CN113845422B - 一种从紫锥菊中批量制备l-菊苣酸的工艺及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种从紫锥菊中批量制备L‑菊苣酸的工艺及其应用，属于中药分离纯化精制技术领域。本发明通过优化工艺方案，从而进行醇提水沉处理，柱层析及乙酸乙酯萃取除杂，制备液相分离及结晶操作即可大批量获得纯度98％以上的L‑菊苣酸原料，非常适合工业化大规模生产，因此具有良好的实际应用之价值。
Description
技术领域
本发明属于中药分离纯化精制技术领域，具体涉及一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺及应用。
背景技术
本发明背景技术中公开的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
在全球性新冠病毒防治的过程中，中医药在抗病毒方面发挥着日益重要的作用，受到国内外人士的青睐。与新型冠状病毒同属于呼吸道病毒的RSV，是呼吸***感染的常见病原，是婴幼儿肺炎、老年性肺炎、哮喘等疾病的元凶，目前缺乏有效的治疗药物，而现上市的代表性药物利巴韦林副作用较大，其安全性和疗效性还有待进一步考证。中药提取物菊苣酸抗RSV疗效显著，毒副作用小，安全性高，且体内外抗RSV作用机制明确，在抗RSV新型候选药物的开发中具有广阔的前景，然而目前市售紫锥菊提取物中菊苣酸提取工艺得率和纯度较低，无法满足以菊苣酸为原料制备抗RSV新药的开发需求。
目前菊苣酸主要用于医药原料和保健食品两大行业，而市售紫锥菊提取物中菊苣酸含量较低，以紫锥菊为原料大规模制备高纯度菊苣酸的生产工艺至今未见报道，这在一定程度上限制了菊苣酸的进一步开发利用。因此，优化出一套经济环保、成本低廉、适合大规模工业化生产的菊苣酸单体制备工艺的方案具有重要意义。
为获得高纯度菊苣酸单体，国内外学者展开了大量实验研究。Nigel B.Perry等人[J.Agric.Food Chem,2001,49(4):1702-1706]利用制备色谱获得纯度95％的菊苣酸对照品，但该方法不易放大生产，成本高，试剂有毒害，故只能用于生产标准品，而不能够进行工业化生产；北京化学大学报道(专利号:CN1587251)用氯仿对紫锥菊进行处理，甲醇提取并用乙酸乙酯萃取，最后用乙腈反相色谱柱进行纯化，而获得高纯度的菊苣酸产品。该工艺使用的氯仿和甲醇，不仅有害环境而且容易残留，且乙腈反相色谱柱生产效率较低，成本昂贵；西安格硕信息科技有限公司报道(专利号:CN109748796A)采用的提取溶剂及重结晶溶剂分别为甲醇和丙酮，具有一定的毒性；湖南师范大学报道(专利号:CN102161620A)报道采用有机溶剂超声提取，并用氯仿进行干燥纯化等处理可获得含量为25％-40％的菊苣酸，纯度较低且超声处理方法不适用于大规模的工业生产；桂林三宝药业有限公司(专利号:CN105294440A)采用多次硅胶柱层析，且用甲醇和丙酮进行洗脱，操作步骤繁琐，耗时费力，难于实现大规模的工业生产。中国药科大学(专利号:CN104693034A)、新疆特瑞生物科技有限公司(专利号:CN103641716A)及湖南朗林生物资源股份有限公司(专利号:CN111233950A)报道的工艺所得菊苣酸的纯度较低(小于85％)；沈阳双鼎科技有限公司(专利号:CN102249917A、CN 102391118A)报道了菊苣酸的提取、分离和鉴定方法，用于抱茎苦卖菜药材和制剂的含量测定及质量控制。南京泽朗医药科技有限公司(专利号:CN102060706A)报道了利用超临界CO2及其夹带剂进行萃取及离子交换等分离纯化方法制备高含量的菊苣酸，成本较高，不适用于工业生产。吴启林(专利号:CN1587251A)工艺以菊苣酸含量较高的紫锥菊根粉末为原料，虽提取物中叶绿素等脂溶性杂质少，但不利于资源的可持续利用；药材经粉碎提取虽然可以提高提取效率，但增加了生产工序，同时易造成粉尘飞扬，对车间环境及安全造成影响。pH＝3时菊苣酸较稳定，在酸化处理过程中调药液pH＝1～3，pH波动较大，工艺的稳定性较差，不同批次实验过程中菊苣酸的降解及杂质等沉淀情况不同，不便于质量控制。乙酸乙酯萃取3次，每次2h，萃取次数较多且萃取时间长，溶剂用量大，影响萃取效率、增加经济成本。柱层析工艺中仅采用去离子水除水溶性杂质，除杂不完全；然后以10-50％乙醇为洗脱剂富集菊苣酸，不同浓度洗脱剂对菊苣酸及杂质的洗脱能力不同，富集菊苣酸所消耗洗脱剂体积变化较大，且洗脱液菊苣酸纯度发生变化，不利于控制产品的重现性及质量的稳定性。萃取及柱层析所得菊苣酸溶液均干燥成固体再进行下一步处理，不仅耗时而且增加生产成本。虽然采用该工艺可获得纯度较高的菊苣酸，但紫锥菊原料不同，提取物内所含杂质的种类及含量也会发生变化，故分离纯化工艺工序及效果也会存在差异。湖南师范大学(专利号:CN109678706A)公开了一种采用化学合成方法制备L-菊苣酸晶型，该晶型X-射线粉末衍射图在6.36°、12.60°、19.24°、25.80°、32.46°、36.32°处显示出衍射，然而目前国内外尚未对植物提取菊苣酸的晶型进行报道。
发明内容
针对现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种从植物紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺及应用，采用本发明的技术方案，可大批量获得纯度98％以上的菊苣酸原料，非常适合工业化大规模生产。
本发明的第一个方面，提供一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺方法，所述方法包括：以紫锥菊药材干燥地上部分为原料，进行醇提水沉处理，柱层析及乙酸乙酯萃取除杂，制备液相分离及结晶操作。
