CN114174488A - 对细胞培养物的提供 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于提供细胞培养物的方法，该方法具有步骤：将培养基填充到增殖器中；给增殖器中的培养基接种第一细胞培养物；在增殖器中增殖细胞培养物，以便在增殖器中得到期望量的第二细胞培养物，其中，第二细胞培养物具有沉淀份额和悬浮份额；以及有选择地从增殖器的靠下的区域中取出期望量的第二细胞培养物的沉淀份额的一部分和/或从增殖器的靠上的区域中取出期望量的第二细胞培养物的悬浮份额的一部分。

Description

对细胞培养物的提供

技术领域

本发明涉及对细胞培养物的提供，包括在增殖器中增殖细胞培养物和从增殖器取出增殖的细胞培养物。

背景技术

细胞培养物、例如酵母通常在增殖器、也就是罐形式的生物反应器中繁殖(增殖)。通常而言，增殖器配备有循环设备如搅拌工具或者循环泵线路，以便将经接种的培养基混匀。此外，增殖器典型地配备有调温装置，以便对培养基进行消毒和/或在增殖期间设定期望的温度。调温装置可以包括加热和/或冷却面以及外部的热交换器。

现有技术的增殖方法在图1中示出。通过培养基入口2以培养基在图1A示出的示例中从下方填充经清洁的增殖器1并且例如借助所谓的嘉士伯篮3接种先前在实验室中培养的纯细胞培养物、譬如用于啤酒酿造的酵母培养物。借助循环泵4将纯培养物与培养基混匀，并且可以有选择地通过气体入口5导入气体例如空气用于细胞繁殖。通常，在该阶段以培养基对细胞进行1:10至1:100的稀释。一旦在增殖器1中已经达到细胞的期望浓度(在酵母的情况中大约每毫升80至120百万个细胞)，那么进行再次的培养基添补(参见图1B)用于再次进行通常1:10至1:100的稀释，以便阻止(由于酒精和CO₂)抑制产物并且促成进一步的生长。气体输送和循环在此可以恒定地维持或间歇性地使用。重复该过程，直至已经制造出细胞的期望的总量。

因为所使用的搅拌工具或循环设备必须针对于容纳在增殖器中的物质特殊地设计，所以典型地使用较小的预增殖器1和较大的主增殖器6，其中，从预增殖器得到的量被导入到主增殖器6中，在主增殖器中以相同方式实施上面描述的过程(图1C)。最后，可以从下方取出如此得到的细胞培养物(所谓的增殖物)并且例如输送给用于实施发酵的发酵桶。

然而，在不同大小的多个增殖器/同化器中的所描述的传统的多级增殖是相对耗费的。主要是不加区分地将增殖的细胞培养物取出以用于例如在发酵过程中的进一步使用，而没有考虑细胞培养物的不同类型的细胞的特殊特征。

然而，细胞的沉淀行为和絮凝行为根据细胞培养物的寿命和大小分布、其基因的变化性、活性和生存性强烈地变化。而这些行为对于使用所得到的细胞培养物的后续过程例如发酵过程而言是非常重要的。因此，例如在根据所期望的啤酒类型或技术对啤酒麦芽汁进行酦酵的情况中要求所使用的酵母培养物有不同的沉淀行为和絮凝行为。这在用于制造细胞培养物的所描述的传统的过程中未充分地被考虑。

发明内容

本发明的任务在于，对细胞培养物的提供进行简化并且在区分所得到的且待进一步使用的细胞培养物方面进行改善。

上面提到的任务通过用于提供(目标)细胞培养物的方法来解决。该方法包括步骤：

将培养基填充到增殖器(罐)中；

给增殖器中的培养基接种第一细胞培养物(例如以在实验室中制造的纯培养物；例如用于啤酒制造的酵母)；

在增殖器中增殖第一细胞培养物，以便在增殖器中得到期望量的具有(细胞相对于培养基的)期望浓度的第二细胞培养物，其中，第二细胞培养物具有(细胞的)沉淀份额和悬浮份额；和

