CN113797114A

CN113797114A - 局部用组合物和方法

Info

Publication number: CN113797114A
Application number: CN202110653682.6A
Authority: CN
Inventors: 蒂凡尼·卡尔; 大卫·甘
Original assignee: Kay Mary Inc
Current assignee: Kay Mary Inc
Priority date: 2020-06-12
Filing date: 2021-06-11
Publication date: 2021-12-17
Also published as: EP4164588A1; US20210386646A1; US20240016719A1; DE202021004246U1; US11779532B2; WO2021253053A1

Abstract

本发明一般涉及用于减少皮肤上的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着的使用方法和组合物。该组合物包含以下成分的组合：烟酰胺、植酸、迷迭香叶提取物、皱波角叉菜提取物和草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的组合。该组合物有效减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。该组合物有效抑制酪氨酸酶和/或过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR‑γ)活性。该组合物还有效地减少皮肤，特别是深色皮肤中的黑色素含量，在一些情况下至少减少30％。

Description

局部用组合物和方法

技术领域

本发明一般地涉及用于治疗与老化皮肤的不期望的色素沉着相关的各种皮肤状况的各种皮肤制剂。制剂可以单独使用或以方案形式组合使用。

背景技术

人类皮肤的颜色是由黑色素引起的。黑色素生成是特殊的树突状细胞、黑色素细胞产生黑色素的过程。黑色素细胞位于皮肤表皮的基底细胞下方或基底细胞之间。许多人的皮肤有过多的黑色素沉着或色素沉着过度斑块，这会导致皮肤色素变异或异常色素沉着。这会导致不期望的雀斑或黑斑，如老年斑、肝斑、黄褐斑、褐色斑或老年斑、白斑、晒伤色素沉着、由于擦伤、烧伤、伤口或皮炎引起的炎症后色素沉着过度、光毒性反应和其他类似的小的、固定的色素病变。

通常希望使这些区域变亮或使皮肤的不规则色素区域的外观变均匀以提供更均匀的肤色/皮肤色调。个人也可能希望增加或减少皮肤色素沉着的整体水平。在任何一种情况下，色素沉着过度通常被视为不利于美容，个人通常希望提亮皮肤。

许多因素会导致皮肤色素沉着增加，例如一个人的实际年龄、暴露于环境因素(例如，阳光、污染、化学品、烟雾等)的程度，以及一个人保护皮肤的程度。特别地，皮肤色素沉着增加涉及两个过程—内在老化，这与自然衰老过程和遗传影响有关，和外在的或由于环境因素(如阳光照射)造成的累积损伤。

外在因素会导致角质形成细胞(皮肤的最外层细胞)释放信号分子，例如α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)和炎性细胞因子，每一种都会导致不期望的皮肤色素沉着和/或皮肤炎症(例如，皮肤变红和/或红斑)。外在因素也可以导致酪氨酸酶基因的上调，已知酪氨酸酶催化黑色素多步生物合成中的两个步骤。此外，可以增加过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR-γ)激动剂。已知PPAR-γ通过刺激酪氨酸酶活性和表达来增加黑色素的产生。还已知PPAR-γ激动剂刺激皮肤中黑色素细胞的迁移。

内在老化和外在因素的结合不仅会增加皮肤的色素沉着，而且最终会导致皮肤老化的明显迹象。皮肤老化的早期迹象包括肤色不均的开始。通常，这发生在大约25至35岁的年龄范围内。皮肤老化的中度迹象包括出现更明显的老年斑和色素沉着过度区域。这通常发生在大约35至50岁的年龄范围内。皮肤老化的晚期迹象包括更突出的黑斑，这些黑斑可能会变大并聚集在一起，使皮肤呈现斑点或斑驳的外观。这通常发生在50岁以上的年龄范围内。

多种亮肤成分是已知的，它们抑制黑色素生成以防止皮肤变黑并淡化与衰老相关的黑斑。在某些情况下，例如，使用一种亮肤成分可能对有明显色素沉着过度、雀斑或老年斑的个体无效。此外，许多先前将各种亮肤成分结合的尝试均无效，并且在某些情况下产生了负面结果，例如刺激炎性细胞因子的产生。此外，已知某些亮肤成分，例如氢醌，会增加较深肤色的色素沉着过度。

发明内容

发明人已经确定了与不期望的皮肤色素沉着相关的至少一些问题的解决方案。在一些情况下，发明人发现了一组独特的成分，其可用于治疗不期望的皮肤色素沉着，特别是黑斑和/或老年斑。最后，这些成分及其制剂与其他已知的亮肤成分(例如曲酸或氢醌)一样有效或更有效。该解决方案的前提是发现了成分的组合，这些成分可以共同改变皮肤中的某些生化途径，从而减少色素沉着。不受理论的束缚，认为这种成分的组合可抑制PPAR-γ和/或酪氨酸酶，其抑制黑素生成。这种组合可以包括有效量的烟酰胺、阿魏酸、四己基癸醇抗坏血酸酯、植酸、迷迭香(Rosmarinus officinalis)叶提取物、肖乳香(Schinusterebinthifolius)籽提取物、皱波角叉菜(Chondrus crispus)提取物、草莓虎耳草(Saxifraga sarmentosa)提取物、番木瓜(Carica papaya(papaya))果提取物、番石榴(Psidium guajava)果提取物、十一碳烯酰基苯丙氨酸、南美苋(Pfaffia paniculata)根提取物、巴西榥榥木(Ptychopetalum olacoides)树皮/茎提取物和/或巴西鹧鸪花(Trichilia catigua)提取物，以抑制PPAR-γ和/或酪氨酸酶活性、减少黑斑、减少老年斑和/或减少不期望的色素沉着。

特别地，发现这种成分的组合能够减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。在某些方面，发现这种成分的组合能够降低皮肤中的整体黑色素水平。在某些方面，这种组合能够将皮肤中的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％或多于30％。在某些方面，这种组合能够降低深色皮肤中的整体黑色素水平。在某些方面，这种组合能够将深色皮肤中的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％或多于30％。在某些方面，皮肤是棕色或黑色肤色的人的皮肤。在某些方面，皮肤是黑色肤色的人的皮肤。

在一些方面，公开了一种局部皮肤用组合物。在一些实例中，公开了一种局部皮肤用组合物，其包括有效量的烟酰胺、阿魏酸、四己基癸醇抗坏血酸酯、植酸、迷迭香叶提取物、肖乳香籽提取物、皱波角叉菜提取物、草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物、番石榴果提取物、十一碳烯酰基苯丙氨酸、南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物和/或巴西鹧鸪花提取物，以减少黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。

在某些方面，局部皮肤用组合物包含草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的组合。在某些方面，草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的组合还可以包括亚硫酸钠和焦亚硫酸钠。在某些方面，草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的组合还可以包括有效量的亚硫酸钠和焦亚硫酸钠以减少黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。

在某些方面，局部皮肤用组合物包含草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物、番石榴果提取物、南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物和巴西鹧鸪花提取物的组合。在某些方面，草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物、番石榴果提取物、南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物和巴西鹧鸪花提取物的组合还可以包括甘油和辛基/癸基葡糖苷。在某些方面，草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物、番石榴果提取物、南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物、巴西鹧鸪花提取物、甘油和辛基/癸基葡糖苷的组合以0.1重量％至5重量％的量提供。在其他方面，南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物、巴西鹧鸪花提取物、甘油和辛基/癸基葡糖苷的组合以0.5重量％的量提供。

在一些方面，局部皮肤用组合物具有抑制酪氨酸酶和/或PPAR-γ活性的能力。在一些方面，迷迭香叶提取物具有抑制酪氨酸酶和/或PPAR-γ活性的能力。在一些方面，局部皮肤用组合物有效减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。在一些方面，局部皮肤用组合物有效降低皮肤中的整体黑色素水平。在一些实例中，局部皮肤用组合物有效地将皮肤中的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％或多于30％。在某些方面，局部皮肤用组合物能够降低深色皮肤中的整体黑色素水平。在某些方面，局部皮肤用组合物能够将深色皮肤中的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％或多于30％。在某些方面，皮肤是棕色或黑色肤色的人的皮肤。在某些方面，皮肤是黑色肤色的人的皮肤。

在一些实例中，局部皮肤用组合物包含0.1重量％至10重量％的烟酰胺、0.01重量％至1重量％的阿魏酸、0.1重量％至5重量％的四己基癸醇抗坏血酸酯、0.01重量％至3重量％的植酸、0.1重量％至5重量％的迷迭香叶提取物、0.1重量％至3重量％的肖乳香籽提取物、0.1重量％至5重量％的皱波角叉菜提取物、0.1重量％至5重量％的草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的组合以及0.1重量％至5重量％的十一碳烯酰基苯丙氨酸。在一些实例中，局部皮肤用组合物包含0.1重量％至5重量％的南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物、巴西鹧鸪花提取物、甘油和辛基/癸基葡糖苷的组合。

在一些实例中，迷迭香叶提取物是包含乳酸、甜菜碱和水的低共熔溶剂的提取物。在一些实例中，肖乳香籽提取物是超临界CO₂提取物。在一些实例中，皱波角叉菜提取物是水提取物。在一些实例中，草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物是水醇提取物。

预期本说明书中讨论的任何实施方案可以针对本发明的任何方法或组合物实施，反之亦然。此外，本发明的组合物可用于实现本发明的方法。

在本发明的上下文中，至少描述了以下21个方面。方面1包括一种减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着的方法。该方法包括向黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着局部施用护肤组合物，所述护肤组合物包含有效量的烟酰胺、阿魏酸、四己基癸醇抗坏血酸酯、植酸、迷迭香叶提取物、肖乳香籽提取物、皱波角叉菜提取物、草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物、番石榴果提取物和十一碳烯酰基苯丙氨酸，以减少皮肤上的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。方面2取决于方面1，其中护肤组合物还包含亚硫酸钠和焦亚硫酸钠。方面3取决于方面2，其中护肤组合物包含有效量的亚硫酸钠和焦亚硫酸钠，以减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。方面4取决于方面1至3中任一项，其中护肤组合物包含0.1重量％至10重量％的烟酰胺、0.01重量％至1重量％的阿魏酸、0.1重量％至5重量％的四己基癸醇抗坏血酸酯、0.01重量％至3重量％的植酸、0.1重量％至5重量％的迷迭香叶提取物、0.1重量％至3重量％的肖乳香籽提取物、0.1重量％至5重量％的皱波角叉菜提取物、0.1重量％至5重量％的草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的组合以及0.1重量％至5重量％的十一碳烯酰基苯丙氨酸。方面5取决于方面1至4中任一项，其中迷迭香叶提取物是包含乳酸、甜菜碱和水的低共熔溶剂的提取物，肖乳香籽提取物是超临界CO₂提取物，皱波角叉菜提取物是水提取物，草莓虎耳草提取物是水醇提取物，番木瓜果提取物是水醇提取物和/或番石榴果提取物是水醇提取物。方面6取决于方面1至5中任一项，其中组合物的局部施用降低皮肤的整体黑色素水平。方面7取决于方面1至6中任一项，其中组合物的局部施用使皮肤的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％或30％。方面8取决于方面1至7中任一项，其中组合物的局部施用使深色皮肤的整体黑色素水平降低至少30％。方面9取决于方面1至8中任一项，其中皮肤是具有棕色或黑色肤色的人的皮肤。方面10取决于方面1至9中任一项，其中皮肤是黑色肤色的人的皮肤。方面11取决于方面1至10中任一项，其中组合物的局部施用抑制皮肤的酪氨酸酶和/或过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR-γ)活性。方面12包括一种护肤组合物，其包含有效量的烟酰胺、阿魏酸、四己基癸醇抗坏血酸酯、植酸、迷迭香叶提取物、肖乳香籽提取物、皱波角叉菜提取物、草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物、番石榴果提取物和十一碳烯酰基苯丙氨酸，以减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。方面13取决于方面12，其中护肤组合物还包含亚硫酸钠和焦亚硫酸钠。方面14取决于方面13，其中护肤组合物包含有效量的亚硫酸钠和焦亚硫酸钠，以减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。方面15取决于方面12至14中任一项，其中组合物包含0.1重量％至10重量％的烟酰胺、0.01重量％至1重量％的阿魏酸、0.1重量％至5重量％的四己基癸醇抗坏血酸酯、0.01重量％至3重量％的植酸、0.1重量％至5重量％的迷迭香叶提取物、0.1重量％至3重量％的肖乳香籽提取物、0.1重量％至5重量％的皱波角叉菜提取物、0.1重量％至5重量％的草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的组合以及0.1重量％至5重量％的十一碳烯酰基苯丙氨酸。方面16取决于方面12至15中任一项，其中迷迭香叶提取物是包含乳酸、甜菜碱和水的低共熔溶剂的提取物，肖乳香籽提取物是超临界CO₂提取物，皱波角叉菜提取物是水提取物，草莓虎耳草提取物是水醇提取物，番木瓜果提取物是水醇提取物和番石榴果提取物是水醇提取物。方面17取决于方面12至16中任一项，其中组合物有效降低皮肤的整体黑色素水平。方面18取决于方面12至17中任一项，其中组合物有效地将皮肤的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％或30％。方面19取决于方面12至18中任一项，其中组合物有效地将深色皮肤的整体黑色素水平降低至少30％。方面20取决于方面12至19中任一项，其中皮肤是具有棕色或黑色肤色的人的皮肤。方面21取决于方面20，其中皮肤是黑色肤色的人的皮肤。

