CN113892556A - 利用即墨老酒的废酒糟制备的生物蛋白饲料及其制备方法 - Google Patents

利用即墨老酒的废酒糟制备的生物蛋白饲料及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于微生物发酵工程技术领域，具体涉及一种利用即墨老酒的废酒糟制备的生物蛋白饲料及其制备方法。老酒酒糟和花生红衣经过发酵条件的筛选，提高了适口性、酸溶蛋白含量以及蛋白消化利用率，抗营养因子一定程度分解。这两种原料再经复配发酵，氨基酸组成互补和改善，在粗蛋白、赖氨酸、蛋氨酸、粗纤维含量方面可以互补，提升了营养价值和饲喂价值。应用本发明产品可以降低养殖成本、增加收益；经过酶处理和发酵，含有大量益生菌和富含生长因子和肽类等，可以提高动物机体和肠道健康水平，增强抗病力，可以常规不用抗生素，有利于推行无抗健康养殖。

Description

利用即墨老酒的废酒糟制备的生物蛋白饲料及其制备方法
技术领域
本发明属于微生物发酵工程技术领域，具体涉及一种利用即墨老酒的废酒糟制备的生物蛋白饲料及其制备方法。
背景技术
目前我国养殖饲料严重依赖玉米-豆粕型日粮，特别是蛋白质原料主要是豆粕，绝大部分从北美进口，受制于国际市场，常造成养殖成本大幅波动，风险增大。另外，进口豆粕中含有转基因成分，不符合有机农产品的要求。
我国有大量地方优质生物质资源未得到充分利用，其原因是这些非常规原料中往往含有较多抗营养因子、适口性较差、甚至含有一定毒性物，限制了在动物日粮中的应用，需要处理后才能发挥出其营养价值。
对非常规原料的处理有物理、化学和生物法。物理和化学方法通常会带来物料变性，营养价值下降。生物法包括酶法和微生物发酵法。酶法条件温和，不会使物料变质。由于酶源有限，只能对部分抗营养因子进行一定程度分解。微生物发酵法适采用适宜的菌株组合，在物料中持续生长和产酶，不仅会对抗营养因子降解、提高适口性、对毒性物也能一定程度降解，还能提高营养物质含量和增加活性因子。
即墨老酒隶属于黄酒，是即墨地区的地方品牌名酒，在原料、制曲、生产工艺及取酒方式上，均不同于其它酒类的制造，因此即墨老酒的酒糟也与其它酒糟明显不同。即墨老酒发酵后的酒糟优点是蛋白含量高和残淀高；缺点是因生产工艺带来明显焦味，影响适口性；残淀虽高但部分焦化难以利用；此外氨基酸组成很不平衡，赖氨酸很低。若直接使用，营养价值不高。而利用酒糟饲喂动物，需要考虑避免发生酒糟酒精中毒和酒糟酸化发生霉变的情况。
花生是我国重要的油料作物。花生红衣是指花生种子外表面的那层***种皮，又称花生皮，花生衣。花生红衣是花生加工后的副产物，富含有黄酮类、多酚类和色素等，蛋白质含量较高，具有一定食用价值。但苦涩味重，作为饲料适口性较差，牛相对猪对苦涩味不敏感，农村常直接添到牛饲料中喂牛，降低成本。花生红衣的另一缺点是氨基酸不平衡，蛋氨酸极低。
本发明的发明人在此应用背景下，欲改善即墨老酒废糟以及花生红衣的营养组成和口感，综合利用食品加工环节的废弃物，提高经济价值和对环境友好。本发明方法可以将这两种废弃物中的成分互补，并通过微生物发酵提高饲喂价值，为当地废弃生物质的有效利用提供了一条更好的途径。
发明内容
针对前述即墨老酒糟和花生红衣的缺陷，本发明提供一种生物蛋白饲料及其制备方法。本发明制备的生物蛋白饲料中，主要原料为即墨老酒废酒糟，可以仅采用即墨老酒废酒糟，还可以添加部分花生红衣为原料。这两种原料在粗蛋白、赖氨酸、蛋氨酸、粗纤维含量方面可以互补，提升了营养价值。这两种原料均为低价高蛋白含量，经过合理处理，减少负面因素后，可以明显降低养殖成本，增加收益。
本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种经过微生物发酵和酶法处理的发酵的即墨老酒废酒糟为原料制备的生物蛋白饲料，发酵的即墨老酒废酒糟以下称为即墨老酒糟生物蛋白。
本发明发酵的即墨老酒废酒糟，也称为即墨老酒糟生物蛋白，是由以下重量配比的原料发酵制备而成：即墨老酒废酒糟100份、混合酵母菌的固体菌种0.2～0.4份和混合酶制剂0.02～0.04份。
优选的，本发明发酵的即墨老酒废酒糟，也称为即墨老酒糟生物蛋白，是由以下重量配比的原料发酵制备而成：即墨老酒废酒糟100份、混合菌的固体菌种0.3份和混合酶制剂0.03份。
即墨老酒废酒糟的含水大约为55％～65％，放置略干后为55％，不可能放太久，会霉变；优选采用含水率60％的即墨老酒废酒糟。
进一步的，上述即墨老酒废酒糟发酵中所用菌种中包括：产朊假丝酵母菌(Candida utilis)和马克斯克鲁维酵母菌(Kluyveromyces marxianus)。
具体的，上述混合酵母菌固体菌种的制备方法为：分别从产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌的斜面保藏菌种中挑取1环(接种环)，分别接入100mLPDA(土豆蔗糖培养基)中，于28～32℃温度摇瓶培养(150～200rpm)培养2～3d，分别得到产朊假丝酵母菌培养液和马克斯克鲁维酵母菌培养液，其中，产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.5-7.0亿个/ml，马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.5-5.0亿个/ml；优选的产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.7亿个/ml，马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.7亿个/ml；再将两种培养液依次按2.5～3.5:1混合，转接入麸皮玉米培养基中。
即上述制备方法中，产朊假丝酵母菌与马克斯克鲁维酵母菌按培养液的重量配比为3～3.5:1。
优选的，产朊假丝酵母菌与马克斯克鲁维酵母菌按培养液的重量配比为2.5～3:1。
最优的，产朊假丝酵母菌与马克斯克鲁维酵母菌按培养液的重量配比为3:1。
上述麸皮玉米培养基的制备方法为：按重量配比计，麸皮︰玉米︰水＝7～8︰2～3︰8将三者混匀后于118～126℃下灭菌25～40min，冷却即可。
按重量比计，麸皮玉米培养基：混合酵母培养液＝10︰0.1～0.2，混合均匀，于28～32℃温度培养2～3d，即得混合酵母固体菌种。
具体的，上述混合酶制剂的制备方法为：按重量配比计，淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.1～0.2；再按淀粉酶、糖化酶、植酸酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶总量的1.8-2.5倍加入中性蛋白酶。
优选的，再按淀粉酶、糖化酶、植酸酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶总量的2倍加入中性蛋白酶。
优选的，上述混合酶制剂为按重量配比计：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4︰0.6︰0.4︰0.1︰5.4。
具体的，上述淀粉酶的酶活力为1万U/g，所述糖化酶的酶活力为10万U/g，所述植酸酶的酶活力为1万U/g，所述纤维素酶的酶活力为1万U/g，所述果胶酶的酶活力为2万U/g，所述木聚糖酶的酶活力为20万U/g，所述中性蛋白酶活力为5万U/g。