有选择地从增殖器的靠下的区域取出期望量的第二细胞培养物的沉淀份额的至少一部分和/或从增殖器的靠上的区域取出期望量的第二细胞培养物的悬浮份额的至少一部分，由此提供(作为增殖完成的第一细胞培养物)的(目标)细胞培养物。

在此并且在下文中，术语“增殖器”也包括同化器，即用于培养和繁殖细胞培养物的罐。第二细胞培养物是第一细胞培养物的第n代，其中，n大于二。通过该方法得到的(目标)细胞培养物被准备用于另外的使用，例如在发酵过程中。与现有技术不同，可以在一个且同一个增殖器中制造出被提供用于另外的使用、例如发酵过程的(目标)细胞培养物。然而原则上，通过该方法得到的(目标)细胞培养物也可以被输送给另外的用于另外的增殖的增殖器。

有选择的取出包括：选定应从增殖器的靠上的区域还是靠下的区域取出。选定可以通过具有能控制/能调节的阀的相应的分配站来进行(也参见下面的详细说明)，通过这些阀来控制/调节介质到增殖器中的导入和从增殖器中的导出。在现有技术中没有提供这种选定。因此，根据本发明的方法以有利的方式实现了根据所得到的(目标)细胞培养物的细胞的沉淀行为和絮凝行为有所区分地提供针对另外的使用的(目标)细胞培养物。

在改进方案中，增殖可以包括下面以说明的顺序依次实施的步骤：

1)在增殖器中对第一细胞培养物(经接种的培养基)进行首次增殖，直至达到细胞相对于培养基的第一浓度(并因此得到第一增殖物)；

2)将另外的培养基添补到增殖器中；

3)在增殖器中进行二次增殖，直至细胞相对于培养基的第二浓度(该第二浓度可以等于第一浓度)被达到(并因此得到第二增殖物)；和

4)重复步骤2)和3)直至得到期望量的具有细胞相对于培养基的期望浓度的第二细胞培养物(作为制成的增殖物)。

当已经在提到的二次增殖后得到了期望量的具有期望浓度的第二细胞培养物时，不再重复，也就是说必要时可以取消步骤4)。

因此，在此从初始细胞培养物迭代地、优选在一个且同一个增殖器中制造制成的增殖物，从制成的增殖物中可以有选择地取走用于另外过程的(目标)细胞培养物。

增殖器可以具有(靠下的)第一导入/导出部和(中间的)第二导入/导出部，第一导入/导出部具有在增殖器的尤其是靠下的端部区域中的第一开口，第二导入/导出部具有在增殖器的与第一开口相比更接近增殖器的中心布置的区域中的第二开口。因此，第二开口与第一开口相比距离端部区域更远并且尤其是处于在增殖器中形成的细胞培养物沉淀物上方。可以通过第一导入/导出部的第一开口来实现有选择地取出期望量的第二细胞培养物的沉淀份额的一部分并且通过第二导入/导出部的第二开口来实现有选择地取出期望量的第二细胞培养物的悬浮份额的一部分。

尤其地，第一和第二导入/导出部可以平行于增殖器的纵轴线地引导，从而第二导入/导出部比第一导入/导出部更多地延伸到增殖器中。第一和第二导入/导出部可以引导穿过增殖器的底部，在该情况中，第二开口比第一开口更高。

例如，第一开口可以处于增殖器的底部中。此外，第二导入/导出部以管套管的配置方式在第一导入/导出部之内例如同中心地引导。具有各自的开口的不同高度水平的一个或多个另外的导入/导出部也能够以管套管的配置方式引导并用于取出期望量的第二细胞培养物的一部分、尤其是第二细胞培养物的悬浮份额的一部分。

增殖器也可以具备带有第三开口的第三导入/导出部，该第三导入/导出部在第一导入/导出部之内引导并且比第二导入/导出部更多地延伸到增殖器中，并且在这种情况中也可以有选择地通过第二导入/导出部的第二开口和/或第三导入/导出部的第三开口来实现有选择地取出期望量的第二细胞培养物的悬浮份额的一部分。

在增殖之前和/或在增殖期间和/或在增殖之后可以在增殖器的至少一个部分区域中对增殖器的内装物进行至少暂时执行的循环。因此，本方法包括：对(在实际增殖之前)经接种的培养基进行至少暂时的循环，并且/或者在增殖器中进行增殖期间对增殖中的第一细胞培养物进行至少暂时的循环，并且/或者在增殖器的至少一个部分区域中对第二细胞培养物进行至少暂时的循环。

