CN112655557B - 一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，属于植物组织培养技术领域。所述方法包括：(1)取吊瓜组织培养苗茎段，接种于丛生芽诱导培养基中培养形成丛生芽，所述丛生芽诱导培养基以MS为基本培养基，添加有6‑苄氨基腺嘌呤和抗生素；(2)取丛生芽茎段，接种于生根培养基中培养至芽生根，获得生根苗，所述生根培养基以1/2 MS为基本培养基，添加有α‑萘乙酸和抗生素；所述抗生素为利福平或氨苄青霉素,浓度为5～20mg/L。本发明通过在培养基中添加利福平或氨苄青霉素，并优化培养基配方，有效抑制离体培养吊瓜苗内生菌的增生，解决吊瓜组织培养过程中内生菌污染问题，解决吊瓜优质种苗的供应问题。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法。
背景技术
吊瓜，又名栝楼，是葫芦科多年生草质藤木植物，生长在海拔100～1800米气候温润的山谷密林和坡地灌丛中。它是一种名贵的中药材，据《本草纲目》、《中药大辞典》、《中国医学大全》等中医药文献记载：皮、籽、根均可入药，具有润肺化痰、降火止咳、宽胸散结、消肿祛毒、润肠通便功效。据《本草纲目》载，吊瓜(栝楼)籽炒用，补虚劳口干、润心肺、治手面皱，现代研究和权威机构检测吊瓜籽含不饱和脂肪酸、蛋白质等。
由于吊瓜生命力强，易学易种，管理方便，且当年投入，当年收获，数年收益，备受种植户青睐，曾一度成为农业新兴产业中的支柱产业。由于吊瓜种植均采用粗放管理模式，所以吊瓜植株容易出现内生菌。即引种3-5年后，吊瓜产量逐年降低，病虫害越来越严重，乃至全地块，全区域绝产。
植物内生细菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官的细胞间隙或细胞内的细菌，可通过组织学方法或从严格表面消毒的植物组织中分离，被感染的寄主(至少是暂时)不表现出来外在病症，在植物组织培养中这些内生细菌就会生长出来，并引起组织培养苗的污染，造成严重损失。现有技术中常规的组培方式仅能杀灭表面病菌，内生菌往往在培养后造成培养物的再次污染。因此，植物组织培养中，内生菌的抑制尤为重要。
专利文献CN106106168A公开了一种去除植物组织培养时外植体内生菌的方法，包括：采用多菌灵对扦插土壤进行消毒处理，采用含有两性霉素B和硫酸链霉素的无菌水溶液对扦插枝条进行消毒处理，以及对半木质化的新发枝条进行预处理，从而能够有效清除杨树等外植体表面及内部的细菌及真菌。
目前，在吊瓜组织培养过程中如何有效解决内生菌污染问题，尚未有研究报道，亟待开发一种针对吊瓜组培苗抑制其内生菌增生的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，可以减少吊瓜组织培养苗内生菌的污染，降低生产成本，实现吊瓜育苗的工厂化批量生产，可有效解决吊瓜优质种苗的供应问题。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，包括以下步骤：
(1)取吊瓜组织培养苗茎段，接种于丛生芽诱导培养基中培养形成丛生芽，所述丛生芽诱导培养基以MS为基本培养基，添加有6-苄氨基腺嘌呤和抗生素；
(2)取步骤(1)培养得到的丛生芽茎段，接种于生根培养基中培养至芽生根，获得生根苗，所述生根培养基以1/2MS为基本培养基，添加有α-萘乙酸和抗生素；
所述抗生素为利福平或氨苄青霉素,浓度为5～20mg/L。
具体地，吊瓜为“越蒌3号”。
研究表明，通过在组织培养基中添加利福平(rif)、氨苄青霉素(amp)，可有效抑制内生菌的增生，从而使吊瓜组培苗能正常生长，建立吊瓜快速繁殖体系。
进一步地，所述丛生芽诱导培养基和生根培养基中均添加有浓度为10～15mg/L的利福平或氨苄青霉素。在上述浓度条件下，不仅有效抑制吊瓜组培苗内生菌的增殖，而且对组培苗的生长影响较小。
所述丛生芽诱导培养基中6-苄氨基腺嘌呤的浓度为0.2～1mg/L。
更进一步，所述丛生芽诱导培养基中添加有浓度为10mg/L的利福平或浓度为15mg/L的氨苄青霉素，以及浓度为0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤，pH值5.8±0.2。
所述MS培养基组成为：1650mg/L NH4NO3、1900mg/L KNO3、440mg/L CaCl2·2H2O、370mg/L MgSO4·7H2O、170mg/L KH2PO4、0.83mg/L KI、6.2mg/L H3BO3、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/LCoCl2·6H2O、27.8FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2.EDTA·2H2O、100mg/L肌醇、0.5mg/L烟酸、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.1mg/L盐酸硫胺素、2.0mg/L甘氨酸、20g/L蔗糖。
进一步地，步骤(1)中，培养条件为：25±1℃、2000Lx光照强度，每天12小时光照条件下培养20～40天。
