CN113797115A

CN113797115A - 一种抗皮肤老化的制剂及其使用方法

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Publication number: CN113797115A
Application number: CN202010530041.7A
Authority: CN
Inventors: 于钰; 贾凯; 丁松; 李军
Original assignee: Qingdao Youdo Bioengineering Co ltd
Current assignee: Qingdao Youdo Bioengineering Co ltd
Priority date: 2020-06-11
Filing date: 2020-06-11
Publication date: 2021-12-17
Anticipated expiration: 2040-06-11
Also published as: CN113797115B

Abstract

本发明公开了一种抗皮肤老化的制剂及其使用方法。本发明所述的抗皮肤老化的制剂，包括A剂和B剂：A剂作用于皮肤表皮层：所述A剂中至少包含粘多糖；B剂作用于皮肤真皮层：所述B剂中至少包含胶原。本发明通过制剂配合纳米微针，利用纳米微针为可调针长，通过定点定位达到皮肤表皮层与真皮层，不造成制剂浪费，效果即时显著。

Description

一种抗皮肤老化的制剂及其使用方法

技术领域

本发明涉及一种化妆品领域，特别涉及一种抗皮肤老化的制剂及其使用方法。

背景技术

皮肤老化包括内源性老化与外源性老化，内源性老化是随着年龄增长发生的老化现象，外源性老化包括环境的影响，如紫外光照射产生自由基等。老化在皮肤表面的表现为皱纹、松弛、皮肤暗沉等。皮肤老化在表皮层的表现有水合作用降低、活性氧产生等现象，水合作用降低导致皮肤结构改变，角质层变干皮肤弹性下降引起细纹问题。皮肤在真皮处的老化表现为真皮内胞外间质(ECM)无序化，使皮肤产生皱纹和下垂。

现有的抗皱产品都是局部外用于皮肤，在角质层表面发挥作用。然而解决皮肤老化问题，需要进入到皮肤的真皮层和表皮层，如何促进活性分子在皮肤角质层的渗透是急需解决的问题。目前的解决手段一是促进渗透屏障，如化学促进剂，包埋化合物如纳米粒，但是这些方法可能会增加皮肤刺激反应，并且到达真皮层有一定的困难。微针可以轻松实现物理屏障的破坏，并且根据针长，携带活性物到达制定的部位，使活性物在不同的皮肤层发挥作用。

传统的微针是由硅、金属、高分子聚合物和玻璃等材料通过微电子制造技术制成的，这种方法在促进药物吸收的同时会引发疼痛、红肿等问题。近年来研发成功的纳米微针是新型的皮肤促渗技术，直径小，密度高，通过纳米微针的处理，可以将活性物通过皮肤有效地送入皮肤表皮层和真皮层，并且伤口愈合快，无红肿反应。

目前纳米微针的美容仪通常使用的是现有的美白产品，尚无针对皮肤老化设计的从真皮层和表皮层两层综合解决皮肤问题的产品。

发明内容

发明目的：本发明提供一种抗皮肤老化的制剂及其使用方法，通过纳米微针，从皮肤表皮层和真皮层，通过调节微针长度，将活性物送达指定位置，发挥功效。

技术方案：本发明所述的一种抗皮肤老化的制剂，所述制剂包括A剂和B剂：

A剂作用于皮肤表皮层：所述A剂中至少包含粘多糖；

B剂作用于皮肤真皮层：所述B剂中至少包含胶原。

A剂为作用于表皮层，增加表皮层水合度和清除氧自由基，B剂作用于真皮层，供给真皮层细胞营养，促进真皮层成纤维细胞增殖，促进ECM的生成，从而促进胶原蛋白的生成。A剂与B剂的原料都选择人体内的组分或者是无热源安全性高的组分提高产品安全性。

在一个实施方案中，胶原为去端肽胶原蛋白。

本发明中A剂解决皮肤水合作用以及清除氧自由基；B剂促进ECM生成，促进成纤维细胞生长。

在一个实施方案中，所述A制剂中的粘多糖为透明质酸。

在一个实施方案中，所述A制剂中包含SOD。

A剂中的透明质酸是属于粘多糖，在皮肤中透明质酸的羧基几乎完全电离，形成聚阴离子结构，赋予皮肤优异的水合特性，可以改善皮肤屏障功能以及降低透过表皮的水分损失；SOD为超氧化物歧化酶，是人体内抗氧化防御***的重要组分，是生物体抗氧化***的首道防线，SOD可以快速催化超氧阴离子自由基发生歧化反应生成水和氧，是集体代谢产生的超氧阴离子自由基的天然清除剂。