至少暂时的循环可以在此通过与增殖器连接的循环线路(该循环线路处于增殖器外部)并借助接驳在循环线路中的循环泵来进行。尤其地，至少暂时的循环可以通过上面提到的第一导入/导出部、第二导入/导出部和第三导入/导出部中的至少一个导入/导出部来进行。在此，至少暂时的循环可以尤其是为了增殖中的第一细胞培养物在增殖器的靠下的区域中的沉淀或在沉淀后至少暂时地仅在第二导入/导出部(22)的第二开口和第三导入/导出部(23)的第三开口之间的区域中进行，从而尤其是基本上不使通过沉淀产生的或已产生的沉淀物循环。

此外，本方法包括步骤：在增殖期间和/或增殖之后，尤其是通过布置在所提到的循环线路中的锌阳极和/或铜阳极(或电极)，将锌和/或铜输送给培养基/增殖物。此外，能够在增殖之前和/或增殖期间有针对性地例如通过上面提到的第一至第三导入/导出部中的一个导入/导出部添补营养物质和/或促进生长的物质。也可以在增殖之前和/或在增殖期间将空气、氧气、和/或其它气体或气体混合物导入到增殖器中。这可以通过上面提到的与增殖器连接的循环线路和接驳到该循环线路上的空气输送装置来进行。

此外，提供了用于酦酵啤酒麦芽汁的方法，该方法包括步骤：以啤酒麦芽汁填充发酵罐并将根据上面描述的方法之一提供的(目标)细胞培养物送交到发酵罐中。

然后，提供了用于改装传统的增殖器和/或之前用于别的方面的罐的改装方法。该方法是用于改装在端部区域上具有导入/导出部的增殖器和/或之前用于别的方面的罐的方法，该方法包括：将第一另外的导入/导出部并且尤其是额外还将第二另外的导入/导出部穿过导入/导出部地引导到增殖器和/或之前用于别的方面的罐中；并且通过分配站将导入/导出部、第一另外的导入/导出部和尤其是第二另外的导入/导出部联接到其中接驳有循环泵的循环线路上，借助循环泵通过导入/导出部、和/或第一另外的导入/导出部和/或尤其是第二另外的导入/导出部能够使增殖器和/或之前用于别的方面的罐的内装物循环。在此，分配站具有用于打开和关闭不同的导入/导出部的阀。

也提供了一种用于提供细胞培养物的设备，该设备包括增殖器和控制/调节单元，其中，控制/调节单元被构造成用实施根据上面描述的示例之一的方法。

附图说明

接下来根据附图详细阐释本发明另外的特征和示例性的实施形式以及优点。应理解的是：实施形式并不穷尽本发明的范围。此外理解的是：接下来描述的特征中的几个或所有特征也能够以其它方式相互组合。

图1示出根据现有技术的对细胞培养物的制造；

图2示出如其可以使用在根据本发明的方法的实施形式中那样的增殖器；

图3A至3G描绘出根据本发明的用于提供细胞培养物的方法的实施形式。

具体实施方式

本发明涉及用于提供(目标)细胞培养物的方法，其中，使用了用于增殖(繁殖、培养)细胞培养物的增殖器/同化器(罐)。针对具有这种增殖器10的设备的示例在图2中示出。增殖器/同化器10具有锥形地逐渐变细的靠下的区域11，在该靠下的区域中可以有选择地沉淀增殖的细胞培养物。导入/导出部12引导穿过锥尖部并与循环线路13连接，在该循环线路中接入有用于使增殖器10的内装物循环的循环泵14。循环泵14构造成能在速度方面进行调节并且例如是频率受控的。此外，空气输送装置15接驳到循环线路13上，以便能够将空气(或其它气体)导入到增殖器10内部中。空气输送装置15实现或加速了细胞在增殖器10中的生长。在循环线路13中可以布置有用于提高改善细胞生长的锌含量的锌阳极和/或用于脱硫的铜阳极。

