垫上置于冷冻干燥机处理，制得结合垫2。
(5)免疫层析试纸条的组装
a.硝酸纤维素膜的处理
将1.0mg/ml的鼠抗人IgG单克隆抗体以1.0ul/cm的速度喷点于硝酸纤维素膜上作为第一检测线T1，将1.0mg/ml的鼠抗人IgM单克隆抗体以1.0ul/cm的速度喷点于硝酸纤维素膜上作为第二检测线T2，将0.5mg/ml的羊抗鸡IgY抗体溶液以1.0ul/cm的速度喷点于硝酸纤维素膜上作为质控线C，置于干燥箱内45℃烘干24h。其中第二检测线T2在硝酸纤维素膜上靠近金标垫端，质控线C位于靠近吸水垫端，第一检测线T1位于第二检测线以及质控线之间。
b.试纸条组装
将样品垫、结合垫1、结合垫2、包被好抗体的硝酸纤维素膜及吸水垫按顺序依次粘贴于PVC底板上(如附图1所示)，将贴好的中间物用斩切机切成3.7mm宽一条的试纸条，并组装进试纸条卡盒，即得成品试纸条。
实施例3试纸条的使用方法
1.将待测样本与稀释液混匀后备用；
2.向检测卡的加样孔中滴入2滴(越80ul)稀释后样本
3.在5-15min后观察结果。
实施例4试纸条性能验证
为验证本发明试纸条的各项性能，共设置两组试剂盒进行性能验证：
A组：本发明实施例1所述试纸条；
B组：市售试剂盒I
C组：市售试剂盒II
其中A组试纸条按照实施例2所述的使用方法进行测试，B组以及C组按照其说明书进行测试。
(1)聚沉死金现象的发生
试验结果显示，在A组以及C组试纸条的胶体金与蛋白标记的过程中，A组试纸条未出现胶体金聚沉现象，而C组试纸条出现了明显的胶体金聚沉现象(标记液中肉眼可见深色颗粒状物质)。
(2)临床评价
选取64例临床阳性样本，以及93例临床阴性样本，使用上述三组试纸条分别针对阳性样本以及阴性样本进行检测，检测结果如下表所示：
表1检测试纸条临床性能
*注：临床灵敏度＝(阳性检测数/阳性样本数)％；临床特异性＝(阴性检测数/阴性样本数)％；总符合率＝(正确检测数/总样本数)％。
(3)重复性
使用上述三组试纸条针对1份新型冠状病毒抗体参考品分别进行检测，每组试纸条重复检测10次，其中A组试纸条10次检测结果均为阳性；B组试纸条10次检测结果9次阳性，一次阴性；C组试纸条10次检测结果7次阳性，3次阴性。
(4)稳定性
将上述三组试纸条在37℃下放置0、5、10、15、20、25以及30天时，针对同一样本进行检测，其中A组试纸条在热加速30天内的检测结果均相同，B组试纸条在热加速25天后的检测结果出现偏差，C组试纸条在热加速20天后的检测结果出现偏差。
由上述实验结果可知，四组试纸条的临床灵敏度分别为98.44％、85.94％以及73.44％；临床特异性分别为100％、99％以及97％；总符合率分别为99.36％、93.63％以及87.26％；实验结果说明，本发明实施例1制备得到的试纸条(A组)的检测性能(包括临床符合性、重复性以及稳定性)显著优于B组以及C组试纸条。
实施例5标记过程中添加酪蛋白钠对试纸条性能的影响
为验证胶体金与蛋白标记过程中添加酪蛋白钠对后试纸条性能的影响，设置以下4组试纸条：
A组：本发明实施例1所述试纸条；
B组：所述试纸条制备方法与实施例1的区别仅在于，胶体金与N蛋白标记过程中未添加酪蛋白钠；
C组：所述试纸条制备方法与实施例1的区别在于，胶体金与N蛋白标记过程中未添加酪蛋白钠，添加1ul 5％BSA；
D组：所述试纸条制备方法与实施例1的区别在于，胶体金与N蛋白标记过程中未添加酪蛋白钠，添加1ul 5％PEG20000。
(1)标记过程中聚沉死金
试验结果显示，上述4组试纸条在胶体金与N蛋白标记的过程中，除A组以及C组试纸条外，B组以及D组试纸条均出现了胶体金聚沉现象(标记液中肉眼可见深色颗粒状物质)。
(2)临床评价
选取64例临床阳性样本，以及93例临床阴性样本，使用上述四组试纸条分别针对阳性样本以及阴性样本进行检测，检测结果如下表所示：
表3检测试纸条临床性能
*注：临床灵敏度＝(阳性检测数/阳性样本数)％；临床特异性＝(阴性检测数/阴性样本数)％；总符合率＝(正确检测数/总样本数)％。
由上述实验结果可知，四组试纸条的临床灵敏度分别为100％、45.31％、59.38％以及76.56％；临床特异性分别为100.00％、100％、97.00％以及98.00％；总符合率分别为100％、77.07％、81.53％以及89.17％。实验结果说明，本发明实施例1制备得到的试纸条(A组)的临床符合性显著优于B组、C组以及D组试纸条。根据实验结果，推测酪蛋白钠作为一种蛋白质可能具有干扰静电的作用，同时由于酪蛋白酸钠在溶液中呈分散状态，对金标复合物有排斥作用，使之分散程度增大，从而起到分散胶体金颗粒的骨架作用，维持胶体金的胶体稳定，因此在标记过程中可以采用酪蛋白酸钠来处理电荷作用造成的聚沉死金等异常现象，尤其是对于标记过程中极易出现聚沉死金的待标记物，例如新冠病毒N蛋白，在其与胶体金的标记过程中添加适量的酪蛋白钠，不仅可以有效解决聚沉死金的技术问题，同时显著提升了试剂盒的检测性能，充分满足临床需求。