对于菊苣酸而言，由于其受到光照、热等影响，会导致其稳定性受到破坏，因此优选的，上述整个操作步骤中选择避光处理，从而降低其在制备过程中成分的破坏。
具体的，所述工艺方法包括：
提取：紫锥菊药材干燥地上部分，以乙醇水溶液回流提取多次，合并滤液后浓缩得浓缩液；
水沉及柱前处理：将浓缩液水沉处理，得水沉上清液进行离心，其离心液浓缩、抽滤后作为上样液待用；
大孔树脂纯化：湿法装柱；固定上样量不变，药液以1～3BV/h的流速上样，循环吸附2～3h，分别用酸性纯化水3～6BV，酸性的10％乙醇溶液3～6BV，20％乙醇溶液1～2BV进行梯度除杂，再用30％～35％乙醇溶液6BV～12BV洗脱富集菊苣酸，收集洗脱液减压浓缩；
乙酸乙酯萃取：取C＝10～18mg/mL、pH＝1～3的30％～35％浓缩液，以乙酸乙酯萃取；有机相经酸性水反向萃取，有机相减压浓缩至稠膏状，用高纯度乙醇置换出乙酸乙酯相继续浓缩至稠膏状并干燥；
高压制备液相及结晶：用10～20％的甲醇溶液溶解菊苣酸粗粉，离心，上清液减压抽滤，进样分离，根据菊苣酸出峰时间，收集30～50min色谱峰对应的流出液，减压浓缩低温析晶，过滤、洗涤、干燥后即得。
本发明的第二个方面，提供上述制备方法在工业化制备L-菊苣酸中应用。
上述一个或多个技术方案的有益技术效果：
上述技术方案提供一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺，通过优化工艺方案，从而进行醇提水沉处理，柱层析及乙酸乙酯萃取除杂，制备液相分离及结晶操作即可大批量获得纯度98％以上的L-菊苣酸原料，非常适合工业化大规模生产，因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明工艺流程图；
图2为本发明采用X-射线粉末衍射法对实施例1获得的L-菊苣酸晶型表征图；
图3为本发明采用差示扫描量热分析法对实施例1获得的L-菊苣酸晶型的表征图；
图4为本发明采用热重分析法对对实施例1获得的L-菊苣酸晶型的表征图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
现结合具体实例对本发明作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照试剂公司所推荐的条件；下述实施例中所用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明的一个典型具体实施方式中，提供一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺方法，所述方法包括：以紫锥菊药材干燥地上部分为原料，进行醇提水沉处理，柱层析及乙酸乙酯萃取除杂，制备液相分离及结晶操作。
对于菊苣酸而言，由于其受到光照、热等影响，会导致其稳定性受到破坏，因此优选的，上述整个操作步骤中选择避光处理，从而降低其在制备过程中成分的破坏。
本发明的又一具体实施方式中，所述工艺方法包括：
提取：紫锥菊药材干燥地上部分，以乙醇水溶液回流提取多次，合并滤液后浓缩得浓缩液；
水沉及柱前处理：将浓缩液水沉处理，得水沉上清液进行离心，其离心液浓缩、抽滤后作为上样液待用；
大孔树脂纯化：湿法装柱；固定上样量不变，药液以1～3BV/h的流速上样，循环吸附2～3h，分别用酸性纯化水3～6BV，酸性的10％乙醇溶液3～6BV，20％乙醇溶液1～2BV进行梯度除杂，再用30％～35％乙醇溶液6BV～12BV洗脱富集菊苣酸，收集洗脱液减压浓缩；
乙酸乙酯萃取：取C＝10～18mg/mL、pH＝1～3的30％～35％浓缩液，以乙酸乙酯萃取；有机相经酸性水反向萃取，有机相减压浓缩至稠膏状，用高纯度乙醇置换出乙酸乙酯相继续浓缩至稠膏状并干燥；
高压制备液相及结晶：用10～20％的甲醇溶液溶解菊苣酸粗粉，离心，上清液减压抽滤，进样分离，根据菊苣酸出峰时间，收集30～50min色谱峰对应的流出液，减压浓缩低温析晶，过滤、洗涤、干燥后即得。
本发明的又一具体实施方式中，所述提取步骤中，以20-40％(优选为30％)乙醇水溶液回流提取2～4次，优选为3次，控制料液比为1:8-15，如1:10、1:12、1:14，提取时间控制为0.1-2h，进一步为0.5-1.5h；在本发明的一个具体实施方式中，所述提取步骤包括：紫锥菊药材干燥地上部分，以30％的乙醇水溶液下回流提取3次，料液比分别为1:14、1:12、1:10，提取时间分别为1.5h、0.5h、0.5h，合并3次滤液，减压浓缩至原体积的1/3。
本发明的又一具体实施方式中，所述水沉及柱前处理步骤中，所述水沉处理具体方法包括：在低温(如4℃)条件下水沉处理5-8h，优选为6h；离心液浓缩至原体积的1/2-1/4，优选为1/3；
本发明的又一具体实施方式中，采用水沉除去部分脂溶性杂质，经上述处理工序后，即有大量黄绿色沉淀出现，不仅除杂效果明显，而且环保经济。
本发明的又一具体实施方式中所述大孔树脂纯化步骤中，湿法装柱使树脂床径高比1:5～1：10；
本发明的又一具体实施方式中，所述乙酸乙酯萃取步骤中，使用同体积的乙酸乙酯萃取2-3次，优选为2次；所述高纯度乙醇为浓度为不小于90％的乙醇，如使用95％乙醇；
所述干燥采用减压真空干燥进行，具体的，温度控制为50～60℃，压强控制为-0.07～0.10MPa。
本申请分离纯化过程中，通过实验比较发现，先柱层析进一步除去水溶性杂质，再进行乙酸乙酯萃取其纯化效果明显优于先萃取再柱层析纯化。在柱层析过程中采用水、10％乙醇、20％乙醇梯度除杂，分级除去不同极性杂质，再用乙醇浓度范围更具体的30-35％乙醇富集菊苣酸，纯化效果较好。再乙酸乙酯萃取过程中采用水反萃对乙酸乙酯相内的水溶性杂质进一步去除，使菊苣酸的纯度提高了2％-5％，且实验工艺间具有连贯性，更加适于工业化生产。