在一个实施方案中，所述B制剂中包含寡肽-1。

在一个实施方案中，所述B制剂中包含氨基酸。

B剂中的寡肽-1可以调节胶原和糖胺聚糖的合成和分解，并且可以调控金属蛋白酶的活性，具有促进成纤维细胞增殖的作用，B剂中的胶原选用去端肽，保持完整三螺旋结构的无热源的胶原，具有与人胶原序列相似度高的重组胶原，重组胶原是III型胶原，是成纤维胶原中的组成部分，可以促进成纤维细胞增殖，氨基酸组合物为13种氨基酸的组合物，为细胞提供营养，为合成胶原蛋白提供营养储备。

在一个实施方案中，所述A制剂包含质量百分比为0.1％-1％的透明质酸。

在一个实施方案中，所述A制剂包含质量百分比为0.1％-1％的SOD。

在一个实施方案中，所述B制剂中包含：按质量百分比计：寡肽-1：0.01％-0.1％；胶原：0.01％-0.1％；氨基酸组合物：1％-5％。

所述氨基酸组合物包含：氨基酸组合物为：组氨酸、精氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸。

上述的抗皮肤老化的制剂的使用方法，使用微针注射5mL-20mL制剂，沿着皮肤轮廓刺入皮肤，将制剂直接注入皮肤；

(1)将B制剂送入皮肤真皮层；

(2)将A制剂送入皮肤表皮层。

使用纳米微针注射设备将制剂送入皮肤设定位置。

在一个实施方案中，纳米微针注射设备包括微针针管以及用于推动微针针管的推进装置。推进装置将微针的针头压入皮肤，针头为可调节针头。

纳米微针的针长为1-2000μm，每次在微针针管中吸入5-10mL制剂，按照一定频率沿着皮肤轮廓刺入皮肤，将制剂直接注入皮肤。

在一个实施例中，送入皮肤真皮层的B剂，送入量为5-10mL。

在一个实施例中，送入皮肤表皮层的A剂，送入量为5-10mL。

在一个实施例中，纳米微针使用的纳米晶片为2mm×2mm。

除非另有说明，本发明中“％”为质量百分比。

有益效果：(1)本发明通过制剂分别作用在表皮层和真皮层，在表皮层解决皮肤的水合作用，提高皮肤水分结合能力，清除自由基，抗氧化；在真皮层解决皮肤中胞外间质的平衡，促进成纤维细胞增殖，促进胶原蛋白和弹性蛋白的再生；(2)本发明通过制剂配合纳米微针，利用纳米微针为可调针长，通过定点定位达到皮肤表皮层与真皮层，不造成制剂浪费，效果即时显著；(3)本发明的制剂组分为人体体内的组分，或者是无热源组分，组分安全度高。

附图说明

图1为使用本发明A剂和B剂之前的面部皱纹情况；

图2为使用本发明A剂和B剂之后的面部皱纹情况；

图3为使用本发明A剂和B剂之前的颈部皱纹情况；

图4为使用本发明A剂和B剂之后的颈部皱纹情况；

图5为使用本发明A剂和B剂之前的眼部皱纹情况；

图6为使用本发明A剂和B剂之后的眼部皱纹情况。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明的上述内容进行进一步详细说明，对于本研究领域技术人员而言，不应将此理解为本发明上述主题范围仅限于以下实例，基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明范围。

下面实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法：下述实施例中所用的试剂、材料、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

一、制备方法

A剂：将0.1％-1％透明质酸钠和0.1％-1％SOD溶解于水中，搅拌均匀，得到A剂。

B剂：将0.01％-0.1％寡肽-1，0.01％-0.1％胶原以及1％-5％氨基酸组合物依次加入水中，搅拌均匀，得到B剂

其中，胶原为酵母发酵产物，非动物来源，来自江苏悦智生物医药有限公司；

氨基酸组合物来自上海百好博化工有限公司；

透明质酸钠来自：华熙福瑞达生物医药有限公司，平均分子量为120万(1200KDa)。

二、产品制备

按照第一部分的制备方法，表1的各组方的质量百分比制备A剂，余量为水。

表1产品组分(质量百分比，％)

按照第一部分的制备方法，表2的各组分的质量百分比制备B剂，余量为水。

表2产品组分(质量百分比，％)

