CN113655006A - 泌尿系结石成石危险因素检测试*** - Google Patents
泌尿系结石成石危险因素检测试*** Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了泌尿系结石成石危险因素检测试***,该检测***包括配套的仪器和试剂盒,所述试剂盒内有多种试剂,多种试剂包括尿草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂。本发明将一系列试剂(尿草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂)整合在一台仪器上检测,更加的便捷。适合高通量检测,操作简单,只需要把这一系列试剂放到试剂仓,然后把尿液样本放到样本仓,仪器自动检测,自动出结果,也不需要人工计算。
Description
技术领域
本发明涉及检测试剂盒技术领域,具体涉及泌尿系结石成石危险因素检测试***。
背景技术
泌尿系结石在我国是一个常见疾病,总体表现为南方地区发病率要高于北方地区。我国曾国华教授在2015年的一项研究表明,中国成人肾结石患病率为5.8%,其中男性患病率为6.5%,女性患病率为5.1%。
尽管随着科技水平的提高,泌尿系结石的治疗方式和效果有了明显的进步。但泌尿系结石的高复发率、结石残留率和残石再生长率也同样居高不下。代谢异常与泌尿系结石的形成关系密切。通过对泌尿系结石患者的代谢进行评估,已成为揭示和诊断结石病因的重要方法。
目前国外最为关注且有效的泌尿系结石患者代谢异常检查项目包括24小时尿液成石危险因素分析等。尿液成石危险因素目前已经知道的主要有高草酸尿、高钙尿、低柠檬酸尿、低镁尿、高磷尿、高尿酸尿等。这些成石危险因素的联合检测有助于辅助诊断尿结石的成分,从而指导临床治疗,并根据相应结石类型给予饮食指导或相应的药物治疗,预防和降低结石的复发。因此,尿液成石危险因素分析对于结石患者评估成石危险因素/代谢因素十分重要。
目前,尿草酸、尿钙、尿柠檬酸、尿镁、尿磷、尿尿酸等的检测已在众多发达和发展中国家中广泛开展。但是在我国,并未大规模开展,这与大多数医院不能直接检测这些成石危险因素有关。主要难点在于需要在不同仪器设备上开展这些项目,虽然尿钙、尿镁、尿磷、尿尿酸可在常规生化仪上开展,但草酸与柠檬酸的检测现目前仍在离子色谱仪开展,离子色谱仪设备昂贵,且操作费时,不能用于常规检测。在不同仪器设备上检测,操作繁琐,费时,普及困难,不能实现高通量检测。因此,多数医院并未开展。
发明内容
本发明的目的在于提供泌尿系结石成石危险因素检测试***,通过一个试剂盒就能实现对尿草酸、尿钙、尿柠檬酸、尿镁、尿磷、尿尿酸的检测,具有操作方便的优点。
本发明通过下述技术方案实现:
泌尿系结石成石危险因素检测试***,该检测***包括配套的仪器和试剂盒,所述试剂盒内有多种试剂,多种试剂包括尿草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂;
所述尿草酸检测试剂包括第一R1试剂和第一R2试剂;
所述第一R1试剂包括以下组分:
柠檬酸、DMAB和MBTH,所述柠檬酸在第一R1试剂中的浓度为0.01-1M,所述DMAB在第一R1试剂中的浓度为0.1-0.5mM;所述MBTH在第一R1试剂中的浓度为0.01-0.5mM;
第一R2试剂包括以下组分:
pH值为3.6-6的缓冲液、草酸氧化酶和过氧化物酶;所述缓冲液在第一R2试剂中的浓度为0.01-0.5M,所述草酸氧化酶在第一R2试剂中的浓度大于等于50U/L,所述过氧化物酶在第一R2试剂中的浓度大于等于5000U/L;
所述第一R2试剂为干粉状态,使用时采用水复溶;
所述尿柠檬酸检测试剂包括第二R1试剂和第二R2试剂;
