CN113559314A - 用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，包括：将负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于改性类人胶原蛋白溶液中，然后与表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶液混合，加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料。本发明通过包括将负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒溶解于改性类人胶原蛋白溶液中后与表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶液混合后迅速加入酪氨酸酶溶液制备得到的仿细胞外基质水凝胶敷料，针对性解决糖尿病足溃疡伤口所具有的血管生成受损以及长期慢性炎症问题，可有效促进血管生成和抗炎症，具有高的伤口愈合速率。

Description

用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料及制备方法
技术领域
本发明属于生物医用材料技术领域，具体涉及用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料及制备方法。
背景技术
近年来我国糖尿病患病率表现出明显的上升趋势，糖尿病及其并发症作为一种慢性疾病已逐步影响到人们生活的方方面面。糖尿病足溃疡是糖尿病最严重的慢性并发症之一，是糖尿病非外伤性截肢的主要病因，使糖尿病足患者的生活质量极大降低，同时严重威胁着患者的生命。许多研究表明能保持创面湿润，吸收组织渗液的水凝胶敷料能促进伤口愈合，但具有上述特点的市售水凝胶敷料对糖尿病足溃疡的治疗作用非常有限。原因是糖尿病足溃疡与其他急性或慢性创面的生理微环境有显著差异，所以普适性市售水凝胶敷料对糖尿病足溃疡无法起到显著的治疗效果。开发针对性治疗糖尿病足溃疡的专用伤口敷料依然是目前生物材料领域的主要挑战之一。
不同于其它急性或慢性伤口的微环境，糖尿病足溃疡创面的生理微环境具有以下特点：1.由于糖尿病患者免疫低下，远离心脏的足部由于供血不足易发生血管病变，血管生成障碍严重影响糖尿病足溃疡创面的新生血管生成，导致伤口组织的再生功能受损。2.糖尿病足溃疡创面长期处于慢性炎症阶段。长期慢性炎症的主要原因是巨噬细胞功能紊乱，使得巨噬细胞从炎症表型(M1)向抗炎表型(M2)转化障碍。
目前市面上并没有针对糖尿病足溃疡的伤口敷料，从糖尿病足溃疡血管生成受损以及长期慢性炎症的特点出发，有针对性地为糖尿病足溃疡患者设计一款能显著促进糖尿病足溃疡愈合的外用敷料具有重要的临床意义与应用前景。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料及制备方法。本发明通过包括将负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒溶解于改性类人胶原蛋白溶液中后与表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶液混合后迅速加入酪氨酸酶溶液制备得到的仿细胞外基质水凝胶敷料，针对性解决糖尿病足溃疡伤口所具有的血管生成受损以及长期慢性炎症问题，可有效促进血管生成和抗炎症，具有高的伤口愈合速率。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，包括：将负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于改性类人胶原蛋白溶液中，然后与表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶液混合，加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料。
上述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，具体包括：
步骤一、制备负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒，具体包括：
步骤101、将表面活性剂和1,3,5-三甲苯溶解于去离子水中，然后加入无水乙醇，搅拌使混合均匀，得到TMB溶液；
步骤102、将盐酸多巴胺和三(羟甲基)氨基甲烷加入步骤101所述TMB溶液中，室温条件下搅拌反应20h～30h，离心，清洗，冻干，得到聚多巴胺纳米粒子；
步骤103、将步骤102所述聚多巴胺纳米粒子和甲磺酸去铁胺加入去离子水中，反应12h～36h，得到负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒；
步骤二、制备改性类人胶原蛋白，具体包括：
步骤201、将类人胶原蛋白溶解于4-吗啉乙磺酸水溶液中，得到含HLC体系；
步骤202、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和酪胺加入步骤201所述含HLC体系中，得到含HLC反应物体系；
步骤203、调节步骤202所述含HLC反应物体系的pH为5～7，于室温条件下搅拌反应12h～24h，透析，冻干，得到改性类人胶原蛋白；
步骤三、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体，具体包括：
步骤301、将2,2-二乙氧基乙胺溶解于含甲磺酸和四氢呋喃的混合液中，得到含DA体系；
步骤302、将四氢呋喃和甲磺酸混合，然后加入表没食子儿茶素没食子酸酯，得到含EGCG体系；
步骤303、向步骤302所述含EGCG体系中加入步骤301所述含DA体系，搅拌反应12h～24h后浓缩，真空干燥，萃取分离，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体；
步骤四、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸，具体包括：
