CN114128621A - 采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法，步骤以下步骤：（1）选取盆栽月季当年生的枝条，且饱满而未萌发的腋芽茎段；将其茎段上的叶片和叶柄剪掉，茎段上都保留1‑2个侧芽；（2）将外植体在洗衣粉溶液中浸泡，之后用清水冲洗，然后用滤纸将外植体表面的水渍吸干，置于无菌环境中，先用75%酒精浸泡30‑50s，再用无菌水冲洗4‑6遍，然后用酸性氧化电位水浸泡，再次使用无菌水冲洗4‑6遍，最后用滤纸吸干茎段表面多余的水分；（3）将外植体用解刨刀切去外植体的两端切口毒害部分，腋芽上端横切，腋芽下端45°斜切，切好茎段接种于诱导培养基中进行培养。本发明的方法可大大提高月季外植体出芽率。
Description
技术领域
本发明属于外植体培养技术领域，涉及一种采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法。
背景技术
月季（Rosa chinensis Jacq)被称为花中皇后，又称月月红，属蔷薇科，多年生木本花卉；月季四季开花，花色丰富，花期长，具有较高的观赏价值和药用价值，是全球种植规模最大的花卉种类，中国为原产地之一，是我国十大名花之一。
酸性氧化电位水(electrolyzed oxidizing water)，是一种具有高氧化还原电位，低pH值，含低浓度活性氯、次氯酸和活性氧的水，具有较强的快速消毒灭菌的作用，又称高电位氧化离子水。在完成消毒灭菌作用后，不留任何有害残存物，是一种以物理消毒为主，化学消毒为辅的新型消毒剂。这种消毒剂的本质是水，而不是化学药品，对人体无刺激性、无不良反应、无蓄积毒性，氧化还原电位下降后还原成水，对环境无污染。目前在医疗***、环境卫生应用广泛。
常见的消毒剂有酒精、升汞、次氯酸钠。升汞：又称氯化汞，灭菌后极易残留于植物材料上，消毒时间过长，产生褐变，消毒时间过短，污染率较高；且汞属于重金属对环境危害较大，对人体的毒性作用较大，废液不能直接排放，需要及时回收，使用成本较高。次氯酸钠：次氯酸钠溶液稳定性较弱，腐蚀性强，分解产生对环境和人体有害的剧毒气体，碱性较强，可以对植物材料造成较大的损伤，具有一定的破坏作用。
发明内容
本发明目的在于提供一种采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法，先利用酸性氧化电位水对月季外植体进行消毒处理，在采用特定的诱导培养基进行培养，可提高月季外植体出芽率。
为实现上述目的，采用以下技术方案：
一种采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法，包括如下步骤：
（1）月季外植体的选择及预处理：选取盆栽月季当年生的枝条，且饱满而未萌发的腋芽茎段；将选取外植体茎段上的叶片和叶柄剪掉，剪成2-3cm的茎段，每个茎段上都保留1-2个侧芽；
（2）酸性氧化电位水消毒处理：将步骤（1）处理后的外植体在洗衣粉溶液中浸泡，之后用清水冲洗，外植体表明晶莹剔透则为处理最佳状态，然后用灭菌的滤纸将外植体表面的水渍吸干，置于无菌环境中，先用75%酒精浸泡30-50s，再用无菌水冲洗4-6遍，然后用酸性氧化电位水浸泡，再次使用无菌水冲洗4-6遍，最后用灭菌的滤纸吸干茎段表面多余的水分，备用；
（3）诱导培养：将步骤（2）处理后的外植体用解刨刀切去外植体的两端切口毒害部分，腋芽上端横切，腋芽下端45°斜切，切好茎段将其接种于诱导培养基中进行培养。
进一步地，步骤（2）中外植体在洗衣粉溶液中浸泡的时间为40min。
进一步地，步骤（2）中酸性氧化电位水的pH值为2-3，氧化还原电位≥1100mv，有效氯浓度90-102mg/L。
进一步地，步骤（2）中酸性氧化电位水浸泡时间为8-36min，优选为16min。
进一步地，步骤（3）中诱导培养基的配方为：MS+0.01mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/L KT+2.0mg/L腺嘌呤+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH值5.8。NAA：萘乙酸，促进植物生长和生根；6-BA：6-苄基腺嘌呤，刺激细胞***引起植物生长和发育；KT：激动素，促进细胞***，延缓离体叶片和切花衰老，诱导芽分化和发育及增加气孔开度的作用。
进一步地，步骤（3）中培养的环境为：光照时间14h/d，光照强度1800-2600lux，温度25℃。
本发明的显著优点在于：
传统的消毒剂处理外植体对植株本身毒害性较大，出芽率低、褐化率高，还会危害人体，而且污染环境；本发明采用酸性氧化电位水处理外植体对植株毒害性小，出芽率高、褐化率低，而且对人体无危害，对环境无污染等特点。
附图说明
图1为不同消毒剂处理后的腋芽萌发情况，其中A为酸性氧化电位水处理后3d开始萌芽；B为次氯酸钠处理后5d开始萌芽；
图2为不同消毒剂处理后15d的芽生长情况；A：酸性氧化电位水处理；B：次氯酸钠处理；
图3为初代培养3d后植株生长情况；
图4 初代培养7d后植株生长情况；A：培养基M3；B：培养基M4；
图5初代培养15d后植株生长情况；A：培养基M3；B：培养基M4。
具体实施例：
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例1
（1）外植体选取盆栽月季当年生的枝条，且饱满而未萌发的腋芽茎段。将选取外植体茎段上的叶片和叶柄剪掉，将其剪成2-3cm的茎段，每个小段上都保留1-2个侧芽，备用。
（2）将选取好的外植体在洗衣粉溶液中浸泡40min，之后用清水冲洗2h，外植体表明晶莹剔透则为处理最佳状态，并用滤纸将外植体表面的水渍吸干，置于无菌环境中进行消毒处理。具体消毒处理：1）酸性氧化电位水处理：用75%酒精浸泡30-50s，再用无菌水冲洗4-6遍，然后再用酸性氧化电位水（pH值为2-3，氧化还原电位≥1100mv，有效氯浓度90-102mg/L）浸泡8min，16min，36min，再次使用无菌水冲洗4-6遍，最后用灭菌的滤纸吸干茎段表面多余的水分，准备接种；2）对照例--次氯酸钠处理：用75%酒精侵泡30-50s，用无菌水冲洗4-6遍，然后用0.4%次氯酸钠侵泡8min，再次使用无菌水冲洗4-6遍，最后用灭菌的滤纸吸干茎段表面多余的水分，准备接种。
（3）每个处理选择30个带侧芽的月季茎段，经过上述处理后，用解刨刀切去外植体的两端切口毒害部分，腋芽上端横切，腋芽下端45°斜切，切好茎段将其接种于配置好的不同诱导培养基中。一般在接种5d左右腋芽开始萌芽。接种后的培养环境为：光照时间14h/d，光照强度1800-2600lux，温度25℃。
本实施例中，不同诱导培养基分别设置为M1、M2、M3、M4；
M1：MS+0.2mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH值5.8。
M2：MS+0.2mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH值5.8。
M3：MS+0.01mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/L KT+2.0mg/L腺嘌呤+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH值5.8。
M4：MS+0.01mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA +30g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH值5.8。
效果测试
1、酸性氧化电位水消毒时间对月季外植体成活的影响
经8min酸性氧化电位水外植体表面消毒后，月季外植体在消毒后逐步出现严重的污染现象，污染率高达67%，污染持续到10d；经16min酸性氧化电位水表面消毒处理后，月季外植体在消毒后污染现象明显降低，污染率为20%，污染持续到5d后结束；经36min较长时间消毒后，月季外植体消毒后的污染现象也明显降低，污染率为30%，污染持续到5d后结束，但不及16min消毒时间的处理。结果表明，16min酸性氧化电位水消毒效果最好。
表1 不同消毒时间对外植体的影响
2、不同消毒剂对月季外植体诱导出芽的影响（均采用M3培养基）