此外，增殖器10具有替选于循环线路13地设置的导入/导出部16，该导入/导出部相对于引导穿过锥尖部或也可以布置在尖部本身中的导入/导出部12的开口更高地布置并且尤其是处于在增殖器中形成的细胞培养物沉淀物的上方。在图2示出的示例中，另外的导入/导出部16在侧向终止于罐内。替选地，另外的导入/导出部16在引导穿过锥尖部的导入/导出部12之内延伸并且比该导入/导出部更靠上地通入到增殖器10中(也参见接下来对图3A至3G的描述)。此外，增殖器10可以具有尤其是用于冷却的调温装置。

根据本发明，通过有选择地经由导入/导出部12或导入/导出部16取走在增殖器10中制造的细胞培养物来提供(目标)细胞培养物。因此，为了进一步的使用，例如在发酵过程中可以一方面获得细胞培养物的以沉积细胞为特征的份额，并且另一方面获得细胞培养物的以悬浮细胞为特征的份额。

当然，也可以获得具有所期望的混合比例的不同沉淀行为和悬浮或絮凝行为的细胞的混合物。因为在装填最终产品之前通常对细胞进行分离(过滤)，或者酦酵在过快沉降的情况中被强烈减缓，所以絮凝行为和沉淀行为是用于发酵的细胞培养物的重要的品质参数。

尤其地，增殖器10可以用于啤酒制造。对于特定的啤酒类型和与此相协调的技术而言，例如群体性的“粉末状特点”(也就是说尽可能高份额的悬浮细胞)是优选的，以便例如借助离心分离使均匀的悬浮液变清澈并减少由于传统的从下方收获酵母所导致的啤酒损失。而在其它啤酒类型的情况下致力于使培养物在酦酵之后尽可能快速且完全地沉淀，以便例如能够从下方尽可能完全地从罐收获酵母并也由此简化了接在积存之后的硅藻土或薄膜过滤。

细胞的沉降行为在基因方面受到所使用的菌株、培养基组成、细胞大小、寿命分布以及培养物的活性和生存性影响，因此重复使用的次数应与(增殖酵母与收获酵母的)混合比例彼此相协调。此外，当然应使用尽可能多的具有所期望的沉降特性的酵母细胞来制作啤酒麦芽汁。这些上面提到的条件可以在根据本发明的方法中在使用例如图2中示出的设备的情况下被考虑到，而这在现有技术中迄今为止是不可能的。

接下来参照图3A至3G描述根据本发明的用于提供例如发酵过程(如酦酵啤酒麦芽汁)的(目标)细胞培养物的方法的实施形式。

在图3A至3G示出的方法中使用了具有增殖器20的设备，该增殖器的特征在于其具有多个、在该情况中三个导入/导出部(流入部/流出部)21、22和23。三个导入/导出部21、22和23以管套管的配置方式提供，在该配置中，中间的导入/导出部22和靠上的导入/导出部23(例如同中心地)延伸穿过靠下的导入/导出部21。靠下的导入/导出部21具有增殖器20中靠下的、尤其是锥尖部中的开口，中间的导入/导出部22以可选的方式具有合适的几何形状的挤压体(例如以双锥形状安设在中间的导入/导出部22上)以及在靠下的导入/导出部21的开口上方的开口，并且靠上的导入/导出部23具有在中间的导入/导出部22的开口上方的开口。因此，中间的导入/导出部22比靠下的导入/导出部21更多地延伸到增殖器20中，并且靠上的导入/导出部23比中间的导入/导出部22更多地延伸到增殖器20中。在其它实施形式中，导入/导出部可以从上面或者侧向地到达增殖器中。

介质流入到增殖器20中或介质从增殖器20流出通过分配站24来调节或控制。在此，经靠下的导入/导出部21的流入/流出通过分配站24的阀***24a来调节或控制，经中间的导入/导出部22的流入/流出通过分配站24的阀***24b来调节或控制，经靠上的导入/导出部23的流入/流出通过分配站24的阀***24c来调节或控制。此外，增殖器20可以具有尤其是用于冷却的调温装置，其中，附加或替选地也可以在循环线路25中设置用于加温和/或冷却的外部的热交换器。