步骤401、将透明质酸溶解于水中，得到HA溶液；
步骤402、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺加入步骤401所述HA溶液中，调整pH为5～7，得到含HA反应物体系；
步骤403、将步骤303所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体加入步骤402所述含HA反应物体系中，搅拌反应12h～24h，透析，冻干，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸；
步骤五、制备仿细胞外基质水凝胶敷料，具体包括：
步骤501、将步骤103所述负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒、步骤203所述改性类人胶原蛋白和步骤403所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸均利用Co60照射灭菌；
步骤502、将步骤501灭菌后改性类人胶原蛋白溶解于水中，配制成HLC-TA溶液，将步骤501灭菌后表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶解于水中，配制成HA-EGCG溶液；
步骤503、将步骤501灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于步骤502的HLC-TA溶液中，得到含M@D体系；
步骤504、将步骤503所述含M@D体系与步骤502所述HA-EGCG溶液混合后加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料。
上述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤101中，所述表面活性剂为Pluronic F-127，所述1,3,5-三甲苯的体积为表面活性剂质量的1125倍～1158倍，所述1,3,5-三甲苯的体积的单位为μL，所述表面活性剂质量的单位为g；步骤101中，所述去离子水的体积为表面活性剂质量的160倍～600倍，所述去离子水体积的单位为mL，所述表面活性剂质量的单位为g；步骤101中，所述乙醇的体积为表面活性剂质量的150倍～160倍，所述乙醇体积的单位为mL，所述表面活性剂质量的单位为g。
上述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤102中，所述盐酸多巴胺质量为表面活性剂质量的0.13倍～0.19倍，所述三(羟甲基)氨基甲烷质量为盐酸多巴胺质量的1倍～1.5倍；步骤103中，所述聚多巴胺纳米粒子的质量为甲磺酸去铁胺质量的1300倍～5300倍，所述去离子水体积为多巴胺纳米粒子质量的0.25倍～1倍，所述去离子水体积单位为mL，所述多巴胺纳米粒子质量单位为mg。
上述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤201中，所述4-吗啉乙磺酸水溶液体积为类人胶原蛋白质量的50倍～100倍，所述4-吗啉乙磺酸水溶液体积的单位为mL，所述类人胶原蛋白质量的单位为g；步骤202中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍～4.5倍，所述酪胺物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2.5倍～4倍。
上述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤301中，所述含甲磺酸和四氢呋喃的混合液中，甲磺酸和四氢呋喃的体积比1:(3～6)，所述含甲磺酸和四氢呋喃的混合液的体积为2,2-二乙氧基乙胺体积的8倍～10倍。
上述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤302中，所述四氢呋喃体积为甲磺酸体积的1400倍～6000倍，所述四氢呋喃体积为表没食子儿茶素没食子酸酯质量的1.0倍～1.7倍，所述四氢呋喃体积的单位为mL，所述表没食子儿茶素没食子酸酯质量的单位为g；步骤303中，所述2,2-二乙氧基乙胺体积为表没食子儿茶素没食子酸酯质量的37.5倍～46.8倍，所述2,2-二乙氧基乙胺体积单位为μL，所述表没食子儿茶素没食子酸酯质量单位为g。
上述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤401中，所述水的体积为透明质酸质量的66倍～100倍，所述水体积的单位为mL，透明质酸质量的单位为g；步骤402中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)物质的量为透明质酸物质的量的2倍～4倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为透明质酸物质的量的2.5倍～4倍；步骤403中，所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体物质的量为透明质酸物质的量的2倍，所述透析的时间为3天～5天。
上述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤502中，所述HLC-TA溶液中，灭菌后改性类人胶原蛋白的质量百分含量为8％～10％，所述HA-EGCG溶液中，表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸的质量百分含量为0.5％～1.5％；步骤503中，所述含M@D体系中，灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒的浓度为4mg/mL～6mg/mL；步骤504中，所述含M@D体系与HA-EGCG溶液的体积比为1:(0.5～3)，所述酪氨酸酶溶液的体积为含M@D体系的0.2倍～1倍，所述酪氨酸酶溶液中，酪氨酸酶的浓度为2KU/mL～4KU/mL。
