CN114032211A - 乙酰栓菌酸用于cik细胞体外扩增的用途 - Google Patents
乙酰栓菌酸用于cik细胞体外扩增的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114032211A CN114032211A CN202111417720.4A CN202111417720A CN114032211A CN 114032211 A CN114032211 A CN 114032211A CN 202111417720 A CN202111417720 A CN 202111417720A CN 114032211 A CN114032211 A CN 114032211A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cik
- cells
- acid
- vitro amplification
- trametes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000004405 cytokine-induced killer cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 39
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 241000222354 Trametes Species 0.000 title claims description 6
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 title description 5
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims abstract description 7
- ZPCCSZFPOXBNDL-RSMXASMKSA-N spiramycin II Chemical compound O([C@H]1/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)C[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H](CC=O)C[C@H]1C)O[C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C2)[C@@H](C)O1)N(C)C)O)OC)OC(C)=O)[C@H]1CC[C@H](N(C)C)[C@H](C)O1 ZPCCSZFPOXBNDL-RSMXASMKSA-N 0.000 claims description 4
- 229950006796 spiramycin ii Drugs 0.000 claims description 4
- VTNQPKFIQCLBDU-UHFFFAOYSA-N Acetochlor Chemical compound CCOCN(C(=O)CCl)C1=C(C)C=CC=C1CC VTNQPKFIQCLBDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 7
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 102400000888 Cholecystokinin-8 Human genes 0.000 description 1
- 101800005151 Cholecystokinin-8 Proteins 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- -1 carboxylic acid compound Chemical class 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002476 tumorcidal effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
- C12N5/0638—Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了乙酰栓菌酸用于CIK细胞体外扩增的用途。本发明发现,乙酰栓菌酸一方面可以提高CIK细胞增殖活性,另一方面可以提高CIK细胞纯度,可以用于CIK细胞体外培养,具有开发用作CIK细胞培养基添加剂的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于细胞免疫治疗领域,涉及CIK细胞的体外培养,具体涉及乙酰栓菌酸用于CIK细胞体外扩增的用途。
背景技术
细胞免疫治疗是一种有潜力的肿瘤治疗方法,细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)是其中一种具有广谱杀瘤活性的免疫细胞。CIK是一群异质性细胞,主要的效应细胞为CD3+CD56+具有自然杀伤细胞(naturalkiller,NK)样特征的T细胞。临床研究证实,CIK对多种肿瘤具有杀伤活性,能使患者临床获益。
乙酰栓菌酸(Tsugaric acid A)是一种有机羧酸类化合物,结构式如下。
为了提高CIK细胞的细胞免疫治疗效果,需要提高CIK细胞体外培养的效率。
发明内容
本发明是为了克服现有技术的不足,提供乙酰栓菌酸用于CIK细胞体外扩增的用途。
技术方案如下:
乙酰栓菌酸用于CIK细胞体外扩增的用途。
乙酰栓菌酸用于制备CIK细胞培养基的用途。
一种CIK细胞培养基,其中含有促进CIK细胞体外扩增的乙酰栓菌酸。
有益效果:
本发明发现,乙酰栓菌酸一方面可以提高CIK细胞增殖活性,另一方面可以提高CIK细胞纯度,可以用于CIK细胞体外培养,具有开发用作CIK细胞培养基添加剂的应用前景。
附图说明
图1为单个核细胞向CIK细胞诱导培养过程中的显微镜观察结果。
图2为流式检测CD3+CD56+表型的结果。
具体实施方式
一、试验材料
淋巴细胞分离液购自Solarbio。
GT-T551培养基购自TAKARA,人AB血清购自SIGMA。
乙酰栓菌酸购自成都曼思特生物科技有限公司,纯度≥98%。
CD3-PerCP-Cy5.5和CD56-FITC购自BD。
二、试验方法
1、CIK细胞的培养和鉴定
取健康献血者外周抗凝血100mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,洗涤后用含有5%人AB血清的GT-T551培养基调整为2.5×106个/mL,并加入重组人IFN-γ至终浓度为1000U/mL,置于37℃、5%CO2条件培养。24h后加人白介素IL-2至终浓度为1000U/mL和抗CD3单抗至终浓度为50ng/mL。此后每2~3d更换培养液并补加人IL-2。第3、5、7、9d于显微镜下观察。培养9d后,收集细胞。取0、9d细胞适量,按照常规的流式细胞检测法加入PerCP-Cy5.5标记的CD3和FITC标记的CD56抗体对细胞表面标志物进行鉴定。
2、CIK细胞增殖活性测定
收集培养9d的细胞,PBS洗涤,用含有5%人AB血清的GT-T551培养基重悬制成细胞密度为5×104/mL的细胞悬浮液,接种于96孔板中,每孔5000个细胞,24h后,药物组更换为含有20μg/mL或50μg/mL乙酰栓菌酸的完全培养基,对照组更换为不含乙酰栓菌酸的完全培养基,在37℃、5%CO2条件继续培养,48h后,每孔加入20μL的CCK8溶剂,继续培养4h,用酶标仪于450nm处测定各孔吸光值OD,按照公式计算CIK细胞增殖活性:
CIK细胞增殖活性(%)=药物组OD值/对照组OD值×100%。
对照组增殖活性计为100%。
3、CIK细胞纯度测定