在一些实例中，局部皮肤用组合物用于减少色素沉着的方法中。在一些实例中，局部皮肤用组合物用于抑制酪氨酸酶。在一些实例中，局部皮肤用组合物用于抑制PPAR-γ活性。在一些实例中，局部皮肤用组合物用于减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。在一些实例中，局部皮肤用组合物用于将皮肤中的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％或多于30％。在一些实例中，局部皮肤用组合物用于降低深色皮肤中的整体黑色素水平。在一些实例中，局部皮肤用组合物用于将深色皮肤中的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％或多于30％。在某些方面，皮肤是棕色或黑色肤色的人的皮肤。在某些方面，皮肤是黑色肤色的人的皮肤。

还预期了包含本发明的组合物的试剂盒。在一些实施方案中，组合物包含在试剂盒内。容器可以是瓶子、分配器或包装。容器可以分配预定量的组合物。在一些方面，组合物以喷雾、薄雾、团块或液体分配。容器可以在其表面上包含标记。标记可以是词语、缩写、图片或符号。

在一些实施方案中，本发明的组合物可以是可药用的或可化妆用的，或可以具有舒适的触觉性质。“可药用的”、“可化妆用的”和/或“舒适的触觉性质”描述具有令皮肤感觉舒适的特定的触觉性质的组合物(例如，不是太水或太油的组合物、具有丝滑质地的组合物、非黏性或黏性的组合物等)。可药用的或可化妆用的还可以涉及组合物的乳脂状或润滑性能，或组合物的水分保留性能。

还预期了一种包含本发明的组合物的产品。在非限制性方面，产品可以是化妆品。化妆品可以是本说明书其他部分所述的那些，或是本领域技术人员已知的那些。产品的非限制性实例包括润肤霜、乳霜、露、柔肤水、精华、凝胶、洗液、身体乳、磨砂膏、粉底、晚霜、口红、清洁剂、爽肤水、防晒霜、面膜、抗老化产品、除臭剂、止汗剂、香水、古龙水等。

“局部施用”是指将组合物施用或铺展在嘴唇或角质组织的表面上。“局部皮肤用组合物”包括适合在皮肤和/或角质组织上局部施用的组合物。这样的组合物通常是皮肤病学上可接受的，因为当施用于皮肤和/或角蛋白组织时，它们不具有异常毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等。本发明的局部皮肤护理组合物可以具有选择的黏度，以避免在施用于皮肤和/或角质组织后明显的滴落或聚集。

“角质组织”包括被配置为哺乳动物的最外层保护性覆盖物的含角蛋白的层，并且包括但不限于嘴唇、皮肤、毛发和指甲。

术语“约”或“大约”定义为如本领域普通技术人员所理解的接近于。在一个非限制性实施方案中，该术语定义为10％以内，优选5％以内，更优选1％以内，最优选0.5％以内。

术语“基本上”及其同义词指在10％以内、5％以内、1％以内、或0.5％以内的范围。

术语“抑制”或“减少”或这些术语的同义词包括为了达到预期结果的任何可测量的减少或完全的抑制。术语“促进”或“增加”包括为了达到预期结果的任何可测量的增加，例如蛋白质或分子(例如，基质蛋白，例如纤连蛋白、层黏连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白，或分子，例如透明质酸)的可测量的增加。

作为本说明书和/或权利要求所使用的术语，术语“有效”表示适于实现希望的、期望的或预期的结果。

当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”、“包括”、“含有”或“具有”或其同义词联用时，要素前面不使用数量词可以表示“一个”，但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。

如本说明书和权利要求所使用的，词组“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未列举的要素或方法步骤。-

使用的组合物和方法可以“包含”本说明书通篇所公开的任意成分或步骤，“主要由”或“由”本说明书通篇所公开的任意成分或步骤“组成”。关于短语“基本上由……组成”，本发明的组合物和方法的基本和新颖的性质是减少皮肤中黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着和/或抑制皮肤中酪氨酸酶和/或PPAR-γ活性的能力。通过下面的详细描述，本发明的其他目的、特征和优点会变得明显。然而，应理解详细的描述和实施例在表明本发明的具体实施方案时仅以举例说明的方式给出。另外，可以预期，根据该详细描述，在本发明的精神和范围内的改变和修改对于本领域技术人员将变得明显。

具体实施方式

如上所述，本发明提供了与当前化妆品相关的问题的解决方案。在一些实施方案中，组合物包含有效量的烟酰胺、阿魏酸、四己基癸醇抗坏血酸酯、植酸、迷迭香叶提取物、肖乳香籽提取物、皱波角叉菜提取物、草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物、番石榴果提取物和十一碳烯酰基苯丙氨酸中的任一种或任意组合或全部，以减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着和/或抑制酪氨酸酶和/或PPAR-γ活性。在某些方面，这种成分的组合有效地降低皮肤中的整体黑色素水平。在某些方面，这种组合有效地将皮肤中的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％或多于30％。在某些方面，这种组合有效地降低深色皮肤的整体黑色素水平。在某些方面，这种组合有效地将深色皮肤中的整体黑色素水平降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％或多于30％。

A、活性成分

成分的组合可以以不同的产品形式用于治疗各种皮肤病。作为非限制性实例，成分的组合可以配制成安剖、乳液(例如水包油、油包水)、凝胶、精华、凝胶乳液、凝胶精华、霜、面膜、磨砂膏、洗液、乳霜或身体乳。

烟酰胺：烟酰胺也称为尼克酰胺、3-吡啶甲酰胺或维生素B3，其是一种已知的有机化合物，当用于化妆品组合物中时会表现出皮肤调理益处。烟酰胺具有以下化学式：

已发现烟酰胺可用于提供额外的皮肤亮白益处并抑制黑色素转移至皮肤。该成分可从各种来源商购获得。

阿魏酸：阿魏酸也称为4-羟基-3-甲氧基-肉桂酸，其是一种基于植物的有机化合物，当用于化妆品组合物中时具有皮肤保护作用。阿魏酸具有以下化学式：

该成分可从各种来源商购获得。已经发现，阿魏酸成分是一种强大的抗氧化剂，能够稳定局部应用的维生素C和维生素E溶液。这种组合的协同益处已被证明可以保护皮肤免受太阳辐射引起的光老化和皮肤癌。此外，阿魏酸能够通过与酪氨酸酶竞争性结合来抑制皮肤中黑色素的产生。

四己基癸醇抗坏血酸酯：四己基癸醇抗坏血酸酯也称为抗坏血酸四异棕榈酸酯，其是一种维生素C衍生物，可作为抗氧化剂和皮肤调理剂。四己基癸醇抗坏血酸酯是可商购的并且可以商品名NIKKOL BV-OSC从Nikko获得。

植酸：植酸也称为六磷酸肌醇(IP6)或多磷酸肌醇，其是一种基于植物的肌醇异构体的六重磷酸二氢酯。在生理pH值下，磷酸盐部分电离，产生植酸阴离子。植酸具有以下化学式：

植酸是一种强大的抗氧化剂。植酸能够清除自由基，自由基会导致皮肤过早形成皱纹和细纹。植酸还通过螯合形成黑色素所必需的铁和铜来抑制黑色素的产生。植酸可以减少与老化和暴露于紫外线相关的皮肤色素沉着和黑斑。

迷迭香叶提取物：迷迭香叶提取物是迷迭香叶的提取物。迷迭香原产于地中海地区，其是一种多年生木本草本植物，具有芬芳、常绿、针状的叶子和白色、粉红色、紫色或蓝色的花。它是一种灌木，最高可达1.5米，叶子长约2至4厘米，呈绿色(顶面)和白色(底面)着色。可以使用包含甜菜碱或水合甜菜碱、氢键供体化合物(例如多元醇、有机酸等)和水的流体提取混合物对叶进行共熔体形成提取过程。特别地，可以将叶部分压碎或浸渍，然后经受上述共熔流体提取混合物以获得共熔提取物。然后可将共熔提取物用于本发明的组合物中。在一些优选的情况下，氢键供体是有机酸，优选乳酸。共熔体形成利用共熔溶剂，共熔溶剂是熔点低于其单独成分的熔点的化合物的混合物。在某些情况下，迷迭香提取物是可商购的。在一些情况下，迷迭香提取物可以是包含乳酸、甜菜碱和水的低共熔溶剂的提取物，以商品名ROSEMARY

BLA由Naturex(法国)提供。

肖乳香籽提取物：肖乳香籽提取物是一种主要位于南美洲亚热带和热带地区的漆树科(腰果)开花植物种子的提取物。在某些情况下，肖乳香籽提取物是可商购的。在某些情况下，肖乳香籽提取物可以商品名

由Barnet Products Corporation提供。在一个优选的情况下，可以使用CO₂超临界提取来获得肖乳香籽提取物。CO₂超临界提取可以包括用磨碎的干燥植物材料填充柱并在非常高的压力(200巴至400巴)下通过柱泵送超临界液态二氧化碳，然后收集所得提取物。

皱波角叉菜提取物：皱波角叉菜提取物是红藻皱波角叉菜的提取物。皱波角叉菜富含矿物质，特别是碘和硫。皱波角叉菜提取物用作皮肤调理剂以及局部皮肤用制剂的黏度调节剂。在一些情况下，皱波角叉菜提取物可以是由Biotech Marine(Seppic)以商品名

PF提供的水提物。

草莓虎耳草提取物：草莓虎耳草提取物是开花草本虎耳草(Saxifragasarmentosa)的提取物。在护肤产品中，草莓虎耳草提取物可用作皮肤调理剂、抗菌剂和收敛剂。草莓虎耳草提取物被认为具有美白皮肤的特性。

番木瓜果提取物：番木瓜果提取物是番木瓜果实的提取物。番木瓜果提取物是一种皮肤调理剂。番木瓜含有蛋白水解酶木瓜蛋白酶，当施用于皮肤时，可加速伤口愈合并加速新组织的生长。

番石榴果提取物：番石榴(Psidium guajava)是常绿乔木或灌木，高度可达6英尺至25英尺。它产生绿色的叶子、芬芳的白色花朵和梨形果实。番石榴果富含维生素A、维生素B和维生素C、单宁、酚类化合物和类黄酮。番石榴果提取物用作皮肤调理剂和收敛剂。该成分还被提出具有抗菌和皮肤修复特性。

在某些情况下，使用草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的混合物，由BASF Care Chemicals(Florham Park，New Jersey(USA))以商品名

WF提供。这种植物水醇提取物制剂以水、甘油和丁二醇的混合物形式提供。该制剂还包含亚硫酸钠和焦亚硫酸钠。亚硫酸钠和焦亚硫酸钠也可能抑制黑色素生成。参见US5989596。

十一碳烯酰基苯丙氨酸：十一碳烯酰基苯丙氨酸是一种能够提亮肤色的经取代的氨基酸。十一碳烯酰基苯丙氨酸具有以下结构：

在某些情况下，十一碳烯酰基苯丙氨酸可由Seppic以商品名

MSH提供。

本文描述的提取物可以是通过本领域已知的提取方法及其组合来制得的提取物。提取方法的非限制性实例包括使用液-液提取、固相提取、水提取、乙酸乙酯提取、醇提取、丙酮提取、油提取、超临界二氧化碳提取、热提取、压力提取、压降提取、超声提取等。提取物可以是液体、固体、干燥液体、再悬浮固体等。

B.成分的量

预期本发明的组合物可以包含任意量的本说明书所讨论的成分。组合物还可以包含任意数目的在本说明书全文中所描述的附加成分的组合(例如，颜料或附加的化妆品或药物成分)。在组合物中任意成分的浓度可以改变。例如，在非限制性实施方案中，组合物在其最终形式中可以包含以下组分、主要由以下组分组成或由以下组分组成：例如至少约0.0001％、0.0002％、0.0003％、0.0004％、0.0005％、0.0006％、0.0007％、0.0008％、0.0009％、0.0010％、0.0011％、0.0012％、0.0013％、0.0014％、0.0015％、0.0016％、0.0017％、0.0018％、0.0019％、0.0020％、0.0021％、0.0022％、0.0023％、0.0024％、0.0025％、0.0026％、0.0027％、0.0028％、0.0029％、0.0030％、0.0031％、0.0032％、0.0033％、0.0034％、0.0035％、0.0036％、0.0037％、0.0038％、0.0039％、0.0040％、0.0041％、0.0042％、0.0043％、0.0044％、0.0045％、0.0046％、0.0047％、0.0048％、0.0049％、0.0050％、0.0051％、0.0052％、0.0053％、0.0054％、0.0055％、0.0056％、0.0057％、0.0058％、0.0059％、0.0060％、0.0061％、0.0062％、0.0063％、0.0064％、0.0065％、0.0066％、0.0067％、0.0068％、0.0069％、0.0070％、0.0071％、0.0072％、0.0073％、0.0074％、0.0075％、0.0076％、0.0077％、0.0078％、0.0079％、0.0080％、0.0081％、0.0082％、0.0083％、0.0084％、0.0085％、0.0086％、0.0087％、0.0088％、0.0089％、0.0090％、0.0091％、0.0092％、0.0093％、0.0094％、0.0095％、0.0096％、0.0097％、0.0098％、0.0099％、0.0100％、0.0200％、0.0250％、0.0275％、0.0300％、0.0325％、0.0350％、0.0375％、0.0400％、0.0425％、0.0450％、0.0475％、0.0500％、0.0525％、0.0550％、0.0575％、0.0600％、0.0625％、0.0650％、0.0675％、0.0700％、0.0725％、0.0750％、0.0775％、0.0800％、0.0825％、0.0850％、0.0875％、0.0900％、0.0925％、0.0950％、0.0975％、0.1000％、0.1250％、0.1500％、0.1750％、0.2000％、0.2250％、0.2500％、0.2750％、0.3000％、0.3250％、0.3500％、0.3750％、0.4000％、0.4250％、0.4500％、0.4750％、0.5000％、0.5250％、0.0550％、0.5750％、0.6000％、0.6250％、0.6500％、0.6750％、0.7000％、0.7250％、0.7500％、0.7750％、0.8000％、0.8250％、0.8500％、0.8750％、0.9000％、0.9250％、0.9500％、0.9750％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％、8.0％、8.1％、8.2％、8.3％、8.4％、8.5％、8.6％、8.7％、8.8％、8.9％、9.0％、9.1％、9.2％、9.3％、9.4％、9.5％、9.6％、9.7％、9.8％、9.9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或其中可获得的任何范围的至少一种在本说明书全文和权利要求中所提及的成分。在非限制性方面，百分比可以按整个组合物的重量或体积进行计算。本领域普通技术人员会理解，给定组合物中的浓度可以根据成分的添加、替换和/或减少而改变。

