CN113736749B

CN113736749B - 一株禽流感病毒毒株及其应用

Info

Publication number: CN113736749B
Application number: CN202110981666.XA
Authority: CN
Inventors: 傅芬芳; 苗玉和; 崔丽瑾
Original assignee: Fujian Shengwei Biotechnology Co ltd
Current assignee: Fujian Shengwei Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-08-25
Filing date: 2021-08-25
Publication date: 2023-07-28
Anticipated expiration: 2041-08-25
Also published as: CN113736749A

Abstract

本发明提供了一株H9N2亚型禽流感病毒毒株及其应用。本发明的禽流感亚型毒株命名为SW001，其保藏编号为CGMCC No.19387。本发明提供的病毒株为低致病性毒株，具有良好的特异性和免疫原性，免疫雏鸡能产生针对H9亚型禽流感病毒的特异性HI抗体，能对H9N2亚型禽流感病毒的攻击产生很好的保护效果。本发明提供H9N2亚型禽流感病毒SW001株可作为疫苗毒株，制备用于预防禽类H9亚型禽流感的疫苗，具有较好的经济效益和社会效益。

Description

一株禽流感病毒毒株及其应用

技术领域

本发明涉及动物病毒学领域，具体说是涉及一株禽流感病毒毒株及其应用。

背景技术

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)感染家禽后引起的各种综合征，从无临床症状到呼吸道疾病和产蛋下降，到死亡率接近100％的严重全身性疾病不等。禽流感病毒属于正粘病毒科，流感病毒属，血凝素(Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(nueraminidase，NA)是病毒的两种主要保护抗原，根据HA和NA的抗原差异，可将A型流感病毒分为不同的亚型。迄今为止，已知HA有16个亚型(H1～H16)，NA有10个亚型(N1～N10)，它们之间的不同组合，使A型流感病毒具有多种亚型，各亚型之间无交互免疫力。根据其致病性，可分为高致病性AIV，主要为H5和H7两种血清型，其他均为低致病性禽流感，临床流行主要为H9亚型。

H9N2亚型禽流感病毒广泛分布存在，是当前禽流感流行的主要亚型之一，我国自1994年首次分离到H9N2亚型禽流感病毒以来，先后从不同地区分离到多株相同亚型的禽流感病毒。感染H9N2亚型禽流感病毒后，常继发或者并发大肠杆菌等疾病，引起大批鸡的死亡，给我国养禽业带来严重的经济损失。虽然H9亚型禽流感灭活疫苗已经广泛使用，该病也得到有效的控制，但近几年，H9亚型禽流感在免疫鸡群后仍时有发病，解决这一难题，有赖于对本地区流行毒株进行筛选和分离，选择保护力好的H9N2禽流感疫苗毒株，使禽流感的防控更具有针对性和实效性。

发明内容

本发明的目的一方面在于提供一种新的禽流感病毒毒株，其为H9N2亚型禽流感病毒SW001株，其HA蛋白具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，NA蛋白具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。该H9N2亚型禽流感病毒SW001株于2020年03月26日保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院2号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC No.9495)，分类命名为H9N2亚型禽流感病毒，保藏登记号为CGMCCNo.19387。

本发明的目的另一方面在于提供一种禽流感病毒毒株在制备生物制品中的应用，所述禽流感病毒毒株是H9N2亚型禽流感病毒SW001株，其保藏登记号为CGMCC No.19387。

根据本发明，所述禽流感病毒毒株在制备生物制品中的应用，所述生物制品优选是禽流感疫苗或联苗。

根据本发明，所述禽流感病毒毒株在制备生物制品中的应用，所述禽流感疫苗优选是灭活疫苗，其中抗原是灭活的所述H9N2亚型禽流感病毒SW001株。

本发明的目的还在于提供利用所述H9N2亚型禽流感病毒SW001株所制备的生物制品。

优选地，所述生物制品是用于检测禽流感的制品和/或禽流感疫苗中的任一种。

本发明提供的禽流感H9N2亚型病毒株SW001具有良好的特异性和免疫原性，实验发现，其不能被抗新城疫病毒(NDV)阳性血清，抗减蛋综合征病毒76株(EDS76)阳性血清、抗鸡传染性支气管炎病毒(M41)阳性血清、抗H5亚型禽流感阳性血清以及抗H7亚型禽流感阳性血清抑制，仅被H9亚型禽流感阳性血清所抑制。通过生物学特性试验，血清中和实验和外源病毒检测，证实该病毒具有良好的纯净度。SW001株对鸡胚的半数感染量为EID50＝10^-8.52/0.1ml，用SW001株制得的疫苗免疫雏鸡能产生针对H9亚型的特异性抗体，平均达到6.5log2，对H9N2亚型禽流感病毒的攻击产生很好的保护效果。