收集培养9d的细胞,PBS洗涤,用含有5%人AB血清的GT-T551培养基重悬制成细胞密度为5×104/mL的细胞悬浮液,接种于6孔板中,每孔2.5mL,24h后,药物组更换为含有20μg/mL或50μg/mL乙酰栓菌酸的完全培养基,对照组更换为不含乙酰栓菌酸的完全培养基,在37℃、5%CO2条件继续培养,48h后,收集细胞,PBS洗涤,按照常规的流式细胞检测法加入PerCP-Cy5.5标记的CD3和FITC标记的CD56抗体,检测CD3+CD56+表型细胞的比例,即得CIK细胞纯度。
4、统计学处理
采用SPSS 17.0统计软件包处理数据,用均数±标准差表示,组间比较采用t检验,P<0.05代表差异具有统计学意义。
三、试验结果
显微镜下观察显示,细胞生长状态良好(图1)。培养0、9d细胞的流式结果如图2中A、B所示,CD3+CD56+表型细胞的百分率由1.7%提高到20.8%,说明CIK细胞诱导成功。
CIK细胞增殖活性如表1所示,药物组CIK细胞增殖活性更强,且存在剂量效应。
表1各组OD值和细胞增殖活性
**表示与对照组相比P<0.05,差异具有统计学意义。
对照组和药物组流式结果如图2中C、D、E所示,药物组CD3+CD56+表型细胞的百分率(35.7%、55.6%)显著高于对照组(25.2%),说明药物组CIK细胞纯度更高。
综合上述实验结果可以看出,乙酰栓菌酸一方面可以提高CIK细胞增殖活性,另一方面可以提高CIK细胞纯度,可以用于CIK细胞体外培养,具有开发用作CIK细胞培养基添加剂的应用前景。
以上实施例旨在具体介绍本发明的实质性内容,但不应将本发明的保护范围局限于以上具体的实施例。
Claims (3)
1.乙酰栓菌酸用于CIK细胞体外扩增的用途。
2.乙酰栓菌酸用于制备CIK细胞培养基的用途。
3.一种CIK细胞培养基,其中含有促进CIK细胞体外扩增的乙酰栓菌酸。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111417720.4A CN114032211A (zh) | 2021-11-26 | 2021-11-26 | 乙酰栓菌酸用于cik细胞体外扩增的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111417720.4A CN114032211A (zh) | 2021-11-26 | 2021-11-26 | 乙酰栓菌酸用于cik细胞体外扩增的用途 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114032211A true CN114032211A (zh) | 2022-02-11 |
Family
ID=80145722
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202111417720.4A Pending CN114032211A (zh) | 2021-11-26 | 2021-11-26 | 乙酰栓菌酸用于cik细胞体外扩增的用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114032211A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114831998A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-08-02 | 山西省人民医院 | 栓菌酸在肾病治疗中的应用 |
-
2021
- 2021-11-26 CN CN202111417720.4A patent/CN114032211A/zh active Pending
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114831998A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-08-02 | 山西省人民医院 | 栓菌酸在肾病治疗中的应用 |
CN114831998B (zh) * | 2022-04-28 | 2023-09-22 | 山西省人民医院 | 栓菌酸在肾病治疗中的应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2914692T3 (es) | Células madre adhesivas derivadas de cordón umbilical mejoradas, método de preparación para las mismas, y uso de las mismas | |
CN1878860A (zh) | 分离和培养来自脐带血的间充质干细胞的方法 | |
CN115558641B (zh) | 高纯度效应免疫细胞群及其培养方法、试剂组合物和应用 | |
CN115651903B (zh) | 高杀伤力的免疫细胞群及其培养方法、试剂组合物和应用 | |
CN114507640B (zh) | 一种高增殖能力和高细胞毒性cik细胞的培养方法及其应用 | |
CN105343894B (zh) | 高效分泌***素e2(pge2)的重组间充质干细胞及其应用 | |
CN112608896A (zh) | 一种nk细胞的培养方法及其应用 | |
CN114032211A (zh) | 乙酰栓菌酸用于cik细胞体外扩增的用途 | |
CN112029723B (zh) | 一种体外培养脐带血cik细胞的方法 | |
CN112080469B (zh) | T1肽在体外促进脐带血造血干细胞增殖中的应用 | |
CN116904398A (zh) | 一种用于car-t细胞快速扩增和活性增强的培养基 | |
Jiang et al. | Adipose tissue‑derived stem cells modulate immune function in vivo and promote long‑term hematopoiesis in vitro using the aGVHD model | |
CN104109653A (zh) | 利用无动物血清培养体系大规模扩增人外周血dnt细胞的方法 | |
CN114507642B (zh) | 一种动物神经***周细胞单细胞的分离方法 | |
CN108690829B (zh) | 一种高效扩增nk细胞的方法 | |
CN106565828B (zh) | 诱导dc-cik细胞的多肽及其在肿瘤细胞治疗中的应用 | |
CN107090434B (zh) | 一种提高cik细胞培养效果的血液抗凝和保存方法 | |
CN112300992B (zh) | 一种nk细胞培养液及多级激活nk细胞的培养方法 | |
CN113293130B (zh) | 一种肿瘤特异性t细胞的培养方法 | |
CN114807031A (zh) | 一种人外周血免疫细胞库和干细胞库的构建方法 | |
CN114032210A (zh) | 一种nk细胞扩增用培养基及培养方法 | |
CN108441473B (zh) | 一种体外富集cd8+*t细胞的方法 | |
CN113881629A (zh) | 一种体外高效扩增nk细胞的培养基及培养方法 | |
CN114517178B (zh) | Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用 | |
CN114990061B (zh) | 一种诱导扩增中央记忆性t细胞的培养方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20220211 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |