CN113620974B - 大环类酪氨酸激酶抑制剂的晶型及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及一类大环类酪氨酸激酶抑制剂的晶型及其制备方法，具体涉及一种式(I)化合物的晶型及其制备方法，以及含有所述晶型的药物制剂、药物组合物，及其在制备治疗和/或预防由TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶受体所介导的疼痛、炎症、癌症、神经退行性疾病和自身免疫性疾病的药物中的应用。
Figure DDA0003053074160000011

Description

大环类酪氨酸激酶抑制剂的晶型及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种大环类酪氨酸激酶抑制剂的晶型、其制备方法及其药物组合物或制剂，其中，所述酪氨酸激酶为TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种。本发明还涉及其在制备治疗和/或预防由TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶受体所介导的疼痛、炎症、癌症、神经退行性疾病和自身免疫性疾病的药物中的应用。
背景技术
分子靶向治疗是近年癌症治疗上的重大突破。相对于手术、放疗及化疗等传统的治疗手段，分子靶向治疗以其高特异性和相对较低的毒副反应为癌症的治疗开辟了一个新天地，已逐渐成为晚期癌症患者的标准治疗方案。蛋白激酶作为靶向治疗的一大领域，是细胞生长、增殖和存活的关键调控剂，其遗传和表观遗传改变都可能导致癌症的发生。
间变性淋巴瘤激酶(ALK，Anaplastic Lymphoma Kinase)属于受体酪氨酸激酶的胰岛素受体超家族，在大脑发育以及特定的神经元中起重要作用。目前已在多种癌症中发现ALK突变，包括间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、非小细胞肺癌、炎症性肌纤维母细胞肿瘤、结肠直肠癌、乳腺癌和其他若干癌症。
原肌凝蛋白相关受体酪氨酸激酶(TRK)是神经滋养蛋白(NT)的高亲和力受体。TRK家族的成员高度表达于神经起源的细胞中。由于TRK在疼痛感觉以及肿瘤细胞生长和存活信号传导中起重要作用，因此TRK受体激酶的抑制剂作为疼痛和癌症的治疗剂可提供益处。
ROS1激酶也是目前备受关注的酪氨酸激酶受体。已报告ROS1激酶经历基因重排以在许多人类癌症中产生组成型活性融合蛋白，所述癌症包括胶质母细胞瘤、非小细胞肺癌、结肠直肠癌、乳腺癌等。
上述三种酪氨酸激酶存在较强的同源性。ROS1基因和ALK基因在酪氨酸激酶区域序列具有49％同源性，而在激酶催化区的ATP结合位点二者同源性高达77％，TRK A/B/C的激酶区域序列具有80％以上的同源性，TRK A基因、ROS1基因和ALK基因在酪氨酸激酶区域序列具有40％左右的同源性。已上市的ALK抑制剂克唑替尼(Crizotinib)同时有ROS1和TRK的抑制活性，且TRK抑制剂恩曲替尼(Entrectinib)也具有ALK和ROS1的抑制活性。
目前，已上市的ALK/ROS1抑制剂以及2017年申报上市的NTRK抑制剂在长期用药过程中均出现了耐药现象。因此，开发一种药效强、毒性低、具有选择性抑制活性且能够解决耐药性问题的抗肿瘤药物具有非常重要的临床价值和意义。同时，晶型的研究在药物研发过程中发挥着重要的作用，同一药物的不同晶型在溶解度、稳定性、生物利用度等方面存在着显著的差异，为了更好地控制药物的质量，满足制剂、生产、运输、存储等情况的要求，我们对化合物的晶型进行了研究，以期发现具有良好性质的晶型。
发明内容
本申请提供了一种酪氨酸激酶抑制剂，即(22R,6R)-35-氟-6-甲基-13H-4-氧杂-7-氮杂-1(5,3)-咪唑并[4,5-b]吡啶-3(3,2)-吡啶-2(1,2)-吡咯烷基环辛烷-8-酮(式(I)化合物)，该化合物对TRK、ALK和ROS1中的一种或多种激酶均具有较好的抑制活性，且在生物体内具有较高的暴露量和生物利用度，在临床疗效或适应症、安全性等方面均有改善。
Figure BDA0003053074140000021
在另一方面，本发明还涉及式(I)化合物(22R,6R)-35-氟-6-甲基-13H-4-氧杂-7-氮杂-1(5,3)-咪唑并[4,5-b]吡啶-3(3,2)-吡啶-2(1,2)-吡咯烷基环辛烷-8-酮的晶型II。
本发明还涉及式(I)化合物的晶型II的制备方法，包含晶型II的药物制剂，包含晶型II的药物组合物，以及式(I)化合物的晶型II、包含晶型II的药物制剂、包含晶型II的药物组合物在制备治疗和/或预防由TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶受体所介导的疼痛、炎症、癌症、神经退行性疾病和自身免疫性疾病的药物中的应用。
本发明提供了一种式(I)化合物的晶型II，在使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱中，所述的晶型II在10.07±0.2°、11.01±0.2°、12.54±0.2°、14.13±0.2°、15.96±0.2°、16.70±0.2°、和21.60±0.2°处有特征峰。
在某些实施方案中，在使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱中，所述晶型II在包含上述特征峰的基础上，还在8.86±0.2°、13.43±0.2°、15.06±0.2°、18.66±0.2°、19.10±0.2°、19.71±0.2°、20.42±0.2°、和22.95±0.2°处有特征峰。
在某些实施方案中，在使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图谱中，所述的晶型II在8.86±0.2°、10.07±0.2°、11.01±0.2°、12.54±0.2°、13.43±0.2°、14.13±0.2°、15.06±0.2°、15.96±0.2°、16.70±0.2°、18.66±0.2°、19.10±0.2°、19.71±0.2°、20.42±0.2°、21.60±0.2°、和22.95±0.2°处有特征峰。