所述高压制备液相及结晶步骤中，减压浓缩低温析晶，过滤、洗涤、干燥具体方法包括：减压浓缩至原体积的1/30～1/40，在低温(如4℃)环境析晶4～10h，过滤白色或类白色针状及针簇状结晶，并用低温(如4℃)水(纯化水)反复洗涤滤饼；滤饼(真空)干燥后即得。
需要说明的是，采用制备液相纯化菊苣酸的过程中，虽然该工艺成本相对较高，但通过前处理进一步纯化可使菊苣酸粗粉的纯度在80％以上，样品相对纯净，对制备液相的填料污染较少，填料可重复利用，工艺稳定且一批可获得纯度98％的L-菊苣酸晶型单体以满足市场需求，可获得更高的社会效益和经济效益。
本发明的又一具体实施方式中，提供上述制备方法在工业化制备L-菊苣酸中应用。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中为注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件进行。
实施例1
一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺，包括如下的步骤：
(1)提取:500g紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量30％的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药渣再用l2倍量、l0倍量30％乙醇进行第二次、第三次回流提取(均0.5h)，合并3次滤液并减压浓缩至原体积的1/3。
(2)水沉及柱前处理：上述浓缩液转移至4℃条件下水沉6h。水沉上清液离心(v＝5000r/min、t＝10min)，抽滤所得滤液进一步减压浓缩至药液菊苣酸浓度c＝2.90mg/mL后调pH＝3转至4℃条件储存，离心抽滤后滤液作为上样液。
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂用无水乙醇溶液浸泡树脂24h，对树脂进行活化。在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内使树脂床径高比1：10，用纯化水冲洗树脂至无醇味。
(4)大孔树脂纯化:以上样流速为2BV/h进行上样，循环吸附3h，分别用pH＝3纯化水3BV，pH＝3的10％乙醇溶液3BV，20％乙醇溶液2BV进行梯度除杂，再用35％乙醇溶液10BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味。
(5)乙酸乙酯萃取：取上述C＝13.56mg/mL、pH＝2浓缩液，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相并用pH＝2水同体积反向萃取1次，每次40min。有机相减压浓缩至稠膏状后转至托盘内减压真空干燥(T＝50℃，P＝-0.09MPa)。
(6)制备及结晶：将上述菊苣酸粗粉用甲醇溶解，离心后上清液减压抽滤，进样分离，根据菊苣酸出峰时间，收集36～44min色谱峰对应的流出液减压浓缩至后4℃冰箱过夜析晶，过滤并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥(T＝60℃、P＝-0.10MPa)。
实施例2
一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺，包括如下的步骤：
(1)提取:500g紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量30％的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药渣再用l2倍量30％乙醇进行第二次回流提取0.5h；滤后药渣用l0倍量30％乙醇进行第三次回流提取0.5h，合并3次滤液并减压浓缩至原体积的1/3。
(2)水沉及柱前处理：上述浓缩液转移至4℃条件下水沉6h。水沉上清液离心(v＝5000r/min、t＝10min)，抽滤所得滤液进一步减压浓缩至药液菊苣酸浓度c＝2.57mg/mL后调pH＝3转至4℃条件储存，离心抽滤后滤液作为上样液。
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂用无水乙醇溶液浸泡树脂24h，对树脂进行活化。在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内使树脂床径高比1：10，用纯化水冲洗树脂至无醇味。
(4)大孔树脂纯化:以上样流速为2BV/h进行上样，循环吸附3h，分别用pH＝3纯化水3BV，pH＝3的10％乙醇溶液3BV，20％乙醇溶液2BV进行梯度除杂，再用35％乙醇溶液10BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味。
(5)乙酸乙酯萃取：取上述C＝15.15mg/mL、pH＝1.99浓缩液，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相并用pH＝2水同体积反向萃取1次，每次40min。有机相减压浓缩至稠膏状后转至托盘内减压真空干燥(T＝55℃，P＝-0.08MPa)。
(6)制备及结晶：将上述菊苣酸粗粉甲醇溶解，离心后上清液减压抽滤，进样分离，收集32～42min色谱峰对应的流出液减压浓缩至后4℃冰箱过夜，过滤晶体，并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥(T＝60℃、P＝-0.09MPa)。
实施例3
一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺，包括如下的步骤：