所述第二R1试剂包括以下组分:Tris缓冲液、NADH和叠氮钠,所述Tris缓冲液浓度40mmol/L,NADH浓度0.4mmol/L,叠氮钠浓度0.95g/L;
所述第二R2试剂包括R2a试剂和R2b试剂:
R2a试剂包括PIPES和叠氮钠,PIPES浓度为600mmol/L,叠氮钠浓度为0.95g/L;
R2b试剂包括苹果酸脱氢酶和柠檬酸裂解酶,苹果酸脱氢酶浓度大于40KU/L;柠檬酸裂解酶浓度大于1KU/L;
所述R2b试剂为干粉状态,使用时将R2a和R2b混合得试剂第二R2试剂;
所述尿钙检测试剂包括R试剂,所述R试剂包括以下组分;
偶氮砷Ⅲ和咪唑;偶氮砷Ⅲ浓度为0.2mmol/L,咪唑浓度为75mmol/L。
所述尿镁检测试剂包括第三R1试剂第三和R2试剂:
所述第三R1试剂包括以下组分:
碳酸缓冲液和乙二醇醚二胺四乙酸;碳酸缓冲液浓度为0.1mol/L,乙二醇醚二胺四乙酸浓度为0.1mmol/L;
所述第三R2试剂包括二甲苯胺蓝和甘氨酸;二甲苯胺蓝浓度为0.5mmol/L;甘氨酸浓度为25mmol/L;
所述尿磷检测试剂包括第四R1试剂和第四R2试剂;
所述第四R1试剂包括氯化钠,浓度154mmol/L;
所述第四R2试剂包括氯化钠和钼酸铵;氯化钠浓度为154mmol/L;钼酸铵浓度为3.5mmol/L;
所述尿尿酸检测试剂包括以下组分:
磷酸盐、尿酸酶、过氧化物酶、4氨基安替比林和抗坏血酸氧化酶,其中,磷酸盐浓度为100mmol/L;尿酸酶浓度大于0.12U/ml;过氧化物酶浓度大于等于1U/mL;4氨基安替比林浓度为0.5mmol/L;抗坏血酸氧化酶浓度大于5U/mL。
本发明的构思在于:
将一系列试剂(尿草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂)整合在一台仪器上检测,更加的便捷。适合高通量检测,操作简单,只需要把这一系列试剂放到试剂仓,然后把尿液样本放到样本仓,仪器自动检测,自动出结果,也不需要人工计算。
其中,尿草酸的测定原理为:尿草酸在草酸氧化酶和过氧化物酶的作用下产生偶联反应生成有色复合物,可根据复合物的吸光度计算出草酸的浓度。
尿草酸检测试剂的核心成分为草酸氧化酶和过氧化物酶,但草酸氧化酶和过氧化物酶的最适pH不同,本发明通过合理设计R2试剂的配方,保证两种酶的较高活性,进而达到高灵敏度的特点,同时通过合理设计R1试剂的配方,使得整个试剂盒不仅灵敏度高,且检测限高,能够适用于尿液中草酸的检测。
本申请由于具有较高的检测限,为1.8-180mg/L,在检测尿液中草酸含量时,无需对样本进行稀释就可直接进行测量。
在现有草酸测量中,大部分检测试剂盒的检测限均较低,基本都是在9-45mg/L,只能适用于血液中草酸含量的检测,当将其用于尿液中草酸含量检测时,需要对样本进行稀释,导致降低了检测结果的准确度。
此外,本发明的试剂中不含有荧光染料等试剂,荧光染料在空气中不太稳定,开启后应尽快使用,且在还原剂的存在下很不稳定,试剂的抗干扰能力弱,本发明试剂避免荧光染料对环境的污染。试剂品种简单,仅R1、R2两种试剂。且无需孵育,减少孵育所导致的时间浪费,可直接上机检测,定标方式简单,无需每次检测定标。操作简单快捷,上机后10min后即可出结果,时间快速,更适用于高通量检测以及即时检测,更适用于医学实验室以及医院检验科的大批量操作。
其中,尿柠檬酸的测定原理为:柠檬酸在柠檬酸裂解酶,苹果酸脱氢酶作用下与酶促反应底物NADH的吸光度的变化值成反比,可吸光度计算出柠檬酸的浓度。
柠檬酸→草酰乙酸+乙酸盐
其中,尿尿酸的测定原理为:尿酸(UA)在尿酸酶催化下,氧化生成尿囊素和H2O2,H2O2与4-氨基安替比林和3,5二氧-2-羟苯磺酸在过氧化物酶的催化下,生成有色物质(琨亚胺化物合物),其色泽与样品中UA的浓度成正比。
其中,尿钙的测定原理为:钙能与试剂中的偶氮砷III(ArsenazoIII)反应,生成的有色复合物可用比色法测定。
其中,尿镁的测定原理为:镁(Mg)和二甲苯胺蓝结合,生成红紫色水溶性赘合物,在520nm处有最大吸收度,与此同时二甲苯胺蓝作为底物在不断减少,其吸光度也不断减少,通过对该底物吸光度减少的测定,即可求得样本中镁的浓度。
其中,尿磷的测定原理为:采用磷钼酸盐复合物直接分析法,反应生成的未还原磷钼酸盐复合物与样本中磷的含量成正比。通过测定340nm处吸光度值的变化,即可计算出样本中无机磷的浓度。
本申请的试剂盒还包括尿草酸标准品、尿钙标准品、尿柠檬酸标准品、尿镁标准品、尿磷标准品、尿尿酸标准品。
进一步地,第一R1试剂的制备过程如下:
DMAB溶解于甲醇中制备DMAB母液,将MBTH溶解于水中制备MBTH母液,柠檬酸溶解于水中制备柠檬酸溶液,然后将DMAB母液、MBTH母液和柠檬酸溶液按比例混合获得第一R1试剂。
进一步地,第一R2试剂的制备过程如下:
将草酸氧化酶用水复溶形成溶液并在2-8°下保存,将过氧化物酶用水复溶形成溶液并在2-8°下保存,将缓冲液、草酸氧化酶水溶液和过氧化物酶水溶液按比例混合获得第一R2试剂。
进一步地,第二R2试剂的制备过程如下:
PIPES和叠氮钠按比例混合组成R2a,将苹果酸脱氢酶复溶形成溶液,将柠檬酸裂解酶复溶形成溶液,将两种酶按比例混合组成R2b,并冻干成干粉。
进一步地,草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂分区设置。
进一步地,仪器包括BST300和BA200。
将泌尿系结石成石危险因素检测试***放入到仪器对应得试剂盘中,将收集的标本放到对应样本位中,仪器自动检测,自动计算结果。
BST300全自动特定蛋白分析仪包含仪器外部结构、加样***、清洗***、搅拌***、反应***、光学***等;BA200全自动特定蛋白分析仪包含仪器外部结构、加样***、清洗***、搅拌***、反应***、光学***等。
具体检测步骤如下:
1)校准程序:将尿草酸标准品、尿钙标准品、尿柠檬酸标准品、尿镁标准品、尿磷标准品、尿尿酸标准品放到仪器(BioSystems A400/BA200全自动特定蛋白分析仪)指定位置进行校准,得到校准曲线。
2)样本检测流程:
将收集好的临床尿液样本,将尿液样本、尿草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂、放置在仪器的对应位置,启动仪器直接测量尿草酸、尿钙、尿柠檬酸、尿镁、尿磷、尿尿酸含量,约8min出第一个结果。
本发明与现有技术相比,具有如下的优点和有益效果:
1、本发明通过一个试剂盒就能实现对尿草酸、尿钙、尿柠檬酸、尿镁、尿磷、尿尿酸的检测,具有操作方便的优点,为泌尿系结石的风险评估、诊断、治疗和预防复发提供依据。
2、本发明的草酸检测试剂使草酸氧化酶和过氧化物酶在合适的PH条件下,均达到较高的活性,提高了检测灵敏度,本发明测得草酸检测试剂盒线性范围为1.8-180mmol/L。
3、本发明的试剂盒能在配套的仪器上使用,达到直接上机的目的,使用更加方便。
4、本发明的配套仪器包括BST300和BA200,采用全球专利的光学***,灵敏度更高,线性范围更宽。
5、本发明的试剂盒中检测试剂均为成品,客户端无需制备相关试剂。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明实施例的进一步理解,构成本申请的一部分,并不构成对本发明实施例的限定。在附图中:
图1为实施例1中尿草酸的定标曲线;
图2为实施例1中UUA的定标曲线;
图3为实施例1中尿磷的定标曲线;
图4为实施例1中尿钙的定标曲线;
