CN113651897A - 一种高活性的百香果多糖的制备方法及其活性制品 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种高活性的百香果多糖的制备方法，以裂壶藻发酵产物、纤维素酶、菠萝蛋白酶组成的复合酶解物进行酶解提取的方法，再通过扩张蛋白的协效复配作用，能够有效解决从百香果中提取百香果多糖的提取率较低、提取的多糖组分生物活性不高的问题，同时，本发明还公开一种高活性的百香果多糖的活性制品，其具有增加免疫力、抗疲劳功效。

Description

一种高活性的百香果多糖的制备方法及其活性制品
技术领域
本发明涉及天然植物提取物的技术领域，尤其涉及一种高活性的百香果多糖的制备方法及其活性制品。
背景技术
百香果又称鸡蛋果，是西番莲科西番莲属的草质藤本植物，长约6米；茎具细条纹，无毛；花瓣5枚，与萼片等长；基部淡绿色，中部紫色，顶部白色，浆果卵球形，直径3～4厘米，无毛，熟时紫色；种子多数，卵形。逸生于海拔180～1900米的山谷丛林中。原产安的列斯群岛，广植于热带和亚热带地区。主要有紫果和黄果两大类。果可生食或作蔬菜、饲料。入药具有兴奋、强壮之效。鸡蛋果含有17种氨基酸，丰富的蛋白质、脂肪、糖、维生素、钙、磷、铁、钾、SOD酶和超纤维等165种对人体有益物质，更被称为水果中的VC(维生素C)之王，并且它的口感独特。
随着全球新冠病毒的肆虐，及生活节奏的加快和社会压力的增大，在发达国家中，除了慢性病确诊的病人外，常人眼中的健康者有60％左右处于“亚健康”状态。据统计资料，在我国国内目前也有八亿人口以上的人处于这种状态。因此，生活饮食不正常、疲劳与亚健康不但是医学问题而且日益成为需要关注的社会问题，严重的影响着人们的生活质量，因此提升人体免疫力防治因饮食生活不正常而导致的亚健康己成为当务之急。
发明内容
本发明的一个目的在于：提供一种高活性的百香果多糖的制备方法及其活性制品，用以解决现有技术存在的问题。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
一种高活性的百香果多糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理：取新鲜百香果嫩果(未熟果)，过筛去除百香果表面的附着物，称重(湿重)并作为计量依据，将新鲜百香果切成丁状，破碎、过滤法去除百香果籽，向粉碎后的百香果中加入4-8倍重量的水，使用匀浆机或胶体磨将粉碎的百香果顶制作成匀浆状；
(2)一次提取：采用过滤的方法将步骤(1)获得的百香果匀浆进行过滤，分别收集滤饼和滤液，滤液为第一次提取液；
(3)二次提取：将步骤(2)获得的百香果滤饼重新悬浮在3-5倍重量的水中，调节溶液pH至3.0-6.0，过滤后收集滤液，为第二次提取液；
(4)酶解：合并两次提取的滤液，加入0.1-2.0％百香果重量的复合酶解物，加入原料重量0.05％-1％的扩张蛋白，调节pH为8-9，在30-50℃范围内搅拌6-10h；发明复合酶解物是由质量比为1-3:1-3:0.5-2的裂壶藻发酵产物、纤维素酶、菠萝蛋白酶组成。
(5)沉淀处理：将步骤(4)获得的酶解液调节pH至3.0-5.5并加入硫酸盐溶液，搅拌均匀，静置后使用离心法将滤液进行处理，收集滤液；
(6)干燥：将步骤(5)获得的滤液进行超滤处理，收集截留液，喷雾干燥，获得的粉末即为百香果多糖。
作为一种优选的技术方案，在所述步骤(4)中，所述裂壶藻发酵产物的制备方法为：取经过清洗的裂壶藻原料，设定酶解条件为料液比1∶10(m/V)、纤维素酶CellulaseACCF-4740添加量2％、温度55℃、pH4.5、反应时间1.3h，进行酶解，纤维素酶水解结束后，沸水浴灭酶15min，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻纤维素酶水解液；裂壶藻酶解液灭酶活后，调节pH值至6.2-6.6，高压蒸汽灭菌(121℃，20min)，然后接种体积分数1％的MRS培养基活化的戊糖片球菌液到裂壶藻酶解液，37℃恒温培养箱静置，进行发酵；发酵结束后，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻发酵产物。
作为一种优选的技术方案，在步骤(4)中，酶解的原料是经过一次和二次提取后滤液的合并物。
作为一种优选的技术方案，在步骤(4)中，所述扩张蛋白的制备方法为：将莲子经0.05-0.15wt％氯化钠消毒4-6min，流水冲洗5-7h，然后，25-28℃暗培养4-6天；剪取幼苗下胚轴顶端3-4cm，置-20℃预冷0.5h，加预冷至4℃的匀浆缓冲液，匀浆后，用孔径70μm的尼龙网过滤，滤渣经匀浆缓冲液洗涤，然后将滤渣加入匀浆缓冲液中，室温静置1-3h，得静置液；向静置液中加入提取液，4℃下提取44-50h，过滤，按0.3-0.5g/mL的添加量向滤液中缓慢添加硫酸铵，添加硫酸铵过程中不断搅拌，防止硫酸铵局部过饱和，然后静置45-50h，4℃条件下25000g离心5-10min，沉淀用酸性缓冲液复溶，4℃下分子量3000Da的透析袋透析，透析液经20000g离心10min，取上清液即为制备的扩张蛋白溶液；上述匀浆缓冲液组分为：25mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，2mmol/LEDTA，0.1wt％TritonX-100，pH7.0；上述提取液组分为：15mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.0mmol/L乙二胺四乙酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，0.5mol/LNaCl，pH6.0；上述酸性缓冲液配制是：将2.05g醋酸钠溶于水中，用冰醋酸调节pH至4.0，水定容至1L。
作为一种优选的技术方案，在步骤(5)中，向溶液中加入的硫酸盐，可以是硫酸铁、硫酸锌或硫酸钠或混合使用。
一种高活性的百香果多糖的活性制品，包括以下重量份数计组分：益母草提取物13-18份，细辛提取物11-14份，百香果多糖25-37份，维生素A10-15份，维生素C15-20份，玉米淀粉10-20份。
作为一种优选的技术方案，所述活性制品的浓度为65％-78％。
作为一种优选的技术方案，各重量份数计组分如下：益母草提取物15份，细辛提取物12份，秋葵多糖29份，维生素A11份，维生素C17份，玉米淀粉17份。
本发明的有益效果为：公开一种高活性的百香果多糖的制备方法，以裂壶藻发酵产物、纤维素酶、菠萝蛋白酶组成的复合酶解物进行酶解提取的方法，再通过扩张蛋白的协效复配作用，能够有效解决从百香果中提取百香果多糖的提取率较低、提取的多糖组分生物活性不高的问题，同时，本发明还公开一种高活性的百香果多糖的活性制品，其具有增加免疫力、抗疲劳功效。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。
实施例一：
一种高活性百香果多糖的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)预处理：取新鲜百香果嫩果，过筛去除百香果表面的附着物，称重(湿重)并作为计量依据，将百香果切成丁状，过滤法去除百香果籽，向粉碎后的百香果中加入6倍重量的水，使用匀浆机或胶体磨将粉碎的百香果顶制作成匀浆状；
(2)一次提取：采用过滤的方法将步骤(1)获得的百香果匀浆进行过滤，分别收集滤饼和滤液，滤液为第一次提取液；
(3)二次提取：将步骤(2)获得的百香果滤饼重新悬浮在3-5倍重量的水中，调节溶液pH至4.0，过滤后收集滤液，为第二次提取液；
(4)酶解：合并两次提取的滤液，加入1.2％百香果重量的复合酶解物，加入原料重量0.5％的扩张蛋白，调节pH为8，在38℃范围内搅拌8h；所述复合酶解物是由质量比为2:2:1的裂壶藻发酵产物、纤维素酶、菠萝蛋白酶组成。