分配站24将导入/导出部21、22和23与循环线路25连接起来，循环泵26接入到该循环线路中。此外，在循环线路25中可以布置有用于根据需求提高锌含量的锌阳极(电极)和/或用于根据需求进行脱硫的铜阳极(电极)。循环泵26构造为能在速度方面进行调节并且例如是频率受控的。此外，样本取样站27、测量技术站28和调节/控制站29设置在循环线路25中或接驳到循环线路上。测量技术站28可以例如用于确定提取含量(浓度)、细胞数量(例如借助浊度测量或电容式测量)、PH值、液位、温度、电导率、氧气/CO₂计量等。

通过具有阀30的过程接驳部和靠下的导入/导出部21将培养基导入到增殖器20中。

培养基可以被设计成没有外来有机物的啤酒麦芽汁，理想情况下足够地具有营养物质和生长物质以及具有能使用的糖，并且具有在接种时10～28℃的温度和在6～20°P之间的原麦汁浓度。在缺乏营养物质和生长物质的情况中，可以将营养物质和生长物质有选择地输送给培养基，其中，根据本发明也借助将电压施加在相应的电极上来根据需求地实现锌富集和/或铜富集。

在此，分配站24的所有的阀24a、24b和24c都可以打开，以便使导入的培养基的流动速度保持得很小(参见图3A)。在此并且在下文中通过实心的阀图标来表示打开的阀状态并通过空心的阀图标来表示关闭的阀状态。介质的流动方向在此并在下文中通过箭头来表示。在图3A示出的示例中，导入培养基直至如下料位：该料位处于中间的导入/导出部22的开口的高度水平的上方。在其它示例中，料位也可以处于其下方。

此外，空气输送装置31、用于输送初始细胞培养物的接种部位32和为了丢弃介质而使能与沟槽连接的线路打开的阀33处于循环线路25中或接驳在循环线路上。

为了开始细胞培养物的首次增殖，如在图3B中所示，具有有机培养物(初始细胞培养物)、例如初始酵母细胞培养物的培养基经由接种部位32和靠下的流入/流出部21被注入并且如此得到的介质至少在时间间隔后借助循环泵26循环并经由空气输送装置31至少暂时地被通气，用以实现有氧式的细胞生长。

可选的挤压体在循环进程的情况中在增殖器20中用作控制介质流动的流动打断件和流动转向件。注入可以利用所谓的嘉士伯篮34和/或利用替选的经处理的培养物(例如喷雾干燥的、抽吸过滤的、固态或液态富集的和/或先前冷冻的培养物)来进行。如果期望的话，能够选择循环泵的压力侧的不同的阀24a、24b、24c并因此选择流入/流出部21、22、23，以便即使在不涉及中间的流入/流出部22和/或靠上的流入/流出部23的情况下也确保理想的混匀。

当在增殖器20中进行首次增殖期间已经达到了细胞培养物的细胞的所期望的浓度、大约每毫升培养基80至120百万个酵母细胞时，那么就经由靠下的导入/导出部21将另外的培养基导入到增殖器20中(参见图3C)，以便实现以培养基将细胞培养物例如稀释到1:10至1:100的范围中，从而能够避免(例如由于提高的酒精含量和CO₂含量以及生长物质的缺少而)抑制产物。再次进行循环和通气。可以通过合适地控制/调节分配站24的阀24a、24b和24c来选择流动方向。

在图3B和3C中示出的过程顺序可以一直被重复，直至在增殖器20中已经制造出期望量的具有培养基中的期望细胞浓度的细胞培养物。在图3D示出的方法状态中示例性示出了循环，其中，靠上的导入/导出部23被用于被循环的介质的流入并因此使全部的容器内装物均匀化。

从一定的时间点起，至少是增殖器20的靠下的区域应不再主动地被穿流，因此在该靠下的区域中不发生介质的循环，从而细胞沉降并富集并且因此可以形成沉淀物S，如在图3E中所示。然而，当期望时，仍可以在中间的导入/导出部22的开口的高度水平和靠上的导入/导出部23的开口的高度水平之间进行循环，以便在那里进一步均匀化，如同样在图3E中所示。在图3E示出的方法状态中示例性示出了循环，其中，靠上的导入/导出部23用于流入被循环的介质。