图5为实施例1中尿镁的定标曲线;
图6为实施例1中尿柠檬酸的定标曲线。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白,下面结合实施例和附图,对本发明作进一步的详细说明,本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明,并不作为对本发明的限定。
实施例1:
泌尿系结石成石危险因素检测试***,其特征在于,该检测***包括配套的仪器和试剂盒,所述试剂盒内有多种试剂,多种试剂包括尿草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂;
所述尿草酸检测试剂包括第一R1试剂和第一R2试剂;
所述第一R1试剂包括以下组分:
柠檬酸、DMAB和MBTH,所述柠檬酸在第一R1试剂中的浓度为0.07M,所述DMAB在第一R1试剂中的浓度为0.18mM;所述MBTH在R1试剂中的浓度为0.09mM;
第一R2试剂包括以下组分:
pH值为5的缓冲液、草酸氧化酶和过氧化物酶;所述缓冲液在第一R2试剂中的浓度为0.06M,所述草酸氧化酶在第一R2试剂中的浓度为100U/L,所述过氧化物酶在第一R2试剂中的浓度为5000U/L;所述缓冲液为柠檬酸盐缓冲液,所述柠檬酸盐缓冲液有0.06M的柠檬酸和0.06M的柠檬酸钠按体积比41:59混合获得;
所述R2试剂为干粉状态,使用时采用水复溶
所述尿柠檬酸检测试剂包括第二R1试剂和第二R2试剂;
所述第二R1试剂包括以下组分:Tris缓冲液、NADH和叠氮钠,所述Tris缓冲液浓度40mmol/L,NADH浓度0.4mmol/L,叠氮钠浓度0.95g/L;
所述第二R2试剂包括R2a试剂和R2b试剂:
R2a试剂包括PIPES和叠氮钠,PIPES浓度为600mmol/L,叠氮钠浓度为0.95g/L;
R2b试剂包括苹果酸脱氢酶和柠檬酸裂解酶,苹果酸脱氢酶浓度大于40KU/L;柠檬酸裂解酶浓度大于1KU/L;
所述R2b试剂为干粉状态,使用时将R2a和R2b混合得试剂第二R2试剂;
所述尿钙检测试剂包括R试剂,所述R试剂包括以下组分;
偶氮砷Ⅲ和咪唑;偶氮砷Ⅲ浓度为0.2mmol/L,咪唑浓度为75mmol/L。
所述尿镁检测试剂包括第三R1试剂第三和R2试剂:
所述第三R1试剂包括以下组分:
碳酸缓冲液和乙二醇醚二胺四乙酸;碳酸缓冲液浓度为0.1mol/L,乙二醇醚二胺四乙酸浓度为0.1mmol/L;
所述第三R2试剂包括二甲苯胺蓝和甘氨酸;二甲苯胺蓝浓度为0.5mmol/L;甘氨酸浓度为25mmol/L;
所述尿磷检测试剂包括第四R1试剂和第四R2试剂;
所述第四R1试剂包括氯化钠,浓度154mmol/L;
所述第四R2试剂包括氯化钠和钼酸铵;氯化钠浓度为154mmol/L;钼酸铵浓度为3.5mmol/L;
所述尿尿酸检测试剂包括以下组分:
磷酸盐、尿酸酶、过氧化物酶、4氨基安替比林和抗坏血酸氧化酶,其中,磷酸盐浓度为100mmol/L;尿酸酶浓度大于0.12U/ml;过氧化物酶浓度大于等于1U/mL;4氨基安替比林浓度为0.5mmol/L;抗坏血酸氧化酶浓度大于5U/mL。
在本实施例中,所述草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂分区设置;所述仪器采用BST300。
本实施例的准确度数据:配置90mg/L、2.19mmol/L、5.2mmol/L、0.864mmol/L、1.39mmol/L、379umol/L的草酸盐、钙离子、柠檬酸、镁离子、磷酸盐及尿酸溶液,检测其草酸、钙、镁、磷、柠檬酸、尿酸准确性。
测试结果如表1所示:
表1
准确度 | 尿草酸 | 尿钙 | 尿柠檬酸 | 尿镁 | 尿磷 | 尿尿酸 |