(5)沉淀处理：将步骤(4)获得的酶解液调节pH至4.0并加入硫酸盐溶液，搅拌均匀，静置后使用离心法将滤液进行处理，收集滤液；
(6)干燥：将步骤(5)获得的滤液进行超滤处理，收集截留液，喷雾干燥，获得的粉末即为百香果多糖。
进一步的，所述步骤(4)中，所述裂壶藻发酵产物的制备方法为：取经过清洗的裂壶藻原料，设定酶解条件为料液比1∶10(m/V)、纤维素酶CellulaseACCF-4740添加量2％、温度55℃、pH4.5、反应时间1.3h，进行酶解，纤维素酶水解结束后，沸水浴灭酶15min，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻纤维素酶水解液；裂壶藻酶解液灭酶活后，调节pH值至6.4，高压蒸汽灭菌(121℃，20min)，然后接种体积分数1％的MRS培养基活化的戊糖片球菌液到裂壶藻酶解液，37℃恒温培养箱静置，进行发酵；发酵结束后，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻发酵产物。
进一步的，步骤(4)中，酶解的原料是经过一次和二次提取后滤液的合并物。
进一步的，步骤(4)中，所述扩张蛋白的制备方法为：将莲子经0.1wt％氯化钠消毒5min，流水冲洗6h，然后，26℃暗培养5天；剪取幼苗下胚轴顶端3cm，置-20℃预冷0.5h，加预冷至4℃的匀浆缓冲液，匀浆后，用孔径70μm的尼龙网过滤，滤渣经匀浆缓冲液洗涤，然后将滤渣加入匀浆缓冲液中，室温静置1-3h，得静置液；向静置液中加入提取液，4℃下提取46h，过滤，按0.4g/mL的添加量向滤液中缓慢添加硫酸铵，添加硫酸铵过程中不断搅拌，防止硫酸铵局部过饱和，然后静置47h，4℃条件下25000g离心7min，沉淀用酸性缓冲液复溶，4℃下分子量3000Da的透析袋透析，透析液经20000g离心10min，取上清液即为制备的扩张蛋白溶液；上述匀浆缓冲液组分为：25mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，2mmol/LEDTA，0.1wt％TritonX-100，pH7.0；上述提取液组分为：15mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.0mmol/L乙二胺四乙酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，0.5mol/LNaCl，pH6.0；上述酸性缓冲液配制是：将2.05g醋酸钠溶于水中，用冰醋酸调节pH至4.0，水定容至1L。
进一步的，步骤(5)中，向溶液中加入的硫酸盐，可以是硫酸铁、硫酸锌或硫酸钠或混合使用。
实施例二：
一种高活性百香果多糖的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)预处理：取新鲜百香果嫩果，过筛去除百香果表面的附着物，称重(湿重)并作为计量依据，将百香果切成丁状，破碎、过滤法去除百香果籽，向粉碎后的百香果中加入4倍重量的水，使用匀浆机或胶体磨将粉碎的百香果顶制作成匀浆状；
(2)一次提取：采用过滤的方法将步骤(1)获得的百香果匀浆进行过滤，分别收集滤饼和滤液，滤液为第一次提取液；
(3)二次提取：将步骤(2)获得的百香果滤饼重新悬浮在3倍重量的水中，调节溶液pH至3.0，过滤后收集滤液，为第二次提取液；
(4)酶解：合并两次提取的滤液，加入0.1％百香果重量的复合酶解物，加入原料重量0.05％的扩张蛋白，调节pH为8，在30℃范围内搅拌6h；所述复合酶解物是由质量比为1:1:1的裂壶藻发酵产物、纤维素酶、菠萝蛋白酶组成。
(5)沉淀处理：将步骤(4)获得的酶解液调节pH至3.0并加入硫酸盐溶液，搅拌均匀，静置后使用离心法将滤液进行处理，收集滤液；