进一步地，步骤(2)中，所述生根培养基中添加有浓度为0.1～0.5mg/L的α-萘乙酸。
更进一步，所述生根培养基中添加有浓度为0.2mg/L的α-萘乙酸、浓度为10mg/L的利福平。在该培养条件下，生根率高，获得的生根苗容易移栽成活。
所述1/2MS培养基组成为：825mg/L NH4NO3、950mg/L KNO3、220mg/L CaCl2·2H2O、185mg/L MgSO4·7H2O、85mg/L KH2PO4、0.83mg/L KI、6.2mg/L H3BO3、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/LCoCl2·6H2O、27.8FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2.EDTA·2H2O、100mg/L肌醇、0.5mg/L烟酸、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.1mg/L盐酸硫胺素、2.0mg/L甘氨酸、20g/L蔗糖。
进一步地，步骤(2)中，培养的条件：25±1℃、2000Lx光照强度，每天12小时光照。
与现有技术相比，本发明具备的有益效果：
本发明通过在培养基中添加利福平(rif)或氨苄青霉素(amp)，有效抑制离体培养吊瓜苗内生菌的增生，解决吊瓜组织培养过程中内生菌污染问题。通过优化培养基配方，建立吊瓜快速繁殖体系，减少综合生产成本，并提高了其性状的稳定性，可实现吊瓜育苗的工厂化大批量生产，解决吊瓜优质种苗的供应问题。
附图说明
图1为实施例1中培养基中添加利福平(rif)抑制吊瓜组培苗内生菌污染的效果；A，培养基中添加10mg/L利福平，培养22d时的吊瓜组培苗，组培苗基部无内生菌污染；B，培养基中不添加利福平，培养22d时的吊瓜组培苗，组培苗基部内生菌污染严重。
图2为吊瓜无菌茎段在生根培养基上培养20d后的生根苗，从左到右依次为在含有0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L NAA的生根培养基上培养的生根苗。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例中采用的材料：吊瓜“越蒌3号”的组培苗。
实施例中涉及的试剂均为市场化商品；
其中MS培养基组成为：大量元素：1650mg/L NH4NO3、1900mg/L KNO3、440mg/LCaCl2·2H2O、370mg/L MgSO4·7H2O、170mg/L KH2PO4；微量元素：0.83mg/L KI、6.2mg/LH3BO3、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/LCuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl2·6H2O、27.8FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2.EDTA·2H2O；有机物：100mg/L肌醇、0.5mg/L烟酸、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.1mg/L盐酸硫胺素、2.0mg/L甘氨酸、20克/L蔗糖。
1/2MS培养基组成为：大量元素减少一半，其余成分与MS培养基相同。
实施例1
1、配置丛生芽诱导培养基：MS+0.2mg/L 6-BA(6-苄氨基腺嘌呤)+不同浓度利福平(rif)。
2、不同浓度利福平(rif)的抑菌处理：在超净台上，将吊瓜组织培养苗从瓶中夹出，切成3cm长一段，分别接入含0mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L利福平(rif)的丛生芽诱导培养基中，放置培养室，温度24±1℃，每天光照12小时。
3、抑菌效果的观察记录：分别于培养22d、45d后记录平均苗高(cm)、平均丛生芽数(个)、抑菌率，结果见图1、表1所示。
表1利福平(Rif)抑制吊瓜组培苗内生苗的效果
由表1可见，利福平浓度为0mg/L的培养基在培养22天和45天中抑菌率均为0。在利福平浓度为5mg/L的培养基中抑菌率为33.3％，但在培养45天后，抑菌率又为0。说明了低浓度的抑制剂无法抑制吊瓜内生菌，而利福平浓度为10mg/L的培养基中抑菌率最高，在22天抑菌率为66.7％，到了45天抑菌率为55.6％。当浓度达到20mg/L，抑菌率开始下降。对于平均丛生芽个数，在培养22天与45天之间都在发生变化，总的实验观察可知，利福平浓度为5mg/L和10mg/L的时候平均丛生芽个数较多，最高的可达到2个。对于平均苗高，随着时间的增长，吊瓜组培苗是在不断的生长的，从实验数据来看，利福平浓度为5mg/L和10mg/L的时候平均苗高高于其他浓度。
总的来说，利福平浓度为10mg/L时吊瓜组培苗的抑菌率最高，平均丛生芽数和平均苗高最高。
4、结论
在吊瓜组培苗继代培养时，培养基中添加10mg/L利福平，既抑制吊瓜组培苗内生菌的增殖，又对组培苗的生长影响较小。
实施例2
1、配置丛生芽诱导培养基：MS+0.2mg/L 6-BA+不同浓度氨苄青霉素。