当在增殖器20中已经制造出期望量的具有培养基中的期望细胞浓度的细胞培养物时，可以通过一个或多个导入/导出部21、22和23有选择地取出该量的某一份额。因此，可以经由靠上的导入/导出部23和/或中间的导入/导出部23取出来自增殖器20的靠上的区域中的悬浮的细胞，如在图3F中所示。取出通过过程接驳部的阀30来进行。值得期望的是，来自锥的富集的培养物的一小部分(大约1％至10％)保留在罐中，该一小部分又用于后续批次的接种。

如此获得的(目标)细胞培养物可以在接下来的过程、例如发酵中使用。例如，如此获得的(目标)酵母细胞培养物可以用于在如下啤酒类型的制造范畴中酦酵啤酒麦芽汁：该啤酒类型需要高份额的具有强烈悬浮倾向的酵母细胞。

对于增殖之后的过程(其中应使用值得期望的具有强烈沉淀倾向的细胞)，如在图3G中所示，通过导入/导出部21来实现从下方取出增殖的细胞培养物。

在此，应留下大约10％至20％的较大的残留体积用于后续批次。通过从下方取出而得到的(目标)细胞培养物不仅具有增强了的沉淀倾向，而且也具有比通过经由靠上的导入/导出部23和/或中间的导入/导出部23取出而得到的(目标)细胞培养物的浓度更高的浓度。因此，也可以有选择地为另外的过程提供不同浓度的(目标)细胞培养物。

在将所得到的(目标)细胞培养物运送至例如用于以酵母细胞添加啤酒麦芽汁的另外的过程时，可以通过运送时间来获知实际的酵母添入量，其方式是：也考虑与大量运送相关的细胞数量(其例如通过浊度来测量)的波动。当混合物具有比通常情况更强烈的浊度时使用更少的酵母，这是因为该浊度表示更高的细胞数量并且酦酵应总是以近似数量的细胞来进行。

为了清洁而完全排空增殖器并且进行传统的CIP过程(在其中，仍会在靠下的罐区域(槽部)中留下介质的一定的部分)，与此同时所有的线路路径(靠下的、中间的和靠上的导入/导出部21、22、23、分配站24和循环线路25)能够以高的流动速度被穿流并因此被清洁。

如上面所述，通过根据本发明的方法尤其实现的是：在一个且同一个增殖器、例如图2中示出的增殖器10或图3A至3G中示出的增殖器20内实施从注入直至取出所制成的待进一步使用的(目标)细胞培养物的过程。可以例如通过合适地控制/调节温度、循环速度、对增殖器20中循环区的选择、通气速率等来合适地设定增殖速度。在增殖之前或期间还可以经由三个导入/导出部21、22、23中的至少一个导入/导出部给增殖器中的介质添补营养物质和/或促进生长的物质。

将电压施加到例如处于循环线路13中的锌电极和/或锰电极上促成了其加速的溶解和电离，从而液体中细胞所需的游离锌/锰的含量提高，并因此造成了培养物的活性提升。

而在铜电极的情况中，铜离子被释放，由此铜离子能够与含硫化合物发生反应并由此导致产品中的硫含量降低。

Claims (15)

1.用于提供细胞培养物的方法，所述方法具有如下步骤：

将培养基填充到增殖器(10、20)中；

给所述增殖器(10、20)中的培养基接种第一细胞培养物；

在所述增殖器(10、20)中增殖第一细胞培养物，以便在所述增殖器(10、20)中得到期望量的具有期望浓度的第二细胞培养物，其中，所述第二细胞培养物具有沉淀份额和悬浮份额；和

有选择地从所述增殖器(10、20)的靠下的区域取出期望量的第二细胞培养物的沉淀份额的至少一部分和/或从所述增殖器(10、20)的靠上的区域取出期望量的第二细胞培养物的悬浮份额的至少一部分。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，增殖包括下面以说明的顺序依次实施的步骤：