此外，本发明还提供一种采用上述方法制备得到的用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明提供一种制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，该方法通过包括将负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒溶解于改性类人胶原蛋白溶液中后与表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶液混合后迅速加入酪氨酸酶溶液制备得到的仿细胞外基质水凝胶敷料，创造性地将聚多巴胺纳米颗粒和表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸引入水凝胶敷料体系，针对性解决糖尿病足溃疡伤口所具有的血管生成受损以及长期慢性炎症问题，可有效促进药物释放、血管生成和抵抗炎症，大鼠全层皮肤缺损伤口创面愈合时间最快可达13天，具有高的伤口愈合速率。
2、本发明的仿细胞外基质水凝胶敷料具有吸收组织渗液，保持创面湿润的特点。
3、本发明的制备方法，通过将表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸和改性类人胶原蛋白同时引入水凝胶体系，使其在功能和结构上具有与细胞外基质高度一致性。
4、本发明在制备水凝胶时未再加入新的交联剂，可有效避免外加交联剂的毒性和副作用。
下面结合附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
说明书附图
图1为本发明实施例1负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)的SEM图。
图2为本发明实施例1改性类人胶原蛋白(HLC-TA)的1H NMR图。
图3为本发明实施例1表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)的傅立叶变换红外吸收光谱图。
图4为本发明实施例1仿细胞外基质水凝胶敷料的成胶图。
图5为本发明实施例1仿细胞外基质水凝胶敷料的FT-IR图。
图6为空白对照组(Control)、市售水凝胶敷料组(HERADERM)、实施例1的仿细胞外基质水凝胶组(Hydrogel)的糖尿病SD大鼠慢性创面的治疗效果图。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供一种制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，包括：
步骤一、制备负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)，具体包括：
步骤101、将0.36g表面活性剂Pluronic F-127和417μL的1,3,5-三甲苯(TMB)溶解于64mL去离子水中，然后加入60mL无水乙醇，搅拌使混合均匀，得到TMB溶液；所述搅拌的时间可以为30min；
步骤102、将60mg盐酸多巴胺和90mg三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)加入步骤101所述TMB溶液中，室温条件下搅拌反应24h，离心，清洗，冻干，得到聚多巴胺纳米粒子(MPDA)；所述清洗为用体积比为2:1的无水乙醇和丙酮混合液清洗，所述清洗的次数为3次；
步骤103、将100mg步骤102所述聚多巴胺纳米粒子和65μg甲磺酸去铁胺(DFO)加入100mL去离子水中，反应24h，得到负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)；所述M@D粒径为182±14nm，所述M@D中，甲磺酸去铁胺的负载率为12.2％；
步骤二、制备改性类人胶原蛋白(HLC-TA)，具体包括：
步骤201、将4g类人胶原蛋白(HLC)溶解于200mL 4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，得到含HLC体系；所述4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，4-吗啉乙磺酸(MES)的浓度为50mM；
步骤202、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和酪胺加入步骤201所述含HLC体系中，得到含HLC反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍，所述酪胺物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2.5倍；
步骤203、调节步骤202所述含HLC反应物体系的pH为5，于室温条件下搅拌反应12h，透析，冻干，得到改性类人胶原蛋白(HLC-TA)；调节pH可以为用6M氢氧化钠溶液进行调节，所述室温为20℃～25℃，所述透析的时间为3天；
步骤三、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)，具体包括：
步骤301、将145μL2,2-二乙氧基乙胺(DA)溶解于1.2mL含甲磺酸(MSA)和四氢呋喃(THF)的混合液中，得到含DA体系；所述含甲磺酸和四氢呋喃的混合液中，甲磺酸和四氢呋喃的体积比1:5；
步骤302、将3.8mL四氢呋喃和1.7μL甲磺酸混合，然后加入2.29g表没食子儿茶素没食子酸酯，得到含EGCG体系；
步骤303、向步骤302所述含EGCG体系中加入步骤301所述含DA体系，于室温条件下搅拌反应12h后浓缩，真空干燥，萃取分离，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)；所述室温为20℃～25℃；
步骤四、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)，具体包括：