C.载剂

本发明的组合物可以包含所有类型的载剂和载体，或并入到所有类型的载剂和载体中。载剂或载体可以是药学或皮肤病学上可接受的载剂或载体。载剂或载体的非限制性实例包括水、甘油、醇、油、含硅化合物、硅酮化合物和蜡。变化方案和其他合适的载剂对于熟练技术人员是明显的，并且适用于本发明。在某些方面，化合物、成分和试剂的浓度和组合以这样的方式进行选择，使得组合物是化学相容的并且不形成从最终产品中沉淀出来的复合物。

D.结构

本发明的组合物可以被构建或配制为多种不同形式。非限制性实例包括乳液(例如，油包水型乳液、水包油包水型乳液、水包油型乳液、水包硅酮型乳液、硅酮包水型乳液、油包水包油型乳液、硅酮包水包油型乳液)、霜剂、洗剂、溶液(水溶液或者水-醇溶液)、无水基质(例如口红和粉末)、凝胶、面膜、磨砂膏、身体乳、去角质剂和软膏。变体和其它的结构对于熟练技术人员是明显的，并且适用于本发明。

E.额外成分

除了发明人所公开成分的组合之外，组合物还可以包含额外成分，例如化妆品成分和药物有效成分。这些额外成分的非限制性实例在以下子章节中进行描述。

1、化妆品成分

CTFA国际化妆品成分词典和手册(2004和2008)描述了多种可以在本发明的环境下使用的非限制性化妆品成分。这些成分种类的实例包括：芳香剂(人造的和天然的，例如葡萄糖酸、苯氧乙醇和三乙醇胺)、染料和着色成分(例如蓝1、蓝1色淀、红40、二氧化钛、D&C蓝色4号、D&C绿色5号、D&C橙色4号、D&C红色17号、D&C红色33号、D&C紫色2号、D&C黄色10号和D&C黄色11号)、调味剂/香味剂(例如，甜菊叶(Stevia rebaudiana)提取物，以及薄荷醇)、吸附剂、润滑剂、溶剂、保湿剂(包括例如润肤剂、湿润剂、成膜剂、闭塞剂和影响皮肤天然保湿机制的试剂)、拒水剂、UV吸收剂(物理和化学吸收剂，例如对氨基苯甲酸(“PABA”)和相应的PABA衍生物、二氧化钛、氧化锌等)、精油、维生素(例如A、B、C、D、E和K)、微量金属(例如锌、钙和硒)、抗刺激物(例如类固醇和非类固醇抗炎药)、植物提取物(例如芦荟(Aloevera)、柑橘、黄瓜提取物、银杏(Ginkgo biloba)、人参和迷迭香)、抗菌剂、抗氧化剂(例如BHT和生育酚)、螯合剂(例如EDTA二钠和EDTA四钠)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、pH调节剂(例如氢氧化钠和柠檬酸)、吸收剂(例如淀粉辛烯基琥珀酸铝、高岭土、玉米淀粉、燕麦淀粉、环糊精、滑石和沸石)、皮肤漂白和美白剂(例如氢醌和烟酰胺乳酸盐/酯)、湿润剂(例如山梨醇、脲、甲基葡糖醇聚醚-20、糖类同分异构体和甘露醇)、去角质剂、防水剂(例如氢氧化镁/铝硬脂酸盐)、皮肤调节剂(例如芦荟提取物、尿囊素、没药醇、神经酰胺、聚二甲基硅氧烷、透明质酸、生物糖胶-1、乙基己基甘油、戊二醇、氢化聚癸烯、油酸辛基十二烷醇酯、葡糖酸内酯、葡糖酸钙、环己硅氧烷和甘草酸二钾)。这些额外成分中一些的非限制性实例在以下子章节中提供。

a.UV吸收剂和/或反射剂

可以与本发明的组合物组合使用的UV吸收剂和/或反射剂包括化学和物理防晒物质。可以使用的化学防晒物质的非限制性实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、PABA酯(PABA甘油酯、PABA戊基二甲酯和PABA辛基二甲酯)、PABA丁酯、PABA乙酯、PABA乙基二羟基丙酯、二苯甲酮(氧苯酮、磺异苯酮、二苯甲酮和二苯甲酮-1至二苯甲酮-12)、肉桂酸盐/酯(甲氧基肉桂酸辛酯(甲氧基肉桂酸乙基己酯))、对-甲氧基肉桂酸异戊酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、西诺沙酯、肉桂酸二异丙基甲酯、DEA甲氧基肉桂酸盐、二异丙基肉桂酸乙酯、甘油辛酸酯二甲氧基肉桂酸酯和甲氧基肉桂酸乙酯)、肉桂酸酯、水杨酸盐/酯(水杨酸均甲酯、水杨酸苄酯、水杨酸乙二醇酯、水杨酸异丙基苄酯等)、邻氨基苯甲酸盐/酯、尿刊酸乙酯、胡莫柳酯、水杨酸辛酯、二苯甲酰基甲烷衍生物(例如阿伏苯宗)、奥克立林、辛基三嗪酮、棓酰棓酸三油酸酯、氨基苯甲酸甘油酯、2-羟基-1,4-萘醌和二羟基丙酮、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺基三嗪酮、苯亚甲基丙二酸脂聚硅氧烷、对苯二亚甲基二樟脑磺酸、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯、双二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸酯、双苯并

唑基苯基乙基己基亚氨基三嗪、甲酚曲唑三硅氧烷、亚甲基双苯并***基四甲基丁基苯酚和双乙基己基氧苯酚甲氧苯基三嗪、4-甲基苯亚甲基樟脑和4-甲氧基肉桂酸异戊酯。物理防晒物质的非限制性实例包括高岭土、滑石、矿脂和金属氧化物(例如二氧化钛和氧化锌)。

b.保湿剂

可以与本发明的组合物一起使用的保湿剂的非限制性实例包括氨基酸、硫酸软骨素、双甘油、赤藓糖醇、果糖、葡萄糖、甘油、甘油聚合物、二醇、1,2,6-己三醇、蜂蜜、透明质酸、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、肌醇、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、天然保湿因子、PEG-15丁二醇、聚甘油山梨醇、吡咯烷酮羧酸的盐、PCA钾、丙二醇、葡糖醛酸钠、糖类同分异构体、PCA钠、山梨醇、蔗糖、海藻糖、脲和木糖醇。

其他实例包括乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、丙氨酸、藻类提取物、库拉索芦荟(Aloe barbadensis)、库拉索芦荟提取物、库拉索芦荟凝胶、药蜀葵(Althea officinalis)提取物、杏(Prunus armeniaca)仁油、精氨酸、精氨酸天冬氨酸盐/酯、山金车提取物、天冬氨酸、鳄梨(Persea gratissima)油、屏障鞘脂、丁醇、蜂蜡、山萮醇、β-谷甾醇、白桦(Betulaalba)树皮提取物、琉璃苣(Borago officinalis)提取物、假叶树(Ruscus aculeatus)提取物、丁二醇、金盏花提取物、金盏花油、小烛树(Euphorbia cerifera)蜡、菜籽油、辛酸/癸酸甘油三酯、小豆蔻(Elettaria cardamomum)油、巴西棕榈(Copernicia cerifera)蜡、胡萝卜(Daucus carota sativa)油、蓖麻(Ricinus communis)油、神经酰胺、地蜡、鲸蜡硬脂醇聚醚-5、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂醇辛酸酯、鲸蜡醇聚醚-20、鲸蜡醇聚醚-24、鲸蜡醇乙酸酯、鲸蜡醇辛酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、白花春黄菊(Anthemisnobilis)油、胆固醇、胆固醇酯、胆甾醇羟基硬脂酸酯、柠檬酸、鼠尾草(Salvia sclarea)油、可可(Theobroma cacao)脂、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、椰子(Cocos nucifera)油、胶原蛋白、胶原蛋白氨基酸、玉米(Zea mays)油、脂肪酸、油酸癸酯、聚二甲基硅氧烷共聚醇、聚二甲基硅氧烷醇、己二酸二辛酯、琥珀酸二辛酯、二聚季戊四醇六辛酸酯/六癸酸酯、DNA、赤藓糖醇、乙氧基二甘醇、亚油酸乙酯、蓝桉(Eucalyptus globulus)油、月见草(Oenotherabiennis)油、脂肪酸、斑点老鹳草(Geranium maculatum)油、葡萄糖胺、葡糖谷氨酸酯、谷氨酸、甘油聚醚-26、甘油、丙三醇、二硬脂酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯SE、甘氨酸、硬酯酸乙二醇酯、硬酯酸乙二醇酯SE、葡糖氨基葡聚糖、葡萄(Vitis vinifera)籽油、美洲榛(Corylus americana)坚果油、欧洲榛(Corylus avellana)坚果油、己二醇、透明质酸、混合红花(Carthamus tinctorius)油、氢化蓖麻油、氢化椰油甘油酯、氢化椰子油、氢化羊毛脂、氢化卵磷脂、氢化棕榈油甘油酯、氢化棕榈仁油、氢化大豆油、氢化牛脂酸甘油酯、氢化植物油、水解胶原蛋白、水解弹性蛋白、水解葡糖氨基葡聚糖、水解角蛋白、水解大豆蛋白、羟基化羊毛脂、羟基脯氨酸、异鲸蜡醇硬脂酸酯、异鲸蜡醇硬脂酰氧基硬脂酸酯、油酸异癸酯、异硬脂酸异丙酯、羊毛脂酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、异硬脂酰胺DEA、异硬脂酸、异硬脂醇乳酸酯、异硬脂醇新戊酸酯、茉莉(Jasminum officinale)油、霍霍巴(Buxus chinensis)油、巨藻、石栗(Aleurites moluccana)坚果油、乳酰胺MEA、羊毛脂醇聚醚-16、羊毛脂醇聚醚-10乙酸酯、羊毛脂、羊毛脂酸、羊毛脂醇、羊毛脂油、羊毛脂蜡、薰衣草(Lavandula angustifolia)油、卵磷脂、柠檬(Citrus medica limonum)油、亚油酸、亚麻酸、澳洲坚果(Macadamia ternifolia)油、麦芽糖醇、母菊(Chamomilla recutita)油、甲基葡糖倍半硬脂酸酯、甲基硅烷醇PCA酯、矿物油、貂油、黄褐色被孢霉油、肉豆蔻醇乳酸酯、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻醇丙酸酯、新戊二醇二辛酸酯/二癸酸酯、辛基十二醇、肉豆蔻酸辛基十二醇酯、硬脂酰氧基硬脂酸辛基十二醇酯、羟基硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、水杨酸辛酯、硬脂酸辛酯、油酸、橄榄(Olea europaea)油、橙(Citrus aurantium dulcis)油、棕榈(Elaeis guineensis)油、棕榈酸、泛硫乙胺、泛醇、泛醇基乙基醚、石蜡、PCA、桃(Prunuspersica)仁油、花生(Arachis hypogaea)油、PEG-8C12-18酸酯、PEG-15椰油胺、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-60甘油异硬脂酸酯、PEG-5甘油硬脂酸酯、PEG-30甘油硬脂酸酯、PEG-7氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、PEG-40失水山梨醇全油酸酯、PEG-5大豆甾醇、PEG-10大豆甾醇、PEG-2硬脂酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-20硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-50硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-150硬脂酸酯、十五内酯、薄荷(Mentha piperita)油、矿脂、磷脂、浮游生物提取物、多氨基酸多糖缩合物、聚甘油-3二异硬脂酸酯、聚季铵盐-24、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯85、肉豆蔻酸钾、棕榈酸钾、丙二醇、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯SE、PVP、吡哆素二棕榈酸酯、视黄醇、视黄醇棕榈酸酯、米(Oryza sativa)糠油、RNA、迷迭香(Rosmarinus officinalis)油、玫瑰油、红花(Carthamus tinctorius)油、鼠尾草(Salvia officinalis)油、檀香(Santalum album)油、丝氨酸、血清蛋白、芝麻(Sesamum indicum)油、牛油果(Butyrospermum parkii)脂、蚕丝粉、软骨素硫酸钠、透明质酸钠、乳酸钠、棕榈酸钠、PCA钠、聚谷氨酸钠、可溶性胶原、山梨坦月桂酸酯、山梨坦油酸酯、山梨坦棕榈酸酯、山梨坦倍半油酸酯、山梨坦硬脂酸酯、山梨醇、大豆(Glycine soja)油、鞘脂、角鲨烷、角鲨烯、硬脂酰胺MEA-硬脂酸酯、硬脂酸、硬脂氧基聚二甲硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷、硬脂醇、硬脂醇甘草亭酸酯、硬脂醇庚酸酯、硬脂醇硬脂酸酯、向日葵(Helianthus annuus)籽油、甜扁桃(Prunus amygdalus dulcis)油、合成蜂蜡、生育酚、生育酚乙酸酯、生育酚亚油酸酯、三山嵛精、十三烷醇新戊酸酯、十三烷醇硬脂酸酯、三乙醇胺、三硬脂精、脲、植物油、水、蜡、小麦(Triticum vulgare)胚芽油和依兰(Canangaodorata)油。

c.抗氧化剂

可以与本发明的组合物一起使用的抗氧化剂的非限制性实例包括乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、BHA、BHT、叔丁基氢醌、半胱氨酸、半胱氨酸HCI、二戊基氢醌、二叔丁基氢醌、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、二油基生育酚甲基硅烷醇、抗坏血酸硫酸酯二钠、二硬脂醇硫代二丙酸酯、双十三烷醇硫代二丙酸酯、十二醇棓酸酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、棓酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸酯镁、甲基硅烷醇抗坏血酸酯、天然植物抗氧化剂，例如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、棓酸辛酯、苯基巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、亚硫酸钾、棓酸丙酯、醌、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、亚硫基二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、生育酚聚醚-5、生育酚聚醚-10、生育酚聚醚-12、生育酚聚醚-18、生育酚聚醚-50、生育酚、托可索仑、生育酚乙酸酯、生育酚亚油酸酯、生育酚烟酸酯、生育酚琥珀酸酯和三(壬基苯酚)亚磷酸酯。

d.结构化剂

在其它非限制性方面，本发明的组合物可以包含结构化剂。在特定的方面，结构化剂帮助向组合物提供流变学特征以有助于组合物的稳定性。在其它方面，结构化剂还可以起乳化剂或表面活性剂的作用。结构化剂的非限制性实例包括椰油酰谷氨酸钠、羟丙基环糊精、硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇、硬脂酸、棕榈酸、具有平均约1至约21个亚乙基氧单元的硬脂醇的聚乙二醇醚、具有平均约1至约5个亚乙基氧单元的鲸蜡醇的聚乙二醇醚及其混合物。

e.乳化剂

在本发明的特定方面，组合物不包含乳化剂。然而，在其它方面，组合物可以包含一种或多于一种乳化剂。乳化剂可以降低相间表面张力并改善乳液的剂型和稳定性。乳化剂可以是非离子的、阳离子的、阴离子的和两性离子的乳化剂(参见美国专利第5011681号；第4421769号；第3755560号)。非限制性实例包括甘油酯、丙二醇酯、乙二醇的脂肪酸酯、聚丙二醇的脂肪酸酯、山梨醇的酯、失水山梨醇酐酯、羧酸共聚物、葡萄糖的酯和醚、乙氧基化的酯、乙氧基化的醇、磷酸烷醇酯、聚氧乙烯脂肪醚磷酸酯、脂肪酸酰胺、乳酰乳酸酯、脂肪酸盐、TEA硬脂酸酯、DEA油醇聚醚-3磷酸酯、聚乙二醇20失水山梨醇单月桂酸酯(聚山梨醇酯20)、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-21、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、C12-13烷醇聚醚-3、PPG-2甲基葡糖醚二硬脂酸酯、PPG-5-鲸蜡醇聚醚-20、双-PEG/PPG-20/20聚二甲基硅氧烷、鲸蜡醇聚醚-10、聚山梨醇酯80、鲸蜡醇磷酸酯、鲸蜡醇磷酸酯钾、二乙醇胺鲸蜡醇磷酸酯、聚山梨醇酯60、甘油硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、花生醇、花生醇葡糖苷及其混合物。

f.含有硅酮的化合物

在非限制性方面，含硅酮的化合物包括分子主链由交替的硅和氧原子与连接在硅原子上的侧基组成的聚合产物家族中的任何成员。通过改变-Si-O-链的长度、侧基和交联，硅酮可以合成为各种各样的材料。它们的稠度可以从液体至凝胶至固体改变。

可以在本发明的环境下使用的含硅酮的化合物包括在本说明书中所描述的或本领域普通技术人员已知的那些。非限制性实例包括硅油(例如挥发性和非挥发性油)、凝胶和固体。在某些方面，含硅的化合物包括硅油，例如聚有机硅氧烷。聚有机硅氧烷的非限制性实例包括聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烷、聚硅氧烷-11、苯基聚三甲基硅氧烷、三甲基硅烷基氨端二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷或它们的混合物和其它任何给定比例的有机硅氧烷材料，以根据预期的应用(例如，对特定区域例如皮肤、毛发或眼睛)达到期望的稠度和应用特征。“挥发性硅油”包括具有低气化热的硅油，即通常低于约50卡每克硅油。挥发性硅油的非限制性实例包括：环聚二甲基硅氧烷，例如Dow Corning344Fluid、Dow Corning 345Fluid、Dow Corning 244Fluid和Dow Corning 245Fluid、Volatile Silicon 7207(康涅狄格州丹伯里的Union Carbide Corp.)；低黏度聚二甲基硅氧烷，即黏度为约50cst或更低的聚二甲基硅氧烷(例如，聚二甲基硅氧烷，例如DowCorning 200-0.5cst Fluid)。Dow Corning Fluid可以从密歇根州米德兰的Dow CorningCorporation购得。在CTFA化妆品成分词典的第三版中(通过引用并入)，环聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷分别被描述为环状二甲基聚硅氧烷化合物和用三甲基硅氧基单元封端的完全甲基化的线性硅氧烷的混合物。可以在本发明的环境下使用的其它非限制性挥发性硅油包括从纽约州沃特福德的General Electric Co.,Silicone Products Div.和密歇根州艾德里安的SWS Silicones Div.of Stauffer Chemical Co.购得的那些。

g.去角质剂

去角质剂包括去除皮肤外表面上的死皮细胞的成分。这些试剂可以通过机械、化学和/或其他方式起作用。机械去角质剂的非限制性实例包括研磨剂，例如浮石、二氧化硅、布、纸、壳、珠、固体晶体、固体聚合物等。化学去角质剂的非限制性实例包括酸和酶去角质剂。可用作去角质剂的酸包括但不限于乙醇酸、乳酸、柠檬酸、α羟基酸、β羟基酸等。本领域技术人员已知的其他去角质剂也可考虑为在本发明的范围内有用。

h.精油

精油包括来自药草、花、树木和其它植物的油。这类油一般以植物细胞间微小的液滴存在，并可以通过本领域技术人员已知的若干方法进行提取(例如，蒸气蒸馏、花香提取(即使用脂肪提取)、浸渍、溶剂提取或机械压榨)。当这些类型的油暴露于空气时，其趋于挥发(即挥发性油)。因此，虽然许多精油是无色的，但是随着时间其被氧化并且颜色变得更深。精油不溶于水，但溶于醇、醚、固定油(植物的)和其它有机溶剂。在精油中发现的一般物理特征包括约160℃至240℃的沸点和约0.759至约1.096的密度。

精油一般通过发现油的来源植物命名。例如，玫瑰油或薄荷油分别来自玫瑰或薄荷植物。可以在本发明的环境下使用的精油的非限制性实例包括芝麻油、澳洲坚果油、茶树油、月见草油、西班牙鼠尾草油、西班牙迷迭香油、芫荽油、百里香油、麝香草油、玫瑰油、大茴香油、凤仙花油、香柠檬油、玫瑰木油、香柏油、甘菊油、鼠尾草油、香紫苏油、丁香油、柏木油、桉油、茴香油、海茴香油、乳香油、香叶油、姜油、葡萄柚油、茉莉油、杜松子油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、来檬油、橘子油、马郁兰油、没药油、苦橙花油、橙油、绿叶油、胡椒油、黑胡椒油、苦橙叶油、松油、奥图玫瑰油、迷迭香油、檀香油、绿薄荷油、甘松油、香根草油、冬青油、依兰油。还预期本领域技术人员已知的其它精油在本发明的环境下是有用的。

i.增稠剂

包括增稠剂或凝胶剂的增稠剂包括可以增加组合物黏度的物质。增稠剂包括可以增加组合物黏度而基本上不改变组合物内活性成分功效的那些。增稠剂还可以增加本发明的组合物的稳定性。在本发明的某些方面，增稠剂包括氢化聚异丁烯、三羟基硬脂精、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、或其混合物。

可以在本发明的环境下使用的另外的增稠剂的非限制性实例包括羧酸聚合物、交联的聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖和胶。羧酸聚合物的实例包括含有一种或多于一种衍生自丙烯酸的单体的交联化合物、经取代的丙烯酸和这些丙烯酸的盐和酯和经取代的丙烯酸，其中所述交联剂含有两个或多于两个碳-碳双键，并衍生自多元醇(参见美国专利第5087445号；第4509949号；第2798053号；CTFA国际化妆品成分词典，第四版，1991，第12页和80页)。可商购获得的羧酸聚合物的实例包括卡波姆，其为丙烯酸与蔗糖或季戊四醇的烯丙基醚交联的均聚物(例如，购自B.F.Goodrich的CARBOPOL^TM 900系列)。

交联的聚丙烯酸酯聚合物的非限制性实例包括阳离子型和非离子型聚合物。实例描述于美国专利第5100660号、第4849484号、第4835206号、第4628078号、第4599379号。

聚丙烯酰胺聚合物(包括非离子的聚丙烯酰胺聚合物，其包括经取代的支化的或未支化的聚合物)的非限制性实例包括聚丙烯酰胺、异构烷烃和月桂醇聚醚-7、丙烯酰胺与被丙烯酸和经取代的丙烯酸取代的丙烯酰胺的多嵌段共聚物。

多糖的非限制性实例包括纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、乙酸丙酸羧酸纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、纤维素硫酸钠及其混合物。其他实例为烷基取代的纤维素，其中纤维素聚合物的羟基被羟烷基化(优选羟乙基化或羟丙基化)以形成羟烷基化的纤维素，其然后用C10至C30直链或带支链的烷基基团通过醚键进一步改性。一般这些聚合物为C10至C30直链或带支链的醇与羟烷基纤维素的醚。其它有用的多糖包括硬葡聚糖类，其包含每三个单元具有一个(1-6)连接的葡萄糖的(1-3)连接的葡萄糖单元的直链。

本发明可以使用的胶的非限制性实例包括***树胶、琼脂、藻胶、藻酸、藻酸铵、支链淀粉、藻酸钙、角叉菜胶钙、肉毒碱、角叉菜胶、糊精、明胶、结冷胶、瓜尔豆胶、瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵、锂蒙脱石、透明质酸、水合二氧化硅、羟丙基壳聚糖、羟丙基瓜尔胶、卡拉亚胶、巨藻、角豆胶、纳豆胶、藻酸钾、角叉菜胶钾、藻酸丙二醇酯、菌核胶、羧甲基葡聚糖钠、角叉菜胶钠、黄蓍胶、黄原胶及其混合物。

j.防腐剂

可以在本发明的环境下使用的防腐剂的非限制性实例包括季铵盐防腐剂，例如聚季铵盐-1和苄烷铵卤化物(例如苯扎氯铵(“BAC”)和苯扎溴铵)、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、苯氧基乙醇、苄醇、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫汞撒或其组合。

2、药物成分

还预期药物活性成分对本发明的组合物是有用的。药物活性成分的非限制性实例包括抗粉刺剂、用于处理酒渣鼻的试剂、止痛剂、麻醉剂、***直肠剂、抗组胺药、包括非甾族消炎药的消炎剂、抗生素、抗真菌剂、抗病毒素、抗微生物剂、抗癌症活性剂、抗疥螨剂、灭虱剂、抗肿瘤药、防汗药、止痒剂、抗牛皮癣药、抗脂溢剂、生物活性蛋白质和多肽、烧伤处理剂、烧灼剂、脱色剂、脱毛剂、尿布疹处理剂、酶、毛发生长刺激剂、包括DFMO及其盐和类似物的毛发生长抑制剂、止血剂、角质分离剂、口疮处理剂、唇疱疹处理剂、牙科或牙周处理剂、光敏感活性剂、皮肤保护剂/屏障剂、包括激素和皮质激素的类固醇、晒伤处理剂、遮光剂、经皮活性剂、鼻活性剂、***活性剂、疣处理剂、创伤处理剂、创伤愈合剂等。

F.试剂盒

还预期了用于本发明的某些方面的试剂盒。例如，本发明的组合物可以包括在试剂盒内。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层压管、塑料管、分配器、加压容器、屏障容器、包装、分室、口红容器、压缩容器、能够保存化妆品组合物的化妆品盘或其它类型的容器，例如注射或吹塑成型的塑料容器，其中保存分散体或组合物或期望的瓶子、分配器或包装。试剂盒和/或容器在其表面上可包含标记。举例来说，标记可以是字词、短语、缩写、图片或符号。

所述容器可以分配预定量的组合物。在其他实施方案中，可以挤压容器(例如金属管、层压管或塑料管)以分配期望量的组合物。组合物可以分配为喷雾、气溶胶、液体、流体或半固体。容器可以具有喷雾、抽吸或挤压机构。试剂盒还可以包含使用试剂盒组分以及使用任何包含于容器内的其他组合物的说明书。说明书可以包含使用和保存组合物的说明。

实施例

列出了以下实施例以说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应理解，以下实施例中所公开的技术代表发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术，并因此可以被认为为其实践建立优选的模式。然而，根据本公开，本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，在所公开的具体实施方案中可以做许多改变，并仍获得类似或相似的结果。

本文所公开和要求保护的所有组合物和方法根据本公开可以不需要过多实验即可做出和实现。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述，但是对于本领域技术人员明显的是，在不脱离本发明的构思、精神和范围的情况下，可以对组合物和方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中进行改变。更具体地，明显地，化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂，同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如所附权利要求限定的本发明的构思、范围和概念内。

实施例1

(示例性制剂)

将具有本文公开的成分的制剂制备为局部皮肤用组合物。在一些情况下，局部皮肤用组合物可以制成安剖、精华、乳霜、乳液、凝胶或凝胶乳液。表1中的制剂为局部皮肤用组合物的实例。

表1^

成分	浓度百分比(以重量计)
		烟酰胺	3
阿魏酸	0.3
		四己基癸醇抗坏血酸酯	2
植酸	0.5
		迷迭香叶提取物	2
肖乳香籽提取物	0.5
		皱波角叉菜提取物	1
草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物*	2
		十一碳烯酰基苯丙氨酸	2
赋形剂**	q.s.

^可以通过在烧杯中在70℃至75℃加热下将成分混合直至均匀来制备制剂。随后，可以将制剂冷却至室温(20℃至25℃)。此外，如果需要，可以添加额外的成分，例如，以改变组合物的流变学特性或对皮肤提供有益效果的成分。

*这种提取物的组合还可以包含亚硫酸钠和亚硫酸氢钠。

**可以添加赋形剂，例如，改变组合物的流变特性。或者，水的量可以变化。

表2中的制剂为局部皮肤用组合物的实例。

表2

成分	浓度百分比(以重量计)
		异山梨醇酐二甲醚	6
聚二甲基硅氧烷	5
		戊二醇	4
烟酰胺	3
		甘油	2.4
硅石	2
		丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物	1.5
乳酸	0.8
		甜菜碱	0.7
氢氧化钾	0.6
		苯氧基乙醇	0.5
丙烯酸(酯)类/C10-30醇丙烯酸酯交联聚合物	0.3
		聚山梨醇酯-20	0.3
辛甘醇	0.1
		EDTA二钠	0.1
植物氨基酸	0.1
		黄原胶	0.1
癸二醇	0.08
		柠檬酸	0.05
1,2-己二醇	0.04
		乙基己基甘油	0.04
己二醇	0.04
		迷迭香叶提取物	0.04
辅料*	q.s.

*可以添加赋形剂，例如，改变组合物的流变特性。或者，水的量可以变化。

实施例2

(使用的材料)

表3中的活性成分用于制备表1和表2的制剂。

表3

实施例3

(黑色素水平的体外分析)

使用包含表1中成分的制剂来确定整体黑色素水平。

整体黑色素水平测定：该生物测定用于分析化合物对黑色素生成的影响。与未经处理的对照相比，表1化合物的组合对皮肤的局部施用显著减少黑色素产生和宏观变黑。该测定的终点是黑色素产生和来自供体的组织构建体的细胞活力的分光光度法测量。

使用由MatTek Corp以商品名MELANODERM^TM出售的皮肤类似物评价表1中制剂的皮肤增白功效。使用源自黑色肤色供体的组织构建体(MELANODERMTM MEL-300B)。与具有白色或棕色肤色黑色素细胞的人相比，源自黑色肤色的人的组织构建体的黑色素细胞具有更多的色素沉着。将MEL-300B组织***物放入填充有维持培养基的12孔板的孔中，并在应用处理前在37℃、5％CO₂的加湿培养箱中预平衡过夜。去除预平衡培养基后，通过用正位移移液管将25μl表1的制剂直接移液到含有MEL-300B组织***物的细胞培养***物内，将其施加到MEL-300B角质层上。一式三份进行处理。25μl 2％的曲酸(KA)溶液和25μl 0.4％的氢醌(HQ)溶液用作阳性对照，25μl无菌超纯水用作阴性对照。

MEL-300B组织***物每隔一天处理一次，连续10天。每隔一天用新鲜培养基更换维持培养基。处理后，将MEL-300B组织***物浸入磷酸盐缓冲盐水(PBS)中10分钟，以从组织中去除任何残留的酚红和测试样品。冲洗掉MEL-300B组织***物后，使用MTT活力测定(MTT试剂盒部件号：MTT-100)测量其中一个组织的活力。

使用可溶解黑色素测定法(Solvable Melanin Assay)测量相对黑色素含量。简而言之，使用细尖镊子从***物中取出组织。将每个组织吸干并置于1.7ml微量离心管中。将500μl SOLVABLE^TM(Tissue and Gel Solubilizer 0.5M-Packard BioScience Co.目录号6NE9100)加入每个管中，使每个组织完全浸没。将管封闭并在95℃水浴中孵育2小时。将样品涡旋直至膜完全溶解。冷却后，将200μl样品移入96孔板的每个孔中。在490nM读取板的吸光度。

下面的表4显示了与2％曲酸溶液、0.4％氢醌和表1的制剂相比，未经处理对照的吸光度值。与未经处理的对照相比，用表1的制剂处理MEL-300B组织使MEL-300B组织构建体中的整体黑色素水平降低了31.93％。此外，表1的制剂显示出与曲酸(一种已知的黑色素生成抑制剂)同样有效。最后，表1的制剂对深色皮肤有效，这与对苯二酚治疗不同，与未经处理的对照相比，氢醌治疗显示增加黑色素。

表4

测试溶液	吸光度
		未经处理的	0.927
曲酸	0.629
		氢醌	1.222
表1的制剂	0.631

在相关测试中，使用MELANODERM^TM***评估了南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物和巴西鹧鸪花提取物的组合。这些成分的净0.05重量％溶液使整体黑色素水平降低了17％。

实施例5

(PPAR-γ拮抗的体外试验)

迷迭香叶提取物由Naturex以商品名ROSEMARY

BLA提供，列于表2中，用于测定PPAR-γ拮抗作用。

PPAR-γ拮抗剂测定(NHR测定)：PPAR-γ是一种对皮脂产生至关重要的受体。PPAR-γ的活性是在拮抗剂模式下使用核激素受体测定法(NHR)测定的，该测定法分析了迷迭香叶提取物的能力，该提取物由Naturex以商品名ROSEMARY

BLA提供，以抑制配体与PPAR-γ的结合。简而言之，

NHR蛋白质相互作用(Pro)测定用于使用酶片段互补(EFC)以均质、非成像测定形式监测PPAR-γ的激活。NHR Pro检测基于激活的全长NHR蛋白与含有类固醇受体共激活肽(SRCP)结构域和一个或多于一个经典相互作用基序的核融合蛋白之间的蛋白质-蛋白质相互作用的检测。NHR用EFC检测***的PROLINK^TM组件标记，SRCP结构域与细胞核中表达的酶受体组件(EA)融合。当与配体结合时，NHR将迁移到细胞核并募集SRCP结构域，从而发生互补，产生一个单位的活性β-半乳糖苷酶(β-Gal)并产生化学发光信号。

PathHunter NHR细胞系根据标准程序从冷冻库中扩增。将细胞以20μL的总体积接种到白壁384孔微孔板中，并在测试前在37℃下孵育适当的时间。检测培养基中含有木炭-葡聚糖过滤血清以降低激素水平。对于拮抗剂测定，细胞与拮抗剂一起预孵育，然后以EC80浓度进行激动剂攻击。进行样品储备的中间稀释以在测定缓冲液中产生5X样品。将5μL 5X样品加入细胞中，并在37℃或室温下孵育60分钟。载体浓度为1％。将在测定缓冲液中的5μL6X EC80激动剂添加到细胞中，并在37℃或室温下孵育3小时至16小时。通过单次添加12.5μL或15μL(50体积/体积％)PathHunter检测试剂混合物，然后在室温下孵育1小时，产生检测信号。使用PerkinElmer ENVISION^TM仪器在产生信号后读取微孔板以进行化学发光信号检测。使用CBIS数据分析套件(ChemInnovation,CA)分析化合物活性。使用以下公式计算抑制百分比：抑制百分比(％)＝100％x(1-(测试样品的平均信号-载体对照的平均信号)/(EC80对照的平均信号-载体对照的平均信号))。

PPAR-γ的抑制百分比(％)在0.1μM ROSEMARY

BLA下为28.1％，在1μM ROSEMARY

BLA下为105.9％。参见表5。

表5

实施例6

B16色素沉着测定

黑色素生成是黑色素细胞产生黑色素的过程，黑色素是一种天然产生的色素，可赋予皮肤、毛发和眼睛颜色。抑制黑色素生成有利于防止皮肤变黑和淡化与衰老相关的黑斑。这种生物测定可以利用B16-F1黑色素细胞(ATCC)，一种永生化的小鼠黑色素瘤细胞系，来分析化合物对黑色素生成的影响。该测定的终点可以是黑色素产生和细胞活力的分光光度测量。B16-F1黑素细胞在37℃和10％CO₂下在含有10％胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中培养，然后用含有上表1制剂的活性成分的溶液处理6天。孵育后，通过405nm处的吸光度测量黑色素分泌。在相关测试中，南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物和巴西鹧鸪花提取物的组合的净0.3重量％溶液提供了42％的色素沉着减少，这对应于黑色素生成的显著减少。

实施例7

(附加的分析)

可以用于确定在本说明书全文和权利要求中所公开的具有所述成分的组合的任一种成分、或成分的任意组合或组合物功效的分析可以通过本领域普通技术人员已知的方法测定。以下是可以在本发明的上下文中使用的非限制性分析。应认识到，可以使用其它测试过程，包括例如客观的和主观的过程。

抗氧化(AO)分析：可以在皮肤细胞(例如表皮角质形成细胞、成纤维细胞和/或真皮内皮细胞)上进行抗氧化分析，以测定本说明书中公开的活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物中的任一种通过抑制

(2,2'-连氮基-双-[3-乙基苯并二氢噻唑啉磺酸])被正铁肌红蛋白氧化为

·+来提供抗氧化(TEAC)的能力。活生物体的抗氧化***可以包括酶，例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶；高分子，例如白蛋白、血浆铜蓝蛋白和铁蛋白；和大量小分子，包括抗坏血酸、α-生育酚、β-胡萝卜素、还原型谷胱甘肽、尿酸和胆红素。內源性和源自食物的抗氧化剂的总数表示细胞外液的总抗氧化活性。所有不同抗氧化剂的协作可以提供比单独的任何单个化合物更强的对抗反应性氧或氮自由基侵袭的保护。因此，与测量单独组分获得的信息相比，总的抗氧化能力可以给出更相关的生物学信息，因为其考虑了血浆和体液中存在的所有抗氧化剂的累积效应。将组合物中的成分预防ABTS氧化的能力与水溶性生育酚类似物Trolox进行比较，并以Trolox的摩尔当量进行定量。可以使用来自Cayman Chemical(安娜堡，密歇根，美国)的抗氧化能力试剂盒#709001来测量总的抗氧化能力。

胶原蛋白刺激分析：胶原蛋白刺激分析可以用来测定本说明书中公开的活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物中的任一种增加前胶原-1(胶原蛋白的前体)的表达的能力。可以合成胶原蛋白(I型、II型、III型、IV型和V型)为称为前胶原的前体分子。这些前体分子可以在氨基末端和羧基末端含有另外的肽序列，通常称为“前肽”。在细胞表达和分泌过程中，前胶原可以三聚体形式组装，然后通过特异性肽链内切酶在特异性N末端和C末端位点裂解，生成三个片段：前胶原-1N末端前肽(PINP)、I型胶原蛋白和前胶原-1羧基末端前肽(PICP)。

前肽的功能是促进前胶原分子在内质网内缠绕成三螺旋构象。前肽可以在其分泌过程中从胶原三螺旋分子上切下，之后三螺旋胶原聚合为细胞外胶原原纤维。因此，游离前肽的量在化学计量上反映了合成的胶原分子的量(类似于胰岛素原的羧基末端肽与内源性胰岛素之间的关系)。胶原蛋白是对皮肤结构至关重要的细胞外基质蛋白。增加的胶原蛋白合成帮助改善皮肤紧致度和弹性。

成纤维细胞提取物和培养上清液中PICP的定量检测可以使用酶免疫测定试剂盒(例如Takara#MK101)进行，以评估这些成分对皮肤中PICP合成的影响。该生物测定可用于检查人表皮成纤维细胞对前胶原肽(胶原蛋白前体)生成的影响。该测定的终点可以是分光光度测量，其反映前胶原肽的存在和细胞活性。测定采用定量的夹心酶免疫测定技术，由此将对前胶原肽特异的单克隆抗体预先包被在微板上。可以将标准品和样品用移液管移入孔中，并且所存在的任何前胶原肽均被固定的抗体结合。冲走所有未结合的物质后，将对前胶原肽特异的酶联多克隆抗体添加到孔中。冲洗以除去所有未结合的抗体-酶试剂之后，可以将底物溶液添加到孔中，以使颜色与最初步骤中结合的前胶原肽的量成比例地显现。终止显色，使用酶标仪测量在450nm处颜色的强度。

为了生成样品和对照，可以在含10％胎牛血清(Mediatech)的标准DMEM生长培养基中，在37℃、10％CO₂中培养次融合的正常成人表皮成纤维细胞(Cascade Biologics)。可用每种测试成分和对照处理细胞3天。孵育之后，可以收集细胞培养基，并如上所述使用来自Takara(#MK101)的夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)定量I型前胶原肽的分泌量。

弹性蛋白刺激分析：弹性蛋白是***蛋白，其帮助皮肤在伸展或收缩后恢复形状。弹性蛋白也是在需要储存机械能的位置使用的重要负载蛋白。弹性蛋白是通过在赖氨酰氧化酶催化的反应中连接许多可溶性原弹性蛋白蛋白分子而制得的。可以通过直接的ELISA夹心法使用针对弹性蛋白的免疫荧光抗体来对培养的人成纤维细胞进行染色，从而对培养的人成纤维细胞中的弹性蛋白分泌和弹性蛋白纤维进行监测。可以使用Meso ScaleDiscovery system SECTOR 2400成像***分析结果。由组合物中的一种或多于一种成分引起的弹性蛋白分泌和弹性蛋白纤维的变化可以通过在用针对弹性蛋白的抗体探测细胞或其裂解物之前将培养的人成纤维细胞与活性成分一起孵育一段时间来测定。

层粘连蛋白刺激分析：层粘连蛋白是真皮-表皮连接(DEJ)(也称为基膜)中的主要蛋白质。DEJ位于真皮和表皮连结之间，其形成称为表皮突的指状突出。表皮细胞从真皮的血管中接收其养分。表皮突增加了暴露于这些血管和所需营养物的表皮的表面积。DEJ提供两个组织隔室的黏附力，并控制皮肤的结构完整性。层粘连蛋白是位于DEJ中的结构性糖蛋白。层粘连蛋白与纤连蛋白一起被认为是将细胞保持在一起的胶，两者均由真皮成纤维细胞分泌，以帮助促进表皮细胞与DEJ的细胞内和细胞间黏附。

层粘连蛋白的分泌可通过对培养的人成纤维细胞的细胞上清液中的层粘连蛋白进行定量来监测，所述培养的人成纤维细胞用含或不含1.0％的测试成分最终浓度的培养基处理3天。孵育后，可以使用针对每种蛋白质的免疫荧光抗体在酶联免疫吸附测定(ELISA)中测量层粘连蛋白含量。

基质金属蛋白酶1的酶活性(MMP-1)分析：MMP是胞外蛋白酶，凭借其广泛的底物特异性在许多正常状态和疾病状态中起作用。MMP-1底物包括胶原蛋白IV。分子探针Enz/Chek明胶酶/胶原酶检测试剂盒(#E12055)可用于检测MMP-1蛋白酶活性，该试剂盒利用荧光明胶底物，并通过纯化的MMP-1酶检测底物的溶蛋白性裂解。在底物的溶蛋白性裂解后，显示出亮绿色的荧光，并使用荧光酶标仪对其进行监测以测量酶活性。在存在或不存在纯化的酶和底物的情况下孵育测试材料，以测定其蛋白酶抑制剂的能力。

基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的酶活性(MMP-3；MMP-9)分析：MMP是胞外蛋白酶，凭借其广泛的底物特异性在许多正常状态和疾病状态中起作用。MMP-3底物包括胶原蛋白、纤连蛋白和层粘连蛋白；而MMP9底物包括胶原蛋白VII、纤连蛋白和层粘连蛋白。可以使用来自BioMol International的用于MMP3(AK-400)和MMP-9(AK-410)的ColorimetricDrug Discovery试剂盒，以测定使用硫肽作为发色底物(Ac-PLG-[2-巯基-4-甲基-戊酰基]-LG-OC2H5)5,6的MMP蛋白酶活性。MMP裂解位点的肽键由硫肽中的硫酯键替代。该键被MMP水解产生巯基，巯基与DTNB[5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)，埃尔曼试剂]反应以生成2-硝基-5-硫代苯甲酸，这可以通过其在412nm处的吸光度进行检测(在pH为6.0和高于7时，ε＝13600M-1cm-1)。

脂氧合酶(LO)分析：脂氧合酶分析可用于测定本说明书中公开的活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物中的任一种抑制脂氧合酶(LO)表达的能力。LO是非血红素的含铁加双氧酶，其催化分子氧加成到脂肪酸中。亚油酸酯和花生四烯酸酯是植物和动物中LO的主要底物。然后可以将花生四烯酸转化为羟基二十碳四烯酸(HETE)衍生物，随后将其转化为有效的炎症介导物白三烯。通过测定脂氧合酶(5-LO、12-LO或15-LO)与花生四烯酸孵育产生的氢过氧化物，可以实现准确、方便的筛选脂氧合酶抑制剂的方法。比色法LO抑制剂筛选试剂盒(#760700，Cayman Chemical)可用于测定组合物的成分抑制酶活性的能力。

纯化的15-脂肪氧合酶和测试成分可以在分析缓冲液中混合，并在室温下摇晃孵育10分钟。孵育之后，可以加入花生四烯酸以开始反应，混合物可以在室温下再孵育10分钟。加入比色底物终止催化，通过在490nm测定的荧光板读数评估颜色变化。与未经处理的对照相比，可以计算出脂氧合酶活性的抑制百分数，以确定组合物的成分抑制纯化的酶的活性的能力。

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分析：TNF超家族的原型配体TNF-α是在炎症中起核心作用的多效细胞因子。其表达的增加与促炎活性上调有关。生物分析可用于分析组合物的成分对人表皮角质形成细胞产生TNF-α的影响。该分析的终点可以是反映TNF-α的存在和细胞活性的分光光度测量。该分析可以采用定量的夹心酶免疫测定技术，由此将对TNF-α特异的单克隆抗体预先包被在微板上。

可以将标准品和样品移入微孔板的孔中，并且存在的任何TNF-α都被固定的抗体结合。洗掉所有未结合的物质后，可将对TNF-α特异的酶联多克隆抗体添加到孔中。冲洗以除去所有未结合的抗体-酶试剂之后，可添加底物溶液到孔中，使用酶标仪在450nm处检测，颜色与最初步骤中结合的TNF-α的量成比例地显现。可以终止显色，并可以测量颜色的强度。在37℃下、5％的CO₂中在EPILIFE^TM标准生长培养基(Cascade Biologics)中培养的次融合正常成人角质细胞(Cascade Biologics)可用佛波醇-12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA，10ng/ml，Sigma Chemical，#P1585-1MG)和组合物的成分或无测试成分(用于阴性对照)处理6小时。显示PMA导致TNF-α分泌的显著增加，TNF-α分泌在处理6小时后达到峰值。孵育之后，可以收集细胞培养基，并使用来自R&DSystems(#DTA00C)的夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)定量TNF-α分泌量。

弹性蛋白酶分析：来自Molecular Probes(尤金，俄勒冈，USA)的

弹性蛋白酶测定(试剂盒#E-12056)可用作体外酶抑制分析，用于在组合物成分存在的情况下测量对弹性蛋白酶活性的抑制作用。EnzChek试剂盒可以含有可溶的牛颈韧带弹性蛋白，其用染料标记以使缀合物的荧光淬灭。非荧光的底物可以被弹性蛋白酶或其他蛋白酶消化以产生高度荧光的片段。产生的荧光增强可以用荧光酶标仪进行监测。来自弹性蛋白底物的消化产物在约505nm处具有最大吸收，在约515nm处具有最大荧光发射。当使用EnzChek弹性蛋白酶检测试剂盒筛选弹性蛋白酶抑制剂时，肽N-甲氧基琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-氯甲基酮可用作弹性蛋白酶的选择性集体抑制剂，用于阳性对照。

纤连蛋白刺激分析：纤连蛋白是真皮-表皮连接(DEJ)(也称为基膜)中的主要蛋白质。DEJ位于真皮和表皮连结之间，形成称为表皮突的指状突出。表皮细胞从真皮的血管中接收其养分。表皮突增加了暴露于这些血管和所需营养物的表皮的表面积。DEJ提供两个组织隔室的黏附力，并控制皮肤的结构完整性。纤连蛋白是位于DEJ中的结构性糖蛋白。纤连蛋白与层粘连蛋白一起被认为是将细胞保持在一起的胶，两者均由真皮成纤维细胞分泌，以帮助促进表皮细胞与DEJ的细胞内和细胞间黏附。

纤连蛋白的分泌可通过对培养的人成纤维细胞的细胞上清液中的纤连蛋白进行定量来监测，所述培养的人成纤维细胞用含或不含1.0％的测试成分最终浓度的培养基处理3天。孵育后，可以使用针对每种蛋白质的免疫荧光抗体在酶联免疫吸附测定(ELISA)中测量纤连蛋白含量。

赖氨酰氧化酶分析：可以在皮肤细胞(例如表皮角质形成细胞、成纤维细胞和/或真皮内皮细胞)上进行赖氨酰氧化酶分析，以测定本说明书公开的活性成分、成分的组合或具有所述组合的组合物中的任一种刺激皮肤中赖氨酰氧化酶表达的能力。赖氨酰氧化酶可以催化弹性蛋白和胶原蛋白的交联，从而为皮肤提供在结构上更坚固的基底。通过增加赖氨酰氧化酶的表达，会发生弹性蛋白和胶原蛋白的交联增加，这可以有益于减少细纹、皱纹、皮肤松弛和/或无弹性皮肤的出现。

ORAC分析：还可以通过测量成分或组合物的抗氧化活性来分析本说明书公开的活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的任一种的氧自由基吸收(或吸收率)能力(ORAC)。抗氧化活性说明减少氧化试剂(氧化剂)的能力。该试验定量抑制氧化剂，例如已知导致损害细胞(例如皮肤细胞)的氧自由基的活动的程度及所需时间。可通过本领域普通技术人员已知的方法(参见美国专利公布号2004/0109905和2005/0163880；以及通常可获得的试剂盒例如Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒(#AOX-2))来确定本说明书公开的活性成分、成分组合或具有所述组合的组合物的任一种的ORAC值。Zen-Bio ORAC抗氧化分析试剂盒(#AOX-2)测量了由于AAPH(2,2'-偶氮双-2-甲基丙脒二盐酸盐)分解形成过氧自由基，荧光素荧光随时间的损失。Trolox(一种水溶性维生素E)以剂量依赖的方式作为抑制荧光素衰变的阳性对照。

透明质酸的产生：可测定在人真皮成纤维细胞中由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的透明质酸产生的变化。HA是一种与基质结构的稳定性有关的多糖，其还与向组织和细胞提供膨压有关。作为一个非限制性实例，可使用Hyaluronan DuoSet ELISA kit from R&D Systems(DY3614)确定在经处理和未经处理的成人真皮成纤维(HDFa)细胞中的HA的产生。在该试验中，对于试样的产生，在处理之前，在37℃和10％CO₂下在饥饿培养基中(在Dulbecco改良Eagle培养基中的0.15％牛胎儿血清和1％青霉素链霉素溶液)培养由Cascade Biologics获得的亚融合的HDFa细胞(C-13-5C)72小时。之后使用测试化合物、阳性对照(来自Sigma-Aldrich(P1585)的佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯和衍生自来自Sigma-Aldrich(P3201)的生长因子的血小板)或无添加对照用新鲜的饥饿培养基培养该细胞24小时。然后收集培养基并在-80℃下冷冻直至在ELISA试验用使用。

简而言之，该ELISA分析采用定量的三明治酶免疫分析技术，因此对HA特异的捕获抗体可以预先涂覆在微孔板上。将标准品、来自经处理的细胞和未处理的细胞的培养基移液至微孔板，以使存在的任何HA被固定化抗体结合。冲走所有未结合的物质后，添加对HA特异的酶联检测抗体到孔中。冲洗以去除所有未结合的抗体-酶试剂之后，添加底物溶液到孔中，使得颜色能够与最初步骤中结合的HA的量成比例的显现。在特定的时间停止颜色显现，颜色的强度可以使用酶标仪在450nm处测量。

闭合蛋白的产生：可测定在角质形成细胞中由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物的闭合蛋白产生的变化。闭合蛋白是对于紧密连结的形成和皮肤水分屏障功能重要的蛋白质。在经处理的和未经处理的角质形成细胞中如何确定闭合蛋白产生的非限制性实例是通过使用分析在角质形成细胞裂解物中的闭合蛋白浓度的生物分析。使用

SIMON^TM免疫印迹方案进行该生物分析。对于样品，在37℃下和5％的CO₂中，来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角质形成细胞(HEKa)在EPILIFE^TM生长培养基中生长24小时，Epilife生长培养基含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙，补充来自Life Technologies(S-101-5)的Keratinocyte Growth Supplement(HKGS)。然后将HEKa在含有测试化合物/提取物、无化合物/提取物用于阴性对照、或含有1mM的CaCl₂用于阳性对照的生长培养基中孵育24小时至48小时。然后将HEKa清洗、收集并于冰或更冷的物体上储存直至使用裂解缓冲液裂解。可确定样品的蛋白质浓度并用于归一化样品。裂解物在-80℃下存储直至在生物分析中使用。