组分	实施例7	实施例8	实施例9	实施例10
					寡肽-1	0.01	0.02	0.03	0.04
胶原	0.02	0.04	0.06	0.08
					氨基酸组合物	1	2	3	4

三、产品检测

3.1皮肤保湿功效测试实验-人体皮肤含水率(MMV)试验

20-40岁之间志愿者，身体健康，没有皮肤病史和过敏史，在测试前，受试者不使用任何化妆品和药物用品。在试验前1小时，受试者需要清洁干净待测试部位，在测试前稳定至少30分钟，记录测试环境。每名受试者在手臂前侧分别使用样品，在测定样品使用前后的1、4、8h水分含量、经表皮失水率。

测试点标记：在每位受试者的手臂内侧用模具标记测试区域(5cmx5cm)，模具上挖孔洞，并标记出测试探头的测试点位置，将样品平均涂于手臂的试验区域。该试验采用电容法进行，试验部位为手臂前侧，每个受试区域平行测定3次，取其平均值。先测量各测试区域的空白值(0h)，然后分别将本发明实施例1～3、对比例1～2的制剂均匀涂布于受试区域。涂抹后，分别测量1h、4h、8h时受试区域的MMV值，将每次检测的平均值减去空白值即为该时段MMV值的变化值，再除去空白值即得出MMV值的增长率。结果见表3：

表3皮肤t时段皮肤MMV值变化测定结果

t/h	实施例1	实施例2	实施例3	对比例1
					1	21.4％	26.3％	27.3％	9.8％
4	16.9％	22.5％	23.1％	5.2％
					8	13.6％	19.8％	20.6％	3.6％

从实验结果可以看出，皮肤MMV值变化随着透明质酸的含量增加而增加，说明透明质酸钠有较好的水合作用以及长效保湿作用，其中实施例2和实施例3的结果相差不大，A剂需要通过微针导入皮肤，粘度太大不利于微针的操作，结合成本因素，此处选择实施例2方案。

3.2DPPH自由基清除实验

人体内的自由基可分为两大类：活性氧(ROS,Reactive oxygen species)和活性氮(RNS，Reactive nitrogen species)。ROS主要包括羟自由基，过氧自由基，制止过氧自由基等；RNS主要有一氧化氮自由基等。这些ROS和RNS如果过量堆积，会引起氧化应激，发生各种病变，加速机体衰老。

DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)是一种稳定的有机自由基，在可见光区最大吸收峰为517nm，在乙醇溶液中，每个DPPH分子在溶液中可生成一个稳定的含氮自由基，具有典型紫色，当它与提供1个电子的自由基清除剂作用时，生成无色产物，使溶液的典型紫色变浅。其褪色程度与配对电子数成化学计量关系。因而可用分光光度法进行定量分析，来检测自由基清除情况，从而评价样品的清除自由基的能力。

1)DPPH溶液的配制：称取20mgDPPH，加入无水乙醇溶解并定容于250mL容量瓶中，DPPH浓度配制为2×10^-4mol/L。

2)样品：取实施例2、实施例4、实施例5、实施例6以及对比例2作为待测样品。

1)取等体积(一般为1.5mL)的待测液与2×10^-4mol/L的DPPH溶液混匀(A1管)；

2)取等体积的无水乙醇(待测物溶剂)与2×10^-4mol/L的DPPH溶液混匀(A2管)；

3)取等体积的无水乙醇与待测液混匀(A3管)；

4)避光反应30min后，在517nm下测A1、A2、A3管吸光度值。

清除率(％)＝[(A2+A3)-A1]/A2

表4 DPPH自由基清除结果

组别	实施例2	实施例4	实施例5	实施例6	对比例2
						清除率(％)	97.85	97.76	97.44	96.56	15.3

从表4可以看出实施例2、实施例4、实施例5、实施例6的清除率相差不大，说明SOD在低浓度下具有较好的自由基清除能力，对比例2清除率较低，原因没有加入SOD，清除率较低，推测透明质酸钠也有一定的清除自由基能力，此处选择实施例2方案。

