CN114163543B - 一种玫瑰多糖的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了一种玫瑰多糖的制备方法，包括玫瑰花的破碎、玫瑰花发酵液的制备、玫瑰花发酵液的过滤、玫瑰水溶性多糖的制备、玫瑰碱溶性多糖的制备等步骤。本公开提供了一种玫瑰多糖的应用，即具有抑制乙酰酯酶活性的作用。

Description

一种玫瑰多糖的制备方法及其应用
技术领域
本公开涉及食品加工的技术领域，尤其涉及一种玫瑰多糖的制备方法及其应用。
背景技术
玫瑰花含有丰富的挥发油、多糖、多酚类和黄酮类物质，还含有亚油酸、生物碱、维生素、氨基酸、膳食纤维和微量元素等人体必需的营养成分。玫瑰具有行气解郁、和血、止痛之功效，用于肝胃气痛、食少呕恶、***、跌扑伤痛等。玫瑰具有应用范围广、利用价值高、经济效益好等特点，潜在的市场占有率高，开发潜力巨大。
当前，人们对玫瑰进行发酵主要获取玫瑰酒、玫瑰醋、玫瑰花酱、玫瑰饮料、玫瑰茶、玫瑰花蛋白肽等。但利用微生物发酵制备玫瑰中的多糖、黄酮等有效成分及功效研究少有报道。玫瑰多糖提取技术主要有热水浸提法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、酶法、技术联用等。因多糖类化合物极性大，所以传统方法一般采用水提法制备玫瑰多糖。采用传统的热水提取，多糖得率低，提取效率低，耗时长，且提取玫瑰多糖后，玫瑰残渣被废弃掉，造成了资源的极大浪费。有鉴于此，本发明人研究和设计出了一种玫瑰多糖的制备方法及其应用。
发明内容
针对上述传统方法提取玫瑰多糖的问题，本公开提供了一种玫瑰多糖的制备方法，包括：
步骤一、玫瑰花的破碎：对玫瑰花进行破碎，得到玫瑰花破碎液；
步骤二、玫瑰花发酵液的制备：按玫瑰花破碎液总重量接入0.02～0.04％酿酒酵母，28～30℃发酵48～72h，待酒精度达到5℃后，升温至32℃，接入0.03～0.06％醋酸菌，30～35℃发酵48h后，于35℃接入0.1～0.4％的植物乳杆菌，于35℃～37℃发酵36～72h；得到玫瑰花发酵液；
步骤三、玫瑰花发酵液的过滤：将所述玫瑰花发酵液进行过滤，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B；
步骤四、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％～95％乙醇于所述清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C；按照所述沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖；
步骤五、玫瑰碱溶性多糖的制备：将所述玫瑰花发酵液渣B用碱调整pH至8.0-10.0，经过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％～95％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E；按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
根据实施例的一个优选方式，所述步骤一的具体步骤为：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提15～30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花添加10～30份纯水，水温度为45～90℃；将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
根据实施例的一个优选方式，在所述步骤二中，在接入酿酒酵母前：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min，再将玫瑰破碎液冷却至30℃。
根据实施例的一个优选方式，在所述步骤二中，按破碎液总重量接入0.03％酿酒酵母，28℃发酵48h，待酒精度达到5℃后，升温至32℃，接入0.05％东方醋酸菌YZD-09，35℃发酵48h后，于35℃接入0.3％的植物乳杆菌，于35℃发酵72h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
根据实施例的一个优选方式，所述醋酸菌为东方醋酸菌YZD-09、醋酸杆菌的一种或两种。其中，东方醋酸菌YZD-09采用如发明专利ZL201710005648.1所述的东方醋酸菌YZD-09。
本公开还提供了一种如上所述玫瑰水溶性多糖的应用，所述玫瑰水溶性多糖用于抑制乙酰酯酶活性。
本公开还提供了一种如上所述玫瑰碱溶性多糖的应用，所述玫瑰碱溶性多糖用于抑制乙酰酯酶活性。
采用上述技术方案后，本公开具有以下有益效果：
1、本公开首次提供了一种复合菌发酵玫瑰花制备水溶性多糖和碱溶性多糖的方法，该提取方法较传统方法有以下优势：利用微生物代谢将植物细胞中的有效成分充分释放，可以避免由甲醇、石油醚或乙酸乙酯等有机溶剂因浸提方式带入的有毒有害物质。
2、本公开提供了玫瑰水溶性多糖和玫瑰碱溶性多糖的新应用，制备的玫瑰多糖具有抗乙酰酯酶活性，且发酵后制备的碱溶性多糖比水溶性多糖具有更强的抗乙酰酯酶活性，提示制备的玫瑰多糖具有治疗阿尔茨海默症的潜力。
3、本公开提高了玫瑰原料利用率和玫瑰的利用价值。
附图说明
附图示出了本公开的示例性实施方式，并与其说明一起用于解释本公开的原理，其中包括了这些附图以提供对本公开的进一步理解，并且附图包括在本说明书中并构成本说明书的一部分。
图1是本公开的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图和实施方式对本公开作进一步的详细说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于解释相关内容，而非对本公开的限定。另外还需要说明的是，为了便于描述，附图中仅示出了与本公开相关的部分。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本公开中的实施方式及实施方式中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施方式来详细说明本公开。
本公开提供了一种玫瑰多糖的制备方法，其工艺流程图如图1所示，包括：
步骤一、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提15～30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花添加10～30份纯水，水温度为45～90℃；将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液；
步骤二、玫瑰花发酵液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min，再将玫瑰破碎液冷却至30℃；按玫瑰花破碎液总重量接入0.02～0.04％酿酒酵母，28～30℃发酵48～72h，待酒精度达到5℃后，升温至32℃，接入0.03～0.06％醋酸菌，30～35℃发酵48h后，于35℃接入0.1～0.4％的植物乳杆菌，于35℃～37℃发酵36～72h；得到玫瑰花发酵液；
步骤三、玫瑰花发酵液的过滤：将所述玫瑰花发酵液进行过滤，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B；
步骤四、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％～95％乙醇于所述清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C；按照所述沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖；
步骤五、玫瑰碱溶性多糖的制备：将所述玫瑰花发酵液渣B用碱调整pH至8.0-10.0，经过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％～95％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E；按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
玫瑰花具有理气、活血、美容养颜、收敛等作用，主治***、跌打损伤、肝气胃痛、乳臃肿痛等症。玫瑰花的主要功效成分是玫瑰花多糖，具有抗氧化、降血糖、抗肿瘤等特定的保健功效。近年来对于玫瑰花多糖的提取工艺及其结构、活性已经进行了初步探索，但是对于发酵制取水溶性玫瑰多糖和碱溶性玫瑰多糖的研究还未见报道。本公开利用微生物发酵制备玫瑰活性多糖，微生物可充分利用原料中的物质，根据原材料中的碳源、氮源、无机盐等能被微生物的生长所利用，但微生物不能直接利用多糖，从而能在发酵过程达到对玫瑰多糖的纯化分离及富集的目的。同时微生物发酵可将人体不能直接吸收的高分子物质分解为小分子，可能产生新的活性物质，使有效成分发挥更佳作用，具有减少毒副作用等优点。
本公开还提供了一种如上所述玫瑰水溶性多糖的应用，所述玫瑰水溶性多糖用于抑制乙酰酯酶活性。
本公开还提供了一种如上所述玫瑰碱溶性多糖的应用，所述玫瑰碱溶性多糖用于抑制乙酰酯酶活性。
实施例1：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花发酵液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至30℃，按破碎液总重量接入0.03％酿酒酵母，28℃发酵48h，待酒精度达到5℃后，升温至32℃，接入0.05％东方醋酸菌YZD-09，35℃发酵48h后，于35℃接入0.3％的植物乳杆菌，于35℃发酵72h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
实施例2：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花发酵液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至30℃，按破碎液总重量接入0.03％酿酒酵母，28℃发酵48h，待酒精度达到5℃后，升温至32℃，接入0.05％醋酸杆菌，35℃发酵48h后，于35℃接入0.3％的植物乳杆菌，于35℃发酵72h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
对比例1：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花发酵液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至30℃，按破碎液总重量接入0.03％酿酒酵母，发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
对比例2：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花发酵液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至30℃，按破碎液总重量接入0.03％酿酒酵母，28℃发酵48h，待酒精度达到5℃后，升温至32℃，接入0.05％东方醋酸菌YZD-09，35℃发酵48h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
对比例3：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花破碎液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至30℃，按破碎液总重量接入0.03％酿酒酵母，28℃发酵48h，待酒精度达到5℃后，升温至32℃，接入0.05％醋酸杆菌，35℃发酵48h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
对比例4：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花破碎液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至30℃，按破碎液总重量接入0.05％东方醋酸菌YZD-09，35℃发酵48h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
对比例5：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花破碎液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至30℃，按破碎液总重量接入0.05％醋酸杆菌，35℃发酵48h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
对比例6：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花发酵液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至35℃，接入0.3％的植物乳杆菌，于35℃发酵72h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
对比例7：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花发酵液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至32℃，按破碎液总重量接入0.05％东方醋酸杆菌YZD-09，35℃发酵48h后，于35℃接入0.3％的植物乳杆菌，于35℃发酵72h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
对比例8：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花发酵液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至30℃，按破碎液总重量接入0.05％醋酸杆菌，35℃发酵48h后，于35℃接入0.3％的植物乳杆菌，于35℃发酵72h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
对比例9：一种发酵制取玫瑰多糖的方法
1、玫瑰花的破碎：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花30份纯水，水温度为85℃。将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
2、玫瑰花发酵液的制备：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min。将玫瑰破碎液冷却至30℃，按破碎液总重量接入0.03％酿酒酵母，28℃发酵48h，待酒精度达到5℃后，升温至35℃，接入0.3％的植物乳杆菌，于35℃发酵72h。发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
3、玫瑰花发酵液的过滤：将上述玫瑰花发酵液经碟式分离机处理，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B。
4、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C。按照沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖。
5、玫瑰碱溶性多糖的制备：将玫瑰花发酵液渣用一定浓度的碱调整pH至9.0，经300目滤布过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75％乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E。按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过陶瓷膜过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩5倍后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
将本公开制备的水溶性多糖和碱溶性多糖进行抗乙酰酯酶活性的测定，得到多糖对乙酰胆碱酯酶的半抑制活性IC 50如表1所示：
抗乙酰胆碱酯酶活性的测定：采用改良的Ellman等的分光光度法对玫瑰多糖进行乙酰胆碱酯酶活性抑制研究。方法如下:将样品用纯水溶解稀释至不同质量浓度的样液。整个反应在酶标板中进行，反应体系中各加入20μL样液、120μL 0.1mol/L PBS(pH值8.0)、20μL乙酰胆碱酶(0.64μg/mL)和20μL 75mmol/L ATCI溶液，在37℃保温20min后加入20μL DTNB溶液，室温下避光放置20min后立即在波长410nm处测量吸光度(D样品)。纯水代替样品溶液测得空白值为D空白；PBS代替酶溶液的空白溶液吸光度为D空白本底，PBS代替酶溶液测定样品溶液的吸光度为D样品本底。以氢溴酸加兰他敏为阳性对照，乙酰胆碱酯酶活性抑制率＝[(D空白－D空白本底)－(D样品－D样品本底)]/(D空白－D空白本底)×100％，试验重复3次，求平均值。
表1玫瑰多糖对乙酰酯酶活性半抑制活性IC50(mg/mL)
Figure BDA0003403394320000151
由表1可以看出，碱溶性多糖具有比水溶性多糖更强的乙酰酯酶抑制活性，2种多糖生物活性差的原因可能跟糖醛酸和单糖的质量分数有一定的相关性。由对比例1、对比例6、对比例9可以看出，经酿酒酵母、植物乳杆菌发酵制备的玫瑰多糖比只经酿酒酵母或只经植物乳杆菌发酵制备的玫瑰多糖更强的乙酰酯酶抑制活性。由实施例1、实施例2、实施例3、对比例1～对比例9还可以看出，玫瑰经酿酒酵母、东方醋酸菌和植物乳杆菌发酵后制备的碱溶性多糖具有最强的乙酰酯酶抑制活性，其对乙酰酯酶活性半抑制活性IC50为0.67mg/mL，这可能是由于酿酒酵母首先利用玫瑰纤维质为营养物质，酵母菌内在酶系促进了纤维之间的酯键断裂而发生剥皮反应，使更多的多糖得以游离而释放出，并产生了乙醇，东方醋酸菌利用乙醇和玫瑰中的营养物质发酵产生了更多醋酸，并促进了玫瑰中细胞壁的溶解，使多糖进一步溶出，此后植物乳杆菌利用自身的酶系在生长过程中，对玫瑰多糖进行生物修饰，进一步纯化玫瑰多糖，使得所制备的玫瑰多糖具有更强的乙酰酯酶抑制活性。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例/方式”、“一些实施例/方式”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例/方式或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本申请的至少一个实施例/方式或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例/方式或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例/方式或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例/方式或示例以及不同实施例/方式或示例的特征进行结合和组合。
本领域的技术人员应当理解，上述实施方式仅仅是为了清楚地说明本公开，而并非是对本公开的范围进行限定。对于所属领域的技术人员而言，在上述公开的基础上还可以做出其它变化或变型，并且这些变化或变型仍处于本公开的范围内。

Claims (5)

1.一种玫瑰多糖的制备方法，其特征在于，包括：
步骤一、玫瑰花的破碎：对玫瑰花进行破碎，得到玫瑰花破碎液；
步骤二、玫瑰花发酵液的制备：按所述玫瑰花破碎液总重量接入0.02～0.04%酿酒酵母，28～30℃发酵48～72h，待酒精度达到5°后，升温至32℃，接入0.03～0.06%醋酸菌，30～35℃发酵48h后，于35℃接入0.1～0.4%的植物乳杆菌，于35℃～37℃发酵36～72h；得到玫瑰花发酵液；
步骤三、玫瑰花发酵液的过滤：将所述玫瑰花发酵液进行过滤，分别收集清液A和玫瑰花发酵液渣B；
步骤四、玫瑰水溶性多糖的制备：加入3～4倍清液质量的75%～95%乙醇于所述清液A中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀C；按照所述沉淀C的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩后，经喷雾干燥制备得到玫瑰水溶性多糖；
步骤五、玫瑰碱溶性多糖的制备：将所述玫瑰花发酵液渣B用碱调整pH至8.0-10.0，经过滤后，取清液D，加入3～4倍清液质量的75%～95%乙醇于清液D中，并静止过夜，将上层清液抽走，收集沉淀E；按照沉淀E的重量加入5～10倍水复原溶解后，将液体经过滤后，得到的浓缩液再经反渗透浓缩后，经喷雾干燥制备得到玫瑰碱溶性多糖。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一的具体步骤为：将干燥的平阴重瓣红玫瑰花投入水中浸提15～30min，并开启煮料罐的搅拌浆，其中加水量按照玫瑰花重量份添加，1份玫瑰花添加10～30份纯水，水温度为45～90℃；将含有玫瑰花的料液输送至胶体磨中进行破碎处理，得到玫瑰花破碎液。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤二中，在接入酿酒酵母前：将玫瑰花破碎液迅速升温至95～100℃，保持10min，再将玫瑰破碎液冷却至30℃。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤二中，按破碎液总重量接入0.03%酿酒酵母，28℃发酵48h，待酒精度达到5°后，升温至32℃，接入0.05%东方醋酸菌YZD-09，35℃发酵48h后，于35℃接入0.3%的植物乳杆菌，于35℃发酵72h，发酵结束后升温至85～90℃，保温5min，终止发酵。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述醋酸菌为东方醋酸菌YZD-09、醋酸杆菌的一种或两种。
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