(1)提取:500g紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量30％的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药渣再用l2倍量30％乙醇进行第二次回流提取0.5h；滤后药渣用l0倍量30％乙醇进行第三次回流提取0.5h，合并3次滤液并减压浓缩至原体积的1/3。
(2)水沉及柱前处理：上述浓缩液转移至4℃条件下水沉6h。水沉上清液离心(v＝5000r/min、t＝10min)，抽滤所得滤液进一步减压浓缩至药液菊苣酸浓度c＝2.71mg/mL后调pH＝2.99转至4℃条件储存，离心抽滤后滤液作为上样液。
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂用无水乙醇溶液浸泡树脂24h，对树脂进行活化。在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内使树脂床径高比1：10，用纯化水冲洗树脂至无醇味。
(4)大孔树脂纯化:以上样流速为2BV/h进行上样，循环吸附3h，分别用pH＝3纯化水3BV，pH＝3的10％乙醇溶液6BV，20％乙醇溶液2BV进行梯度除杂，再用35％乙醇溶液9BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味。
(5)乙酸乙酯萃取：取上述浓缩液C＝13.34mg/mL、pH＝2.00)，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相并用pH＝2水同体积反向萃取1次，每次40min。有机相减压浓缩至稠膏状后转至托盘内减压真空干燥(T＝50℃，P＝-0.09MPa)。
(6)制备及结晶：将上述有机相粉末用15％甲醇溶解，配置浓度约28mg/mL，离心后上清液减压抽滤，进样分离，根据菊苣酸出峰时间，收集26～36min色谱峰对应的流出液减压浓缩至后4℃冰箱静置过夜，晶体减压过滤，并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥(T＝60℃、P＝-0.09MPa)。
对比例1
一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺，包括如下的步骤：
(1)提取:取500g紫锥菊药材干燥地上部分，用10倍量60％的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药渣再用8倍量60％乙醇进行第二次回流提取1h；滤后药渣用6倍量60％乙醇进行第三次回流提取1h，合并3次滤液并减压浓缩至原体积的1/3。
(2)水沉及柱前处理：上述浓缩液转移至4℃条件下水沉6h。水沉上清液离心(v＝5000r/min、t＝10min)，抽滤所得滤液进一步减压浓缩至药液菊苣酸浓度C＝2.98mg/mL后调pH＝3.00转至4℃条件储存，离心抽滤后滤液作为上样液。
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂用无水乙醇溶液浸泡树脂24h，对树脂进行活化。在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内使树脂床径高比1：10，用纯化水冲洗树脂至无醇味。
(4)大孔树脂纯化:以上样流速为2BV/h进行上样，循环吸附3h，先用pH＝3纯化水3BV除杂，再用10％乙醇溶液6BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味。
(5)乙酸乙酯萃取：取上述C＝17.19mg/mL、pH＝3.00浓缩液，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相减压浓缩至稠膏状后转至托盘内减压真空干燥(T＝50℃，P＝-0.09MPa)。
(6)制备及结晶：将上述有机相粉末用100％甲醇溶解，配置浓度约80mg/mL，离心后上清液减压抽滤，进样分离，根据菊苣酸出峰时间，收集26～39min色谱峰对应的流出液减压浓缩至后4℃冰箱过夜析晶，减压抽滤晶体，并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥(T＝60℃、P＝-0.10MPa)。
对比例2
一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺，包括如下的步骤：
(1)提取:500g紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量pH＝2的30％的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药渣再用l2倍量pH＝2的30％乙醇进行第二次回流提取0.5h；滤后药渣用l0倍量pH＝2的30％乙醇进行第三次回流提取0.5h，合并3次滤液并减压浓缩至原体积的1/3。
(2)水沉及柱前处理：上述浓缩液转移至4℃条件下水沉12h。水沉上清液离心(v＝5000r/min、t＝10min)，抽滤所得滤液进一步减压浓缩至药液菊苣酸浓度C＝2.71mg/mL后调pH＝2.99转至4℃条件储存，离心抽滤后滤液作为上样液。
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂用无水乙醇溶液浸泡树脂24h，对树脂进行活化。在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内使树脂床径高比1：10，用纯化水冲洗树脂至无醇味。
(4)大孔树脂纯化:以上样流速为2BV/h进行上样，循环吸附2h，先用pH＝3纯化水3BV除杂，再用20％乙醇溶液6BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味。