本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种还含有经过微生物发酵和酶法处理的发酵的花生红衣的生物蛋白饲料，发酵的花生红衣以下称为花生红衣蛋白。
本发明发酵的花生红衣，也称为花生红衣生物蛋白，是由以下重量配比的原料发酵而成：花生红衣95～100份、玉米粉3～5份、枯草芽孢杆菌的液体菌种0.1～0.2份、混合酵母菌的固体菌种0.3～0.4份、混合酶制剂0.03～0.04份、混合营养盐0.1～0.15份和水50～70份。
优选的，上述发酵的花生红衣，即花生红衣生物蛋白，是由以下重量配比的原料发酵而成：花生红衣100份、枯草芽孢杆菌的液体菌种0.2份、混合酵母菌的固体菌种0.3份、混合营养盐0.15份和混合酶制剂0.04份和水60份。
进一步的，上述花生红衣的发酵中，所用菌种中包括：枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、啤酒酵母(Saccharomyces ceremony)、产朊假丝酵母菌(Candida utilis)和马克斯克鲁维酵母菌(Kluyveromyces marxianus)。
先分别制备枯草芽孢杆菌的液体菌种，以及啤酒酵母、产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌的液体菌种。再将以上三种酵母菌的液体菌种混合接种到麸皮玉米培养基中，经培养得到混合酵母菌固体菌种。
具体的，上述枯草芽孢杆菌的液体菌种的制备方法为：从枯草芽孢杆菌的斜面保藏菌种中挑取1环(接种环)，接入100mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于35～37℃温度摇瓶培养(150～200rpm)培养20-24h，得到枯草芽孢杆菌的培养液；其中，细菌浓度为2.0-3.2亿个/ml。
优选的，上述枯草芽孢杆菌的培养温度为36℃。
具体的，上述混合酵母菌固体菌种的制备方法为：分别从啤酒酵母、产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌的斜面保藏菌种中挑取1环(接种环)，分别接入100mLPDA(土豆蔗糖培养基)中，于28～32℃温度摇瓶培养(150～200rpm)培养2～3d，分别得到啤酒酵母、产朊假丝酵母菌培养液和马克斯克鲁维酵母菌培养液。再将三种培养液依次按比例混合，转接入麸皮玉米培养基中；其中，所述啤酒酵母培养液细胞浓度为2.0-3.2亿个/ml，产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.5-7.0亿个/ml，马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.5-5.0亿个/ml；优选的，所述啤酒酵母培养液细胞浓度为2.8亿个/ml，产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.7亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.7亿个/ml。
即上述制备方法中，所述混合酵母菌的固体菌种的各菌种按培养液的重量配比为：啤酒酵母:产朊假丝酵母菌:马克斯克鲁维酵母菌为1:2.8～3.5:0.8～1.2。
优选的，所述混合酵母菌的固体菌种的各菌种按培养液的重量配比为：啤酒酵母:产朊假丝酵母菌:马克斯克鲁维酵母菌为1︰2.8～3:0.8～1。
最优的，所述混合酵母菌的固体菌种的各菌种按培养液的重量配比为：啤酒酵母:产朊假丝酵母菌:马克斯克鲁维酵母菌为1:3:1。
上述麸皮玉米培养基的制备方法为：按重量配比计，麸皮︰玉米︰水＝7～8︰2～3︰8将三者混匀后于118～126℃下灭菌25～40min，冷却即可。
按重量比计，麸皮玉米培养基：混合酵母培养液＝10：0.1～0.2，混合均匀，于28～32℃温度培养2～3d，即得三种酵母菌的混合固体菌种。
具体的，上述混合酶制剂的制备方法为：按重量配比计，淀粉酶：糖化酶：植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.04～0.1︰1～1.5，将七者混匀即可。
优选的，上述混合酶制剂为按重量配比计：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰木聚糖酶︰果胶酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4︰0.6︰0.1︰0.4︰1.35。
上述淀粉酶的酶活力为1万U/g，所述糖化酶的酶活力为10万U/g，所述植酸酶的酶活力为1万U/g，所述纤维素酶的酶活力为1万U/g，所述果胶酶的酶活力为2万U/g，所述木聚糖酶的酶活力为20万U/g，所述中性蛋白酶的酶活力为5万U/g。
具体的，上述混合营养盐的制备方法为：按重量配比计，取0.8～1.2份KH2PO4和0.2份MgSO4混匀即可；优选的，按重量配比计，取1份KH2PO4和0.2份MgSO4混匀即可。
本发明生物蛋白饲料包括单独使用发酵后的即墨老酒废酒糟，即即墨老酒糟生物蛋白；或混合使用发酵后的即墨老酒废酒糟(即墨老酒糟生物蛋白)和发酵后的花生红衣(花生红衣生物蛋白)为原料的两种方案。
具体的，原料仅包括即墨老酒糟生物蛋白；或者按下述重量配比总量为100份称取原料：即墨老酒糟生物蛋白50～80份、花生红衣生物蛋白20～50份。
进一步优选，按下述重量配比总量为100份称取原料：即墨老酒糟生物蛋白80份、花生红衣生物蛋白20份。
本发明所要解决的第三个技术问题是提供一种将发酵的即墨老酒废酒糟(即墨老酒糟生物蛋白)、发酵的花生红衣(花生红衣生物蛋白)混合制备生物蛋白饲料的方法。
本发明生物蛋白饲料的制备方法包括单独使用即墨老酒废酒糟，或混合使用即墨老酒废酒糟和花生红衣为原料的两种方案。
方案一，仅以即墨老酒糟生物蛋白为原料，包括以下步骤：
A、制备即墨老酒糟生物蛋白：各原料按重量配比混合，在30～35℃下发酵40～48h；其中，各原料按重量配比计为：即墨老酒的废酒糟100份、混合酵母菌的固体菌种0.3～0.4份、混合酶制剂0.02～0.04份；
B、再发酵：取A1所得即墨老酒糟生物蛋白，在30～35℃下，再发酵40～48h，即得。
方案二、以即墨老酒糟生物蛋白和花生红衣生物蛋白为原料，包括以下步骤：
A1、制备即墨老酒糟生物蛋白：各原料按重量配比混合，在30～35℃下发酵40～48h；其中，各原料按重量配比计为：即墨老酒的废酒糟100份、混合酵母菌的固体菌种0.2～0.4份、混合酶制剂0.02～0.04份；
A2、制备花生红衣生物蛋白：各原料按重量配比混合，35～40℃下发酵48～72h；其中，各原料按重量配比计为：花生红衣95～100份、玉米粉3～5份、枯草芽孢杆菌的液体菌种0.1～0.2份、混合酵母菌的固体菌种0.3～0.4份、混合酶制剂0.03～0.04份、混合营养盐0.1～0.15份和水60～70份；
B、再发酵：按重量配比取A1所得即墨老酒糟生物蛋白50～80份、A2所得花生红衣生物蛋白20～50份，混合后在30～35℃下，再发酵40～48h。
上述方法制备的生物蛋白饲料，其制备方法还包括步骤C：经步骤B再发酵的生物蛋白饲料，直接饲喂或烘干至含水率小于14％储存。
上述制备方法中：
步骤A1所述制备即墨老酒糟生物蛋白的原料按重量配比为：即墨老酒的废酒糟100份、混合酵母菌的固体菌种0.3份、混合酶制剂0.03份；
步骤A或步骤A1所述混合酵母菌的固体菌种产朊假丝酵母菌Candida utilis和马克斯克鲁维酵母菌Kluyveromyces marxianus；
优选的，步骤A或步骤A1所述混合酵母菌的固体菌种中：产朊假丝酵母菌与马克斯克鲁维酵母菌按培养液的重量配比为2.5～3.5:1；优选的2.5～3:1；最优的3:1；
所述步骤A或步骤A1中，混合酵母菌固体菌种的制备方法为：分别从产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌的斜面保藏菌种中接种环挑取1环，分别接入100mLPDA中，于28～32℃温度摇瓶中，以转速150～200rpm培养2～3d，分别得到产朊假丝酵母菌培养液和马克斯克鲁维酵母菌培养液，其中，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.5-7.0亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.5-5.0亿个/ml；优选的，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.7亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.7亿个/ml；
步骤A或步骤A1所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.1～0.2；再按淀粉酶、糖化酶、植酸酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶总量的1.8-2.5倍加入中性蛋白酶；
优选的，步骤A或步骤A1中再按淀粉酶、糖化酶、植酸酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶总量的2倍加入中性蛋白酶；
优选的，步骤A或步骤A1所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4︰0.6︰0.4︰0.1︰5.4；
步骤A或步骤A1所述淀粉酶的酶活力为1万U/g，所述糖化酶的酶活力为10万单位，所述植酸酶的酶活力为1万U/g，所述纤维素酶的酶活力为1万U/g，所述果胶酶的酶活力为2万U/g，所述木聚糖酶的酶活力为20万U/g，所述中性蛋白酶的酶活力为5万U/g；
步骤A2所述制备花生红衣生物蛋白的原料按重量配比为：花生红衣100份、枯草芽孢杆菌的液体菌种0.2份、混合酵母菌的固体菌种0.3份、混合酶制剂0.04份、混合营养盐0.15份和水60份。
步骤A2所述枯草芽孢杆菌的液体菌种的制备方法为：从斜面保藏菌种中用接种环挑取1环，接入100mL牛肉膏蛋白胨培养基中，于35～37℃温度摇瓶中，以转速150～200rpm培养20～24h，得到枯草芽孢杆菌的培养液，细菌浓度为2.0-3.2亿个/ml。
步骤A2所述混合酵母菌的固体菌种为啤酒酵母Saccharomyces ceremony、产朊假丝酵母菌(Candida utilis)和马克斯克鲁维酵母菌Kluyveromyces marxianus；
步骤A2所述混合酵母菌的固体菌种的各菌种按培养液的重量配比为：啤酒酵母:产朊假丝酵母菌:马克斯克鲁维酵母菌为1:2.8～3.5:0.8～1.2；优选的1:2.8～3:0.8～1；最优为1:3:1；
其中，步骤A2所述混合酵母菌固体菌种的制备方法为：啤酒酵母、产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌的斜面保藏菌种中用接种环挑取1环，分别接入100mL土豆蔗糖培养基中，于28～32℃温度摇瓶中，以转速150～200rpm培养2～3d，分别得到啤酒酵母、产朊假丝酵母菌培养液和马克斯克鲁维酵母菌培养液，其中，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.5-7.0亿个/ml，马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.5-5.0亿个/ml；优选的，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.7亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.7亿个/ml；
步骤A2所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.04～0.1︰1～1.5；
优选的，步骤A2所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4︰0.6︰0.4︰0.1︰1.35；
步骤A2所述淀粉酶的酶活力为1万U/g，所述糖化酶的酶活力为10万U/g，所述植酸酶的酶活力为1万U/g，所述纤维素酶的酶活力为1万U/g，所述果胶酶的酶活力为2万U/g，所述木聚糖酶的酶活力为20万U/g，所述中性蛋白酶的酶活力为5万U/g。
步骤A2所述混合营养盐包括下述重量配比的组分：KH2PO4 0.8～1.2份、MgSO40.2份；所述混合营养盐包括下述重量配比的组分：KH2PO4 1份、MgSO4 0.2份。
本发明的有益效果在于：老酒酒糟和花生红衣经过发酵适口性提高，蛋白消化利用率提高(酸溶蛋白含量提高)，抗营养因子一定程度分解。再经复配发酵，氨基酸组成互补和改善，提高了饲喂价值。而且也避免了直接饲喂酒糟出现消化吸收利用率低和营养不平衡问题，经过发酵处理，也不易发生霉变的情况。应用本发明产品可以降低养殖成本、增加收益；经过酶处理和发酵，含有大量益生菌和富含生长因子和肽类等，可以提高动物机体和肠道健康水平，增强抗病力，可以常规不用抗生素，有利于推行无抗健康养殖。
具体实施方式
即墨老酒是山东青岛即墨地区的地方名酒，由于其生产工艺的独特性，其酒糟也与其它固态发酵酒糟明显不同。残淀在10％以上，粗蛋白含量高达33％，但氨基酸组成不平衡，赖氨酸很低，蛋氨酸较高。现今未有对其加工处理工艺，而是直接用于养殖。花生红衣是花生加工后的副产物，粗蛋白含量较高，在20％左右，与即墨老酒酒糟相反，赖氨酸较高，蛋氨酸很低。通常未经处理，直接做饲料，由于苦涩味重，一般只做牛饲料。目前没有针对这两种原料的处理工艺，用作生物蛋白饲料。
老酒酒糟和花生红衣这两种原料，营养上有一定互补性，但性质差异较大，不能在同一条件下处理。需要先单独进行微生物发酵和酶处理，再进行复配和后发酵。
老酒酒糟已经经过酿酒发酵，粮食原料中各种成分有一定分解，本发明对其处理的关键是，在生物学处理中更偏向于酶分解作用，提高酸溶蛋白，提高蛋白利用率。
花生红衣是天然原料，未经生物学分解。对其处理的关键是，要消除苦涩味和改善适口性，消除各种抗营养因子，提高饲用价值。在生物学处理中，微生物发酵和酶分解作用同样重要。
在对老酒酒糟和花生红衣单独发酵处理后，再经过复配和再次发酵，除了平衡氨基酸外，利用老酒酒糟的独特香味，可以进一步改善花生红衣的适口性。
在经过酿酒发酵后，酒糟中还存在未降解的抗营养因子。经过酶作用可以部分降解。蛋白酶可以提高酸溶蛋白含量。少量淀粉酶和糖化酶可以释放出一定糖分，促进微生物生长。花生红衣所含抗营养因子高于老酒酒糟，其中粗纤维高于酒糟所含的38％以上。需要选择适当菌种和酶制剂组合。由于花生红衣中缺少微生物生长的碳源，需要补充一定玉米粉。实验发现，花生红衣发酵中加入啤酒酵母、产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌，能消除花生红衣的苦涩味，改善适口性。枯草芽孢杆菌对适口性没有负面影响，并能补充发酵产品中的益生菌。植酸酶、纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶有助于降解抗营养因子，加入中性蛋白酶能增强抗营养因子分解酶的作用。
实验与实施例中，所采用的枯草芽孢杆菌来自中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种编号CGMCC 1.836。
啤酒酵母(Saccharomyces ceremony)来自中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种编号CGMCC 2.116。
产朊假丝酵母(Candida utilis)来自中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种编号CGMCC2.281。
马克斯克鲁维酵母来自中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号CGMCC No.9427。
所用酶制剂均购自济南百斯杰生物工程有限公司。淀粉酶的酶活力为1万U/g，糖化酶的酶活力为10万U/g，植酸酶的酶活力为1万U/g，纤维素酶的酶活力为1万U/g，果胶酶的酶活力为2万U/g，木聚糖酶的酶活力为20万U/g，中性蛋白酶的酶活力为5万U/g。
实施例1即墨老酒糟发酵菌种筛选
取新鲜即墨老酒糟(丢糟)，分装250ml三角瓶，每瓶装100g。
配制PDA(土豆蔗糖)培养基1000ml，分装250ml三角瓶，每瓶装50ml。包扎后蒸汽灭菌120℃20分钟，冷却后待用。
配制牛肉膏蛋白胨培养基1000ml，分装250ml三角瓶，每瓶装50ml。包扎后蒸汽灭菌120℃20分钟，冷却后待用。
分别从不同保存菌种斜面中挑取1环，接入以上培养基中。真菌接入PDA培养基，在30℃下摇瓶培养3d；细菌接入牛肉膏蛋白胨培养基，在33℃下摇瓶培养培养2d。作为种子培养液。
按下表1，分别取不同种子培养液1ml，接入装有老酒糟的三角瓶中，分别在30℃(真菌)和33℃(细菌)下培养3d。测定细胞数和观察培养物外观和气味。表1和表2分别是细菌和真菌的部分培养结果。
表1不同细菌对老酒糟的发酵情况
细菌菌株编号 B2 B7 B8 B10 B13 B16 B21 B23 B24
外观 未变 未变 未变 未变 未变 未变 未变 未变 未变
气味 + - + — + + + + +
细菌数10<sup>8/</sup>g 0.05 0.03 0.06 0.04 0.06 0.055 0.05 0.05 0.06
注：细菌数为平板计数结果。
外观：未变指与原来酒糟颜色一样。
气味：—(无异臭)、+(微臭)
表1结果显示：所用的细菌(主要是芽孢杆菌)菌株在酒糟上生长很差。B7为地衣芽孢杆菌，B10为枯草芽孢杆菌。酒糟pH较低，约3.5～4，不利于芽孢杆菌生长。
表2不同真菌对老酒糟的发酵情况
真菌菌株编号 F1 F4 F5 F11 F12 F14 F18 F22 F24 F25
外观 未变 未变 未变 未变 未变 长霉 长霉 长霉 长霉 长霉
气味 酒香 酸香 酸香 不明显 不明显 霉味 霉味 霉味 霉味 霉味
细胞数10<sup>8/</sup>g 0.15 0.32 0.24 0.12 0.1 未计 未计 未计 未计 未计
注：细胞数为显微镜计数结果，以下同。
外观：-(未变)，长霉2～3d后产生霉菌孢子。
表2结果显示：F1为啤酒酵母，F4为产朊假丝酵母，F5为马克斯克鲁维酵母。编号F14以后为丝状真菌。
根据表1和表2结果显示，排除芽孢杆菌和丝状真菌。考虑到酒糟已经经过啤酒酵母发酵，故选择采用产朊假丝和马克斯克鲁维酵母作为老酒糟发酵菌种。
实施例2即墨老酒糟发酵中添加酶制剂的试验
称取1万U/g淀粉酶1g，加水100ml，配制成1％溶液。称取10万U/g糖化酶1g，加水100ml，配制成1％溶液。称取1万U/g植酸酶1g，加水100ml，配制成1％溶液。称取1万U/g纤维素酶1g，加水100ml，配制成1％溶液。称取20万U/g木聚糖酶1g，加水100ml，配制成1％溶液。称取2万U/g果胶酶1g，加水100ml，配制成1％溶液。称取5万U/g中性蛋白酶1g，加水100ml，配制成1％溶液。
按实施例1的方法，配制PDA(土豆蔗糖)培养基，分别制备产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母的种子培养液。再各取20ml培养液按1:1混合，成为混合酵母菌的种子培养液。取新鲜即墨老酒糟(丢糟)，分装250ml三角瓶，每瓶装100g。将混合酵母菌种子培养液1ml，分别接入装有老酒糟的三角瓶中。
按下表3，各三角瓶中加入不同的酶制剂。在30℃下培养3d。测定细胞数和观察培养物外观和气味。
表3不同酶制剂对老酒糟的发酵的影响
Figure BDA0003287737560000101
注：表中酶制剂简写：糖表示糖化酶，植表示植酸酶，纤表示纤维素酶，果表示果胶酶，木表示木聚糖酶，蛋表示中性蛋白酶。
添加酶制剂对酒糟组分有所分解，能促进酵母菌生长，以淀粉酶类最明显，其余酶也有作用。进一步对酶制剂组合试验，见下表4。
表4不同酶制剂组合对即墨老酒糟的发酵的影响
Figure BDA0003287737560000102
根据表4结果，进一步组合及加入中性蛋白酶的试验见表5。
表5不同酶制剂及蛋白酶组合对即墨老酒糟的发酵的影响
Figure BDA0003287737560000111
根据以上结果，选择酶制剂的配比(以糖化酶为1计)：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.1～0.2︰1～1.5。优选：淀粉酶0.2，糖化酶1，植酸酶0.4，纤维素酶0.6，木聚糖酶0.1，果胶酶0.4，中性蛋白酶1.5。
实施例3即墨老酒糟发酵中菌种比例和添加量实验
按重量比分别称取7种酶制剂：淀粉酶0.2份，糖化酶1份，植酸酶0.4份，纤维素酶0.6份，木聚糖酶0.1份，果胶酶0.4份，中性蛋白酶1份，混合均匀，共计3.7份。再称取10g，加水100ml，配成10％的混合酶液。
按实施例1的方法，配制PDA培养基，分别制备产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母的种子培养液。
取新鲜即墨老酒糟(丢糟)，分装500ml三角瓶，每瓶装200g。按下表6，分别接种不同酵母菌的种子培养液和添加酶制剂。在30℃下培养3d。测定细胞数和测定酸溶蛋白。
表6不同酵母菌比例对即墨老酒糟的发酵的影响
Figure BDA0003287737560000112
由表6结果显示，产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母培养液的比例＝3︰1较好。对生长细胞数而言，总接种量0.5％＜1％＜2％。
实施例4即墨老酒糟发酵中不同酶制剂的添加量实验
按重量比分别称取6种酶制剂：淀粉酶0.2份，糖化酶1份，植酸酶0.4份，纤维素酶0.6份，木聚糖酶0.1份，果胶酶0.4份，混合均匀，共计2.7份，为无蛋白酶的混合酶。再称取10g，加水100ml，配成10％的无蛋白酶的混合酶液