步骤401、将0.5g透明质酸(HA)溶解于100mL水中，得到HA溶液；
步骤402、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入步骤401所述HA溶液中，调整pH为5，得到含HA反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)物质的量为透明质酸物质的量的2倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为透明质酸物质的量的2.5倍；
步骤403、将步骤303所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体加入步骤402所述含HA反应物体系中，室温条件下搅拌反应12h，透析，冻干，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)；所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体的物质的量为透明质酸物质的量的2倍；所述透析的时间为3天；所述室温为20℃～25℃；
步骤五、制备仿细胞外基质水凝胶敷料，具体包括：
步骤501、将步骤103所述负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒、步骤203所述改性类人胶原蛋白(HLC-TA)和步骤403所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)均利用Co60照射灭菌；
步骤502、将步骤501灭菌后改性类人胶原蛋白溶解于水中，配制成HLC-TA溶液，将步骤501灭菌后表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶解于水中，配制成HA-EGCG溶液；所述HLC-TA溶液中，灭菌后改性类人胶原蛋白的质量百分含量为9％；所述HA-EGCG溶液中，表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸的质量百分含量为1％；
步骤503、将步骤501灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于步骤502改性类人胶原蛋白溶液中，得到含M@D体系；所述含M@D体系中，灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒的浓度为4mg/mL；
步骤504、将步骤503所述含M@D体系与步骤502所述HA-EGCG溶液混合后迅速加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料；所述含M@D体系与HA-EGCG溶液的体积比为1:1，所述酪氨酸酶溶液的体积为含M@D体系的0.5倍，所述酪氨酸酶溶液中，酪氨酸酶的浓度为2KU/mL。
性能评价：
图1为实施例1步骤一负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒的形貌，可以看出纳米颗粒尺寸均一，结构良好。
图2为实施例1步骤二的改性类人胶原蛋白核磁共振光谱分析图，在6.7～7.1ppm的化学位移处的新特征峰显示酪氨酸的芳香质子存在，说明酪胺成功接枝在类人胶原蛋白上。
如图3所示，对本实施例1步骤四的HA-EGCG进行傅立叶变换红外吸收光谱分析图，根据图3，通过比较HA和HA-EGCG，HA-EGCG的红外光谱在1695和1247cm-1处有新的特征峰，这两个特征峰对应EGCG的特征谱带，说明EGCG-dimers成功接枝在透明质酸上。
图4为对实施例1的仿细胞基质水凝胶进行倒置不流动成胶实验，试验方法包括：按照本实施例1步骤五中的比例分别配制含M@D的HLC-TA溶液、HA-EGCG溶液以及酪氨酸酶溶液，然后分别取1mL含M@D的HLC-TA溶液、2mLHA-EGCG溶液加入玻璃小瓶中，倒置发现上述两种溶液为具有流动性的液体，将以上两种溶液按照步骤504先混合均匀后置于另一玻璃小瓶中，再快速加入400μL上述酪氨酸酶溶液，得到仿细胞基质水凝胶HTHE-M@D，倒置发现溶液不流动，表明采用本发明的方法可制备得到水凝胶。
图5为实施例1仿细胞基质水凝胶傅立叶变换红外吸收光谱分析图，其中HTHE-M@D为仿细胞基质水凝胶，可见，在2910和925cm-1附近的峰归属于二苯醚和二酚基团，表明与苯氧基相关的偶联反应的发生，1560cm-1处的特征峰表明酪胺和EGCG-dimers之间产生双酚结构，表明采用本发明的方法成功制备出仿细胞基质水凝胶。
图6为实施例1仿细胞基质水凝胶对糖尿病SD大鼠的慢性创面的治疗效果测试结果，检测方法包括：首先建立糖尿病SD大鼠模型。选择60只SPF级8周龄雄性SD大鼠，体重为200～250g，给予标准饮食，于22～23℃环境下适应性饲养1周；术前禁食，按65mg/kg的标准，腹腔注射柠檬酸缓冲液配置的1％链脲佐菌素溶液，注射72h后，采大鼠尾静脉血检测血糖，连续观测SD大鼠的血糖3周，当SD大鼠的随机血糖在3周内均稳定大于或等于16.7mmol/L，视为糖尿病大鼠模型建立，糖尿病大鼠模型诱导成功后，按照随机数字表法将大鼠分为空白对照组、市售敷料(HERADERM)治疗组和仿细胞外基质水凝胶治疗组分别记为：Control、HeraDerm、Hydrogel组，建立糖尿病大鼠全层皮肤受损模型。每组6只，术前禁食，按300mg/kg腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉，麻醉成功后用75％酒精消毒大鼠爪子，用皮肤取样器于爪子正中切除直径为7mm的全层皮肤缺损伤口，Control组不使用敷料治疗，HeraDerm组在大鼠伤口处使用市售敷料HERADERM治疗，Hydrogel组在大鼠伤口处使用实施例1仿细胞外基质水凝胶，每日观察各组SD大鼠，确保创面始终有效覆盖，每24h更换一次敷料。由图6可见，采用本发明的水凝胶治疗组的治疗效果优于空白对照组与市售水凝胶(HeraDerm)敷料组，慢性创面愈合时间最快可达13天。
实施例2
本实施例提供一种制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，包括：
步骤一、制备负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)，具体包括：
步骤101、将0.38g表面活性剂Pluronic F-127和435μL的1,3,5-三甲苯(TMB)溶解于64mL去离子水中，然后加入60mL无水乙醇，搅拌使混合均匀，得到TMB溶液；所述搅拌的时间可以为30min；
步骤102、将65mg盐酸多巴胺和90mg三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)加入步骤101所述TMB溶液中，室温条件下搅拌反应24h，离心，清洗，冻干，得到聚多巴胺纳米粒子(MPDA)；所述清洗为用体积比为2:1的无水乙醇和丙酮混合液清洗，所述清洗的次数为3次；
步骤103、将100mg步骤102所述聚多巴胺纳米粒子和70μg甲磺酸去铁胺(DFO)加入100mL去离子水中，反应24h，得到负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)；所述M@D粒径与实施例1基本一致；
步骤二、制备改性类人胶原蛋白(HLC-TA)，具体包括：
步骤201、将2g类人胶原蛋白(HLC)溶解于200mL 4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，得到含HLC体系；所述4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，4-吗啉乙磺酸(MES)的浓度为50mM；
步骤202、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和酪胺加入步骤201所述含HLC体系中，得到含HLC反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为类人胶原蛋白物质的量的3倍，所述酪胺物质的量为类人胶原蛋白物质的量的3倍；
步骤203、调节步骤202所述含HLC反应物体系的pH为6，于室温条件下搅拌反应12h，透析，冻干，得到改性类人胶原蛋白(HLC-TA)；调节pH可以为用6M氢氧化钠溶液进行调节，所述室温为20℃～25℃，所述透析的时间为4天；
步骤三、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)，具体包括：
步骤301、将150μL2,2-二乙氧基乙胺(DA)溶解于1.2mL含甲磺酸(MSA)和四氢呋喃(THF)的混合液中，得到含DA体系；所述含甲磺酸和四氢呋喃的混合液中，甲磺酸和四氢呋喃的体积比1:6；
步骤302、将4.2mL四氢呋喃和2.4μL甲磺酸混合，然后加入3.2g表没食子儿茶素没食子酸酯，得到含EGCG体系；
步骤303、向步骤302所述含EGCG体系中加入步骤301所述含DA体系，于室温条件下搅拌反应12h后浓缩，真空干燥，萃取分离，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)；所述室温为20℃～25℃；
步骤四、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)，具体包括：
步骤401、将1g透明质酸(HA)溶解于100mL水中，得到HA溶液；
步骤402、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入步骤401所述HA溶液中，调整pH为5，得到含HA反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)物质的量为透明质酸物质的量的3倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为透明质酸物质的量的3倍；
步骤403、将步骤303所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体加入步骤402所述含HA反应物体系中，室温条件下搅拌反应12h，透析，冻干，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)；所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体物质的量为透明质酸物质的量的2倍；所述透析的时间为4天；所述室温为20℃～25℃；
步骤五、制备仿细胞外基质水凝胶敷料，具体包括：
步骤501、将步骤103所述负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒、步骤203所述改性类人胶原蛋白(HLC-TA)和步骤403所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)均利用Co60照射灭菌；
步骤502、将步骤501灭菌后改性类人胶原蛋白溶解于水中，配制成HLC-TA溶液，将步骤501灭菌后表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶解于水中，配制成HA-EGCG溶液；所述HLC-TA溶液中，灭菌后改性类人胶原蛋白的质量百分含量为9％；所述HA-EGCG溶液中，表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸的质量百分含量为1％；
步骤503、将步骤501灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于步骤502改性类人胶原蛋白溶液中，得到含M@D体系；所述含M@D体系中，灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒的浓度为5mg/mL；
步骤504、将步骤503所述含M@D体系与步骤502所述HA-EGCG溶液混合后迅速加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料；所述含M@D体系与HA-EGCG溶液的体积比为2:1，所述酪氨酸酶溶液的体积为含M@D体系的0.5倍，所述酪氨酸酶溶液中，酪氨酸酶的浓度为3KU/mL。