(5)乙酸乙酯萃取：取上述C＝17.19mg/mL、pH＝4.00浓缩液，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相减压浓缩至稠膏状后转至托盘内减压真空干燥(T＝50℃，P＝-0.09MPa)。
(6)制备及结晶：将上述菊苣酸粗粉用100％甲醇溶解，配置浓度约80mg/mL，离心后上清液减压抽滤，进样分离，收集28～37min色谱峰对应的流出液减压浓缩至后4℃冰箱过夜析晶，减压抽滤，并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥(T＝60℃、P＝-0.10MPa)。
对比例3
一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺，包括如下的步骤：
(1)提取:取500g紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量pH＝3的30％的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药渣再用l2倍量pH＝3的30％乙醇进行第二次回流提取0.5h；滤后药渣用l0倍量pH＝3的30％乙醇进行第三次回流提取0.5h，合并3次滤液并减压浓缩至原体积的1/3。
(2)水沉及柱前处理：上述浓缩液转移至25℃条件下水沉6h。水沉上清液离心(v＝5000r/min、t＝10min)，抽滤所得滤液进一步减压浓缩至药液菊苣酸浓度C＝2.71mg/mL后调pH＝2.99转至4℃条件储存，离心抽滤后滤液作为上样液。
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂用无水乙醇溶液浸泡树脂24h，对树脂进行活化。在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内使树脂床径高比1：10，用纯化水冲洗树脂至无醇味。
(4)大孔树脂纯化:以上样流速为2BV/h进行上样，循环吸附3h，先用pH＝3纯化水3BV除杂，再用50％乙醇溶液6BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味。
(5)乙酸乙酯萃取：取上述C＝17.19mg/mL、pH＝2.00浓缩液，用同体积的乙酸乙酯萃取3次，每次10min；合并有机相减压浓缩至稠膏状后转至托盘内减压真空干燥(T＝50℃，P＝-0.10MPa)。
(6)制备及结晶：将上述菊苣酸粗粉用15％甲醇溶解，配置浓度约17.55mg/mL，离心后上清液减压抽滤，进样分离，根据菊苣酸出峰时间收集40～50min色谱峰对应的流出液减压浓缩至后4℃冰箱过夜，晶体减压抽滤，并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥(T＝60℃、P＝-0.10MPa)。
结果分析
分别测定实施例和对比例的结果(国际通用标准)，以菊苣酸的提取率和纯度为指标，测定结果如下。
由此可以看出，本发明在获得的紫锥菊提取物产品中菊苣酸含量高，与对比例相比，整个工艺获得了良好的提取效果，与对比例对比分析可知，本发明在菊苣酸的提取、水沉工艺的优化、树脂的梯度除杂和乙酸乙酯萃取工艺改进等方面取得了更优的效果。
中试
如图1所示，一种从紫锥菊中批量制备高纯度L-菊苣酸的工艺，包括如下步骤:
(1)提取:125kg紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量30％的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药材再用l2倍量30％乙醇进行第二次回流提取；滤后药材用l0倍量30％乙醇进行第三次回流提取，第二、三次回流提取时间均为0.5h，合并3次滤液，得滤液总体积为4296L，双效节能浓缩蒸发器减压浓缩至1604L(一效温度T1＝70℃、P＝-0.048MPa；二效温度T2＝70℃、P＝-0.066MPa)。
(2)水沉及柱前处理：上述浓缩液转移至沉淀罐内4℃条件下水沉6h。水沉上清液以进料速度为30～50mL/s进行离心，并减压浓缩(T＝74℃，P＝-0.062MPa)至482L，浓缩液上样前调pH＝3转移至4℃冷库储存，离心抽滤后滤液作为上样液。
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂75Kg用1.5倍量95％乙醇溶液浸泡树脂24h，对树脂进行活化。在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内，用纯化水冲洗树脂至无醇味。
(4)大孔树脂纯化:根据生产车间实际情况及实验室工艺参数对不锈钢大孔吸附柱(h＝160cm，d＝25cm)径高进行了折算，确定树脂床径高比为1:6；药液菊苣酸实际浓度范围为1.2～1.7mg/mL，考虑到浓缩损失，故保持上样量不变的条件下，根据上样浓度调整上样体积。以流速为2BV/h进行上样，循环吸附3h，分别用pH＝3纯化水3BV，pH＝3的10％乙醇溶液3BV，20％乙醇溶液2BV进行梯度除杂，再用35％乙醇溶液6BV～12BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味。
(5)乙酸乙酯萃取：取上述浓缩液(C＝11～16mg/mL、pH＝1.91)，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相并用pH＝2水同体积反向萃取1次，每次40min。有机相减压浓缩至稠膏状，用95％乙醇置换出乙酸乙酯相继续浓缩至稠膏状转移至托盘内减压真空干燥(T＝50～60℃，P＝-0.10MPa)。