本发明提供的H9N2亚型禽流感病毒毒株可以作为疫苗毒株，预防禽的H9亚型禽流感，尤其是对疫源地分离源地区的禽流感预防效果优于现有的禽流感疫苗，对禽流感病毒的防治具有重要的价值。

附图说明

图1示出了本发明的H9N2亚型禽流感病毒毒株SW001株的HA基因同源性分析的结果。

图2示出了本发明的H9N2亚型禽流感病毒毒株SW001株的HA基因遗传进化分析的结果。

图3示出了本发明的H9N2亚型禽流感病毒毒株SW001株的NA基因同源性分析的结果。

图4示出了本发明的H9N2亚型禽流感病毒毒株SW001株的NA基因遗传进化分析的结果。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所做的修改或替换，均属于本发明的范畴。

本发明实施例中所用的SPF鸡胚购自浙江立华农业科技有限公司，抗H5、H7和H9亚型禽流感病毒阳性血清购自哈尔滨维科生物技术有限公司，新城疫病毒(NDV)阳性血清、减蛋综合征病毒(EDS76)阳性血清和传染性支气管炎病毒M41阳性血清购自中国兽医药品监察所。

若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规实验室分析纯，实施例中所用的技术均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

本发明提供的一株H9N2亚型禽流感病毒SW001株，是2018年12月在福建某鸡场的发病鸡只体内分离得到的。该鸡场的鸡只21日龄开始发病，临床症状主要表现为：饮水和采食减少，张口呼吸，偶见猝死，3天后死亡率升高，死亡率可达2％。剖检可见少数喉头有出血，严重的气囊炎，支气管栓塞，有白色干酪样物质，肺脏出血。自这些发病鸡的体内分离并鉴定得到一株H9N2亚型禽流感病毒，命名为A/Chicken/Fujian/SW001/2018(H9N2)株(简称SW001株)。该病毒毒株已于2020年03月26日保藏在中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC No.9495，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院2号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，分类命名为H9N2亚型禽流感病毒，保藏号为CGMCC No.19387。

本发明提供的禽流感H9N2亚型病毒毒株SW001，其HA蛋白具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，NA蛋白具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

使用含有该分离株的鸡胚尿囊液对1％鸡红细胞产生凝集，血凝抑制(HI)实验证明，该凝集不被鸡新城疫、禽流感H5、H7亚型、减蛋综合征等单因子阳性血清抑制。通过1日龄雏鸡脑内接种指数(ICPI)测定，证明该禽流感病毒为低致病力毒株。

本发明中制备的禽流感疫苗，其有效成分为灭活后的SW001株病毒，所制备疫苗是针对禽H9N2亚型禽流感病毒的疫苗，利用血清学方法和免疫攻毒病毒保护试验方法对该疫苗进行效果评估。结果显示，本发明中制备的禽流感灭活疫苗对禽具有良好的保护力。

进一步地，利用禽流感H9N2亚型禽流感病毒毒株SW001或其重组毒株所制备的生物制品也属于本发明的保护范围。

本发明提供了禽流感H9N2亚型病毒毒株SW001在制备禽流感疫苗中的应用。

实施例1：H9N2亚型禽流感病毒毒株SW001株的分离鉴定

1、病毒分离

本发明申请人从福建某肉鸡场发病鸡只体内分离得到H9N2亚型禽流感病毒SW001株。

该鸡场的鸡只21日龄时开始发病，临床症状主要表现为：饮水和采食减少，张口呼吸，偶见猝死，3天后死亡率升高，可达2％。剖检可见少数喉头有出血，严重的气囊炎，支气管栓塞，有白色干酪样物质，肺脏出血。

无菌条件下采集发病鸡的肝脏、脾脏、肺和胰腺，剪碎研磨，按1:5的重量比加入无菌PBS，4℃、8000r/min离心10min，取上清液并用0.22μm过滤器过滤后，转入另一无菌1.5mlEP管中。按0.2ml/胚的剂量接种10日龄SPF鸡胚各6枚，弃去24h内死亡的鸡胚，以后每隔12小时观察一次，收取死亡鸡胚，置于4℃保存，至96小时取出所有鸡胚尿囊液，每胚留样检测，剩余部分按1ml/管的剂量分装后保存于-80℃。

从病鸡病料中分离到的有血凝性的病毒，红细胞凝集(HA)试验表明该分离株能使鸡红细胞凝集，凝集抑制(HI)试验表明该分离株的血凝性不能被新城疫病毒(NDV)血清、抗AIV H5亚型血清和抗AIV H7亚型血清所抑制，而能被AIV H9亚型阳性血清抑制。

2、病毒继代

将病毒在11日龄SPF鸡胚中继续传代，收获尿囊液。

经血清学方法鉴定SW001株分离物为AIV H9N2亚型，定名为A/Chicken/Fujian/SW001/2018(H9N2)株(简称SW001株)。该分离株已于2020年03月26日保藏在中微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC No.9495，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院2号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)保藏，分类命名为H9N2亚型禽流感病毒，保藏号为CGMCC No.19387。

实施例2：H9N2亚型禽流感病毒SW001株的毒力的测定。

1、1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)测定

取1日龄SPF雏鸡10只，分别脑内注射按10^-1稀释度稀释的含病毒尿囊液0.05ml。另取2只以同样的方法注射稀释病毒用的生理盐水0.05ml。隔离饲养，观察8d，记录试验结果。

接种后，每天在与接种时间对应的时刻进行观察，并按正常(表现为活动灵活、行动无共济失调现象)、发病(包括表现为麻痹、卧地不起的鸡，但不包括表现迟钝的鸡)和死亡记录雏鸡的情况。连续观察8天，计算结束观察时正常、发病、死亡鸡的总和，根据不同的权值(正常为0、发病为1、死亡为2)，累计分数，观察和记录的结果如表1所示。

基于表1的结果，总分数为60，总和为80，利用公式ICPI＝总分/总和，计算得出禽流感病毒SW001株的ICPI为0.75。根据国际通用标准，ICPI在1.6～2.5范围内时，可判定病毒株为强致病性毒株，而禽流感病毒SW001株的ICPI低于该数值范围的下限值1.6，故判定所分离的病毒株为低致病性禽流感病毒。

表1

2、病毒滴度测定

将病毒株用无菌PBS做10倍倍比稀释，取10^-7～10^-9三个稀释度，按0.1ml/胚的剂量经尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚，每个稀释度分别接种5个鸡胚。接种后将鸡胚置于37℃下培养120小时，逐个检测鸡胚的HA效价，利用Reed-muench法计算病毒EID₅₀，结果示于表2。

表2

依据表2结果计算得出本发明的H9N2亚型禽流感病毒SW001株对鸡胚的半数感染量为EID₅₀为10^-8.17/0.1ml，即，将病毒悬液进行10^-8.17稀释后，按0.1ml的量接种于鸡胚，可使50％的鸡胚感染。

接下来，对H9N2亚型禽流感病毒SW001株对鸡胚的毒力进行测定。

将H9N2亚型禽流感病毒SW001株的第3代毒用无菌PBS稀释10⁴倍，接种于10日龄SPF鸡胚，共接种15枚，每胚接种0.2ml。接种后将鸡胚置于37℃孵育至120小时，每天观察两次，记录死胚情况，结果见表3。

表3

接下来，进一步测定H9N2亚型禽流感病毒SW001株对雏鸡的毒力。

按照OIE标准，接种4周龄SPF鸡，共接种10只。接种后观察鸡的存活和发病情况，连续观察10天，结果示于表4。从表4的结果可知，所有鸡只均存活，且未表现出明显的临床发病症状和病理变化，表明本发明的H9N2亚型禽流感病毒SW001株为低致病性毒力。

表4

实施例3：禽流感H9N2亚型病毒毒株SW001株的免疫原性评价

在37℃下，利用终浓度为1mmol/L的二乙烯亚胺(BEI)溶液对H9N2亚型禽流感病毒SW001株病毒液进行灭活处理36小时，并不断搅拌。灭活结束后，加入1mol/L过滤除菌的硫代硫酸钠，使其终浓度为10mmol/L，充分搅拌，37℃反应l小时终止灭活。将含有灭活的H9N2亚型禽流感病毒SW001株的溶液与吐温-80按照96:4的体积比进行混合，充分摇匀，直到吐温-80完全溶解，得到水相。将注射用白油94份，加硬脂酸铝2份，混合均匀并加热搅拌，直到完全透明为止，再加入司本-80 6份，充分混合后高压灭菌得到油相。将上述制备得到的水相和油相按照体积比为1:2进行混合乳化搅拌，制成油乳灭活疫苗。

取21日龄SPF鸡15只，对其中10只鸡进行颈部皮下接种上述制备的油乳灭活疫苗，每只接种0.2ml，另外5只皮下注射生理盐水作为对照组。将15只鸡分别隔离饲养，28天后采血分离血清，用禽流感病毒H9亚型标准抗原进行血凝抑制(HI)试验并测定针对H9亚型标准抗原的HI平均滴度。在免疫后28天，用H9N2亚型禽流感病毒SW001株进行攻毒，攻毒剂量为10^8.0EID₅₀/0.1ml。攻毒后5天，采集棉拭子，接种10日龄SPF鸡胚并从中分离该毒株。

结果如表5所示。

表5

注:分母为接种的动物数量，分子为发病或死亡的动物数量。

从表5的结果可知，免疫组和对照组都没有出现疑似禽流感的临床症状，对棉拭子进行病原分离，免疫组的10只鸡中均未分离到病毒，而对照组的5只鸡中均分离到了病毒，棉拭子结果显示利用本发明的H9N2亚型禽流感病毒SW001株制备的灭活疫苗能使鸡免受该毒株的攻击，表明该H9N2亚型禽流感病毒SW001株具有良好的免疫原性。

实施例4：H9N2亚型禽流感病毒SW001株的稳定性评价

用10日龄SPF鸡胚将H9N2亚型禽流感病毒毒株SW001株连续传代10代，对每一代的病毒进行尿囊液血凝效价(HA)检测，结果见表6。

从上述传代的病毒中随机选取其中一个代次的病毒在-80℃条件进行保存，在保存的第1月、3月、6月、9月、12月对病毒的HA效价进行检测，同时以第7～9代的病毒作为实验对照。结果如表7所示。

表6

表7

表6和表7的结果表明，本发明的H9N2亚型禽流感病毒SW001株能够稳定传代，且在低温保存条件下能够保持优异的效价稳定性。

实施例5：H9N2亚型禽流感病毒SW001株的HA基因和NA基因的分析

利用试剂盒提取P1代病毒的RNA，用PCR扩增病毒的HA基因和NA基因，回收PCR产物，连接到pMD18-T载体上，转化到DH5α感受代细胞，将鉴定为阳性的质粒送生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序分析。

测序结果显示，扩增获得1686bp的HA基因全长序列，具体序列如SEQ ID No.3所示，该基因编码的蛋白质具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。将该HA基因全长序列与表8所列的GenBank中已有的H9N2型毒株进行遗传进化分析，结果如图2所示，本发明的H9N2亚型禽流感病毒SW001株处于近年来流行的h9.4.2.5分支，HA基因序列与h9.4.2.5分支分离株的同源性在98.8％以上(参见图1)。

表8

测序结果显示，扩增获得1401bp的NA基因全长片段，序列如SEQ ID No.4所示，该NA基因编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。将该NA基因全长序列与表9中所列的GenBank中2018年后的流行毒株进行同源性序列分析，结果如图3和图4所示，本发明的H9N2亚型禽流感病毒SW001株的NA基因序列与近期H9亚型分离株的同源性均在98％以上，同源性高、亲缘关系近。

表9

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，单在本发明的基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求的范围。

序列表

<110> 申请人名称

福建圣维生物科技有限公司

<120> 一株禽流感病毒毒株及其应用

<130> SW001

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 560

<212> PRT

<213> 禽流感病毒(Avian Influenza virus)

<400> 1

Met Glu Thr Val Ser Leu Ile Thr Ile Leu Leu Val Ala Thr Val Ser

1 5 10 15

Asn Ala Asp Lys Ile Cys Ile Gly Tyr Gln Ser Thr Asn Ser Thr Glu

20 25 30

Thr Val Asp Thr Leu Thr Glu Asn Asn Val Pro Val Thr His Ala Lys

35 40 45

Glu Leu Leu His Thr Glu His Asn Gly Met Leu Cys Ala Thr Ser Leu

50 55 60

Gly Gln Pro Leu Ile Leu Asp Thr Cys Thr Ile Glu Gly Leu Ile Tyr

65 70 75 80

Gly Asn Pro Ser Cys Asp Leu Ser Leu Glu Gly Arg Glu Trp Ser Tyr

85 90 95

Ile Val Glu Arg Pro Ser Ala Val His Gly Leu Cys Tyr Pro Gly Asn

100 105 110

Val Glu Asp Leu Glu Glu Leu Arg Ser Leu Phe Ser Ser Ala Arg Ser

115 120 125

Tyr Gln Arg Ile Gln Ile Phe Pro Asp Thr Ile Trp Asn Val Ser Tyr

130 135 140

Asp Gly Thr Ser Thr Ala Cys Ser Gly Ser Phe Tyr Lys Ser Met Arg

145 150 155 160

Trp Leu Thr Arg Lys Asn Gly Glu Tyr Pro Thr Gln Asp Ala Gln Tyr

165 170 175

Thr Asn Asn Gln Gly Lys Asn Ile Leu Phe Met Trp Gly Ile Asn His

180 185 190

Pro Pro Thr Asp Glu Thr Gln Arg Gly Leu Tyr Thr Lys Thr Asp Thr

195 200 205

Thr Thr Ser Val Ala Thr Glu Glu Ile Asn Arg Ile Phe Lys Pro Leu

210 215 220

Ile Gly Pro Arg Pro Arg Val Asn Gly Leu Met Gly Arg Ile Asn Tyr

225 230 235 240

Tyr Trp Ser Val Leu Lys Pro Gly Gln Thr Leu Arg Ile Lys Ser Asp

245 250 255

Gly Asn Leu Ile Ala Pro Trp Tyr Gly His Ile Leu Ser Gly Glu Ser

260 265 270

His Gly Arg Ile Leu Lys Thr Asp Leu Lys Arg Gly Ser Cys Thr Val

275 280 285

Gln Cys Gln Thr Glu Lys Gly Gly Leu Asn Thr Thr Leu Pro Phe Gln

290 295 300

Asn Val Ser Lys Tyr Ala Phe Gly Asn Cys Ser Lys Tyr Ile Gly Ile

305 310 315 320

Lys Ser Leu Lys Leu Ala Val Gly Leu Arg Asn Val Pro Ser Arg Ser

325 330 335

Ser Arg Gly Leu Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Gly Gly Trp

340 345 350

Ser Gly Leu Val Ala Gly Trp Tyr Gly Phe Gln His Ser Asn Asp Gln

355 360 365

Gly Val Gly Met Ala Ala Asp Arg Asp Ser Thr Gln Lys Ala Ile Asp

370 375 380

Lys Ile Thr Ser Lys Val Asn Asn Ile Val Asp Lys Met Asn Lys Gln

385 390 395 400

Tyr Glu Ile Ile Asn His Glu Phe Ser Glu Val Glu Thr Arg Leu Asn

405 410 415

Met Ile Asn Asn Lys Ile Asp Asp Gln Ile Gln Asp Ile Trp Ala Tyr

420 425 430

Asn Ala Glu Leu Leu Val Leu Leu Glu Asn Gln Lys Thr Leu Asp Glu

435 440 445

His Asp Ala Asn Val Asn Asn Leu Tyr Asn Lys Val Lys Arg Ala Leu

450 455 460

Gly Ser Asn Ala Val Glu Asp Gly Lys Gly Cys Phe Glu Leu Tyr His

465 470 475 480

Lys Cys Asp Asp Gln Cys Met Glu Thr Ile Arg Asn Gly Thr Tyr Asn

485 490 495

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Gly Val Lys Leu Glu Ser Glu Gly Thr Tyr Lys Ile Leu Thr Ile Tyr