本实施例的仿细胞外基质水凝胶敷料效果与实施例1基本一致。
实施例3
本实施例提供一种制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，包括：
步骤一、制备负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)，具体包括：
步骤101、将0.40g表面活性剂Pluronic F-127和450μL的1,3,5-三甲苯(TMB)溶解于120mL去离子水中，然后加入60mL无水乙醇，搅拌使混合均匀，得到TMB溶液；所述搅拌的时间可以为30min；
步骤102、将70mg盐酸多巴胺和90mg三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)加入步骤101所述TMB溶液中，室温条件下搅拌反应24h，离心，清洗，冻干，得到聚多巴胺纳米粒子(MPDA)；所述清洗为用体积比为2:1的无水乙醇和丙酮混合液清洗，所述清洗的次数为3次；
步骤103、将100mg步骤102所述聚多巴胺纳米粒子和75μg甲磺酸去铁胺(DFO)加入100mL去离子水中，反应24h，得到负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)；所述M@D粒径与实施例1基本一致；
步骤二、制备改性类人胶原蛋白(HLC-TA)，具体包括：
步骤201、将3g类人胶原蛋白(HLC)溶解于200mL 4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，得到含HLC体系；所述4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，4-吗啉乙磺酸(MES)的浓度为50mM；
步骤202、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和酪胺加入步骤201所述含HLC体系中，得到含HLC反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为类人胶原蛋白物质的量的4倍，所述酪胺物质的量为类人胶原蛋白物质的量的4倍；
步骤203、调节步骤202所述含HLC反应物体系的pH为7，于室温条件下搅拌反应12h，透析，冻干，得到改性类人胶原蛋白(HLC-TA)；调节pH可以为用6M氢氧化钠溶液进行调节，所述室温为20℃～25℃，所述透析的时间为5天；
步骤三、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)，具体包括：
步骤301、将150μL2,2-二乙氧基乙胺(DA)溶解于1.2mL含甲磺酸(MSA)和四氢呋喃(THF)的混合液中，得到含DA体系；所述含甲磺酸和四氢呋喃的混合液中，甲磺酸和四氢呋喃的体积比1:3；
步骤302、将4.2mL四氢呋喃和3μL甲磺酸混合，然后加入4g表没食子儿茶素没食子酸酯，得到含EGCG体系；
步骤303、向步骤302所述含EGCG体系中加入步骤301所述含DA体系，于室温条件下搅拌反应12h后浓缩，真空干燥，萃取分离，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)；所述室温为20℃～25℃；
步骤四、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)，具体包括：
步骤401、将1.0g透明质酸(HA)溶解于100mL水中，得到HA溶液；
步骤402、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入步骤401所述HA溶液中，调整pH为6，得到含HA反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)物质的量为透明质酸物质的量的4倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为透明质酸物质的量的4倍；
步骤403、将步骤303所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体加入步骤402所述含HA反应物体系中，室温条件下搅拌反应12h，透析，冻干，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)；所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体物质的量为透明质酸物质的量的2倍；所述透析的时间为3天；所述室温为20℃～25℃；
步骤五、制备仿细胞外基质水凝胶敷料，具体包括：
步骤501、将步骤103所述负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒、步骤203所述改性类人胶原蛋白(HLC-TA)和步骤403所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)均利用Co60照射灭菌；
步骤502、将步骤501灭菌后改性类人胶原蛋白溶解于水中，配制成HLC-TA溶液，将步骤501灭菌后表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶解于水中，配制成HA-EGCG溶液；所述HLC-TA溶液中，灭菌后改性类人胶原蛋白的质量百分含量为9％；所述HA-EGCG溶液中，表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸的质量百分含量为1％；
步骤503、将步骤501灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于步骤502改性类人胶原蛋白溶液中，得到含M@D体系；所述含M@D体系中，灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒的浓度为6mg/mL；