实施例5标记过程中酪蛋白钠的添加量对试纸条性能的影响
为验证胶体金与N蛋白标记过程中酪蛋白钠的添加量对后续试纸条性能的影响，设置以下4组试纸条：
A组：所述试纸条的制备方法与实施例1的区别仅在于，胶体金与N蛋白标记过程中添加0.1ul 5％酪蛋白钠；
B组：所述试纸条的制备方法与实施例1的区别仅在于，胶体金与N蛋白标记过程中添加0.5ul 5％酪蛋白钠；
C组：所述试纸条的制备方法与实施例1的区别仅在于，胶体金与N蛋白标记过程中添加2ul 5％酪蛋白钠；
D组：所述试纸条的制备方法与实施例1的区别仅在于，胶体金与N蛋白标记过程中添加3ul 5％酪蛋白钠；
(1)标记过程中聚沉死金
试验结果显示，上述4组试纸条在胶体金与N蛋白标记的过程中，除A组试纸条出现微量胶体金聚沉现象外(标记液中肉眼可见深色颗粒状物质)，B组、C组以及D组试纸条均未出现胶体金聚沉现象。
(2)临床评价
选取64例临床阳性样本，以及93例临床阴性样本，使用上述四组试纸条分别针对阳性样本以及阴性样本进行检测，检测结果如下表所示：
表3检测试纸条临床性能
*注：临床灵敏度＝(阳性检测数/阳性样本数)％；临床特异性＝(阴性检测数/阴性样本数)％；总符合率＝(正确检测数/总样本数)％。
由上述实验结果可知，四组试纸条的临床灵敏度分别为67％、98％、100％以及83％；临床特异性分别为97％、100％、100％以及99％；总符合率分别为85％、99％、100％以及92％。实验结果说明，在胶体金与新冠病毒N蛋白标记过程中，酪蛋白钠与新冠病毒N蛋白的质量比在1.25-5范围内时，试纸条的检测性能最好。
实施例6标记过程pH值对试纸条性能的影响
为验证胶体金与N蛋白标记过程中pH值对后续试纸条性能的影响，设置以下5组试纸条：
A组：所述试纸条的制备方法与实施例1的区别仅在于，标记过程胶体金溶液pH值为6.0；
B组：所述试纸条的制备方法与实施例1的区别仅在于，标记过程胶体金溶液pH值为7.0；
C组：所述试纸条的制备方法与实施例1的区别仅在于，标记过程胶体金溶pH值为9.0；
D组：所述试纸条的制备方法与实施例1的区别仅在于，标记过程胶体金溶液pH值为10.0；
(1)标记过程中聚沉死金
试验结果显示，上述4组试纸条在胶体金与蛋白标记的过程中，四组试纸条均未出现胶体金聚沉现象。
(2)临床评价
选取53例完成新冠疫苗注射的阳性样本，119例未接种新冠疫苗的阴性样本，使用上述三组试纸条分别针对阳性样本以及阴性样本进行检测，检测结果如下表所示：
表3检测试纸条临床性能
*注：阳性样本为完成疫苗接种样本；阴性样本为未接种疫苗样本；临床灵敏度＝(阳性检测数/阳性样本数)％；临床特异性＝(阴性检测数/阴性样本数)％；总符合率＝(正确检测数/总样本数)％。
由上述实验结果可知，四组试纸条的临床灵敏度分别为83％、97％、98％以及77％；临床特异性分别为98％、100％、100％以及96％；总符合率分别为92％、99％、99％以及88％。实验结果说明，在N蛋白与胶体金溶液标记过程中，pH值的范围在7.0-9.0内，检测性能最优。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变形。
Claims (10)
1.一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试纸条以及稀释液，所述试纸条包括：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫以及底衬，所述样品垫、结合垫1、结合垫2、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次搭接粘贴在所述底衬上；所述标记垫1上包被有RBD蛋白-示踪粒子复合物，所述标记垫2上包被有N蛋白-示踪粒子复合物；所述硝酸纤维素膜上设置有检测线T2、检测线T1以及质控线C。
2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述示踪粒子为胶体金。