(6)高压制备及结晶：将1010-C18为填料装入DAC-150动态轴向压缩柱内，用15％的甲醇溶液溶解上述菊苣酸粉末，配置成浓度为15mg/mL的药液，离心(v＝10000r/min，t＝7min)，上清液减压抽滤，以菊苣酸量为10g进样分离，根据菊苣酸出峰时间，收集40～50min色谱峰对应的流出液6L，减压浓缩流出液至原体积的1/30(T＝60℃、P＝-0.10MPa)，浓缩液转至4℃环境析晶，白色或类白色针状及针簇状体晶体过滤，并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥(T＝60℃、P＝-0.10MPa)，即得纯度为98％以上的L-菊苣酸原料，结晶母液重结晶进行回收处理。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种从紫锥菊中批量制备L-菊苣酸的工艺方法，其特征在于，包括如下的步骤：
(1)提取:500g紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量30%的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药渣再用12倍量、10倍量30%乙醇进行第二次、第三次回流提取，第二次、第三次回流提取均为0.5h，合并3次滤液并减压浓缩至原体积的1/3得浓缩液；
(2)水沉及柱前处理：将步骤（1）所述浓缩液转移至4℃条件下水沉6 h；水沉上清液离心，抽滤所得滤液进一步减压浓缩至药液菊苣酸浓度c=2.90mg/mL后调pH=3转至4℃条件储存，离心抽滤后滤液作为上样液；离心条件为：v=5000 r/min、t=10 min；
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂用无水乙醇溶液浸泡树脂24 h，对树脂进行活化；在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内使树脂床径高比1：10，用纯化水冲洗树脂至无醇味；
(4)大孔树脂纯化：以上样流速为2 BV/h进行上样，循环吸附3 h，分别用pH=3纯化水3BV，pH=3的10%乙醇溶液3BV，20%乙醇溶液2BV进行梯度除杂，再用35%乙醇溶液10BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味；
(5)乙酸乙酯萃取：取步骤（4）中的C=13.56mg/mL、pH=2浓缩液，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相并用pH=2水同体积反向萃取1次，每次40min；有机相减压浓缩至稠膏状后转至托盘内减压真空干燥得菊苣酸粗粉，所述减压真空干燥具体条件为：T=50℃，P=-0.09MPa；
(6)制备及结晶：将所述菊苣酸粗粉用甲醇溶解，离心后上清液减压抽滤，进样分离，根据菊苣酸出峰时间，收集36～44min色谱峰对应的流出液减压浓缩至后4℃冰箱过夜析晶，过滤并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥，真空干燥具体条件为：T=60℃、P=-0.10MPa。
2.一种从紫锥菊中批量制备L-菊苣酸的工艺方法，其特征在于，包括如下的步骤：
(1)提取:500g紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量30%的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药渣再用12倍量30%乙醇进行第二次回流提取0.5h；滤后药渣用10倍量30%乙醇进行第三次回流提取0.5h，合并3次滤液并减压浓缩至原体积的1/3得浓缩液；
(2)水沉及柱前处理：将步骤（1）所述浓缩液转移至4℃条件下水沉6 h；水沉上清液离心，抽滤所得滤液进一步减压浓缩至药液菊苣酸浓度c=2.57mg/mL后调pH=3转至4℃条件储存，离心抽滤后滤液作为上样液，离心条件为：v=5000 r/min、t=10 min；
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂用无水乙醇溶液浸泡树脂24 h，对树脂进行活化；在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内使树脂床径高比1：10，用纯化水冲洗树脂至无醇味；
(4)大孔树脂纯化: 以上样流速为2 BV/h进行上样，循环吸附3 h，分别用pH=3纯化水3BV，pH=3的10%乙醇溶液3BV，20%乙醇溶液2BV进行梯度除杂，再用35%乙醇溶液10BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味；
(5)乙酸乙酯萃取 ：取步骤（4）中C=15.15mg/mL、pH=1.99浓缩液，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相并用pH=2水同体积反向萃取1次，每次40min；有机相减压浓缩至稠膏状后转至托盘内减压真空干燥得菊苣酸粗粉，所述减压真空干燥具体条件为：T=55℃，P=-0.08MPa；
(6)制备及结晶：将所述菊苣酸粗粉甲醇溶解，离心后上清液减压抽滤，进样分离，收集32～42min色谱峰对应的流出液减压浓缩至后4℃冰箱过夜，过滤晶体，并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥，所述真空干燥的具体条件为：T=60℃、P=-0.09MPa。
3.一种从紫锥菊中批量制备L-菊苣酸的工艺方法，其特征在于，包括如下的步骤：