在某些实施方案中，所述晶型II具有与图1实质相同的X-射线粉末衍射图。
在某些实施方案中，DSC热图谱显示，所述晶型II在约155℃-170℃处存在一个吸热转变峰。
在某些实施方案中，DSC热图谱显示，所述晶型II在160℃-165℃处存在吸热转变峰。
在某些实施方案中，DSC热图谱显示，所述晶型II的最大吸热时转变温度(相变温度)，即吸热峰峰值处的温度，为162.25±3℃。
在某些实施方案中，所述晶型II具有与图2实质相同的差示扫描量热分析图谱。
在某些实施方案中，TGA图谱显示，所述晶型II在0℃-250℃处无明显失重现象。
在某些实施方案中，所述晶型II具有与图3实质相同的TGA曲线图谱。
在另一个方面，本发明还提供了式(I)化合物的晶型II的制备方法，其步骤包括将式(I)化合物与有机溶剂混合，加热，至化合物完全溶解，滴加不良溶剂，析出固体，经过滤、干燥，得到晶型II。
在某些实施方案中，式(I)化合物的晶型II的制备方法中还包括降温的操作。
在某些实施方案中，降温的操作在滴加不良溶剂的操作之前进行。
在某些实施方案中，降温的操作在滴加不良溶剂的操作之后进行。
在某些实施方案中，降温的操作与滴加不良溶剂的操作同时进行。
在某些实施方案中，本发明提供的式(I)化合物的晶型II的制备方法，其步骤包括将式(I)化合物与有机溶剂混合，搅拌加热至30-80℃，直至化合物完全溶解，降温至0-30℃，滴加不良溶剂，恒温搅拌，析出固体，经过滤、干燥得到晶型II。
在某些实施方案中，本发明提供的式(I)化合物的晶型II的制备方法，其步骤包括将式(I)化合物与有机溶剂混合，搅拌加热至30-80℃，直至化合物完全溶解，滴加不良溶剂，降温至0-30℃，恒温搅拌，析出固体，经过滤、干燥得到晶型II。
在某些实施方案中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，加热至40-70℃，例如加热至40-45℃，例如加热至45-50℃，例如加热至50-55℃，例如加热至55-60℃，例如加热至60-65℃，例如加热至65-70℃，例如加热至样品溶解并变澄清。
在某些实施方案中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，降温至0-30℃，例如降温至0-10℃，例如降温至10-15℃，例如降温至10-20℃，例如降温至15-20℃，例如降温至20-30℃。降温过程中可以任选的在不同温度进行多次降温，其降温方式包括但不限于自然冷却降温、冰浴降温、油浴降温、使用制冷设备降温等，本发明中优选自然冷却降温、油浴降温和使用制冷设备降温。
本发明中，“滴加不良溶剂时的温度”指的是滴加不良溶剂时反应体系的温度，而不是指滴加的该不良溶剂的溶剂温度。
在某些实施方案中，降至析出晶体后滴加不良溶剂。在一些实施方案中，降温后但未析出晶体时开始滴加不良溶剂。在一些实施方案中，降温操作先于滴加不良溶剂操作而完成。在一些实施方案中，降温操作晚于滴加不良溶剂操作而完成。在一些实施方案中，降温操作和滴加不良溶剂操作同时完成。
在某些实施方案中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，滴加不良溶剂时的温度选自0-30℃，例如0-10℃，例如10-15℃，例如15-20℃，例如20-30℃。
在某些实施方案中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，降温的操作在滴加不良溶剂的操作之前进行；滴加不良溶剂时，反应体系的温度例如为0-30℃，例如0-10℃，例如10-15℃，例如10-20℃，例如15-20℃，例如20-30℃。
在某些实施方案中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，滴加不良溶剂时的温度选自10-70℃，例如20-60℃，例如55-65℃，例如45-55℃，例如35-45℃，例如20-30℃。
在一些实施方案中，滴加不良溶剂操作完成后开始降温。在一些实施方案中，滴加不良溶剂开始后但未完成前开始降温。在一些实施方案中，降温操作先于滴加不良溶剂操作而完成。在一些实施方案中，降温操作晚于滴加不良溶剂操作而完成。在一些实施方案中，降温操作和滴加不良溶剂操作同时完成。
在某些实施方案中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，降温的操作在滴加不良溶剂的操作之后进行；滴加不良溶剂时的温度选自10-70℃，例如20-60℃，例如55-65℃，例如45-55℃，例如35-45℃，例如20-30℃。
在某些实施方案中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，所述的有机溶剂选自酮类溶剂和酯类溶剂中的一种，或者两种或两种以上溶剂之间按照特定比例组合形成的混合溶剂。在某些实施方案中，所述的酮类溶剂选自脂肪酮类及环酮类溶剂。在某些实施方案中，所述的脂肪酮类溶剂优选为甲乙酮、甲基异丙酮、丙酮、甲基丁酮或甲基异丁酮，更优选丙酮，所述的环酮类溶剂优选为环丙酮、环己酮、异佛尔酮或N-甲基吡咯烷酮，更优选为N-甲基吡咯烷酮。在某些实施方案中，所述的酯类溶剂选自脂肪酯类及芳香酯类溶剂。在某些实施方案中，所述脂肪酯类溶剂优选为甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯或丙酸异丙酯，进一步优选为甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯或乙酸丙酯，更优选为乙酸乙酯，所述芳香酯类溶剂如邻苯二甲酸二甲酯。
以上所指的酮类溶剂和酯类溶剂并不局限于所列出的具体实例，凡是可用于制备得到式(I)化合物的晶型II的属于上述分类中的溶剂均在本发明的保护范围之内。
所述的“混合溶剂”是指上述有机溶剂中同一种类或不同种类的溶剂按照一定比例混合形成的溶剂。同一种类溶剂形成的混合溶剂，包括但不限于以下具体实例：甲酸甲酯/乙酸乙酯、乙酸甲酯/乙酸乙酯、乙酸异丁酯/乙酸乙酯或甲乙酮/丙酮等。所述的不同种类溶剂形成的混合溶剂，包括但不限于酯类/酮类。
在某些实施方案中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，所述的有机溶剂选自丙酮和乙酸乙酯中的一种或两种。