按实施例1的方法，配制PDA培养基，分别制备产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母的种子培养液。再将培养液按产朊假丝酵母培养液3份和马克斯克鲁维酵母培养液1份的比例混合，成为混合酵母培养液。
取新鲜即墨老酒糟(丢糟)，分装500ml三角瓶，每瓶装200g。按下表7，分别接种混合酵母菌培养液和添加不同的酶制剂。在30℃下培养3d。测定细胞数和测定酸溶蛋白。
表7不同酶制剂添加量和添加蛋白酶对即墨老酒糟的发酵的影响
Figure BDA0003287737560000121
注：未发酵酒糟酸溶蛋白＝1.82％。
根据表7结果，对酒糟量，10％无蛋白酶的混合酶添加量在0.3％～0.4％。10％中性蛋白酶添加量在0.2％～0.3％对细胞数提升不大，但能增加酸溶蛋白。无蛋白酶的混合酶与中性蛋白酶的比例为0.2～0.3︰0.6＝1～1.5︰3(优选1:2)。
实施例5花生红衣发酵的菌种筛选
取花生红衣960g，玉米粉40g，加水700ml，拌匀，分装250ml三角瓶，每瓶装100g(按干料计)。
按实施例1的方法，分别配制PDA(土豆蔗糖)培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，并分装三角瓶和灭菌。分别从不同保存菌种斜面中挑取1环，接入以上培养基中。真菌接入PDA培养基，在30℃下摇瓶培养3d；细菌接入牛肉膏蛋白胨培养基，在36℃下摇瓶培养培养2d。作为种子培养液。
按下表8，分别取不同种子培养液1ml，接入装有花生红衣的三角瓶中，分别在30℃(真菌)培养3d和36℃(细菌)培养1d。测定细胞数和观察培养物外观和气味。表8和表9分别是细菌和真菌的部分培养结果。
表8不同细菌对花生红衣的发酵情况
细菌菌株编号 B2 B7 B8 B10 B13 B16 B17 B21 B23 B24
外观 未变 未变 未变 未变 未变 未变 未变 未变 未变 未变
气味 + - + - + + + - + +
细菌数10<sup>8/</sup>g 1.15 1.03 0.96 1.21 0.86 0.85 1.01 1.05 1.10 0.93
注：细菌数为平板计数结果。
外观：未变指与原来花生红衣颜色一样。
气味：-(无异臭)、+(微臭)
表8显示：B7为地衣芽孢杆菌，B10为枯草芽孢杆菌，B21为侧孢芽孢杆菌。综合以上，暂选地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌(侧孢芽孢杆菌常用在有机肥中)。
表9不同真菌对花生红衣的发酵情况
真菌菌株编号 F1 F4 F5 F11 F12 F14 F18 F22 F24 F25
外观 未变 未变 未变 未变 未变 长霉 长霉 长霉 长霉 长霉
气味 酒香 酸香 酸香 不明显 不明显 霉味 霉味 霉味 霉味 霉味
细胞数10<sup>8/</sup>g 0.45 0.66 0.74 0.62 0.62 未计 未计 未计 未计 未计
注：细胞数为显微镜计数结果，以下同。
外观：-(未变)，长霉2～3d后产生霉菌孢子。
表9显示：F1为啤酒酵母，F4为产朊假丝酵母，F5为马克斯克鲁维酵母。编号F14以后为丝状真菌。选择采用啤酒酵母、产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母作为花生红衣的发酵菌种。
实施例6花生红衣发酵中添加酶制剂的试验
按实施例2的方法，分别配制淀粉酶、糖化酶、植酸酶、纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、和中性蛋白酶的1％溶液。
按实施例1的方法，分别配制PDA(土豆蔗糖)培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，并分装三角瓶和灭菌。分别从不同保存菌种斜面中挑取1环，接入以上培养基中。啤酒酵母、产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母菌分别接入PDA培养基，在30℃下摇瓶培养3d，作为种子培养液。地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌分别接入牛肉膏蛋白胨培养基，在36℃下摇瓶培养培养1d。作为种子培养液。
将地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的种子培养液按1:1混合，作为混合芽孢杆菌种子培养液。
将啤酒酵母、产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母菌按1:1:1混合，作为混合酵母菌种子培养液。
再将混合芽孢杆菌种子培养液与混合酵母菌种子培养液按1:1混合，作为混合菌种液。
取花生红衣2850g，玉米粉150g，加水2100ml，拌匀，分装250ml三角瓶，每瓶装100g(按干料计)。
按下表10，各三角瓶中加入不同的酶制剂和混合菌种液。在30℃下培养3d。测定细胞数和观察培养物外观和气味
表10不同酶制剂组合对花生红衣的发酵的影响
Figure BDA0003287737560000141
根据表10结果，进一步组合及加入中性蛋白酶的试验见表11。
表11不同酶制剂及蛋白酶组合对花生红衣的发酵的影响
Figure BDA0003287737560000151
对生长的促进作用一定程度代表了对物料的分解。根据以上结果，复合酶有协同作用。选择酶制剂的重量配比(以糖化酶为1计)：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.04～0.1︰1～1.5。优选重量配比：淀粉酶0.2份，糖化酶1份，植酸酶0.4份，纤维素酶0.6份，木聚糖酶0.1份，果胶酶0.4份，中性蛋白酶1.5份。
实施例7花生红衣发酵中菌种添加量和混合营养盐实验
按重量比分别称取7种酶制剂：淀粉酶0.2份，糖化酶1份，植酸酶0.4份，纤维素酶0.6份，木聚糖酶0.1份，果胶酶0.4份，中性蛋白酶1.5份，混合均匀，共计4.2份。再取10g，加水100ml，配成10％混合酶液。
按实施例1的方法，分别配制PDA(土豆蔗糖)培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，并分装三角瓶和灭菌。分别从不同保存菌种斜面中挑取1环，接入以上培养基中。啤酒酵母、产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母菌分别接入PDA培养基，在30℃下摇瓶培养2d，作为种子培养液。地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌分别接入牛肉膏蛋白胨培养基，在37℃下摇瓶培养培养1d。作为种子培养液。
取花生红衣2280g，加玉米粉120g，水1680ml，分装500ml三角瓶，每瓶装200g(按干料计)。按下表12，分别接种不同的种子培养液和添加酶制剂。在30℃下培养3d。测定细胞数。
表12不同菌株比例对花生红衣的发酵的影响
Figure BDA0003287737560000161