515 520 525

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Leu Phe Trp Ala Met Ser Asn Gly Ser Cys Arg Cys Asn Ile Cys Ile

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<210> 2

<211> 466

<212> PRT

<213> 禽流感病毒(Avian Influenza virus)

<400> 2

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1 5 10 15

Ile Ala Ile Ile Cys Leu Leu Met Gln Ile Ala Ile Leu Thr Thr Thr

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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165 170 175

Ser Ser Ser Cys Tyr Asp Gly Lys Ala Trp Leu His Ile Cys Val Thr

180 185 190

Gly Asp Asp Lys Asn Ala Thr Ala Ser Ile Ile Tyr Asp Gly Met Leu

195 200 205

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Ser Glu Cys Val Cys Ile Asn Gly Thr Cys Ala Val Val Met Thr Asp

225 230 235 240

Gly Ser Ala Ser Gly Val Ala Asp Thr Arg Val Leu Phe Ile Arg Glu

245 250 255

Gly Lys Ile Ile Asn Ile Arg Pro Leu Ser Gly Ser Ala Gln Phe Val

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275 280 285

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290 295 300

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340 345 350

Asp Gly Asn Asp Val Trp Met Gly Arg Thr Ile Lys Asn Gly Ser Arg

355 360 365

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385 390 395 400

Ser Gly Tyr Ser Gly Ile Phe Ser Val Glu Gly Lys Glu Cys Ile Asn

405 410 415

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435 440 445

Thr Tyr Gly Thr Gly Ser Trp Pro Asp Gly Ala Asn Ile Asn Phe Met

450 455 460

Pro Ile

465

<210> 3

<211> 1683

<212> DNA

<213> 禽流感病毒(Avian Influenza virus)

<400> 3

atggagacag tatcactaat aactatacta ctggtagcaa cagtaagcaa tgcagataaa 60

atctgcatcg gctatcaatc aacaaactcc acagaaactg tggacacact aacagaaaac 120

aatgtccctg tgacacatgc caaagaactg ctccacacag agcataatgg gatgctgtgt 180

gcaacaagct tgggacaacc tcttattttg gacacatgca ccattgaagg gctaatctat 240

ggcaatcctt cttgtgatct atcgctggaa ggaagagaat ggtcctatat cgtcgagaga 300

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aatgtttctt acgatgggac aagcacagca tgttcaggtt cattctacaa aagcatgaga 480

tggttgactc gaaaaaacgg cgagtaccct actcaagacg cccaatacac aaataatcaa 540

gggaagaaca ttcttttcat gtggggcata aatcacccac ccaccgatga aacgcagaga 600

gggctataca caaaaacaga cacaacaacg agtgtggcaa cagaagaaat aaataggatt 660

ttcaaaccat taataggacc aaggcctcgt gtcaacggtt tgatgggaag aatcaattat 720

tactggtctg tattgaaacc gggtcaaaca ctgcgaataa aatctgatgg gaatctaata 780

gctccatggt atggacacat tctttcagga gagagccacg gaagaattct aaagactgat 840

ttaaaaagag gtagctgcac agtgcagtgt cagacagaaa aaggtggctt aaacacaaca 900

ctgccattcc aaaatgtaag taagtatgca tttggaaact gctcaaaata tattggcata 960

aagagtctca aacttgcagt tggtctgagg aacgtgcctt ctaggtctag tagaggacta 1020

ttcggggcca tagcagggtt tatagaggga ggttggtcag gactagttgc tggttggtac 1080

gggttccagc attcaaatga ccaaggggtt ggtatggcag crgatagaga ctcaacccaa 1140

aaggcaattg ataaaataac atccaaagtg aataatatag tcgacaaaat gaacaagcag 1200

tatgaaatca ttaatcatga attcagtgag gtagaaacta gacttaacat gattaataat 1260

aagattgatg atcaaatcca ggatatatgg gcatataatg cagaattgct agttctgctt 1320

gaaaaccaga aaacactcga tgagcatgac gcaaatgtaa acaatctata taataaagta 1380

aagagggcgt tgggttctaa tgcagtggaa gatggtaaag gatgtttcga gctataccac 1440

aaatgtgatg accaatgcat ggagacaatt cggaacggga cctacaacag aaggaagtat 1500

caagaggaat caaaattaga aagacagaga atagaggggg tcaagctgga atctgaagga 1560

acttacaaaa tcctcaccat ttattcgact gtcgcctcat ctcttgtgat tgcaatgggg 1620

tttgctgcct tcttgttctg ggccatgtct aatgggtctt gcagatgcaa catttgtata 1680

taa 1683

<210> 4

<211> 1401

<212> DNA

<213> 禽流感病毒(Avian Influenza virus)