3.根据权利要求2所述的一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述N蛋白-胶体金的标记过程包括：将N蛋白与酪蛋白钠混匀后再加入胶体金溶液中，所述N蛋白与酪蛋白钠的质量比为1.25-5。
4.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金溶液的pH为7.0-9.0，优选为8.0。
5.根据权利要求4所述的一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述检测线T2上包被鼠抗人IgM单克隆抗体，所述检测线T1上包被鼠抗人IgG单克隆抗体，所述质控线上包被羊抗鸡IgY抗体。
6.根据权利要求5所述的一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述稀释液包括0.2-2.0g/L的缓冲液、0.2-10g/L盐离子、1-2g/L的防腐剂；所述缓冲液选自十二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、MOPS、Tris缓冲液中的至少一种，优选为十二水磷酸氢二钠以及磷酸二氢钾的组合；所述盐离子选自氯化钠或氯化钾中的至少一种，优选为氯化钠以及氯化钾的组合；所述防腐剂选自叠氮钠或Proclin-300中的至少一种，优选为Proclin-300。
7.根据权利要求1-5任一项所述的一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)结合垫1的处理
将RBD蛋白加入胶体金溶液1中，标记10-30min后，加入2-10％封闭剂，搅拌10-30min后，10000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀以胶体金标记复溶液恢复体积，得到RBD蛋白金标复合物，4℃保存；
将上述RBD蛋白金标复合物以OD20-OD50的浓度包被于结合垫1上，随后冷冻干燥处理，即得结合垫1；
(2)结合垫2的处理
将N蛋白与酪蛋白钠混匀后，加入胶体金溶液2中，标记10-30min后，加入2-10％封闭剂，搅拌10-30min后，10000rpm，离心20分钟，弃上清，沉淀以胶体金标记复溶液恢复体积，得到N蛋白金标复合物，4℃保存；
将上述N蛋白金标复合物以OD10-OD40的浓度包被与结合垫2上，随后冷冻干燥处理，即得结合垫2；
(3)硝酸纤维素膜的处理：
在硝酸纤维素膜上包被检测线T2、检测线T1以及质控线C后进行干燥处理：
a.检测线T2的制备
将鼠抗人IgM单克隆抗体以1.0-3.0ul/cm喷涂于硝酸纤维素膜上靠近样本垫端；
b.T1检测线的制备：
将的鼠抗人IgG单克隆抗体以1.0-3.0ul/cm包被于T2检测线侧方，且远离样品垫端；；
d.C质控线的制备：
将的羊抗鸡IgY抗体溶液以1.0-3.0ul/cm包被于T1检测线侧方，且远离样品垫端；
(4)组装：
在底衬上依次粘贴样品垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫，切成3-5mm宽的试纸条。
8.根据权利要求7所述的一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述N蛋白与酪蛋白钠的质量比为1.25-5；在步骤(1)以及步骤(2)中，所述胶体金溶液1的pH值为6.0-8.0，优选为7.0；所述胶体金溶液2的pH值为7.0-9.0，优选为8.0。
9.根据权利要求8所述的一种新型冠状病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述胶体金标记复溶液的组分包括：20-50mmol/缓冲液、1-10g/蛋白、10-20g/L表面活性剂、20-60g/L保护剂、大分子物质0.1-0.5g/L、1-2.0g/L防腐剂；所述缓冲液选自甘氨酸、Tris缓冲液、MOPS缓冲液中的至少一种；所述蛋白选自酪蛋白或BSA中的至少一种，优选为酪蛋白和BSA的组合；所述表面活性剂选自Tween-80、Tween-20、TritonX-100或A90中的至少一种；所述大分子物质选自PVP、PEG或PVA中的至少一种；所述防腐剂选自叠氮钠或Proclin-300中的至少一种。
10.一种用于免疫层析试剂的胶体金与待标记物质的标记方法，其特征在于，所述标记方法中包括将待标记物质与酪蛋白钠混匀后加入胶体金溶液中的步骤。
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