(1)提取:500g紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量30%的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药渣再用12倍量30%乙醇进行第二次回流提取0.5h；滤后药渣用10倍量30%乙醇进行第三次回流提取0.5h，合并3次滤液并减压浓缩至原体积的1/3得浓缩液；
(2)水沉及柱前处理：将步骤（1）所述浓缩液转移至4℃条件下水沉6 h；水沉上清液离心，抽滤所得滤液进一步减压浓缩至药液菊苣酸浓度c=2.71mg/mL后调pH=2.99转至4℃条件储存，离心抽滤后滤液作为上样液；离心条件为：v=5000 r/min、t=10 min；
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂用无水乙醇溶液浸泡树脂24 h，对树脂进行活化；在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内使树脂床径高比1：10，用纯化水冲洗树脂至无醇味；
(4)大孔树脂纯化: 以上样流速为2 BV/h进行上样，循环吸附3 h，分别用pH=3纯化水3BV，pH=3的10%乙醇溶液6BV，20%乙醇溶液2BV进行梯度除杂，再用35%乙醇溶液9BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味；
(5)乙酸乙酯萃取：取步骤（4）中C=13.34mg/mL、pH=2.00的浓缩液，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相并用pH=2水同体积反向萃取1次，每次40min；有机相减压浓缩至稠膏状后转至托盘内减压真空干燥，减压真空干燥具体条件为：T=50℃，P=-0.09MPa；
(6)制备及结晶：将上述有机相粉末用15%甲醇溶解，配置浓度约28mg/mL，离心后上清液减压抽滤，进样分离，根据菊苣酸出峰时间，收集26～36min色谱峰对应的流出液减压浓缩至后4℃冰箱静置过夜，晶体减压过滤，并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥，真空干燥具体条件为：T=60℃、P=-0.09MPa。
4.一种从紫锥菊中批量制备L-菊苣酸的工艺方法，其特征在于，包括如下步骤:
(1)提取:125kg紫锥菊药材干燥地上部分，用14倍量30%的乙醇水溶液浸泡0.5h，第一次加热回流提取1.5h；过滤后药材再用12倍量30%乙醇进行第二次回流提取；滤后药材用10倍量30%乙醇进行第三次回流提取，第二、三次回流提取时间均为0.5h，合并3次滤液，得滤液总体积为4296L，双效节能浓缩蒸发器减压浓缩至1604L；所述双效节能浓缩蒸发器减压浓缩具体条件为：一效温度T1=70℃、P=-0.048MPa；二效温度T2=70℃、P=-0.066MPa；
(2)水沉及柱前处理：将步骤（1）制得的浓缩液转移至沉淀罐内4℃条件下水沉6 h；水沉上清液以进料速度为30～50mL/s进行离心，并减压浓缩至482L，浓缩液上样前调pH=3转移至4℃冷库储存，离心抽滤后滤液作为上样液；减压浓缩具体条件为：T=74℃，P=-0.062MPa；
(3)大孔吸附树脂预处理：取AB-8型大孔吸附树脂75Kg用1.5倍量95%乙醇溶液浸泡树脂24 h，对树脂进行活化；在活化过程中及时除去乙醇上漂浮的浑浊物，更换乙醇并保持乙醇高出树脂面；将活化的树脂转至层析柱内，用纯化水冲洗树脂至无醇味；
(4)大孔树脂纯化: 根据生产车间实际情况及实验室工艺参数对不锈钢大孔吸附柱径高进行折算，确定树脂床径高比为1:6；药液菊苣酸实际浓度范围为1.2～1.7 mg/mL，以流速为2 BV/h进行上样，循环吸附3 h，分别用pH=3纯化水3BV，pH=3的10%乙醇溶液3BV，20%乙醇溶液2BV进行梯度除杂，再用35%乙醇溶液6BV～12BV洗脱富集菊苣酸，洗脱液减压浓缩至无醇味；所述不锈钢大孔吸附柱h=160 cm，d=25 cm；
(5)乙酸乙酯萃取 ：取步骤（4）中C=11～16mg/mL、pH=1.91的浓缩液，用同体积的乙酸乙酯萃取2次，每次40min；合并有机相并用pH=2水同体积反向萃取1次，每次40min；有机相减压浓缩至稠膏状，用95%乙醇置换出乙酸乙酯相继续浓缩至稠膏状转移至托盘内减压真空干燥，减压真空干燥具体条件为：T=50～60℃，P=-0.10MPa；
(6)高压制备及结晶：将1010-C18为填料装入DAC-150动态轴向压缩柱内，用15%的甲醇溶液溶解上述菊苣酸粉末，配置成浓度为15mg/mL的药液，离心，离心条件为v=10000r/min，t=7min，上清液减压抽滤，以菊苣酸量为10g进样分离，根据菊苣酸出峰时间，收集40～50min色谱峰对应的流出液6L，减压浓缩流出液至原体积的1/30；所述减压浓缩条件为：T=60℃、P=-0.10MPa，浓缩液转至4℃环境析晶，白色或类白色针状及针簇状体晶体过滤，并用4℃纯化水洗涤滤饼，滤饼真空干燥，所述真空干燥具体条件为：T=60℃、P=-0.10MPa，即得纯度为98%以上的L-菊苣酸原料，结晶母液重结晶进行回收处理。
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Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000063152A1 (en) * | 1999-02-22 | 2000-10-26 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Acetylated and related analogues of chicoric acid as hiv integrase inhibitors |
| CN1587251A (zh) * | 2004-07-20 | 2005-03-02 | 北京化工大学 | 从紫锥菊制备菊苣酸的方法 |