理论浓度 | 90 | 2.19 | 5.2 | 0.864 | 1.39 | 379 |
1 | 86.2 | 2.21 | 4.98 | 0.804 | 1.3 | 390 |
2 | 87.64 | 2.2 | 4.78 | 0.842 | 1.29 | 378 |
3 | 86.34 | 2.18 | 5.21 | 0.853 | 1.38 | 368 |
4 | 88.93 | 2.16 | 5.33 | 0.845 | 1.33 | 389 |
5 | 85.43 | 2.19 | 5.19 | 0.851 | 1.28 | 365 |
6 | 86.29 | 2.19 | 5.05 | 0.861 | 1.41 | 389 |
7 | 89.2 | 2.15 | 5.00 | 0.866 | 1.38 | 377 |
8 | 86.1 | 2.23 | 4.92 | 0.868 | 1.39 | 367 |
9 | 83.32 | 2.22 | 5.03 | 0.854 | 1.32 | 372 |
10 | 80.23 | 2.16 | 5.12 | 0.824 | 1.37 | 389 |
平均值 | 85.97 | 2.19 | 5.06 | 0.85 | 1.35 | 378.40 |
相对偏差 | -4.48% | -0.05% | -2.67% | -1.99% | -3.24% | -0.16% |
SD | 2.64 | 0.03 | 0.16 | 0.02 | 0.05 | 10.18 |
CV | 3.07% | 1.23% | 3.12% | 2.33% | 3.46% | 2.69% |
本实施例的定标曲线分别如图1-图6所示。
本实施例的重复性数据:
浓度(80mg/L)的数据如表2所示:
表2
重复性 | 尿草酸 | 尿尿酸 | 尿柠檬酸 | 尿钙 | 尿磷 | 尿镁 |
1 | 82.32 | 1249.2 | 12.73 | 4.34 | 6.68 | 2.8 |
2 | 81.55 | 1244.6 | 13.02 | 4.29 | 6.72 | 2.83 |
3 | 79.66 | 1248.1 | 12.94 | 4.4 | 6.63 | 2.76 |
4 | 82.23 | 1361.9 | 13.43 | 4.27 | 6.74 | 2.7 |
5 | 80.19 | 1351.8 | 13.23 | 4.31 | 6.66 | 2.6 |
6 | 79.33 | 1351 | 13.35 | 4.2 | 6.58 | 2.7 |
7 | 78.98 | 1388.7 | 13.25 | 4.32 | 6.27 | 2.67 |
8 | 76.89 | 1379.9 | 13.28 | 4.19 | 6.34 | 2.71 |
9 | 79.08 | 1366.5 | 13.21 | 4.19 | 6.26 | 2.7 |
10 | 80.23 | 1265.9 | 13.92 | 4.2 | 6.37 | 2.69 |
11 | 81.90 | 1283.9 | 13.82 | 4.18 | 6.44 | 2.65 |
12 | 82.22 | 1296.2 | 13.79 | 4.3 | 6.42 | 2.68 |
13 | 81.45 | 1306.6 | 13.47 | 4.17 | 6.36 | 2.59 |
14 | 82.11 | 1272.4 | 14.69 | 4.37 | 6.48 | 2.6 |
15 | 84.44 | 1266.2 | 14.2 | 4.28 | 6.46 | 2.5 |
AVG | 80.84 | 1308.86 | 13.49 | 4.27 | 6.49 | 2.68 |
SD | 1.88 | 52.33 | 0.51 | 0.07 | 0.16 | 0.08 |
CV | 2.32% | 4.00% | 3.81% | 1.75% | 2.51% | 3.15% |
浓度(10mg/L)的数据如表3所示:
表3
重复性 | 尿草酸 | 尿尿酸 | 尿柠檬酸 | 尿钙 | 尿磷 | 尿镁 |
1 | 10.87 | 119.3 | 1.31 | 0.3 | 0.34 | 0.56 |
2 | 9.76 | 117.1 | 1.35 | 0.32 | 0.31 | 0.55 |
3 | 9.98 | 126.3 | 1.3 | 0.35 | 0.35 | 0.58 |
4 | 8.99 | 134.9 | 1.44 | 0.31 | 0.32 | 0.56 |
5 | 10.1 | 138.6 | 1.31 | 0.34 | 0.34 | 0.58 |
6 | 9.78 | 144.7 | 1.33 | 0.33 | 0.33 | 0.56 |
7 | 9.45 | 133 | 1.46 | 0.32 | 0.32 | 0.54 |
8 | 8.97 | 132.6 | 1.49 | 0.34 | 0.33 | 0.59 |
9 | 9.76 | 132.1 | 1.35 | 0.32 | 0.35 | 0.55 |
10 | 9.67 | 124.8 | 1.4 | 0.33 | 0.35 | 0.55 |
11 | 9.24 | 126 | 1.38 | 0.35 | 0.36 | 0.51 |
12 | 9.45 | 127.1 | 1.36 | 0.34 | 0.34 | 0.54 |
13 | 10.02 | 119.1 | 1.43 | 0.32 | 0.35 | 0.54 |
14 | 9.69 | 116.8 | 1.36 | 0.34 | 0.36 | 0.59 |
15 | 9.56 | 116.6 | 1.33 | 0.35 | 0.35 | 0.58 |
AVG | 9.69 | 127.27 | 1.37 | 0.33 | 0.34 | 0.56 |
SD | 0.47 | 8.62 | 0.06 | 0.02 | 0.02 | 0.02 |
CV | 4.87% | 6.77% | 4.27% | 4.64% | 4.45% | 3.99% |
实施例2:
本实施例基于实施例1,与实施例1的区别在于:在本实施例中,各试剂将泌尿系结石成石危险因素检测试剂盒放入到BA200仪器试剂样本盘中,将收集的标本放到样本位中,仪器自动检测,自动计算结果。
本实施例的准确度数据如表4所示:
表4
准确度 | 尿草酸 | 尿钙 | 尿柠檬酸 | 尿镁 | 尿磷 | 尿尿酸 |
理论浓度 | 90 | 2.19 | 5.2 | 0.864 | 1.39 | 379 |
1 | 87.92 | 2.17 | 5.08 | 0.828 | 1.33 | 386 |
2 | 89.39 | 2.18 | 4.89 | 0.868 | 1.31 | 374 |
3 | 88.07 | 2.16 | 5.31 | 0.879 | 1.41 | 364 |
4 | 90.71 | 2.14 | 5.44 | 0.870 | 1.36 | 385 |
5 | 87.14 | 2.17 | 5.29 | 0.877 | 1.31 | 361 |
6 | 88.91 | 2.17 | 5.17 | 0.899 | 1.43 | 389 |
7 | 90.98 | 2.12 | 5.19 | 0.892 | 1.41 | 376 |
8 | 87.82 | 2.21 | 5.02 | 0.894 | 1.42 | 363 |
9 | 84.99 | 2.20 | 5.13 | 0.871 | 1.37 | 368 |
10 | 85.83 | 2.15 | 5.22 | 0.849 | 1.42 | 385 |
平均值 | 88.18 | 2.17 | 5.17 | 0.87 | 1.38 | 375.28 |
相对偏差 | -2.03% | -1.11% | -0.49% | 1.00% | -1.07% | -0.98% |
SD | 1.92 | 0.03 | 0.16 | 0.02 | 0.05 | 10.57 |
CV | 2.18% | 1.20% | 3.03% | 2.46% | 3.50% | 2.82% |
本实施例的重复性数据:
浓度(80mg/L)的数据如表5所示:
表5
浓度(10mg/L)下的重复性的数据如表6所示:
表6
重复性 | 尿草酸 | 尿尿酸 | 尿柠檬酸 | 尿钙 | 尿磷 | 尿镁 |
1 | 9.87 | 116.3 | 1.22 | 0.31 | 0.34 | 0.58 |
2 | 8.97 | 119.7 | 1.26 | 0.29 | 0.31 | 0.57 |
3 | 8.98 | 118.6 | 1.36 | 0.31 | 0.35 | 0.61 |
4 | 9.87 | 124.6 | 1.34 | 0.3 | 0.32 | 0.58 |
5 | 9.14 | 121.3 | 1.36 | 0.29 | 0.34 | 0.60 |
6 | 9.60 | 125.8 | 1.29 | 0.27 | 0.33 | 0.56 |
7 | 9.19 | 123.2 | 1.31 | 0.31 | 0.33 | 0.56 |
8 | 10.28 | 121.9 | 1.36 | 0.32 | 0.33 | 0.61 |
9 | 9.88 | 119.1 | 1.27 | 0.28 | 0.35 | 0.59 |
10 | 8.95 | 121.2 | 1.23 | 0.33 | 0.35 | 0.57 |
11 | 9.74 | 120 | 1.26 | 0.31 | 0.36 | 0.53 |
12 | 9.95 | 123.5 | 1.16 | 0.29 | 0.34 | 0.54 |
13 | 10.12 | 115.7 | 1.33 | 0.31 | 0.35 | 0.56 |
14 | 9.99 | 113.7 | 1.29 | 0.31 | 0.36 | 0.61 |
15 | 9.86 | 116.9 | 1.38 | 0.29 | 0.37 | 0.62 |
AVG | 9.63 | 120.10 | 1.29 | 0.30 | 0.34 | 0.58 |
SD | 0.45 | 3.47 | 0.06 | 0.02 | 0.02 | 0.03 |
CV | 4.72% | 2.89% | 4.82% | 5.30% | 4.80% | 4.82% |
以上所述的具体实施方式,对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,所应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施方式而已,并不用于限定本发明的保护范围,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.泌尿系结石成石危险因素检测试***,其特征在于,该检测***包括配套的仪器和试剂盒,所述试剂盒内有多种试剂,多种试剂包括尿草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂;
所述尿草酸检测试剂包括第一R1试剂和第一R2试剂;