3.3促成纤维细胞增殖实验

活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。水溶性样品使用DMEM高糖培养基进行稀释后过0.22mm滤膜；将生长状态良好的人皮肤成纤维细胞以每孔5×10³个的密度接种于96孔培养板中，于37℃，5％CO₂环境中培养过夜。弃培养液，加入样品实施例7、实施例8、实施例9、实施例10，每个样品活性组分的总含量在细胞液中的终浓度为0.2％，每个样品处理设3个平行，细胞对照组加入无血清的DMEM培养液，培养48h。吸弃培养基，PBS洗两次，加入100μL MTT(1.0g·L^-1)溶液，放入37℃，5％CO₂环境中培养4h后，弃液，加入150μL DMSO，37℃下放置10min后于490nm波长测定各孔吸光度值。

V(％)＝(OD_样品-OD_空白对照)/(OD_细胞对照-OD_空白对照)×100％

式中:V(％)——细胞存活率，％；OD_样品——含有待测样反应体系的吸光度；OD_空白对照——不含任何物质的空板吸光度；OD_细胞对照——不含待测样反应体系的吸光度。

表5促进人成纤维细胞增殖实验结果

组分	实施例7	实施例8	实施例9	实施例10
					细胞活率(％)	114.98±2.25	120.39±2.13	133.99±3.15	132.72±3.05

从表5可以看出实施例7、实施例8、实施例9之间细胞活率是增加的，实施例9到实施例10趋于平稳，说明实施例具有促进人成纤维细胞增殖的活性，且无细胞毒性，此处选择实施例9方案。

3.4抗老化人体测试

选取无过敏性皮肤病，既往对护肤类化妆品无严重过敏史，近1个月未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者，未参加其他临床测试，面部、颈部皱纹较多，肌肤松弛，粗糙不细腻受试者20名，其中面部受试者10名(其中有两名为眼周皮肤注射，其余为面颊两侧注射，眼周处理的注射量为A剂5mL，B剂5mL)，颈部受试者10名，除眼周处理者，其余受试者A剂采用实施例2方案，B剂采用实施例9方案，纳米微针注射10mL的A剂以及10mLB剂，按照一定频率沿着肌肤轮廓刺入皮肤，面部与颈部均先使用B剂(作用于皮肤真皮层)，再使用A剂(作用于皮肤表皮层)，沿皱纹方向以及肌肤轮廓进行操作。受试者操作之前与操作之后拍照，观察操作之前和操作之后的对比，每个人操作之后填写问卷，对操作之后皮肤粗糙、皱纹、紧致等方面进行评价。皮肤粗糙程度、皱纹、紧致度得到了100％改善，并且在使用过程中没有副作用。操作前后对比图如图1和图2所示，从图1和图2可以看出受试者面部轮廓得到提升。

如图3操作之前，图4操作之后，受试者颈部粗糙度得到改善，皱纹变淡，颈部肌肤紧致。图5为操作之前眼部皱纹情况，图6为操作之后眼部皱纹情况，从对比图中明显看到受试者皱纹情况得到改善。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims

1.一种抗皮肤老化的制剂，其特征在于，所述制剂包括A剂和B剂：

A剂作用于皮肤表皮层：所述A剂中至少包含粘多糖；

B剂作用于皮肤真皮层：所述B剂中至少包含胶原。

2.根据权利要求1所述的抗皮肤老化的制剂，其特征在于，所述A制剂中的粘多糖为透明质酸。

3.根据权利要求2所述的抗皮肤老化的制剂，其特征在于，所述A制剂中包含SOD。

4.根据权利要求1所述的抗皮肤老化的制剂，其特征在于，所述B制剂中包含寡肽-1。

5.根据权利要求4所述的抗皮肤老化的制剂，其特征在于，所述B制剂中包含氨基酸。

6.根据权利要求1所述的抗皮肤老化的制剂，其特征在于，所述A制剂包含质量百分比为0.1％-1％的透明质酸。

7.根据权利要求6所述的抗皮肤老化的制剂，其特征在于，所述A制剂包含质量百分比为0.1％-1％的SOD。

8.根据权利要求1所述的抗皮肤老化的制剂，其特征在于，所述B制剂中包含：按质量百分比计：寡肽-1：0.01％-0.1％；胶原：0.01％-0.1％；氨基酸组合物：1％-5％。

9.如权利要求1-8任一所述的抗皮肤老化的制剂的使用方法，其特征在于：使用微针注射制剂，沿着皮肤轮廓刺入皮肤，将制剂注入皮肤；

(1)将B制剂送入皮肤真皮层；

(2)将A制剂送入皮肤表皮层。

10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征在于，使用纳米微针注射设备将制剂送入皮肤设定位置。