| CN101148410A (zh) * | 2007-10-30 | 2008-03-26 | 聊城大学 | 一种从紫锥菊中提取高纯度菊苣酸的方法 |
| CN102060706A (zh) * | 2010-12-24 | 2011-05-18 | 南京泽朗医药科技有限公司 | 一种从紫锥菊中提取纯化菊苣酸的方法 |
| CN103408423A (zh) * | 2013-07-17 | 2013-11-27 | 张家港威胜生物医药有限公司 | 一种天然活性产物l-菊苣酸的合成工艺 |
| CN106397188A (zh) * | 2016-09-07 | 2017-02-15 | 张家港威胜生物医药有限公司 | 一种l‑菊苣酸的制备方法 |
| CN107050010A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-08-18 | 山东中医药大学 | 菊苣酸在制备抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用 |
| CN109867603A (zh) * | 2019-04-27 | 2019-06-11 | 蚌埠学院 | 一种菊苣酸的纯化方法 |
-
2021
- 2021-11-04 CN CN202111300839.3A patent/CN113845422B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000063152A1 (en) * | 1999-02-22 | 2000-10-26 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Acetylated and related analogues of chicoric acid as hiv integrase inhibitors |
| CN1587251A (zh) * | 2004-07-20 | 2005-03-02 | 北京化工大学 | 从紫锥菊制备菊苣酸的方法 |
| CN101148410A (zh) * | 2007-10-30 | 2008-03-26 | 聊城大学 | 一种从紫锥菊中提取高纯度菊苣酸的方法 |
| CN102060706A (zh) * | 2010-12-24 | 2011-05-18 | 南京泽朗医药科技有限公司 | 一种从紫锥菊中提取纯化菊苣酸的方法 |
| CN103408423A (zh) * | 2013-07-17 | 2013-11-27 | 张家港威胜生物医药有限公司 | 一种天然活性产物l-菊苣酸的合成工艺 |
| CN106397188A (zh) * | 2016-09-07 | 2017-02-15 | 张家港威胜生物医药有限公司 | 一种l‑菊苣酸的制备方法 |
| CN107050010A (zh) * | 2016-11-24 | 2017-08-18 | 山东中医药大学 | 菊苣酸在制备抗呼吸道合胞病毒的药物中的应用 |
| CN109867603A (zh) * | 2019-04-27 | 2019-06-11 | 蚌埠学院 | 一种菊苣酸的纯化方法 |
Non-Patent Citations (9)
| Title |
|---|
| Anti-RSV activities of chicoric acid from Echinacea purpurea in vitro;Tianxi Zhang，等;Minerva Surgery;第77卷(第01期);78-80 * |
| Chicoric Acid: Natural Occurrence, Chemical Synthesis, Biosynthesis, and Their Bioactive Effects;Min Yang，等;Frontiers in Chemistry;第10卷;第888673篇第1-16页 * |
| Highly selective separation and purification of chicoric acid from Echinacea purpurea by quality control methods in macroporous adsorption resin column chromatography;Yidan Bai，等;Journal of Separarion Science;第42卷(第05期);1027-1036 * |
| Keabetswe Masike ,等.Deciphering the influence of column chemistry and mass spectrometry settings for the analyses of geometrical isomers of L-chicoric acid.Journal of Chromatography B.2017,第1052卷73-81. * |
| L-菊苣酸在不同溶剂中的光致差向异构化;谢继国，等;天然产物研究与开发;第22卷(第04期);630-633 * |
| 应用大孔吸附树脂吸附分离技术制备菊苣酸的研究;吴启林，等;北京化工大学学报(自然科学版);第31卷(第05期);45-52 * |
| 紫锥菊中菊苣酸大孔吸附树脂纯化工艺的优化;张天锡，等;中成药;1-7 * |
| 紫锥菊中菊苣酸提取纯化工艺研究;吴启林，等;中草药;第35卷(第09期);995-997 * |
| 菊苣酸提取及分离纯化工艺的研究概况;杨敏，等;山东中医杂志;第39卷(第07期);749-753 * |
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