表12结果：枯草芽孢杆菌平均菌数高于地衣芽孢杆菌，故优选枯草芽孢杆菌为发酵菌种。啤酒酵母︰产朊假丝酵母︰马克斯克鲁维酵母的比例＝1︰3︰1较好。对细胞生长而言，酵母菌总接种量2％的比1％的细胞数更高。
加入营养盐对对花生红衣的发酵的影响见表13。
表13加入营养盐对花生红衣的发酵的影响
1 2 3 4 5
花生红衣(g) 200 200 200 200 200
10％混合酶液(ml) 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
枯草芽孢杆菌培养液(ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
混合酵母培养液(ml) 4 4 4 4 4
10％混合营养盐(ml) —— 1 2 3 4
酵母数10<sup>8/</sup>g 1.52 1.55 1.57 1.57 1.58
注：混合酵母培养液：啤酒酵母︰产朊假丝酵母︰马克斯克鲁维酵母按＝1︰3︰1混合。混合营养盐按KH2PO4︰MgSO4＝5:1混合配制。
表13结果显示，混合营养盐对100份花生红衣的添加量选0.1～0.15份。
实施例8花生红衣发酵中不同酶制剂的添加量实验
按重量比分别称取6种酶制剂：淀粉酶0.2份，糖化酶1份，植酸酶0.4份，纤维素酶0.6份，木聚糖酶0.1份，果胶酶0.4份，混合均匀，共计2.7份，为无蛋白酶的混合酶。再称取10g，加水100ml，配成10％的无蛋白酶的混合酶液。
按实施例1的方法配制PDA培养基，分别制备啤酒酵母、产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母三种菌的种子培养液。再按啤酒酵母1份，产朊假丝酵母培养液3份和马克斯克鲁维酵母培养液1份的比例混合，成为混合酵母培养液。
按实施例1的方法配制牛肉膏蛋白胨培养基，制备枯草芽孢杆菌的种子培养液。
配制混合营养盐，取1份KH2PO4和0.2份MgSO4混合。
取花生红衣1900kg，加玉米粉100g，水1400ml，分装500ml三角瓶，每瓶装200g(按干料计)。按下表14，分别接种不同的种子培养液和添加酶制剂。在30℃下培养3d。
表14不同酶制剂添加量和添加蛋白酶对花生红衣发酵的影响
1 2 3 4 5 6 7 8 9
花生红衣(g) 200 200 200 200 200 200 200 200 200
混合营养盐(g) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
枯草芽孢杆菌培养液(ml) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
混合酵母培养液(ml) 4 4 4 4 4 4 4 4 4
10％无蛋白酶混合酶液(ml) 0.2 0.3 0.4 0.2 0.3 0.4 0.2 0.3 0.4
10％中性蛋白酶(g) 0.1 0.1 0.1 0.15 0.15 0.15 0.2 0.2 0.2
酵母数10<sup>8/</sup>g 1.49 1.53 1.54 1.52 1.58 1.57 1.55 1.56 1.56
酸溶蛋白(％干基) 1.02 1.05 1.06 1.33 1.34 1.34 1.36 1.36 1.37
注：未发酵花生红衣酸溶蛋白＝0.72％。
根据表14结果，对花生红衣量，10％无蛋白酶的混合酶添加量在0.15％～0.2％。10％中性蛋白酶添加量在0.075％～0.1％对细胞数提升不大，但能增加酸溶蛋白。无蛋白酶的混合酶与中性蛋白酶的比例为2:1。
实施例9老酒糟生物蛋白和花生红衣生物蛋白混合制备生物蛋白饲料
根据实施例4和实施例8的结果，按重量比分别称取淀粉酶0.2份，糖化酶1份，植酸酶0.4份，纤维素酶0.6份，木聚糖酶0.1份，果胶酶0.4份，共计2.7份，为无蛋白酶混合酶。在其中加入1.5份的中性蛋白酶(按无蛋白酶的混合酶与中性蛋白酶的比例为1:2)，混合均匀，则为酒糟发酵用的混合酶制剂(混合酶制剂A)；在其中加入1.35份的中性蛋白酶(按无蛋白酶的混合酶与中性蛋白酶的比例为2:1)，混合均匀，则为花生红衣发酵用的混合酶制剂(混合酶制剂B)。
按实施例1的方法配制PDA培养基，分别制备啤酒酵母、产朊假丝酵母和马克斯克鲁维酵母三种菌的种子培养液。
按产朊假丝酵母培养液3份和马克斯克鲁维酵母培养液1份的比例混合，成为酒糟发酵用的混合酵母培养液(混合酵母液A)。称取麸皮750g和玉米粉250g，加水600ml，拌匀后，在120℃灭菌25分钟，冷却后拌入50ml混合酵母液A，在30℃下培养3d，成为酒糟发酵用混合酵母固体菌种(固体菌种A)。
再按啤酒酵母1份，产朊假丝酵母培养液3份和马克斯克鲁维酵母培养液1份的比例混合，成为花生红衣发酵用的混合酵母培养液(混合酵母液B)。称取麸皮750g和玉米粉250g，加水600ml，拌匀后，在120℃灭菌25分钟，冷却后拌入50ml混合酵母液B，在30℃下培养3d，成为花生红衣发酵用混合酵母固体菌种(固体菌种B)。
按实施例1的方法配制牛肉膏蛋白胨培养基，制备枯草芽孢杆菌的种子培养液。
配制混合营养盐，取1份KH2PO4和0.2份MgSO4混合。
称取即墨老酒糟(含水率60％)10kg，加入固体菌种A 40g、混合酶制剂A 4g。混匀后装入带呼吸阀的塑料袋，在30℃下发酵3d。
称取花生红衣9.5kg，玉米粉500g，水7kg，枯草芽孢杆菌的液体菌种10ml，固体菌种B 40g，混合酶制剂B 4g和混合营养盐10g。先将固体菌种B，混合酶制剂B和混合营养盐加入水中化开后，加入枯草芽孢杆菌的液体菌种，再与花生红衣和玉米粉拌匀。装入带呼吸阀的塑料袋，在30℃下发酵3d。
将发酵后的酒糟与花生红衣按下表15混合后，分别装入塑料袋中，30℃下继续发酵48h，测定饲料营养指标。
表15发酵酒糟与发酵花生红衣不同比例混合
1 2 3 4
发酵酒糟：发酵红衣(g) 400:600 500:500 600:400 800:200
测水分(％) 49.5％ 50.5％ 51.5％ 53.5％
CP(％) 25.86 27.07 28.54 31.46
总氨基酸(％) 22.16 23.53 25.11 28.47
Lys(％) 0.690 0.602 0.520 0.357
Met(％) 0.393 0.474 0.553 0.722
注：1、表中CP、总氨基酸、Lys和Met含量均按折成10％含水的物料算。
2、发酵酒糟水分55％，发酵红衣水分45％
3、未发酵前，酒糟CP＝33.9％，总AA30.3％，Lys0.186，Met0.89；
未发酵前，红衣CP＝19.7％，总AA 15.4％，Lys0.99，Met0.065；
经过发酵和配合后，赖氨酸和蛋氨酸互补，营养更加平衡。可选择发酵酒糟50～80份，发酵红衣20～50份，总重量100份配合制备生物蛋白。
实施例10老酒糟生物蛋白和花生红衣生物蛋白混合制备生物蛋白饲料
按实施例9，分别制备固体菌种A、固体菌种B、枯草芽孢杆菌的种子培养液、混合酶制剂A、混合酶制剂B和混合营养盐。
称取即墨老酒糟(含水率60％)100kg，加入固体菌种A 400g、混合酶制剂A 40g。混匀后装入带呼吸阀的塑料袋，在30℃下发酵3d。
称取花生红衣95kg，玉米粉5kg，水70kg，枯草芽孢杆菌的液体菌种100ml、固体菌种B 400g，混合酶制剂B 40g和混合营养盐100g。先将固体菌种B，混合酶制剂B和混合营养盐加入水中化开后，加入枯草芽孢杆菌的液体菌种，再与花生红衣和玉米粉拌匀。装入带呼吸阀的塑料袋，在30℃下发酵3d。