由表2可知，酸性氧化电位水处理（处理时间为16min）外植体后的污染率为20%，出芽率为90%；次氯酸钠处理外植体后的污染率为17%，出芽率为67%。虽然消毒剂酸性氧化电位水处理后的污染率略高于次氯酸钠，但是出芽率明显高于次氯酸钠处理后的出芽率。酸性氧化电位水处理外植体，3d后开始萌芽(图1-A），次氯酸钠处理外植体5d后开始萌芽（图1-B）。培养15d后，酸性氧化电位水处理的芽体生长至2-3cm（图2-A）,次氯酸钠处理的芽体生长至1.5-2.0cm（图2-B）。结果表明，酸性氧化电位为最佳消毒剂。
表2 不同消毒剂对外植体出芽的影响
3、不同诱导培养基对月季外植体诱导出芽的影响（均采用酸性氧化电位水处理16min）
经过试验3d后观察发现（图3），腋芽开始萌发至0.3-0.5cm，继续培养至7d后（图4），发现腋芽芽体生长至1-1.5cm，继续培养至15d后（图5），腋芽芽体生长至2-3cm,培养15d开始统计所有外植体萌发个数。
由表3可知，4种诱导培养基均能促进外植体的腋芽的萌发，但长势存在差异，M2培养基中月季茎段上的腋芽出芽率最低（图3），出芽率为27%，新梢生长瘦弱，而且生长缓慢，培养后期出现叶片皱缩，长势差，不利于月季外植体腋芽的萌发；M3、M4培养基中，月季外植体茎段腋芽出芽率最高（图3)，出芽率分别为90%、80%，新梢生长健壮，同时生长速度较快,长势好。结果表明，M3培养基为诱导月季茎段腋芽出芽的最佳培养基。
表3 不同培养基对外植体出芽的影响
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (6)
1.一种采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）月季外植体的选择及预处理：选取盆栽月季当年生的枝条，且饱满而未萌发的腋芽茎段；将选取外植体茎段上的叶片和叶柄剪掉，剪成2-3cm的茎段，每个茎段上都保留1-2个侧芽；
（2）酸性氧化电位水消毒处理：将步骤（1）处理后的外植体在洗衣粉溶液中浸泡，之后用清水冲洗，外植体表明晶莹剔透则为处理最佳状态，然后用灭菌的滤纸将外植体表面的水渍吸干，置于无菌环境中，先用75%酒精浸泡30-50s，再用无菌水冲洗4-6遍，然后用酸性氧化电位水浸泡，再次使用无菌水冲洗4-6遍，最后用灭菌的滤纸吸干茎段表面多余的水分，备用；
（3）诱导培养：将步骤（2）处理后的外植体用解刨刀切去外植体的两端切口毒害部分，腋芽上端横切，腋芽下端45°斜切，切好茎段将其接种于诱导培养基中进行培养。
2.根据权利1所述的采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法，其特征在于，步骤（2）中外植体在洗衣粉溶液中浸泡的时间为40min。
3.根据权利1所述的采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法，其特征在于，步骤（2）中酸性氧化电位水的pH值为2-3，氧化还原电位≥1100mv，有效氯浓度90-102mg/L。
4.根据权利1所述的采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法，其特征在于，步骤（2）中酸性氧化电位水浸泡时间为8-36min。
5.根据权利1所述的采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法，其特征在于，步骤（3）中诱导培养基的配方为：MS+0.01mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA+0.3mg/L KT+2.0mg/L腺嘌呤+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH值5.8。
6.根据权利1所述的采用酸性氧化电位水提高月季外植体出芽率的方法，其特征在于，步骤（3）中培养的环境为：光照时间14h/d，光照强度1800-2600lux，温度25℃。
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