1)在所述增殖器(10、20)中对所述第一细胞培养物进行首次增殖，直至达到细胞相对于培养基的第一浓度；

2)将另外的培养基添补到所述增殖器(10、20)中；

3)在所述增殖器(10、20)中进行二次增殖，直至达到细胞相对于培养基的第二浓度，所述第二浓度尤其是能够等于所述第一浓度；和

4)重复步骤2)和3)直至得到期望量的具有细胞相对于培养基的期望浓度的第二细胞培养物。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，

所述增殖器(10、20)具有第一导入/导出部(21)和第二导入/导出部(22)，所述第一导入/导出部具有在所述增殖器(10、20)的尤其是靠下的端部区域中的第一开口，所述第二导入/导出部具有在所述增殖器(10、20)的与所述第一开口相比距离所述增殖器(10、20)的尤其是靠下的端部区域更远布置的区域中的第二开口，并且

其中，通过所述第一导入/导出部(21)的第一开口来实现有选择地取出期望量的第二细胞培养物的沉淀份额的一部分并且通过所述第二导入/导出部(22)的第二开口来实现有选择地取出期望量的第二细胞培养物的悬浮份额的一部分。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述第二导入/导出部(22)在所述第一导入/导出部(21)之内引导。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，

所述增殖器(20)具备带有第三开口的第三导入/导出部(23)，所述第三导入/导出部在所述第一导入/导出部(21)之内引导并且比所述第二导入/导出部(22)更多地延伸到所述增殖器(10、20)中，并且

也通过所述第三导入/导出部(23)的第三开口来有选择地取出期望量的第二细胞培养物的悬浮份额的部分，或者代替通过所述第二导入/导出部(22)的第二开口地通过所述第三导入/导出部(23)的第三开口来实现有选择地取出期望量的第二细胞培养物的悬浮份额的一部分。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：在所述增殖器(10、20)的至少一个部分区域中对经接种的培养基和/或增殖中的第一细胞培养物和/或第二细胞培养物进行至少暂时的循环。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，通过与所述增殖器(10、20)连接的循环线路(13、25)并且借助接驳在所述循环线路中的循环泵(14、26)来进行至少暂时的循环。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，通过第一导入/导出部(21)、第二导入/导出部(22)和第三导入/导出部(23)中的至少一个导入/导出部来进行至少暂时的循环。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，尤其是为了增殖中的细胞培养物在所述增殖器(10、20)的靠下的区域中的沉淀或在沉淀后，至少暂时地仅在所述第二导入/导出部(22)的第二开口和所述第三导入/导出部(23)的第三开口之间的区域中进行至少暂时的循环。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：在增殖期间和/或增殖之后，尤其是通过特别是布置在所述循环线路(13、25)中的锌/锰阳极或者锌/锰电极和/或铜阳极或者铜电极，将锌、锰和/或铜输送给培养基。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：在增殖之前和/或增殖期间将提供营养的物质和/或促进生长的物质输送到所述增殖器(10、20)中。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在增殖之前和/或增殖期间借助接驳到与所述增殖器(10、20)连接的循环线路中的气体/空气输送装置(31)将空气、氧气和/或其它气体/气体混合物输送到所述增殖器(10、20)中。

13.用于酦酵啤酒麦芽汁的方法，所述方法包括：以啤酒麦芽汁填充发酵罐并且将根据前述权利要求中任一项所述的方法提供的细胞培养物送交到所述发酵罐中。

14.用于改装在端部区域上具有导入/导出部的增殖器和/或之前用于别的方面的罐的方法，所述方法包括：将第一另外的导入/导出部并且尤其是额外还将第二另外的导入/导出部穿过所述导入/导出部地引导到所述增殖器和/或之前用于别的方面的罐中；并且通过分配站将所述导入/导出部、所述第一另外的导入/导出部和尤其是所述第二另外的导入/导出部联接到其中接驳有循环泵的循环线路上，借助所述循环泵通过所述导入/导出部和/或所述第一另外的导入/导出部和/或尤其是所述第二另外的导入/导出部能够使所述增殖器和/或之前用于别的方面的罐的内装物循环。

15.用于提供细胞培养物的设备，所述设备包括增殖器(10、20)和控制/调节单元，其中，所述控制/调节单元被构造成用于实施根据权利要求1至13中任一项所述的方法。

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