将发酵后的酒糟与花生红衣6:4混合后，摊开放入金属盘中，料层厚度5cm，30℃下继续发酵40h。
测定CP＝28.9％，酸溶蛋白＝2.296％。
综上，本发明提供一种以即墨老酒废酒糟和花生红衣为原料混合制备的生物蛋白饲料及其制备方法。老酒酒糟和花生红衣经过发酵适口性提高，酸溶蛋白含量提高，蛋白消化利用率提高，抗营养因子一定程度分解。这两种原料再经复配发酵，氨基酸组成互补和改善，在粗蛋白、赖氨酸、蛋氨酸、粗纤维含量方面可以互补，提升了营养价值和饲喂价值。应用本发明产品可以降低养殖成本、增加收益；经过酶处理和发酵，含有大量益生菌和富含生长因子和肽类等，可以提高动物机体和肠道健康水平，增强抗病力，可以常规不用抗生素，有利于推行无抗健康养殖。

Claims (10)

1.生物蛋白饲料，其特征在于：它的原料包括即墨老酒糟生物蛋白，是即墨老酒的废酒糟经发酵制备而成；所述即墨老酒糟生物蛋白是由以下重量配比的原料发酵制备而成的发酵后的即墨老酒废酒糟：
即墨老酒的废酒糟100份、混合酵母菌的固体菌种0.2～0.4份、混合酶制剂0.02～0.04份；
所述即墨老酒的废酒糟的含水率为55～65％；
优选的，所述即墨老酒的废酒糟的含水率为60％。
2.根据权利要求1所述的生物蛋白饲料，其特征在于：至少满足以下任意一项：
所述即墨老酒糟生物蛋白是由以下重量配比的原料发酵制备而成：即墨老酒的废酒糟100份、混合酵母菌的固体菌种0.3份、混合酶制剂0.03份；
所述混合酵母菌的固体菌种产朊假丝酵母菌Candida utilis和马克斯克鲁维酵母菌Kluyveromyces marxianus；
优选的，所述混合酵母菌的固体菌种中：产朊假丝酵母菌与马克斯克鲁维酵母菌按培养液的重量配比为2.5～3.5:1；优选的2.5～3:1；最优的3:1；
其中，混合酵母菌固体菌种的制备方法为：分别从产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌的斜面保藏菌种中接种环挑取1环，分别接入100mlPDA培养基中，于28～32℃温度摇瓶中，以转速150～200rpm培养2～3d，分别得到产朊假丝酵母菌培养液和马克斯克鲁维酵母菌培养液，其中，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.5-7.0亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.5-5.0亿个/ml；优选的，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.7亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.7亿个/ml；
所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.1～0.2；再按淀粉酶、糖化酶、植酸酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶总量的1-2.5倍加入中性蛋白酶；
优选的，再按淀粉酶、糖化酶、植酸酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶总量的2倍加入中性蛋白酶；
优选的，所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4︰0.6︰0.4︰0.1︰5.4；
所述淀粉酶的酶活力为1万U/g，所述糖化酶的酶活力为10万U/g，所述植酸酶的酶活力为1万U/g，所述纤维素酶的酶活力为1万U/g，所述果胶酶的酶活力为2万U/g，所述木聚糖酶的酶活力为20万U/g，所述中性蛋白酶的酶活力为5万U/g；
所述即墨老酒的废酒糟的含水率为60％。
3.根据权利要求1或2所述的生物蛋白饲料，其特征在于：它的原料还包括花生红衣生物蛋白，是花生红衣经发酵制备而成；所述花生红衣生物蛋白是由以下重量配比的原料发酵而成的发酵后的花生红衣：
花生红衣95～100份、玉米粉3～5份、枯草芽孢杆菌的液体菌种0.1～0.2份、混合酵母菌的固体菌种0.3～0.4份、混合酶制剂0.03～0.04份、混合营养盐0.1～0.15份和水60～70份。
4.根据权利要求3所述的生物蛋白饲料，其特征在于：至少满足以下任意一项：
所述花生红衣生物蛋白是由以下重量配比的原料发酵而成：花生红衣100份、玉米粉4份、枯草芽孢杆菌的液体菌种0.2份、混合酵母菌的固体菌种0.3份、混合酶制剂0.04份、混合营养盐0.15份和水60份；
所述枯草芽孢杆菌的液体菌种的制备方法为：从斜面保藏菌种中用接种环挑取1环，接入100mL牛肉膏蛋白胨培养基中，于35～37℃温度摇瓶中，以转速150～200rpm培养20～24h，得到枯草芽孢杆菌的培养液，细菌浓度为2.0-3.2亿个/ml；
所述混合酵母菌的固体菌种为啤酒酵母Saccharomyces ceremony、产朊假丝酵母菌(Candida utilis)和马克斯克鲁维酵母菌Kluyveromyces marxianus；
所述混合酵母菌的固体菌种的各菌种按培养液的重量配比为：啤酒酵母:产朊假丝酵母菌:马克斯克鲁维酵母菌为1:2.8～3.5:0.8～1.2；优选的1:2.8～3:0.8～1；最优为1:3:1；
其中，混合酵母菌固体菌种的制备方法为：啤酒酵母、产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌的斜面保藏菌种中用接种环挑取1环，分别接入100mLPDA培养基中，于28～32℃温度摇瓶中，以转速150～200rpm培养2～3d，分别得到啤酒酵母、产朊假丝酵母菌培养液和马克斯克鲁维酵母菌培养液，其中，所述啤酒酵母培养液细胞浓度为2.0-3.2亿个/ml，产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.5-7.0亿个/ml，马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.5-5.0亿个/ml；优选的，所述啤酒酵母培养液细胞浓度为2.8亿个/ml，产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.7亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.7亿个/ml；
所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.04～0.1︰1～1.5；
优选的，所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4︰0.6︰0.4︰0.1︰1.35；
所述混合营养盐包括下述重量配比的组分：KH2PO4 0.8～1.2份、MgSO40.2份；所述混合营养盐包括下述重量配比的组分：KH2PO4 1份、MgSO4 0.2份；
所述淀粉酶的酶活力为1万U/g，所述糖化酶的酶活力为10万U/g，所述植酸酶的酶活力为1万U/g，所述纤维素酶的酶活力为1万U/g，所述果胶酶的酶活力为2万U/g，所述木聚糖酶的酶活力为20万U/g，所述中性蛋白酶的酶活力为5万U/g。
5.根据权利要求3或4所述的生物蛋白饲料，其特征在于：按下述重量配比总量为100份称取原料：即墨老酒糟生物蛋白50～80份、花生红衣生物蛋白20～50份。
6.根据权利要求5所述的生物蛋白饲料，其特征在于：按下述重量配比总量为100份称取原料：即墨老酒糟生物蛋白80份、花生红衣生物蛋白20份。
7.权利要求1或5所述生物蛋白饲料的制备方法，其特征在于：所述生物蛋白饲料的原料为即墨老酒糟生物蛋白，包括以下步骤：
A、制备即墨老酒糟生物蛋白：各原料按重量配比混合，在30～35℃下发酵40～48h；其中，各原料按重量配比计为：即墨老酒的废酒糟100份、混合酵母菌的固体菌种0.2～0.4份、混合酶制剂0.02～0.04份；
B、再发酵：取步骤A所得即墨老酒糟生物蛋白，在30～35℃下，再发酵40～48h，即得。
8.根据权利要求3或6所述生物蛋白饲料的制备方法，其特征在于：所述生物蛋白饲料的原料为即墨老酒糟生物蛋白、花生红衣生物蛋白，包括以下步骤：
A1、制备即墨老酒糟生物蛋白：各原料按重量配比混合，在30～35℃下发酵40～48h；其中，各原料按重量配比计为：即墨老酒的废酒糟100份、混合酵母菌的固体菌种0.2～0.4份、混合酶制剂0.02～0.04份；
A2、制备花生红衣蛋白：各原料按重量配比混合，35～40℃下发酵48～72h；其中，各原料按重量配比计为：花生红衣95～100份、玉米粉3～5份、枯草芽孢杆菌的液体菌种0.1～0.2份、混合酵母菌的固体菌种0.3～0.4份、混合酶制剂0.03～0.04份、混合营养盐0.1～0.15份和和水60～70份；
B、再发酵：按重量配比总量为100份称取原料：A1所得即墨老酒糟生物蛋白50～80份、A2所得花生红衣生物蛋白20～50份，混合后在30～35℃下，再发酵40～48h。
9.根据权利要求7或8所述的生物蛋白饲料的制备方法，其特征在于：包括步骤C：经步骤B再发酵的生物蛋白饲料，直接饲喂或烘干至含水率小于14％储存。
10.根据权利要求7或8所述的生物蛋白饲料的制备方法，其特征在于：至少满足以下任意一项：
步骤A或步骤A1所述制备即墨老酒糟生物蛋白的原料按重量配比为：即墨老酒的废酒糟100份、混合酵母菌的固体菌种0.3份、混合酶制剂0.03份；
步骤A或步骤A1所述混合酵母菌的固体菌种产朊假丝酵母菌Candida utilis和马克斯克鲁维酵母菌Kluyveromyces marxianus；
优选的，步骤A或步骤A1所述混合酵母菌的固体菌种中：产朊假丝酵母菌与马克斯克鲁维酵母菌按培养液的重量配比为2.5～3.5:1；优选的2.5～3:1；最优的3:1；
所述步骤A或步骤A1中，混合酵母菌固体菌种的制备方法为：分别从产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌的斜面保藏菌种中接种环挑取1环，分别接入100mLPDA中，于28～32℃温度摇瓶中，以转速150～200rpm培养2～3d，分别得到产朊假丝酵母菌培养液和马克斯克鲁维酵母菌培养液，其中，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.5-7.0亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.5-5.0亿个/ml；优选的，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.7亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.7亿个/ml；
步骤A或步骤A1所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.1～0.2；再按淀粉酶、糖化酶、植酸酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶总量的1.8-2.5倍加入中性蛋白酶；
优选的，步骤A或步骤A1中再按淀粉酶、糖化酶、植酸酶、纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶总量的2倍加入中性蛋白酶；
优选的，步骤A或步骤A1所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4︰0.6︰0.4︰0.1︰5.4；
步骤A或步骤A1所述淀粉酶的酶活力为1万U/g，所述糖化酶的酶活力为10万U/g，所述植酸酶的酶活力为1万U/g，所述纤维素酶的酶活力为1万U/g，所述果胶酶的酶活力为2万U/g，所述木聚糖酶的酶活力为20万U/g，所述中性蛋白酶的酶活力为5万U/g；
步骤A2所述制备花生红衣生物蛋白的原料按重量配比为：花生红衣100份、玉米粉4份、枯草芽孢杆菌的液体菌种0.2份、混合酵母菌的固体菌种0.3份、混合酶制剂0.04份、混合营养盐0.15份和水60份；
步骤A2所述枯草芽孢杆菌的液体菌种的制备方法为：从斜面保藏菌种中用接种环挑取1环，接入100mL牛肉膏蛋白胨培养基中，于35～37℃温度摇瓶中，以转速150～200rpm培养20～24h，得到枯草芽孢杆菌的培养液，细菌浓度为2.0-3.2亿个/ml；
步骤A2所述混合酵母菌的固体菌种为啤酒酵母Saccharomyces ceremony、产朊假丝酵母菌(Candida utilis)和马克斯克鲁维酵母菌Kluyveromyces marxianus；
步骤A2所述混合酵母菌的固体菌种的各菌种按培养液的重量配比为：啤酒酵母:产朊假丝酵母菌:马克斯克鲁维酵母菌为1:2.8～3.5:0.8～1.2；优选的1:2.8～3:0.8～1；最优为1:3:1；
其中，步骤A2所述混合酵母菌固体菌种的制备方法为：啤酒酵母、产朊假丝酵母菌和马克斯克鲁维酵母菌的斜面保藏菌种中用接种环挑取1环，分别接入100mL土豆蔗糖培养基中，于28～32℃温度摇瓶中，以转速150～200rpm培养2～3d，分别得到啤酒酵母、产朊假丝酵母菌培养液和马克斯克鲁维酵母菌培养液，其中，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.5-7.0亿个/ml，马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.5-5.0亿个/ml；优选的，所述产朊假丝酵母菌培养液细胞浓度为6.7亿个/ml，所述马克斯克鲁维酵母菌培养液细胞浓度为4.7亿个/ml；
步骤A2所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4～0.6︰0.6～0.8︰0.2～0.4︰0.04～0.1︰1～1.5；
优选的，步骤A2所述混合酶制剂包括下述重量配比的组分：淀粉酶︰糖化酶︰植酸酶︰纤维素酶︰果胶酶︰木聚糖酶︰中性蛋白酶＝0.2︰1︰0.4︰0.6︰0.4︰0.1︰1.35；
步骤A2所述混合营养盐包括下述重量配比的组分：KH2PO4 0.8～1.2份、MgSO40.2份；所述混合营养盐包括下述重量配比的组分：KH2PO4 1份、MgSO4 0.2份；
步骤A2所述淀粉酶的酶活力为1万U/g，所述糖化酶的酶活力为10万U/g，所述植酸酶的酶活力为1万U/g，所述纤维素酶的酶活力为1万U/g，所述果胶酶的酶活力为2万U/g，所述木聚糖酶的酶活力为20万U/g，所述中性蛋白酶的酶活力为5万U/g。
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