SIMON^TM蛋白质印迹生物分析使用定量的蛋白质印迹免疫分析技术，该技术使用对闭合蛋白特异性的抗体来定量检测样品中的闭合蛋白。将细胞样品裂解并针对蛋白质浓度进行归一化。然后将归一化的样品和分子量标准使用毛细管电泳装载于变性蛋白质分离凝胶并在其上运行。然后，将凝胶内的蛋白质进行固定并使用对闭合蛋白特异性的初代抗体免疫探测。将固定的蛋白质用与初代抗体结合的酶联检测抗体免疫探测。然后向固定的蛋白质中添加化学发光底物溶液以使得化学发光显色与在固定中结合的闭合蛋白的量成比例。可在特定的时间终止化学发光显色，可测定化学发光信号的强度并与阳性对照和阴性对照比较。

角质形成细胞单层渗透性：可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合或具有该组合的组合物中的任一种的角质形成细胞单层的渗透性变化。角质形成细胞单层的渗透性是皮肤屏障的完整性的量度。作为非限制性实例，可使用Millipore(ECM642)的体外血管渗漏性试验测定在经处理和未经处理的角质形成细胞中的角质形成细胞单层的渗透性。该试验分析了内皮细胞吸附、输送和渗透。简略来说，来自Life Technologies(C-005-5C)的成人表皮角质形成细胞可被接种到在收集孔内的多孔胶原蛋白涂覆的膜上。在37℃下和5％的CO₂中，角质形成细胞在Epilife生长培养基中培养24小时，Epilife生长培养基含有来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的钙，补充来自Life Technologies(S-101-5)的Keratinocyte Growth Supplement(HKGS)。培养时间使得细胞形成单层并封闭膜孔。然后将培养基替换成含有测试化合物/提取物(测试样品)或不含有测试化合物/提取物(未经处理的对照)的新鲜的培养基，角质形成细胞在37℃下和5％的CO₂中培养另外48小时。在存在/不存在测试化合物/提取物的培养之后，为了确定角质形成细胞单层的渗透性，培养基被替换成含有高分子量异硫氰酸荧光素(FITC)-Dextran的新鲜的培养基，角质形成细胞在37℃下和5％的CO₂中培养另外4小时。在4小时的培养期间，FITC可以与单层膜渗透性成比例的速率穿过角质形成细胞单层和多孔膜进入收集孔。在4小时的培养之后，可确定细胞活性和收集孔中FITC的含量。对于FITC含量，收集孔中的培养基被收集，并且在520nm处激发时在480nm(Em)处测定培养基的荧光。与未处理的对照相比，渗透性百分比和变化百分比可以通过以下等式确定：渗透率百分比＝((测试样品的平均Ex/Em)/未经处理的对照的平均Ex/Em)*100；变化百分比＝测试样品的渗透率百分比-未经处理的对照的渗透率百分比。

蘑菇酪氨酸酶活性分析：在哺乳动物细胞中，酪氨酸酶在来自酪氨酸(和来自多巴色素聚合)的黑色素的多步生物合成中催化两个步骤。酪氨酸酶位于黑素细胞中，并产生赋予皮肤、毛发和眼睛颜色的黑色素(芳香族醌化合物)。在存在或不存在本说明书公开的每种活性成分、任意成分组合或具有所述组合的组合物的情况下，纯化的蘑菇酪氨酸酶(Sigma)可以与其底物L-Dopa(Fisher)一起孵育。色素形成可通过在490nm的比色板读数进行评估。蘑菇酪氨酸酶活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物比较进行计算，以确定测试成分或其组合抑制纯化的酶活性的能力。测试提取物的抑制与曲酸(Sigma)的进行比较。

环氧合酶(COX)分析：体外环氧合酶-1和环氧合酶-2(COX-1、COX-2)抑制分析。COX是一种展现环氧合酶和过氧化物酶两者活性的双功能酶。环氧合酶活性将花生四烯酸转换为过氧化氢内过氧化物(***素G2；PGG2)，过氧化物酶组分将内过氧化物(***素H2；PGH2)还原为相应的醇，***素、凝血

烷和环***素的前体。该COX抑制剂筛选分析测量环氧合酶的过氧化物酶组分。过氧化物酶活性通过监测氧化的N,N,N',N'-四甲基-对苯二胺(TMPD)的出现比色地进行分析。该抑制筛选分析包括COX-1和COX-2酶两者，以筛选同工酶特异性抑制剂。比色的COX(绵羊)抑制剂筛选分析(#760111，Cayman Chemical)可以用于分析说明书中所公开的活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物对纯化的环氧合酶(COX-1或COX-2)活性的效果。根据制造商的指示，纯化的酶、血红素和测试提取物可以在分析缓冲液中混合，并在室温下摇动孵育15分钟。孵育之后，可以加入花生四烯酸和比色底物开始反应。颜色变化可以通过在590nm的比色板读数进行评估。COX-1或COX-2活性的抑制百分比可以通过与未处理的对照物比较进行计算，以确定测试提取物抑制纯化的酶活性的能力。

控油分析：用于测量皮脂腺中皮脂分泌的减少和/或皮脂腺中皮脂产生的减少的试验可以通过使用本领域普通技术人员已知的标准技术进行分析。在具体的例子中，可以使用前额。本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合的任一种或具有该组合的组合物可以每天一次或两次地施用到前额的一部分一段固定的日子(例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或多于14天)，而前额的其他部分不用组合物处理。在一段固定的日子期满后，皮脂分泌可以通过将细吸油纸施用到经处理的和未经处理的前额皮肤上进行分析。这是通过首先用湿的和干的布从经处理的和未经处理的区域除去所有皮脂完成的。然后吸油纸施用到经处理的和未经处理的前额区域，可以绕着前额放置橡皮筋以轻轻地将吸油纸压到皮肤上。2小时后，可以移去吸油纸，使其干燥，然后进行透照。较深的吸油纸对应于较多的皮脂分泌(或较浅的吸油纸对应于减少的皮脂分泌)。

红斑分析：测量皮肤发红减少的试验可以使用Minolta Chromometer进行评估。皮肤红斑可以通过在对象前臂施用0.2％的十二烷基硫酸钠溶液来引发。该区域用封闭的贴片保护24小时。24小时后，除去贴片，可以使用Minolta Chroma Meter的a^*值对刺激引发的发红进行评估。a^*值测量肤色在红色区域的变化。在阅读后，立即用说明书中公开的活性成分、成分的组合、或具有所述组合的组合物中的任一种来处理该区域。可以定期进行重复测量以确定制剂减少发红和刺激的能力。

皮肤水分/水合分析：皮肤水分/水合的益处可以通过使用以Nova Dermal PhaseMeter进行的阻抗测量进行测量。阻抗计测量皮肤水分含量的变化。皮肤外层具有不同的电性质。当皮肤干燥时，其导电很差。当其变得更加含水时，产生增加的导电性。因此，皮肤阻抗(与导电性有关)的变化可以用于评价皮肤水合的变化。装置可以根据仪器说明针对每个测试日进行校准。还可以对温度和相对湿度进行标记。对象可以进行如下评估：测量前其可以在具有确定湿度(例如30％至50％)和温度(例如68℃至72℃)的室内进行平衡。在脸的每一侧进行三个独立的阻抗测定，并对其进行记录和平均。阻抗计可以使用T5设定，其对施用到脸上每五秒的阻抗值进行平均。变化可以以统计方差和显著性进行报告。可以分析本说明书公开的每种活性成分、成分组合中的任一种或具有该组合的组合物。

皮肤清透度和雀斑与老年斑减少的分析：皮肤清透度和雀斑与老年斑减少使用Minolta Chromometer进行评价。肤色改变可以使用Minolta Chroma Meter的a^*值进行评估以确定由于产品处理引起刺激的可能性。a^*值测量肤色在红色区域的变化。这用于确定说明书中公开的每种活性成分、任意一种成分的组合、或具有所述组合的组合物是否诱导刺激。测量可以在脸的每一侧上进行并进行平均，作为左脸和右脸的值。皮肤清透度也可以使用Minolta Meter进行测量。测量是Minolta Meter的a^*、b、和L值的组合，并与皮肤的亮度有关，而且非常好的对应皮肤的光滑度和水合。皮肤测定如上进行。在一个非限制性方面，皮肤清透度可以描述为L/C，其中C是色度并定义为(a²+b²)^1/2。

皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色分析：皮肤干燥、表面细纹、皮肤光滑度和肤色可以用临床评分技术进行评估。例如，皮肤干燥的临床评分可以通过五点标准Kligmanscale进行确定：(0)皮肤是柔软和湿润的；(1)皮肤呈现正常而没有可见的干燥；(2)皮肤触摸感觉轻微干燥而没有可见的剥落；(3)皮肤感觉干燥、坚韧并且具有鳞屑的发白外观；以及(4)皮肤感觉非常干燥、粗糙并且具有鳞屑的发白外观。评估可以由两个临床医师独立进行并进行平均。

肤色临床评分分析：肤色的临床评分可以通过十点模拟数值刻度实施：(10)均匀的肤色、粉红棕色。手持放大镜检查时没有暗的、发红的或有鳞的斑块。皮肤的微观纹理摸上去非常均匀；(7)不用放大镜观察均匀的肤色。没有鳞状区域，但是有由于色素淀积或红斑引起的轻微变色。没有直径大于1cm的变色；(4)轻易地注意到皮肤变色和不均匀的纹理。轻微有鳞。一些区域摸上去粗糙的皮肤；以及(1)不均匀的皮肤着色和纹理。多个区域有鳞和变色，色素减退型、发红的或暗斑。大面积的直径超过1cm的不均匀着色。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。

皮肤平滑度的临床评分分析：皮肤光滑度的临床评分可以通过一个十点模拟数值刻度进行分析：(10)光滑的，皮肤是湿润的和闪光的，手指划过表面时没有阻力；(7)一定程度光滑的，微小的阻力；(4)粗糙的、可见地改变的，摩擦时有摩擦力；以及(1)粗糙的、片状的、不均匀的表面。评估由两个临床医师独立进行并进行平均。

用Packman等人(1978)公开的方法进行的皮肤光滑度和皱纹减少分析：(1978)：皮肤光滑度和皱纹的减少也可以通过使用Packman等人(1978)公开的方法进行可视化评估。例如，每名对象就诊时，对每名对象的表面面线(SFL)的深度、浅度和总数量都可以进行认真的评分和记录。通过将数量因子乘以深度/宽度/长度因子得到数字的分数。获得眼睛区域和嘴巴区域(左侧和右侧)的分数，加到一起作为总的皱纹分数。

用复制品进行的纹和皱纹的显现分析：皮肤上纹和皱纹的显现可以使用复制品进行评估，复制品是皮肤表面的印模。可以使用如硅橡胶的材料。复制品可以通过图像分析进行分析。纹和皱纹可见性的变化可以通过利用硅复制品形成对象的脸并用计算机图像分析***分析复制品图像进行客观地定量。复制品可以从眼睛区域和颈部区域获得，并用数码相机以低照明入射角进行拍摄。数字图像可以用图像处理程序进行分析并确定复制品被皱纹和细纹覆盖的区域。

用Hargens Ballistometer进行的皮肤紧致度分析：皮肤紧致度可以用HargensBallistometer进行测量，Hargens Ballistometer是一种通过在皮肤上落下一个小物体并记录前两个反弹峰来评估皮肤弹性和紧致度的装置。Ballistometry是使用相对钝的探头(4平方毫米-接触面积)的小的轻量探测器。探测器轻轻地穿透进入皮肤，导致依赖于皮肤外层性质的测量，皮肤外层包括角质层和外表皮以及部分真皮层。

用Gas Bearing Electrodynamometer进行的皮肤柔软度/柔韧性分析：皮肤柔软度/柔韧性可以使用Gas Bearing Electrodynamometer进行评估，Gas BearingElectrodynamometer是一种测量皮肤压力/张力性质的仪器。皮肤的黏弹性与皮肤保湿有关。可以通过用双面胶将探测器附着在皮肤表面实现对脸颊区域预定位点的测量。大约3.5gm的力平行施加于皮肤表面，精确地测量皮肤的位移。然后可以计算皮肤的柔韧性，并表达为DSR(动态弹簧刚度，以gm/mm计)。

用表面光度仪/记录针的方法进行的皮肤表面轮廓分析：皮肤表面轮廓可以通过使用表面光度仪/记录针的方法进行测量。这包括闪光或拖动记录针穿过复制品表面。记录针的垂直位移通过距离传感器可以录入计算机，在扫描复制品的一定距离后，皮肤轮廓的分析可以以二-维曲面产生。该扫描可以沿着固定的轴重复任意次数以产生模拟的皮肤3-D图像。使用记录针技术可以获得十个随机的复制品截面，并组合产生平均值。感兴趣的值包括Ra，其为通过积分相对于平局轮廓高度的轮廓高度计算得到的所有粗糙度(高度)值的算术平均数。Rt，其为最高峰和最低谷之间的最大垂直距离，以及Rz，其为平均峰振幅减去平均峰高度。数值以用mm为单位标定的数值给出。设备应在每次使用前通过扫描已知数值的金属标准物进行归一化。Ra值可以通过下式计算：R_a＝归一化粗糙度；l_m＝横向(扫描)长度；以及y＝轮廓位置相对于平均轮廓高度的绝对值(x-轴)。