所述第一R1试剂包括以下组分:
柠檬酸、DMAB和MBTH,所述柠檬酸在第一R1试剂中的浓度为0.01-1M,所述DMAB在第一R1试剂中的浓度为0.1-0.5mM;所述MBTH在第一R1试剂中的浓度为0.01-0.5mM;
第一R2试剂包括以下组分:
pH值为3.6-6的缓冲液、草酸氧化酶和过氧化物酶;所述缓冲液在第一R2试剂中的浓度为0.01-0.5M,所述草酸氧化酶在第一R2试剂中的浓度大于等于50U/L,所述过氧化物酶在第一R2试剂中的浓度大于等于5000U/L;
所述第一R2试剂为干粉状态,使用时采用水复溶;
所述尿柠檬酸检测试剂包括第二R1试剂和第二R2试剂;
所述第二R1试剂包括以下组分:Tris缓冲液、NADH和叠氮钠,所述Tris缓冲液浓度40mmol/L,NADH浓度0.4mmol/L,叠氮钠浓度0.95g/L;
所述第二R2试剂包括R2a试剂和R2b试剂:
R2a试剂包括PIPES和叠氮钠,PIPES浓度为600mmol/L,叠氮钠浓度为0.95g/L;
R2b试剂包括苹果酸脱氢酶和柠檬酸裂解酶,苹果酸脱氢酶浓度大于40KU/L;柠檬酸裂解酶浓度大于1KU/L;
所述R2b试剂为干粉状态,使用时将R2a和R2b混合得试剂第二R2试剂;
所述尿钙检测试剂包括R试剂,所述R试剂包括以下组分;
偶氮砷Ⅲ和咪唑;偶氮砷Ⅲ浓度为0.2mmol/L,咪唑浓度为75mmol/L。
所述尿镁检测试剂包括第三R1试剂第三和R2试剂:
所述第三R1试剂包括以下组分:
碳酸缓冲液和乙二醇醚二胺四乙酸;碳酸缓冲液浓度为0.1mol/L,乙二醇醚二胺四乙酸浓度为0.1mmol/L;
所述第三R2试剂包括二甲苯胺蓝和甘氨酸;二甲苯胺蓝浓度为0.5mmol/L;甘氨酸浓度为25mmol/L;
所述尿磷检测试剂包括第四R1试剂和第四R2试剂;
所述第四R1试剂包括氯化钠,浓度154mmol/L;
所述第四R2试剂包括氯化钠和钼酸铵;氯化钠浓度为154mmol/L;钼酸铵浓度为3.5mmol/L;
所述尿尿酸检测试剂包括以下组分:
磷酸盐、尿酸酶、过氧化物酶、4氨基安替比林和抗坏血酸氧化酶,其中,磷酸盐浓度为100mmol/L;尿酸酶浓度大于0.12U/ml;过氧化物酶浓度大于等于1U/mL;4氨基安替比林浓度为0.5mmol/L;抗坏血酸氧化酶浓度大于5U/mL。
2.根据权利要求1所述的泌尿系结石成石危险因素检测试***,其特征在于,所述第一R1试剂的制备过程如下:
DMAB溶解于甲醇中制备DMAB母液,将MBTH溶解于水中制备MBTH母液,柠檬酸溶解于水中制备柠檬酸溶液,然后将DMAB母液、MBTH母液和柠檬酸溶液按比例混合获得第一R1试剂。
3.根据权利要求1所述的泌尿系结石成石危险因素检测试***,其特征在于,所述第一R2试剂的制备过程如下:
将草酸氧化酶用水复溶形成溶液并在2-8°下保存,将过氧化物酶用水复溶形成溶液并在2-8°下保存,将缓冲液、草酸氧化酶水溶液和过氧化物酶水溶液按比例混合获得第一R2试剂。
4.根据权利要求1所述的泌尿系结石成石危险因素检测试***,其特征在于,所述第二R2试剂的制备过程如下:
PIPES和叠氮钠按比例混合组成R2a,将苹果酸脱氢酶复溶形成溶液,将柠檬酸裂解酶复溶形成溶液,将两种酶按比例混合组成R2b,并冻干成干粉。
5.根据权利要求1所述的泌尿系结石成石危险因素检测试***,其特征在于,所述草酸检测试剂、尿钙检测试剂、尿柠檬酸检测试剂、尿镁检测试剂、尿磷检测试剂和尿尿酸检测试剂分区设置。
6.根据权利要求1-5任一项所述的泌尿系结石成石危险因素检测试***,其特征在于,所述仪器包括BST300和BA200。
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