在某些实施方案中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，所述的不良溶剂选自水和正庚烷。
在某些实施方式中，所述的式(I)化合物的晶型II的制备方法中，所述的干燥的方式包括但不限于室温下自然晾干、红外灯干燥、烘箱烘干和干燥器干燥，优选在真空条件下干燥；优选的干燥温度为30℃-100℃，优选30℃-80℃，优选35℃-70℃，优选40℃-65℃，优选45℃-55℃；干燥过程中可以任选的在不同温度进行多次干燥。
在另一方面，本发明还提供了一种药物制剂或药物组合物，其含有前述式(I)化合物的晶型II，及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。
本发明所述式(I)化合物的晶型II可以单独给药，也可与一种或多种药物联用以治疗及/或预防由TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶所介导的疾病和相关病症。
因此，在某些实施方案中，所述的药物组合物还含有一种或多种第二治疗活性剂。在某些实施方案中，所述第二治疗活性剂选自治疗疼痛的药物、治疗癌症的药物、治疗炎症的药物、治疗神经退行性疾病的药物和治疗自身免疫性疾病的药物。
在某些实施方案中，所述治疗疼痛的药物包括但不限于Nav1.7通道调节剂、阿片类镇痛药、非甾体抗炎药、镇静剂、选择性/非选择性环氧酶抑制剂、抗癫痫药、抗抑郁药、局部***、5-HT受体阻断药、5-HT受体激动剂、麦角类生物碱、β-受体阻断药、M受体阻断药、硝酸酯类、维生素K等。
在某些实施方案中，所述治疗癌症的药物包括但不限于：有丝***抑制剂、烷化剂、抗代谢物、反义DNA或RNA、抗肿瘤抗生素、生长因子抑制剂、信号传导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、类维生素A受体调控剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物应答调节剂、激素类药物、血管再生抑制剂、细胞生长抑制剂、靶向抗体、HMG-CoA还原酶抑制剂和异戊二烯基蛋白质转移酶抑制剂等。
在某些实施方案中，所述治疗炎症的药物包括但不限于：甾体类抗炎药物和非甾体类抗炎药物。
在某些实施方案中，所述治疗神经退行性疾病的药物包括但不限于：拟多巴胺类药物、多巴胺受体激动剂、影响多巴胺代谢药物、NMDA受体拮抗剂、腺苷A2A受体抑制剂、影响DA释放和再摄取药、中枢抗胆碱药、胆碱酯酶抑制剂、5-HT激动剂、α2肾上腺素能受体拮抗剂、抗抑郁药、胆碱受体激动剂、β/γ分泌酶抑制剂、H3受体拮抗剂或抗氧化药物等。
在某些实施方案中，所述治疗自身免疫性疾病的药物包括但不限于：改善病情的抗风湿药、非甾体抗炎药、糖皮质激素药、TNF拮抗剂、环磷酰胺、霉酚酸酯、环孢菌素等。
在某些实施方案中，待组合的各成分(例如，本发明的式(I)化合物的晶型II与第二治疗活性剂)可同时给药或依次顺序地分开用药。例如，可以在施用本发明式(I)化合物的晶型II之前、同时或之后，施用第二治疗活性剂。此外，待组合的各成分还可以以同一制剂形式或以分开的不同制剂的形式联合给药。
在某些实施方案中，所述药物组合物可以制成临床上或药学上可接受的任一剂型，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、栓剂、吸入剂或喷雾剂等。
在本发明的某些实施方案中，上述药物制剂或药物组合物可以以口服、肠胃外、直肠或经肺给药等方式施用于需要这种治疗的患者或受试者。用于口服给药时，所述药物组合物可制成口服制剂，例如可以制成常规的口服固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂或颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂或糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂或润滑剂等。用于肠胃外给药时，上述药物制剂也可制成注射剂、包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配置注射剂时，可以不加入附加剂，也可以根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，所述药物组合物可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物组合物可制成吸入剂或喷雾剂等。
本发明的药物组合物或药物制剂中可用的药学上可接受的载体和/或赋形剂可以是药物制剂领域中任何常规的药学上可接受的载体和/或赋形剂，特定载体和/或赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物或药物制剂的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。
在另一方面，本发明还涉及前述式(I)化合物的晶型II在制备用于治疗和/或预防由酪氨酸激酶介导的疾病和相关病症的药物中的用途，所述药物可与一种或多种其他药物联用以预防或治疗由酪氨酸激酶介导的疾病和相关病症。所述由酪氨酸激酶介导的疾病和相关病症优选由TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶所介导的疾病和相关病症。所述TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶所介导的疾病和相关病症包括但不限于疼痛、癌症、炎症、神经退行性疾病、自身免疫性疾病、和感染性疾病等。
在某些实施方案中，所述疼痛可以是任一来源或病因的疼痛，包括但不限于炎性疼痛、内脏疼痛、癌症引起的疼痛、化疗疼痛、创伤疼痛、手术及手术后疼痛、分娩疼痛、急性疼痛、慢性疼痛、顽固性疼痛、躯体疼痛、伤害性疼痛、神经性疼痛、血运源性疼痛、免疫源性疼痛、内分泌源性疼痛、代谢性病变引起的疼痛、心源性疼痛、头痛、幻肢痛和牙痛中的一种或多种。