丝聚合蛋白的产生：可测定在角质形成细胞中由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合或具有该组合的组合物中的任一种的丝聚合蛋白产生的变化。丝聚合蛋白是皮肤中天然保湿因子(NMF)的前体。增加的NMF提高了皮肤中的水分含量。使用分析角质形成细胞裂解物中的丝聚合蛋白浓度的生物试验来确定在经处理和未经处理的角质形成细胞中的丝聚合蛋白的产生。可用于量化丝聚合蛋白产生的生物试验的非限制性实例为

SIMON^TM蛋白质印迹方案。对于每个样品，使正常的人表皮角质形成细胞(NHEK)在来自Life Technologies(M-EP-500-CA)的含有钙的EPI-200–MattekEPILIFE^TM生长培养基中生长。在处理之前，在37℃下5％的CO₂中，使NHEK在生长培养基中培养过夜。然后将NHEK在含有1％测试化合物/提取物的生长培养基中或不含化合物/提取物(阴性对照)的生长培养基中培育24小时至36小时。然后可将NHEK清洗、收集并于冰或更冷的物体上储存直至使用裂解缓冲液裂解并超声处理。可确定样品的蛋白质浓度并用于标准化样品。裂解物可在-80℃下存储直至在定量分析中使用。

SIMON^TM蛋白质印迹生物分析使用定量的蛋白质印迹免疫分析技术，该技术使用了对丝聚合蛋白特异性的抗体来定量检测试样品中的丝聚合蛋白。将细胞样品裂解并针对蛋白质浓度进行归一化。然后可将归一化的样品和分子量标准使用毛细管电泳装载于变性蛋白质分离凝胶并在其上运行。使用针对丝聚合蛋白特异性的初代抗体对凝胶内的蛋白质进行固定并免疫探测。然后可用与初代抗体结合的酶联检测抗体免疫探测经固定的蛋白质。然后可向经固定的蛋白质中添加化学发光底物溶液以使得化学发光显色与在固定中结合的丝聚合蛋白的量成比例。在特定的时间终止化学发光显色，可测定化学发光信号的强度并与阳性对照和阴性对照比较。

透明质酸酶活性的抑制：可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合或具有该组合的组合物中的任一种的透明质酸酶活性的变化。透明质酸酶是一种分解HA的酶。HA是一种与基质结构的稳定性有关的多糖，其还与向组织和细胞提供膨压有关。作为非限制性实例，可以使用修改源自Sigma-Aldrich方案#EC 3.2.1.35的体外协议测定透明质酸活性。简略来说，向含有测试化合物或对照组的微孔板反应孔中添加来自Sigma-Aldrich(H3506)的1-S型透明质酸。可使用鞣酸作为阳性对照抑制剂，对于对照的酶不添加测试化合物，可使用含有测试化合物的孔或并没有透明质酸的阳性对照作为背景的阴性对照。在底物(HA)的添加之前，孔在37℃下培养10分钟。添加底物，反应在37℃下培养45分钟。然后，将每个反应溶液的一部分转移并轻轻混合在乙酸钠和pH为3.75的乙酸的溶液中，以停止该部分反应(停止的孔)。在将一部分反应溶液加入到停止的孔中之后，停止的孔和反应孔应该都含有相同体积的溶液。反应孔和停止的孔均在室温下培养10分钟。然后测量反应孔和停止的孔在600nm处的吸光度。抑制可以使用以下公式来计算：抑制剂(或对照)活性＝(在600nm处的抑制剂停止的孔吸光度-在600nm处的抑制剂反应孔吸光度)；初始活性＝在600nm处的对照酶吸光度；抑制百分数＝[(初始活性/抑制剂活性)*100]-100。

过氧化物酶体增殖剂-激活的受体γ(PPAR-γ)的活性：可测定由于本说明书中所公开的每种活性成分、成分组合或具有该组合的组合物中的任一种的PPAR-γ活性的变化。PPAR-γ是一种对黑色素产生至关重要的受体。作为非限制性实例，可使用分析测试化合物或组合物抑制配体结合的能力的生物测试测定PPAR-γ的活性。简略来说，可以使用荧光的小分子pan-PPAR配体，由Life Technologies(PV4894)获得的FLUORMONE^TM Pan-PPARGreen，来确定测试的化合物或组合物是否能够抑制配体结合至PPAR-γ。样品孔含有PPAR-γ和荧光配体和测试化合物或组合物(测试)；参考抑制剂；罗格列酮(阳性对照)；或者没有测试化合物(阴性对照)。孔被培养设定的一段时间以使得配体有机会与PPAR-γ结合。然后可测定每个样品孔的荧光偏振，并与阴性对照孔比较以确定测试化合物或组合物的抑制百分比。

细胞因子分析：人表皮角质形成细胞被培养至70％至80％的融合度。吸出板中的培养基并加入0.025％的胰蛋白酶/EDTA。当细胞变得丰满时，轻轻地对培养皿敲击以释放细胞。从培养皿中除去含有胰蛋白酶/EDTA的细胞并中和。将细胞离心5分钟。以180×g形成细胞球团。吸出上清液。在EPILIFE^TM培养基(Cascade Biologics)中再悬浮获得的球团。细胞以约10％至20％的融合度被接种到6孔板中。在细胞变为约80％融合度之后吸出培养基，添加1.0ml的EPILIFE^TM，以及佛波醇13-十四酸酯12-乙酸酯(“PMA”)(已知的炎症诱导剂)和测试组合物稀释物至两个复制品孔中(即1.0％(100X储备的100μl)和0.1％(100X储备的10μl)的测试组合物被稀释为最终体积为1ml的EpiLife生长培养基)。轻轻地搅拌培养基以确保充分混合。另外，在存在或不存在额外的PMA的情况下，向对照孔中添加1.0ml的EPILIFE^TM。在给料之后，将板在37±1℃和5.0±1％CO₂中孵育约5小时。孵育5小时后，将所有培养基收集在锥形管中并在-70℃下冷冻。

为了分析，将16块的杂交盒连接至16块的FAST载玻片与16抗细胞因子抗体加实验对照一式三份的阵列(Whatman Bioscience)，将载玻片置于用于加工的FAST框架中(每框架4个载玻片)。在室温下，使用70ml S&S蛋白质阵列阻断缓冲剂(Whatman Schleicher andScheull)将阵列阻断15分钟。除去阻断缓冲剂，并向每个阵列添加70ml各自的上清液试样。在轻微振动下，阵列在室温下培养3小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。使用70ml混合型抗体处理阵列，混合型抗体含有对应于每个阵列捕捉抗体的一个生物素化的抗体。在轻微振动下，阵列在室温下培养1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次。在轻微振动下，在室温下使用70ml含有链霉亲和素-Cy5缀合物的溶液培养1小时。使用TBS-T将阵列清洗3次，在去离子水中快速冲洗并干燥。

载玻片可以在Perkin-Elmer ScanArray 4000共焦荧光成像***中成像。使用Imaging Research ArrayVision软件可以保存并分析阵列图像。简略来说，通过去除本底信号确定点强度。可以平均来自每个样品条件下的点重复，然后和适当的对照比较。

内皮细胞管形成：内皮细胞管的形成涉及血管形成和微毛细血管形成。毛细血管形成和血管形成可以促成皮肤发红和酒渣鼻。在存在或不存在测试提取物和化合物的情况下，在细胞培养***中，使用具有预成型的初代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的毛细管破坏试验可以确定内皮细胞形成管的能力。

简而言之，将HUVEC在细胞外基质进行体外培养，其刺激连接物和内皮细胞的管状形态生成以形成毛细管状的内腔结构。在许多方面，这些体外形成的毛细管和人类的毛细血管类似。毛细管试验是基于该现象的，并用于评价潜在的脉管***靶向试剂。

HUVEC培养物在5％CO₂、37℃下在细胞培养器中生长。用于HUVEC的完整生长培养基是内皮管细胞基础培养基(EBM)，补充2％的牛胎儿血清(FBS)、12μg/ml的牛脑提取物、1μg/ml皮质醇和1μg/ml的GA-1000(庆大霉素-两性霉素B)。在第3代至第8代之间的HUVEC培养物可以用于所有的分析试验。

使用荧光试剂Calcein AM预标记HUVEC，并将其接种于使用其完整的生长培养基涂覆的96孔培养板的细胞外基质中。在形态生成过程之后约4小时，形成内皮毛细管。然后，作为处理条件，对形成的毛细管培养物应用50μl体积的设定剂量的测试试剂。可以向无处理对照加入测试试剂的载剂。Sutent，一种FDA批准的抗血管生成药物，其可能与分析性能控制有关。在处理之后的约6小时，通过显微镜获得每个孔的图像来检查每个孔中的内皮细胞管形态，并定量分析在处理条件下的毛细管破坏活性。每个测试条件可以在重复的孔中实施，包括对照组。

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本文所公开和要求保护的所有组合物和/或方法可以根据本公开制成和实现而不需要过度的实验。尽管本发明的组合物和方法已经按照优选实施方案进行了描述，但对于本领域技术人员而言明显的是，可以对组合物和/或方法以及在本文所描述方法的步骤或步骤的顺序中实施变化，而不脱离本发明的概念、精神和范围。更具体地，明显的是化学和生理两方面都相关的特定试剂可以替代本文所描述的试剂，同时会实现相同或相似的结果。所有对本领域技术人员明显的这类相似的替代和改变都被视为在如由所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。

Claims

1.包含有效量的烟酰胺、植酸、迷迭香叶提取物、皱波角叉菜提取物、草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的护肤组合物在制备用于减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着的制剂中的用途，其中护肤组合物被局部施用至皮肤的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。

2.根据权利要求1所述的用途，其中护肤组合物还包含亚硫酸钠和焦亚硫酸钠。

3.根据权利要求2所述的用途，其中护肤组合物包含有效量的亚硫酸钠和焦亚硫酸钠，以减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。

4.根据权利要求1所述的用途，其中护肤组合物包含0.1重量％至10重量％的烟酰胺、0.01重量％至3重量％的植酸、0.1重量％至5重量％的迷迭香叶提取物、0.1重量％至5重量％的皱波角叉菜提取物、0.1重量％至5重量％的草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的组合。

5.根据权利要求1所述的用途，其中迷迭香叶提取物是包含乳酸、甜菜碱和水的低共熔溶剂的提取物，皱波角叉菜提取物是水提取物，草莓虎耳草提取物是水醇提取物，番木瓜果提取物是水醇提取物和/或番石榴果提取物是水醇提取物。

6.根据权利要求1所述的用途，其中组合物的局部施用降低皮肤的整体黑色素水平。

7.根据权利要求1所述的用途，其中组合物的局部施用使皮肤的整体黑色素水平至少降低5％、10％、15％、20％、25％或30％。

8.根据权利要求1所述的用途，其中组合物的局部施用使深色皮肤的整体黑色素水平降低至少30％。

9.根据权利要求1所述的用途，其中皮肤是棕色或黑色肤色的人的皮肤。

10.根据权利要求1所述的用途，其中皮肤是黑色肤色的人的皮肤。

11.根据权利要求1所述的用途，其中组合物的局部施用抑制皮肤的酪氨酸酶和/或过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR-γ)活性。

12.根据权利要求1所述的用途，其中护肤组合物还包含甘油和辛基/癸基葡糖苷。

13.根据权利要求1所述的用途，其中护肤组合物还包含有效量的南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物和巴西鹧鸪花提取物，以减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。

14.一种护肤组合物，其包含有效量的烟酰胺、植酸、迷迭香叶提取物、皱波角叉菜提取物、草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物，以减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。

15.根据权利要求14所述的组合物，其中护肤组合物还包含亚硫酸钠和焦亚硫酸钠。

16.根据权利要求15所述的组合物，其中护肤组合物包含有效量的亚硫酸钠和焦亚硫酸钠，以减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。

17.根据权利要求14所述的组合物，其包含0.1重量％至10重量％的烟酰胺、0.01重量％至3重量％的植酸、0.1重量％至5重量％的迷迭香叶提取物、0.1重量％至5重量％的皱波角叉菜提取物、0.1重量％至5重量％的草莓虎耳草提取物、番木瓜果提取物和番石榴果提取物的组合和0.1重量％至5重量％的十一碳烯酰基苯丙氨酸。

18.根据权利要求14所述的组合物，其中迷迭香叶提取物是包含乳酸、甜菜碱和水的低共熔溶剂的提取物，皱波角叉菜提取物是水提取物，草莓虎耳草提取物是水醇提取物，番木瓜果提取物是水醇提取物和番石榴果提取物是水醇提取物。

19.根据权利要求14所述的组合物，其中组合物有效降低皮肤的整体黑色素水平。

20.根据权利要求14所述的组合物，其中组合物有效地使皮肤的整体黑色素水平至少降低5％、10％、15％、20％、25％或30％。

21.根据权利要求14所述的组合物，其中组合物有效地使深色皮肤的整体黑色素水平降低至少30％。

22.根据权利要求14所述的组合物，其中皮肤是棕色或黑色肤色的人的皮肤。

23.根据权利要求14所述的组合物，其中皮肤是黑色肤色的人的皮肤。

24.根据权利要求14所述的组合物，其中组合物还包含甘油和辛基/癸基葡糖苷。

25.根据权利要求14所述的组合物，其中组合物还包含有效量的南美苋根提取物、巴西榥榥木树皮/茎提取物和巴西鹧鸪花提取物，以减少皮肤中的黑斑、老年斑和/或不期望的色素沉着。