<400> 4

atgatcccaa atcagaagat aatagcaatt ggctctgttt ctctaatcat tgcgataata 60

tgtctcctca tgcaaattgc aatcttaaca acgactatga cattacattt cgggcagaaa 120

gaatgcagca aaccatcgaa taatcaagtg atgccatgtg aaccgatcat aatagaaagg 180

aatacagtgc atttgaatag tactaccata gagagggaaa tttgtcccaa agtggcggag 240

tataaaaatt ggtcaaaacc acagtgtcta attacagggt tcgctccttt ctcaaaggac 300

aactcaatta ggctttctgc aggtggggat atctgggtaa caagagaacc ttatgtctca 360

tgcagtcccg acaaatgtta tcaatttgca cttgggcagg gaaccaccct gaaaaacgag 420

cactcaaatg gcactacaca cgatagaacc cctcacagaa ctcttttaat gaatgaatta 480

ggtgtcccat ttcatctggg aaccaaacaa gtgtgtatag catggtctag ttcaagctgc 540

tatgatggaa aagcatggtt acatatttgt gttactgggg acgataaaaa tgctactgct 600

agtatcatct atgatgggat gcttgttgac agtattggat catggtccaa aaacatcctc 660

agaactcagg agtcagaatg cgtttgcatc aatggaactt gtgcagtggt aatgactgat 720

ggcagtgcat caggagtggc cgacactaga gtattattca taagggaagg gaaaattata 780

aatattagac cattgtcagg aagcgctcag ttcgttgagg aatgctcctg ttatccccgg 840

taccctgaaa ttagatgtgt ttgcagagac aattggaagg gctccaatag gcccattata 900

tatataaata tggctgatta tagcattgaa tccagctata tgtgctcagg acttgttggc 960

gacacaccaa gaaatgatga tagctccagc agcagcaact gcagagaccc taacaacgaa 1020

agaggggccc caggagtgaa agggtgggcc tttgacgacg ggaatgatgt ttggatggga 1080

cggacaatca aaaatggttc acgctcaggt tatgagactt ttagggtcat aaatggttgg 1140

accatggcta attcaaagtc acagataaat aggcaagtca tagtcgacag tgacaactgg 1200

tctgggtatt ccggcatctt ctctgttgaa ggcaaagaat gcatcaacag gtgtttttat 1260

gtagagttga taagagggag accacaggaa cccagagtgt ggtggacatc aaatagcatc 1320

attgtattct gtggaacctc aggtacatat ggaacaggct catggcctga tggagcgaat 1380

atcaacttca tgcctatata a 1401

Claims

1.一种禽流感病毒毒株，其为H9N2亚型禽流感病毒SW001株，保藏登记号为CGMCCNo.19387，所述禽流感病毒毒株的HA蛋白的序列如SEQ ID No.1所示，所述禽流感病毒毒株的NA蛋白的序列如SEQ ID No.2所示，

其中，所述禽流感病毒毒株的1日龄雏鸡脑内致病指数为0.75，

所述流感病毒毒株对10日龄SPF鸡胚的半数感染量EID₅₀为10^-8.17 /0.1ml。

2.一种禽流感病毒毒株在制备生物制品中的应用，其特征在于：所述禽流感病毒毒株是H9N2亚型禽流感病毒SW001株，其保藏登记号为CGMCC No.19387，

其中所述生物制品是禽流感疫苗、用于诊断禽流感病毒的抗原试剂或用于诊断禽流感病毒的阳性血清制剂中的任意一种。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述禽流感疫苗是灭活疫苗，其中抗原是灭活的所述H9N2亚型禽流感病毒SW001株。

4.利用权利要求1所述禽流感病毒毒株所制备的生物制品，其中所述生物制品是禽流感疫苗、用于诊断禽流感病毒的抗原试剂或用于诊断禽流感病毒的阳性血清制剂中的任意一种。