(6)干燥：将步骤(5)获得的滤液进行超滤处理，收集截留液，喷雾干燥，获得的粉末即为百香果多糖。
进一步的，所述步骤(4)中，所述裂壶藻发酵产物的制备方法为：取经过清洗的裂壶藻原料，设定酶解条件为料液比1∶10(m/V)、纤维素酶CellulaseACCF-4740添加量2％、温度55℃、pH4.5、反应时间1.3h，进行酶解，纤维素酶水解结束后，沸水浴灭酶15min，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻纤维素酶水解液；裂壶藻酶解液灭酶活后，调节pH值至6.2，高压蒸汽灭菌(121℃，20min)，然后接种体积分数1％的MRS培养基活化的戊糖片球菌液到裂壶藻酶解液，37℃恒温培养箱静置，进行发酵；发酵结束后，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻发酵产物。
进一步的，步骤(4)中，酶解的原料是经过一次和二次提取后滤液的合并物。
进一步的，步骤(4)中，所述扩张蛋白的制备方法为：将莲子经0.05wt％氯化钠消毒4min，流水冲洗5h，然后，25℃暗培养4天；剪取幼苗下胚轴顶端3cm，置-20℃预冷0.5h，加预冷至4℃的匀浆缓冲液，匀浆后，用孔径70μm的尼龙网过滤，滤渣经匀浆缓冲液洗涤，然后将滤渣加入匀浆缓冲液中，室温静置1h，得静置液；向静置液中加入提取液，4℃下提取44h，过滤，按0.3g/mL的添加量向滤液中缓慢添加硫酸铵，添加硫酸铵过程中不断搅拌，防止硫酸铵局部过饱和，然后静置45h，4℃条件下25000g离心5min，沉淀用酸性缓冲液复溶，4℃下分子量3000Da的透析袋透析，透析液经20000g离心10min，取上清液即为制备的扩张蛋白溶液；上述匀浆缓冲液组分为：25mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，2mmol/LEDTA，0.1wt％TritonX-100，pH7.0；上述提取液组分为：15mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.0mmol/L乙二胺四乙酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，0.5mol/LNaCl，pH6.0；上述酸性缓冲液配制是：将2.05g醋酸钠溶于水中，用冰醋酸调节pH至4.0，水定容至1L。
进一步的，步骤(5)中，向溶液中加入的硫酸盐，可以是硫酸铁、硫酸锌或硫酸钠或混合使用。
实施例三：
一种高活性百香果多糖的制备方法，该方法包括以下步骤：
(1)预处理：取新鲜百香果嫩果，过筛去除百香果表面的附着物，称重(湿重)并作为计量依据，将百香果切成丁状，破碎、过滤法去除百香果籽，向粉碎后的百香果中加入8倍重量的水，使用匀浆机或胶体磨将粉碎的百香果顶制作成匀浆状；
(2)一次提取：采用过滤的方法将步骤(1)获得的百香果匀浆进行过滤，分别收集滤饼和滤液，滤液为第一次提取液；
(3)二次提取：将步骤(2)获得的百香果滤饼重新悬浮在5倍重量的水中，调节溶液pH至6.0，过滤后收集滤液，为第二次提取液；
(4)酶解：合并两次提取的滤液，加入2.0％百香果重量的复合酶解物，加入原料重量1.2％的扩张蛋白，调节pH为9，在50℃范围内搅拌6-10h；所述复合酶解物是由质量比为3:3:2的裂壶藻发酵产物、纤维素酶、菠萝蛋白酶组成。
(5)沉淀处理：将步骤(4)获得的酶解液调节pH至5.5并加入硫酸盐溶液，搅拌均匀，静置后使用离心法将滤液进行处理，收集滤液；
(6)干燥：将步骤(5)获得的滤液进行超滤处理，收集截留液，喷雾干燥，获得的粉末即为百香果多糖。