2、不同浓度氨苄青霉素(amp)的抑菌处理：在超净台上，将吊瓜组织培养苗从瓶中夹出，切成3cm长一段，分别接入含0mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L氨苄青霉素的培养基中，放置培养室，温度24±1℃，每天光照12小时。
3、抑菌效果的观察记录：分别于培养22d、45d后记录平均苗高(cm)、平均丛生芽数(个)、抑菌率，结果见表2所示。
表2氨苄青霉素(Amp)抑制吊瓜组培苗内生菌的效果
由表2可见，氨苄青霉素浓度为0mg/L的培养基在培养22天和45天中抑菌率为0。在氨苄青霉素浓度为5mg/L的培养基中抑菌率为32.7％，但在培养45天后，抑菌率又为0。说明了低浓度的抑制剂无法抑制吊瓜内生菌，而氨苄青霉素浓度为15mg/L的培养基中抑菌率最高，在22天抑菌率为58.7％，到了45天抑菌率为53.7％。当氨苄青霉素浓度达到20mg/L，抑菌率开始下降。对于丛生芽个数，在培养22天与45天之间都在发生变化，总的实验观察可知，氨苄青霉素浓度为10mg/L和15mg/L时，平均丛生芽个数较多，最高的可达到2.18cm。其他浓度的培养基平均丛生芽个数接近于1-2个之间。对于平均苗高，随着时间的增长，吊瓜组培苗是在不断生长的，从实验数据来看，氨苄青霉素浓度为10mg/L和15mg/L的时候平均苗高高于其他浓度。
从表2看，随着时间的变化，在0mg/L青霉素培养基上培养的吊瓜组培苗的苗高从0.94cm升高到1.76cm；以10mg/L青霉素浓度的培养基培养的吊瓜组培苗的苗高从0.76cm升高到1.76cm；以15mg/L青霉素浓度的培养基培养的吊瓜组培苗的苗高从1.38cm升高到2.15cm。对于苗高，随着时间的变化，总体在增加，青霉素浓度为15mg/L的时候平均苗高在45天时稍高于其他浓度。
总的来说，青霉素浓度为15mg/L时吊瓜组培苗的抑菌率较高，而对于平均丛生芽数在45天时青霉素浓度为15mg/L的时候增殖明显和平均苗高最高。
4、结论
在吊瓜组培苗继代培养时，培养基中添加15mg/L氨苄青霉素，既抑制吊瓜组培苗内生菌的增殖，又对组培苗的生长影响较小。
实施例3
1、生根培养的条件
将实施例1和实施例2增殖培养得到的丛生芽切成3cm长的茎段，接种于生根培养基中，生根培养基的基本培养基为1/2MS，分别添加0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L NAA(α-萘乙酸)，均添加10mg/L利福平。在25±1℃，2000Lx光照强度，每天12小时光照条件下培养。
2、生根率的观察记录
茎段在生根培养基上培养20d后，记录生根率；结果见图2、表3所示。
表3不同浓度NAA对吊瓜无菌苗生根的影响
| NAA浓度(mg/L) | 生根率(％) | 苗基部愈伤化 |
| 0 | 13.3 | |
| 0.1 | 46.7 | + |
| 0.2 | 83.3 | ++ |
| 0.5 | 90.0 | ++++ |
由表3可见，当培养基中添加0.5mg/L NAA时，生根率最高，达到90.0％，但苗的基部愈伤化严重，生根苗难以移栽成活。当培养基中添加0.2mg/L NAA时，生根率达83.3％，苗的基部稍有愈伤化，这种生根苗容易移栽成活。当培养基中添加0.1mg/L NAA时，生根率为46.7％。
3、结论
综合来看，NAA浓度在0-0.5mg/L范围内，生根培养基以添加0.2mg/L NAA，最为合适。
Claims (8)
1.一种抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取吊瓜组织培养苗茎段，接种于丛生芽诱导培养基中培养形成丛生芽，所述丛生芽诱导培养基以MS为基本培养基，添加有6-苄氨基腺嘌呤和抗生素；
(2)取步骤(1)培养得到的丛生芽茎段，接种于生根培养基中培养至芽生根，获得生根苗，所述生根培养基以1/2MS为基本培养基，添加有α-萘乙酸和抗生素；
所述抗生素为利福平或氨苄青霉素,利福平的浓度为10mg/L，氨苄青霉素的浓度为10～15mg/L。
2.如权利要求1所述的抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述丛生芽诱导培养基中添加有浓度为10mg/L的利福平或浓度为15mg/L的氨苄青霉素，以及浓度为0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤，pH值5.8±0.2。
3.如权利要求1所述的抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，其特征在于，所述MS培养基组成为：1650mg/L NH4NO3、1900mg/L KNO3、440mg/L CaCl2·2H2O、370mg/L MgSO4·7H2O、170mg/L KH2PO4、0.83mg/L KI、6.2mg/L H3BO3、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl2·6H2O、27.8FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2.EDTA·2H2O、100mg/L肌醇、0.5mg/L烟酸、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.1mg/L盐酸硫胺素、2.0mg/L甘氨酸、20g/L蔗糖。
4.如权利要求1所述的抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，其特征在于，步骤(1)中，培养条件为：25±1℃、2000Lx光照强度，每天12小时光照条件下培养20～40天。
5.如权利要求1所述的抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述生根培养基中添加有浓度为0.1～0.5mg/L的α-萘乙酸。
6.如权利要求5所述的抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述生根培养基中添加有浓度为0.2mg/L的α-萘乙酸、浓度为10mg/L的利福平。
7.如权利要求1所述的抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，其特征在于，所述1/2MS培养基组成为：825mg/L NH4NO3、950mg/L KNO3、220mg/L CaCl2·2H2O、185mg/L MgSO4·7H2O、85mg/L KH2PO4、0.83mg/L KI、6.2mg/L H3BO3、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl2·6H2O、27.8FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2.EDTA·2H2O、100mg/L肌醇、0.5mg/L烟酸、0.5mg/L盐酸吡哆醇、0.1mg/L盐酸硫胺素、2.0mg/L甘氨酸、20g/L蔗糖。
8.如权利要求1所述的抑制离体培养吊瓜苗内生菌的方法，其特征在于，步骤(2)中，培养的条件：25±1℃、2000Lx光照强度，每天12小时光照。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102172223A (zh) * | 2011-03-24 | 2011-09-07 | 浙江森禾种业股份有限公司 | 红叶南天竹组织培养体系中内生菌的去除方法 |
| CN106106168A (zh) * | 2016-07-20 | 2016-11-16 | 中国林业科学研究院林业研究所 | 一种去除植物组织培养时外植体内生菌的方法 |
| CN107494269A (zh) * | 2017-09-29 | 2017-12-22 | 南京仙草堂生物科技有限公司 | 一种消除小花万代兰组织培养过程中内生菌的方法 |
| CN107568064A (zh) * | 2017-09-22 | 2018-01-12 | 无为县姚沟镇太白瓜蒌种植专业合作社 | 一种瓜蒌组织培养育苗方法 |
| CN107581068A (zh) * | 2017-10-13 | 2018-01-16 | 中国科学院华南植物园 | 一种去除单轴类兰花内生菌的方法及在香荚兰组织培养快速繁殖中的应用 |
| CN108703068A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-10-26 | 广西壮族自治区农业科学院生物技术研究所 | 去除慈姑培养过程中内生菌的方法、培养方法以及应用 |
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|---|---|---|---|---|
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102172223A (zh) * | 2011-03-24 | 2011-09-07 | 浙江森禾种业股份有限公司 | 红叶南天竹组织培养体系中内生菌的去除方法 |
| CN106106168A (zh) * | 2016-07-20 | 2016-11-16 | 中国林业科学研究院林业研究所 | 一种去除植物组织培养时外植体内生菌的方法 |
| CN107568064A (zh) * | 2017-09-22 | 2018-01-12 | 无为县姚沟镇太白瓜蒌种植专业合作社 | 一种瓜蒌组织培养育苗方法 |
| CN107494269A (zh) * | 2017-09-29 | 2017-12-22 | 南京仙草堂生物科技有限公司 | 一种消除小花万代兰组织培养过程中内生菌的方法 |
| CN107581068A (zh) * | 2017-10-13 | 2018-01-16 | 中国科学院华南植物园 | 一种去除单轴类兰花内生菌的方法及在香荚兰组织培养快速繁殖中的应用 |
| CN108703068A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-10-26 | 广西壮族自治区农业科学院生物技术研究所 | 去除慈姑培养过程中内生菌的方法、培养方法以及应用 |
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