在某些实施方案中，所述癌症包括但不限于肺癌、结肠癌、***癌、乳腺癌、肝癌、淋巴癌、甲状腺癌、多发性骨髓瘤、软组织肉瘤、卵巢癌、***、输卵管癌、肾细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤、骨癌、基底细胞癌、腹膜癌、皮肤纤维瘤、胰腺癌、食管癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、炎症性肌纤维母细胞瘤和间变性大细胞淋巴瘤中的一种或多种，所述肺癌包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌。
在某些实施方案中，所述炎症包括但不限于动脉粥样硬化、过敏和因感染或损伤而引起的炎症。
在某些实施方案中，所述神经退行性疾病包括但不限于阿尔茨海默症、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症和亨廷顿氏病中的一种或多种。
在某些实施方案中，所述自身免疫性疾病包括但不限于类风湿性关节炎、休格伦氏综合征、I型糖尿病和红斑狼疮中的一种或多种。
在某些实施方案中，所述感染性疾病如锥形虫病等。
在另一方面，本发明还提供了一种治疗和/或预防由TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶所介导的疾病和相关病症的方法，该方法包括向有需要的受试者施用有效量的前述式(I)化合物的晶型II、前述制剂或药物组合；所述由TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶所介导的疾病和相关病症如上定义。
在本申请中除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。同时，为了更好地理解本发明，下面提供部分术语的定义和解释。
在本申请中，各晶型X射线粉末衍射图谱中吸收峰的位置可以在上述发明的具体数值±0.2°的范围内，例如在±0.1°的范围内，差示扫描量热法测定的吸热转变温度可以在上述具体数值±3.0℃(例如±1.0℃或±2.0℃)的范围内。
应当理解用不同类型设备或用不同的测试条件可能给出稍微不同的X-射线粉末衍射(简称XRPD或XRD)的图谱和峰值。不同晶型的图谱、峰值和各衍射峰的相对强度将受化合物纯度、样品的前处理、扫描速度、粒径和测试设备的校验和维修的影响。所提供的数值不能作为绝对值。
应当理解用不同类型设备或用不同的测试条件可能给出稍微不同的吸热转变温度读数。该数值将受化合物纯度、样品重量、加热速度、粒径和测试设备的校验和维修的影响。所提供的数值不能作为绝对值。
本公开还采用热失重分析(TGA)对晶型发生分解或升华、蒸发的程度(失去重量)与温度的关系进行了分析。TGA是指以一定速度升温，测定供试品重量随温度变化的方法。应当理解同种晶型受样品纯度、粒径、不同类型设备、不同的测试方法等的影响，所得到的数值存在一定误差。晶型发生分解或升华、蒸发时的温度可以在上述公开的具体数值±3.0℃的范围内，例如±2.0℃的范围内。
如本文中所使用的，术语“室温”、“常温”是指室内环境温度，通常指20-30℃，例如20-25℃。
如本文中所使用的，术语“受试者”是指健康个体、患有或者疑似患有某种疾病的个体，可以为人或者非人哺乳动物，优选为人。通常包括健康志愿者、患者、检测对象以及治疗对象等。
如本文中使用的，术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，治疗有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量；预防有效量是指，足以预防，阻止，或延迟疾病的发生的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度，患者自己的免疫***的总体状态，患者的一般情况例如年龄、体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。
对受试者给予的药物的量取决于所述疾病或病况的类型和严重程度以及受试者的特征，如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受度，还取决于制剂的类型和药物的给药方式，以及给药周期或时间间隔等因素。本领域技术人员能够根据这些因素和其它因素来确定适当的剂量。
本发明式(I)化合物的晶型，尤其是晶型II的主要优点包括下述的一种或多种：
(1)制备方法操作简便，适合工业化生产；
(2)具有良好的性状，便于生产、检测、制剂制备、运输和储藏；
(3)纯度高、残留溶剂少，稳定性好，质量易控；
(4)对TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶具有良好的抑制活性，在体内具有良好暴露量和/或生物利用度；
(5)具有良好的体内外药效，可用于治疗和/或预防由TRK、ALK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶症所介导的疾病和相关病症。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1是式(I)化合物的晶型II的X-射线粉末衍射图谱，纵坐标表示衍射强度(intensity)，横坐标表示衍射角度(2θ)。
图2是式(I)化合物的晶型II的DSC分析图，纵坐标表示热流(W/g)，横坐标表示温度T(℃)。
图3是式(I)化合物的晶型II的TGA分析图，纵坐标表示重量(％)，横坐标表示温度T(℃)。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：(22R,6R)-35-氟-6-甲基-13H-4-氧杂-7-氮杂-1(5,3)-咪唑并[4,5-b]吡啶-3(3,2)-吡啶-2(1,2)-吡咯烷基环辛烷-8-酮的制备(式(I)化合物)
Figure BDA0003053074140000101
1.(R)-6-(2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)-3-硝基吡啶-2-胺的制备
Figure BDA0003053074140000102
将(R)-5-氟-2-甲氧基-3-(吡咯烷-2-基)吡啶(1.0g，5.1mmol)和6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(886mg，5.1mmol)加入到乙腈(30mL)中，加入二异丙基乙胺(1.98g，15.3mmol)，加热至70℃，反应16小时。将反应液旋干，加入水(30mL)，过滤。固体用乙酸乙酯(30mL)洗涤，真空干燥，得目标产物(1.65g，产率97.0％)。
LC-MS(M/e)：334.1(M+H+)
2.(R)-6-(2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡啶-2,3-二胺的制备
Figure BDA0003053074140000103
将(R)-6-(2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)-3-硝基吡啶-2-胺(1.65g，4.94mmol)溶于甲醇(20mL)中，加入雷尼镍(1g)，20℃氢气环境下反应16小时。将反应液过滤，旋干，剩余物直接用于下一步。
LC-MS(M/e)：304.1(M+H+)
3.(R)-5-(2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶的制备
Figure BDA0003053074140000104
将(R)-6-(2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)吡啶-2,3-二胺(上步粗品，约3.0mmol)溶于甲苯(30mL)中，加入原甲酸三甲酯(5.2g，49mmol)和对甲苯磺酸(170mg，0.99mmol)，加热至110℃，反应5小时。将反应液旋干，加入碳酸氢钠溶液(100mL)和乙酸乙酯(100mL)，分液，水相用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机相，旋干，柱层析(乙酸乙酯)纯化，得目标产物(1.5g，产率96.8％)。
LC-MS(M/e)：314.1(M+H+)
4.(R)-3-(1-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)吡咯烷-2-基)-5-氟吡啶-2-醇的制备
Figure BDA0003053074140000111
将(R)-5-(2-(5-氟-2-甲氧基吡啶-3-基)吡咯烷-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(1.5g，4.79mmol)加入氯化氢乙醇溶液(30mL)中，加热至90℃反应16小时。将反应液旋干，加入三乙胺(5mL)调节pH至碱性，旋干，柱层析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得目标产物(1.4g，产率97.9％)。
LC-MS(M/e)：300.1(M+H+)
5.((R)-1-((3-((R)-1-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)吡咯烷-2-基)-5-氟吡啶-2-基)氧基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003053074140000112
将(R)-3-(1-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)吡咯烷-2-基)-5-氟吡啶-2-醇(700mg，2.34mmol)、(R)-(1-羟基丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(410mg，2.34mmol)和三正丁基膦(945mg，4.68mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，氮气保护下加入偶氮二甲酰基二哌啶(1.18g，4.68mmol)，30℃反应2小时。将反应液浓缩，C18柱层析纯化，得目标产物(500mg，产率46.7％)。
LC-MS(M/e)：457.0(M+H+)
6.(R)-1-((3-((R)-1-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)吡咯烷-2-基)-5-氟吡啶-2-基)氧基)丙-2-胺的制备
Figure BDA0003053074140000121
将((R)-1-((3-((R)-1-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)吡咯烷-2-基)-5-氟吡啶-2-基)氧基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.1mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入三氟乙酸(20mL)，20℃反应16小时。将反应液浓缩，用三乙胺调节pH至碱性，旋干，C18柱层析纯化，得目标产物粗品(400mg)。
LC-MS(M/e)：357.0(M+H+)
7.(22R,6R)-35-氟-6-甲基-13H-4-氧杂-7-氮杂-1(5,3)-咪唑并[4,5-b]吡啶-3(3,2)-吡啶-2(1,2)-吡咯烷基环辛烷-8-酮的制备
Figure BDA0003053074140000122
将(R)-1-((3-((R)-1-(3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基)吡咯烷-2-基)-5-氟吡啶-2-基)氧基)丙-2-胺(上步粗品，400mg，约1.1mmol)溶于二甲苯(50mL)，加入羰基二咪唑(535mg，3.3mmol)，升温至130℃反应2小时。将反应液浓缩，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)纯化，得目标产物粗品(300mg)，进一步经HPLC高压反相制备层析(乙腈:水＝10％-70％)分离，得标题化合物(100mg，23.8％)。
分子式：C19H19FN6O2；分子量：382.4；LC-MS(M/e)：383.2(M+H+)。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ10.50(m,1H),8.36(s,1H),7.86-7.90(m,2H),7.31-7.35(m,1H),6.51(d,J＝8.8Hz,1H),5.63-5.60(m,1H),5.13-5.17(m,1H),4.39-4.42(m,1H),4.15-4.19(m,1H),3.92-3.98(m,1H),3.65-3.60(m,1H),2.50-2.59(m,2H),2.40-2.50(m,1H),1.95-2.01(m,1H),1.57(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例2：式(I)化合物晶型II的制备
制备方法一：
将式(I)化合物10.00g与12.5g丙酮混合，搅拌升温至50-55℃溶解澄清，降温析晶，析出固体后继续降温至10℃，在10℃滴加入60mL水，滴加完毕，恒温搅拌0.5h，抽滤，45-50℃真空干燥，得到产品，送XRD检测为式(I)化合物晶型II。
制备方法二：
将式(I)化合物50.00g与62.50g丙酮混合，搅拌升温至50-55℃溶解澄清，降温至10-15℃析晶，在10-15℃滴加正庚烷375mL，恒温搅拌，抽滤，50℃真空干燥，得到产品，送XRD检测为式(I)化合物晶型II。
制备方法三：
3-1：将式(I)化合物600.00g与900mL乙酸乙酯混合，升温至60-70℃溶解澄清，降温至20℃，于20±5℃下滴加6L正庚烷，恒温搅拌，抽滤，50℃真空干燥，得到产品，送XRD检测为式(I)化合物晶型II。
3-2：将式(I)化合物1.45kg与2.2L乙酸乙酯混合，升温至60-70℃溶解澄清，控温60-65℃，滴加正庚烷(15L)，降温至10-20℃析晶，恒温搅拌，抽滤，45-50℃真空干燥，得到产品，送XRD检测为式(I)化合物晶型II。
XRPD测试
X射线反射参数：Cu，Kα；入射狭缝：0.6mm；发散狭缝：1mm；扫描模式：连续；扫描范围：3.0-45.0度；取样步长：0.02度；每步扫描时间：0.3s。
晶型II的X-射线粉末衍射图示于图1中，该晶型在以下衍射2θ角度处有峰：8.86±0.2°、10.07±0.2°、11.01±0.2°、12.54±0.2°、13.43±0.2°、14.13±0.2°、15.06±0.2°、15.96±0.2°、16.70±0.2°、18.66±0.2°、19.10±0.2°、19.71±0.2°、20.42±0.2°、21.60±0.2°、22.95±0.2°。
差示扫描量热测试
通过差示扫描量热法(DSC)研究式(I)化合物的晶型II的固态热性能。DSC测试条件：用氮气以50mL/min吹扫，在100℃至200℃之间以3℃/min加热速率收集数据，在吸热峰朝下的情况下绘图。晶型II的DSC曲线显示于图2中。DSC热图谱显示，所述晶型II在160℃～165℃处存在吸热转变峰，其最大吸热时转变温度(相变温度)，即吸热峰峰值处的温度，为162.25±3℃。
热重分析
TGA测试条件：用氮气以60mL/min吹扫，在室温至350℃之间以10℃/min加热速率收集数据。晶型II的TGA曲线显示于图3中。TGA图谱显示，所述晶型II在0℃-250℃处无明显失重现象。
性质测试实验例：
1.稳定性试验
供试品：式(I)化合物的晶型II
实验方法：分别称取供试品适量，于如下条件放置后，对供试品的性状、水分、含量、有关物质、XRD、DSC进行考察，放置条件如下：
在60℃±2℃条件下、或者25℃RH92.5％条件下放置10天，开/闭口，于第10天取样检测(开口包装为扁形称量瓶，闭口包装为低密度聚乙烯袋和低密度聚乙烯袋+复合膜袋)；
在40℃RH75％条件下放置1个月，开/闭口，于1个月取样检测(开口包装为扁形称量瓶，闭口包装为低密度聚乙烯袋和低密度聚乙烯袋+复合膜袋)。
水分：按照《中国药典》2015年版四部通则0832水分测定法第一法2库仑滴定法。
XRD：按照《中国药典》2015年版四部通则0451X射线衍射法测定。
DSC：以3℃/min的升温速率，从100℃升温至200℃测定。
有关物质、含量：参照中国药典2015年版四部通则0512高效液相色谱法测定。
实验结果：
表1晶型II稳定性考察结果
Figure BDA0003053074140000141
实验结果：
在60℃开/闭口放置10天条件下、或者25℃RH92.5％开/闭口放置10天条件下、或者40℃RH75％开/闭口放置1个月条件下，其性状、总有关、含量、水分、XRD、DSC等均未发生变化，晶型稳定性良好。
2.晶型II的引湿性试验
供试品：式(I)化合物的晶型II；
实验方法：依据《中国药典》2015年版四部通则9103药物引湿性试验指导原则测定：将供试品在25℃，RH80％条件下放置24h(样品瓶预先在该条件下放置24h)，结果如表2所示：
表2引湿性考察结果
Figure BDA0003053074140000151
实验结果：本品无或几乎无引湿性。
活性测试
以下提供本发明化合物的示例性活性测试，以显示本发明化合物的有利活性和有益技术效果。但是应当理解，下述实验方案仅仅是对本发明内容的示例，而不是对本发明范围的限制。
实验例1.本发明化合物的体外细胞学抑制活性
实验材料
测试化合物：式(I)化合物，按实施例1方法制得。
实验中所用细胞株含义如下：
Ba/F3 LMNA-NTRK1-G595R细胞系：
Ba/F3细胞转染了LMNA-NTRK1 G595R的稳定表达细胞株；
Ba/F3 ETV6-NTRK3-G623R细胞系：
Ba/F3细胞转染了ETV6-NTRK3-G623R的稳定表达细胞株。
实验方法(CelltiterGlo assay)
1.细胞培养和接种
所有细胞均为悬浮细胞，培养基均为RPMI-1640+10％FBS，细胞在对数生长期进行试验。
收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。调整到合适浓度，分别添加90μL细胞悬液至96孔板中。
表3细胞接种数目
Figure BDA0003053074140000161
2.配制测试化合物
2.1配制测试化合物DMSO储备液，浓度见表4。
表4测试化合物的储备液浓度(mM)
Figure BDA0003053074140000162
2.2配制测试化合物工作储备液
用DMSO将测试化合物储备液从10mM稀释至1mM，然后用DMSO 3倍连续梯度稀释，共9个浓度。分别取2μL DMSO梯度稀释的化合物溶液加到198μL培养液中，得到测试化合物工作储备液(化合物浓度为终浓度的10倍，DMSO浓度为1％，最高浓度为10μM)。
最大值为DMSO溶剂对照，空白孔只加培养基，不接种细胞。
2.3化合物处理
在接种有细胞的96孔板中每孔加入10μL化合物工作储备液(10倍稀释，DMSO终浓度为0.1％)。
测试化合物的终浓度为：1000nM，333.33nM，111.11nM，37.04nM，12.35nM，4.12nM，1.37nM，0.46nM，0.15nM。
5％CO2细胞培养箱中培养72小时。
3.检测
融化CTG试剂并平衡细胞板至室温30分钟，每孔加入60μL试剂(Celltiter Gloassay kit)，振荡器震摇2min混匀(避光)，室温孵育10分钟(避光)。多功能酶标仪读取光信号值。
4.数据处理
1)抑制率(％)＝(DMSO溶剂对照孔读数–测试物孔读数)/(DMSO溶剂对照孔读数–空白孔读数)×100％；
2)输入GraphPad Prism 5.0作图，得到曲线及IC50。
实验结果及结论
表5本发明化合物的体外细胞学活性(IC50，nM)
Figure BDA0003053074140000171
由表5可知，本发明化合物可以有效地抑制Ba/F3 LMNA-NTRK1-G595R、Ba/F3ETV6-NTRK3-G623R等细胞的增殖，表明本发明化合物具有治疗由NTRK基因突变引起的耐药性癌性疾病的临床应用潜力。
实验例2本发明化合物的体外细胞学抑制活性
实验材料
测试化合物：式(I)化合物，按实施例1方法制得。
实验中所用细胞株含义如下：
Ba/F3 SLC34A2/ROS1-G2032R细胞系：
Ba/F3细胞转染了SLC34A2/ROS1-G2032R的稳定表达细胞株。
实验方法(Celltiter-Glo assay)
1.细胞培养和接种
所有细胞均为悬浮细胞，培养基均为RPMI-1640+10％FBS，细胞在对数生长期进行试验。
收获处于对数生长期的细胞并采用血小板计数器进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保细胞活力在90％以上。调整到合适浓度，分别添加90μL细胞悬液至96孔板中。
表6细胞接种数目
Figure BDA0003053074140000172
2.配制测试化合物
2.1配制测试化合物DMSO储备液，浓度见表7。
表7测试化合物的储备液浓度(mM)
Figure BDA0003053074140000173
2.2配制测试化合物工作储备液
用DMSO将测试化合物储备液从10mM稀释至1mM，然后用DMSO 3.16倍连续梯度稀释，共9个浓度。分别取2μL DMSO梯度稀释的化合物溶液加到198μL培养液中，得到测试化合物工作储备液(化合物浓度为终浓度的10倍，DMSO浓度为1％，最高浓度为10μM)。
最大值为DMSO溶剂对照，空白孔只加培养基，不接种细胞。
2.3化合物处理
在接种有细胞的96孔板中每孔加入10μL化合物工作储备液(10倍稀释，DMSO终浓度为0.1％)。
测试化合物的终浓度为：1000nM，316nM，100nM，31.6nM，10nM，3.16nM，1nM，0.316nM，0.1nM。
5％CO2细胞培养箱中培养72小时。
3.检测
融化CTG试剂并平衡细胞板至室温30分钟，每孔加入100μL试剂(Celltiter-Gloassay kit)，振荡器震摇5min混匀(避光)，室温孵育20分钟(避光)。多功能酶标仪读取光信号值。
4.数据处理
1)细胞存活率(％)＝(测试物孔读数–空白孔读数)/(DMSO溶剂对照孔读数–空白孔读数)×100％；
2)输入GraphPad Prism 5.0作图，得到曲线及IC50。
实验结果及结论
表8本发明化合物的体外细胞学活性(IC50，nM)
Figure BDA0003053074140000181
由表8可知，本发明化合物可以有效地抑制Ba/F3 SLC34A2/ROS1-G2032R细胞的增殖，表明本发明化合物具有治疗由ROS基因突变引起的耐药性癌性疾病的临床应用潜力。
实验例3：本发明化合物在BaF3-LMNA-NTRK1-G595R稳转细胞株皮下异种移植模型上的药效研究实验
测试品：式(I)化合物，按实施例1方法制得。
阳性对照药：化合物LOXO-195，购买或按照现有技术WO2011146336公开的方法制备，其结构如下所示：
Figure BDA0003053074140000191
实验方法
3.1细胞接种
RPMI1640无血清培养基重悬的BaF3 LMNA-NTRK1-G595R稳转细胞株，以1×106cell/只(0.1ml/只)，接种于小鼠(NOD-SCID)的右侧肩胛部皮下。
3.2分组给药
当平均肿瘤体积为500mm3左右时，随机分为Vehicle组、式(I)化合物(10/5/3/1mg/kg，bid)组、LOXO-195组(30/10/3mg/kg，bid)。
详细的给药方法、给药剂量和给药途径见表9。
表9-1 BaF3 LMNA-NTRK1-G595R模型药效实验1的给药途径、剂量及方案
Figure BDA0003053074140000192
表9-2 BaF3 LMNA-NTRK1-G595R模型药效实验2的给药途径、剂量及方案
Figure BDA0003053074140000193
注：n：动物只数；分组当天即给药。
3.3实验评价指标
1)肿瘤生长抑制率TGI(％)
肿瘤生长抑制率TGI(％)＝(1－T/C)x 100％
2)治疗组/对照组肿瘤体积比T/C(％)
T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％
*RTV＝Vt/V0，其中Vt为分组后的第t天的肿瘤体积，V0为分组当天的肿瘤体积；TRTV：给药组平均相对肿瘤体积；CRTV：溶媒对照组平均相对肿瘤体积。
3)疗效评价标准：T/C(％)＞40％为无效，T/C(％)≤40％为有效；肿瘤生长抑制率≥60％为有效。
3.4实验结果
表10-1.药效实验1对BaF3-LMNA-NTRK1-G595R稳转细胞株异种移植瘤的抑制作用