进一步的，所述步骤(4)中，所述裂壶藻发酵产物的制备方法为：取经过清洗的裂壶藻原料，设定酶解条件为料液比1∶10(m/V)、纤维素酶CellulaseACCF-4740添加量2％、温度55℃、pH4.5、反应时间1.3h，进行酶解，纤维素酶水解结束后，沸水浴灭酶15min，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻纤维素酶水解液；裂壶藻酶解液灭酶活后，调节pH值至6.6，高压蒸汽灭菌(121℃，20min)，然后接种体积分数1％的MRS培养基活化的戊糖片球菌液到裂壶藻酶解液，37℃恒温培养箱静置，进行发酵；发酵结束后，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻发酵产物。
进一步的，步骤(4)中，酶解的原料是经过一次和二次提取后滤液的合并物。
进一步的，步骤(4)中，所述扩张蛋白的制备方法为：将莲子经0.15wt％氯化钠消毒6min，流水冲洗7h，然后，28℃暗培养6天；剪取幼苗下胚轴顶端4cm，置-20℃预冷0.5h，加预冷至4℃的匀浆缓冲液，匀浆后，用孔径70μm的尼龙网过滤，滤渣经匀浆缓冲液洗涤，然后将滤渣加入匀浆缓冲液中，室温静置1-3h，得静置液；向静置液中加入提取液，4℃下提取50h，过滤，按0.5g/mL的添加量向滤液中缓慢添加硫酸铵，添加硫酸铵过程中不断搅拌，防止硫酸铵局部过饱和，然后静置50h，4℃条件下25000g离心10min，沉淀用酸性缓冲液复溶，4℃下分子量3000Da的透析袋透析，透析液经20000g离心10min，取上清液即为制备的扩张蛋白溶液；上述匀浆缓冲液组分为：25mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，2mmol/LEDTA，0.1wt％TritonX-100，pH7.0；上述提取液组分为：15mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.0mmol/L乙二胺四乙酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，0.5mol/LNaCl，pH6.0；上述酸性缓冲液配制是：将2.05g醋酸钠溶于水中，用冰醋酸调节pH至4.0，水定容至1L。
进一步的，步骤(5)中，向溶液中加入的硫酸盐，可以是硫酸铁、硫酸锌或硫酸钠或混合使用。
实施例四：
一种高活性的百香果多糖的活性制品，所述的胶囊中各原料的质量份数比为：益母草提取物15份，细辛提取物12份，百香果多糖29份，维生素A11份，维生素C17份，玉米淀粉17份。百香果多糖采用实施例一中的制备方法获得。
实施例五：
一种高活性的百香果多糖的活性制品，所述的胶囊中各原料的质量份数比为：益母草提取物15份，细辛提取物12份，百香果多糖25份，维生素A11份，维生素C17份，玉米淀粉17份。百香果多糖采用实施例一中的制备方法获得。
实施例六：
一种高活性的百香果多糖的活性制品，所述的胶囊中各原料的质量份数比为：益母草提取物15份，细辛提取物12份，百香果多糖37份，维生素A17份，维生素C17份，玉米淀粉17份。百香果多糖采用实施例二中的制备方法获得。
实施例七：
一种高活性的百香果多糖的活性制品，所述的胶囊中各原料的质量份数比为：益母草提取物15份，细辛提取物12份，百香果多糖25份，维生素A11份，维生素C17份，玉米淀粉17份。百香果多糖采用实施例三中的制备方法获得。
实施例八：
一种高活性的百香果多糖的活性制品，所述的胶囊中各原料的质量份数比为：益母草提取物15份，细辛提取物12份，百香果多糖37份，维生素A11份，维生素C17份，玉米淀粉17份。百香果多糖采用实施例三中的制备方法获得。
增加免疫力、抗疲劳效果验证实验：
将通过实施例四制得的活性制品混合均匀，制备成粉末状，作为测试样品。将生理盐水为空白对照组，以支链氨基酸的水溶液为阴性对照组。
实验对象：选用SD大鼠，由北京实验动物中心提供，雌雄各半，180只，220±18g，约3月龄，在实验室饲养一个月后，经过初步游泳训练随机分为空白对照组、阴性对照组和样品组。
试验方法：
力竭性试验：取样品粉末，用蒸馏水溶解，样品的浓度分别为分别为0.15g.kg-1.d-1、0.30g.kg-1.d-1、0.60g.kg-1.d-1，样品组每天按0.1mL/10g体重灌胃；阴性对照组为支链氨基酸(亮氨酸∶异亮氨酸∶缬氨酸按质量比2：1:1混合后获得)的水溶液，配成浓0.60g.kg-1.d-1，每天按0.1mL/10g体重灌胃；各组末次灌喂30min后，进行大鼠负重(5％体重)游泳试验至力竭(力竭标准：负重大鼠游泳动作明显失调，不能再坚持或沉入水底超过3s不能回水面为力竭)。
(2)血清尿素氮试验：取样品粉末，用蒸馏水溶解，样品的浓度分别为分别为0.15g.kg-1.d-1、0.30g.kg-1.d-1、0.60g.kg-1.d-1，样品组每天按0.1mL/10g体重灌胃；阴性对照组为支链氨基酸(亮氨酸∶异亮氨酸∶缬氨酸按质量比2：1:1混合后获得)的水溶液，配成浓0.60g.kg-1.d-1，每天按0.1mL/10g体重灌胃；各组连续灌喂30d后，进行大鼠游泳试验(无负重)，90min后，拔眼球采血，用尿素氮测定试剂盒(二乙酰肼一肟法，北京化工厂生产)检测血清尿素氮。
试验结果
实施例样品与对照组对大鼠负重游泳时间的影响见表1。
表1实施例样品与对照组对大鼠负重游泳时间的影响对比
组别 游泳时间(min)
阴性对照组 98±2.1
阳性对照组 137±1.9a
低剂量组 116±1.3a
中剂量组 154±0.2ab
高剂量组 138±1.6ab
注：采用方差分析方法进行统计分析，与阴性对照组比较，”a”:p<0.05；与阳性对照组比较,“b”:p<0.01。
表2实施例样品与对照组对大鼠运动后血清尿素氮含量的影响
Figure BDA0003218607060000121
Figure BDA0003218607060000131
注：采用方差分析方法进行统计分析，与阴性对照组比较，”a”:p<0.05；与阳性对照组比较,“b”:p<0.01。
同样，对其余实施例五至八和本发明的实施例其余配比进行相同实验，结果与实施例一的效果类似。
百香果，营养保健价值很高，富含多种蛋白质，氨基酸，维生素和矿质元素。每100克百香果富含蛋白质2.1g，碳水化合物含6.6g，膳食纤维5g，维生素C4mg，钙45mg，铁0.1mg，锌0.23mg，硒0.51μg等，可提供150kJ的能量。百香果中多糖含量2％，嫩果中含有黏性液质及***聚糖、牛乳聚糖、鼠李聚糖，其脆嫩多汁，口感润滑，香味独特，具有助消化、增强体力、保护肝脏、健胃整肠；秋葵含有特殊的具有药效的成分，强肾补虚，享有“植物伟哥”之美誉，是欧美运动员消除疲劳、快速恢复体力的首选蔬菜；富含维生素C，可预防心血管疾病发生，提高免疫力；由于含锌和硒等微量元素，可以增强人体防癌抗癌能力。
百香果具有以下功能：
1、提高免疫力，百香果中富含非常丰富维生素C，可以帮助我们提高免疫力。每一百克百香果中的维生素含量相当于八个橙子，维生素E的含量相当于十个苹果。
2、降低血压，百香果中富含非常丰富的维生素和膳食纤维，经常食用百香果可以帮助我们降脂。经常食用百香果，还可以帮助我们降低心脏的收缩压，因此高血压患者如果能在生活中多吃些百香果，可以起到很好的控制血压作用。
3、百果香含有丰富的维生素、超纤维和蛋白质等上百中对人体非常有益的元素，而且口感跟香味都美到极致，可以增强人体抵抗力，提高免疫力，尤其小孩和孕妇吃了更是非常有助于身体发育和生长。
4、百果香中含有的超纤维可以进入人体肠胃里面非常微笑的部位，进行深层次的清理和排毒，但是又不会对肠壁有任何损害的，有改善人体吸收功能、整肠健胃的功效。
百香果多糖在百香果物质中不仅是作为能量资源或结构材料，更重要的是它参与了生命科学中细胞的各种胺基酸活动，不仅具有多方面的生物胺基酸活性，而且具有增强免疫、降低血压、血脂、血糖和抗癌等作用。2种方法提取百香果多糖工艺研究，报道了利用微波法和纤维素酶解法提取百香果中百香果多糖的方法。微波辅助提取是将溶剂浸提与微波提取相结合，利用被加热物体本身作为发热体而进行加热，不靠热传导作用，可以使物料内部温度迅速提高，加热时间缩短，同时采用蒸馏水作为提取溶剂，具有廉价、无毒、易于回收再利用的特点，大大降低了生产成本，利用微波辅助提取的工艺，其百香果多糖的提取率可达到3.6％；而利用纤维素酶解的方式能够完整地分解细胞壁的结构，增加了溶剂的可溶性，有利于细胞间的活性物质溶出，同时还可以催化水解细胞壁多糖，增加多糖的浸提率，可以最大限度的避免多糖污染以及活性物质的丧失，其百香果多糖的提取率预期达到6.3％。但是上述方法对于百香果多糖的提取利用率依然存在提取率较低、提取的多糖组分生物活性不高的问题。
海洋微藻作为一类原始而十分重要的海洋生物资源，富含多不饱和脂肪酸、多糖、多肽等多种生物活性物质，现主要用于制备生物能源及水产养殖饲料，关于用于发酵的活性物质制备的报道更为少见。裂壶藻是一类富含多不饱和脂肪酸的微藻，常被用来生产高纯度二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid，DHA)的保健品、婴幼儿乳制品添加剂等。裂壶藻经提取多不饱和脂肪酸后所产生的藻渣其蛋白质含量可高达40％以上，然而目前这些藻渣大多被当成饲料或肥料处理，蛋白资源未得到充分开发与利用。将裂壶藻发酵蛋白产物应用于百香果多糖的发酵生产，用以提高百香果多糖产量等次生代谢产物产量的研究国内外尚未见报道。
扩张蛋白是近年在植物细胞壁中发现的一类新型蛋白，最先是从黄瓜下胚轴伸长区分离纯化得到，现已证明在燕麦胚芽鞘细胞壁、栝楼根尖细胞壁、西红柿、烟草、拟南芥、水稻、棉纤维、玉米、大豆等细胞壁中也有扩张蛋白的存在，被认为其普遍存在于各种双子叶和单子叶植物的细胞壁中，与促进其细胞生理生长，影响营养生长、形态发生、授粉受精、果实软化等生理生长过程有关。利用重组细胞壁实验研究证实了扩张蛋白与以前发现的细胞壁蛋白不同，具有诱导热钝化的离体细胞壁恢复伸展的功能，被推测能够打断细胞壁多聚物之间的氢键进而诱导酸依赖的细胞壁延展和压力松弛等生理活动，在植物生长过程中可能是生理调控和细胞壁松弛延伸的主要生理调节物质。
本发明经验证，食用后可达到抗疲劳和增强免疫力的效果，基于本发明中主要活性组分为百香果多糖，配合从植物体内提取出的活性成分以及益母草提取物，在进入肠道后，一方面可以在肠道内定殖，维持肠道微生物菌群的平衡；另一方面是百香果多糖与益母草提取物等共同作用于宿主的免疫***，诱发肠道免疫，并刺激胸腺，脾脏等免疫器官，促进巨噬细胞活性，通过增强B、T淋巴细胞对抗原刺激的反应性，发挥特异性免疫活性，从而增强机体的免疫功能，易于被人体吸收，条件98％低龄人群长期服用无不适症状。
需要声明的是，上述具体实施方式仅仅为本发明的较佳实施例及所运用技术原理，在本发明所公开的技术范围内，任何熟悉本技术领域的技术人员所容易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (8)

1.一种高活性的百香果多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)预处理：取新鲜百香果嫩果(未熟果)，过筛去除百香果表面的附着物，称重(湿重)并作为计量依据，将新鲜百香果切成丁状，破碎、过滤法去除百香果籽，向粉碎后的百香果中加入4-8倍重量的水，使用匀浆机或胶体磨将粉碎的百香果顶制作成匀浆状；
(2)一次提取：采用过滤的方法将步骤(1)获得的百香果匀浆进行过滤，分别收集滤饼和滤液，滤液为第一次提取液；
(3)二次提取：将步骤(2)获得的百香果滤饼重新悬浮在3-5倍重量的水中，调节溶液pH至3.0-6.0，过滤后收集滤液，为第二次提取液；
(4)酶解：合并两次提取的滤液，加入0.1-2.0％百香果重量的复合酶解物，加入原料重量0.05％-1％的扩张蛋白，调节pH为8-9，在30-50℃范围内搅拌6-10h；发明复合酶解物是由质量比为1-3:1-3:0.5-2的裂壶藻发酵产物、纤维素酶、菠萝蛋白酶组成。
(5)沉淀处理：将步骤(4)获得的酶解液调节pH至3.0-5.5并加入硫酸盐溶液，搅拌均匀，静置后使用离心法将滤液进行处理，收集滤液；
(6)干燥：将步骤(5)获得的滤液进行超滤处理，收集截留液，喷雾干燥，获得的粉末即为百香果多糖。
2.根据权利要求1所述的一种高活性的百香果多糖的制备方法，其特征在于，在所述步骤(4)中，所述裂壶藻发酵产物的制备方法为：取经过清洗的裂壶藻原料，设定酶解条件为料液比1∶10(m/V)、纤维素酶CellulaseACCF-4740添加量2％、温度55℃、pH4.5、反应时间1.3h，进行酶解，纤维素酶水解结束后，沸水浴灭酶15min，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻纤维素酶水解液；裂壶藻酶解液灭酶活后，调节pH值至6.2-6.6，高压蒸汽灭菌(121℃，20min)，然后接种体积分数1％的MRS培养基活化的戊糖片球菌液到裂壶藻酶解液，37℃恒温培养箱静置，进行发酵；发酵结束后，9000r/min离心，收集上清液得到裂壶藻发酵产物。
3.根据权利要求1所述的一种高活性的百香果多糖的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，酶解的原料是经过一次和二次提取后滤液的合并物。
4.根据权利要求1所述的一种高活性的百香果多糖的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述扩张蛋白的制备方法为：将莲子经0.05-0.15wt％氯化钠消毒4-6min，流水冲洗5-7h，然后，25-28℃暗培养4-6天；剪取幼苗下胚轴顶端3-4cm，置-20℃预冷0.5h，加预冷至4℃的匀浆缓冲液，匀浆后，用孔径70μm的尼龙网过滤，滤渣经匀浆缓冲液洗涤，然后将滤渣加入匀浆缓冲液中，室温静置1-3h，得静置液；向静置液中加入提取液，4℃下提取44-50h，过滤，按0.3-0.5g/mL的添加量向滤液中缓慢添加硫酸铵，添加硫酸铵过程中不断搅拌，防止硫酸铵局部过饱和，然后静置45-50h，4℃条件下25000g离心5-10min，沉淀用酸性缓冲液复溶，4℃下分子量3000Da的透析袋透析，透析液经20000g离心10min，取上清液即为制备的扩张蛋白溶液；上述匀浆缓冲液组分为：25mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，2mmol/LEDTA，0.1wt％TritonX-100，pH7.0；上述提取液组分为：15mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸，1.0mmol/L乙二胺四乙酸，1.5mmol/L焦亚硫酸钠，0.5mol/LNaCl，pH6.0；上述酸性缓冲液配制是：将2.05g醋酸钠溶于水中，用冰醋酸调节pH至4.0，水定容至1L。
5.根据权利要求1所述的一种高活性的百香果多糖的制备方法，其特征在于，在步骤(5)中，向溶液中加入的硫酸盐，可以是硫酸铁、硫酸锌或硫酸钠或混合使用。
6.一种高活性的百香果多糖的活性制品，其特征在于，包括以下重量份数计组分：益母草提取物13-18份，细辛提取物11-14份，百香果多糖25-37份，维生素A10-15份，维生素C15-20份，玉米淀粉10-20份。
7.根据权利要求6所述的一种高活性的百香果多糖的活性制品，其特征在于，所述活性制品的浓度为65％-78％。
8.根据权利要求6所述的一种高活性的百香果多糖的活性制品，其特征在于，各重量份数计组分如下：益母草提取物15份，细辛提取物12份，秋葵多糖29份，维生素A11份，维生素C17份，玉米淀粉17份。
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