Figure BDA0003053074140000201
表10-2.药效实验2对BaF3-LMNA-NTRK1-G595R稳转细胞株异种移植瘤的抑制作用
Figure BDA0003053074140000202
实验结论
实验数据表明，口服本发明化合物能显著抑制含NTRK融合基因的细胞系BaF3LMNA-NTRK1-G595R肿瘤药效模型，即本发明化合物对NTRK融合基因突变的肿瘤表现出良好的肿瘤抑制作用，具有很好的临床应用前景。
除本文中描述的那些外，根据前述描述，本发明的各种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。

Claims (22)

1.式(I)化合物的晶型II，在使用Cu-Kα辐射，以2θ角度表示X-射线粉末衍射图谱中，在10.07±0.2°、11.01±0.2°、12.54±0.2°、14.13±0.2°、15.96±0.2°、16.70±0.2°、18.66±0.2°、20.42±0.2°和21.60±0.2°处有特征峰，
Figure FDA0003844558070000011
2.如权利要求1所述的晶型II，其X-射线粉末衍射图谱还在8.86±0.2°、13.43±0.2°、15.06±0.2°、19.10±0.2°、19.71±0.2°和22.95±0.2°处有特征峰。
3.如权利要求1或2所述的晶型II，其X-射线粉末衍射图谱基本如图1所示。
4.如权利要求1所述的晶型II，DSC热图谱显示，其在155℃-170℃处存在一个吸热转变峰。
5.如权利要求1所述的晶型II，DSC热图谱显示，其在160℃-165℃处存在吸热转变峰。
6.如权利要求1所述的晶型II，DSC热图谱显示，其产生最大吸热量时的转变温度为162.25±3℃。
7.如权利要求1所述的晶型II，其差示扫描量热分析图基本如图2所示。
8.制备权利要求1-7任一项所述的晶型II的方法，其步骤包括将式(I)化合物与有机溶剂混合，加热，至化合物完全溶解，滴加不良溶剂，析出固体，经过滤、干燥，得到晶型II；所述的有机溶剂选自酮类溶剂和酯类溶剂；所述的不良溶剂选自水和正庚烷中的一种或多种。
9.如权利要求8所述的晶型II的制备方法，其特征在于下述的一项或多项：
(1)所述的有机溶剂选自丙酮和乙酸乙酯中的一种或多种；
(2)加热至30℃-80℃。
10.如权利要求8所述的晶型II的制备方法，其特征在于，加热至40℃-70℃。
11.如权利要求8所述的晶型II的制备方法，其特征在于，加热至40-45℃。
12.如权利要求8所述的晶型II的制备方法，其特征在于，加热至45-50℃。
13.如权利要求8所述的晶型II的制备方法，其特征在于，加热至50-55℃。
14.如权利要求8所述的晶型II的制备方法，其特征在于，加热至55-60℃。
15.如权利要求8所述的晶型II的制备方法，其特征在于，加热至60-65℃。
16.如权利要求8所述的晶型II的制备方法，其特征在于，加热至65-70℃。
17.如权利要求8所述的晶型II的制备方法，其特征在于，加热至样品溶解并变澄清。
18.药物制剂或药物组合物，其含有权利要求1-7任一项所述的式(I)化合物的晶型II，以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。
19.如权利要求18所述的药物制剂或药物组合物，所述的药物组合物进一步含有一种或多种选自以下的第二治疗活性剂：
用于治疗疼痛的药物；其选自Nav1.7通道调节剂、阿片类镇痛药、非甾体抗炎药、镇静剂、选择性/非选择性环氧酶抑制剂、抗癫痫药、抗抑郁药、局部***、5-HT受体阻断药、5-HT受体激动剂、麦角类生物碱、β-受体阻断药、M受体阻断药、硝酸酯类和维生素K；
用于治疗癌症的药物；其选自有丝***抑制剂、烷化剂、抗代谢物、反义DNA或RNA、抗肿瘤抗生素、生长因子抑制剂、信号传导抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、类维生素A受体调控剂、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物应答调节剂、激素类药物、血管再生抑制剂、细胞生长抑制剂、靶向抗体、HMG-CoA还原酶抑制剂和异戊二烯基蛋白质转移酶抑制剂；
用于治疗神经退行性疾病的药物；其选自拟多巴胺类药物、多巴胺受体激动剂、影响多巴胺代谢药物、NMDA受体拮抗剂、腺苷A2A受体抑制剂、影响DA释放和再摄取药、中枢抗胆碱药、胆碱酯酶抑制剂、5-HT激动剂、α2肾上腺素能受体拮抗剂、抗抑郁药、胆碱受体激动剂、β/γ分泌酶抑制剂、H3受体拮抗剂和抗氧化药物；
用于治疗自身免疫性疾病的药物；其选自改善病情的抗风湿药、非甾体抗炎药、糖皮质激素药、TNF拮抗剂、环磷酰胺、霉酚酸酯和环孢菌素；和
用于治疗炎症的药物；其选自甾体类抗炎药物和非甾体类抗炎药物。
20.权利要求1-7任一项所述的式(I)化合物的晶型II、权利要求18-19任一项所述的药物制剂或药物组合物在制备用于治疗和/或预防由TRK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶介导的疾病和相关病症的药物中的用途，所述疾病和相关病症选自疼痛、癌症、炎症、神经退行性疾病、自身免疫性疾病中的一种或多种。
21.如权利要求20所述的用途，其中所述由TRK和/或ROS1中的一种或多种酪氨酸激酶介导的疾病是癌症，所述癌症选自肺癌、结肠癌、直肠癌、***癌、乳腺癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、白血病、黑色素瘤、淋巴癌、甲状腺癌、多发性骨髓瘤、软组织肉瘤、卵巢癌、***、输卵管癌、肾细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤、骨癌、基底细胞癌、腹膜癌、皮肤纤维瘤、胰腺癌、食管癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、炎症性肌纤维母细胞瘤、间变性大细胞淋巴瘤和成神经细胞瘤。
22.如权利要求21所述的用途，其中所述肺癌选自小细胞肺癌和非小细胞肺癌。
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