步骤504、将步骤503所述含M@D体系与步骤502所述HA-EGCG溶液混合后迅速加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料；所述含M@D体系与HA-EGCG溶液的体积比为1:2，所述酪氨酸酶溶液的体积为含M@D体系的0.5倍，所述酪氨酸酶溶液中，酪氨酸酶的浓度为4KU/mL。
本实施例的仿细胞外基质水凝胶敷料效果与实施例1基本一致。
实施例4
本实施例提供一种制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，包括：
步骤一、制备负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)，具体包括：
步骤101、将0.40g表面活性剂Pluronic F-127和450μL的1,3,5-三甲苯(TMB)溶解于240mL去离子水中，然后加入60mL无水乙醇，搅拌使混合均匀，得到TMB溶液；所述搅拌的时间可以为30min；
步骤102、将55mg盐酸多巴胺和85mg三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)加入步骤101所述TMB溶液中，室温条件下搅拌反应20h，离心，清洗，冻干，得到聚多巴胺纳米粒子(MPDA)；所述清洗为用体积比为2:1的无水乙醇和丙酮混合液清洗，所述清洗的次数为3次；
步骤103、将400mg步骤102所述聚多巴胺纳米粒子和75μg甲磺酸去铁胺(DFO)加入100mL去离子水中，反应12h，得到负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)；所述M@D粒径与实施例1基本一致；
步骤二、制备改性类人胶原蛋白(HLC-TA)，具体包括：
步骤201、将3g类人胶原蛋白(HLC)溶解于200mL 4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，得到含HLC体系；所述4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，4-吗啉乙磺酸(MES)的浓度为50mM；
步骤202、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和酪胺加入步骤201所述含HLC体系中，得到含HLC反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为类人胶原蛋白物质的量的4倍，所述酪胺物质的量为类人胶原蛋白物质的量的4倍；
步骤203、调节步骤202所述含HLC反应物体系的pH为7，于室温条件下搅拌反应18h，透析，冻干，得到改性类人胶原蛋白(HLC-TA)；调节pH可以为用6M氢氧化钠溶液进行调节，所述室温为20℃～25℃，所述透析的时间为5天；
步骤三、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)，具体包括：
步骤301、将130μL2,2-二乙氧基乙胺(DA)溶解于1.2mL含甲磺酸(MSA)和四氢呋喃(THF)的混合液中，得到含DA体系；所述含甲磺酸和四氢呋喃的混合液中，甲磺酸和四氢呋喃的体积比1:3；
步骤302、将6mL四氢呋喃和1μL甲磺酸混合，然后加入4g表没食子儿茶素没食子酸酯，得到含EGCG体系；
步骤303、向步骤302所述含EGCG体系中加入步骤301所述含DA体系，于室温条件下搅拌反应18h后浓缩，真空干燥，萃取分离，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)；所述室温为20℃～25℃；
步骤四、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)，具体包括：
步骤401、将1.5g透明质酸(HA)溶解于100mL水中，得到HA溶液；
步骤402、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入步骤401所述HA溶液中，调整pH为6，得到含HA反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)物质的量为透明质酸物质的量的4倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为透明质酸物质的量的4倍；
步骤403、将步骤303所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体加入步骤402所述含HA反应物体系中，室温条件下搅拌反应18h，透析，冻干，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)；所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体物质的量为透明质酸物质的量的2倍；所述透析的时间为3天；所述室温为20℃～25℃；
步骤五、制备仿细胞外基质水凝胶敷料，具体包括：
步骤501、将步骤103所述负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒、步骤203所述改性类人胶原蛋白(HLC-TA)和步骤403所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)均利用Co60照射灭菌；
步骤502、将步骤501灭菌后改性类人胶原蛋白溶解于水中，配制成HLC-TA溶液，将步骤501灭菌后表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶解于水中，配制成HA-EGCG溶液；所述HLC-TA溶液中，灭菌后改性类人胶原蛋白的质量百分含量为8％；所述HA-EGCG溶液中，表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸的质量百分含量为0.5％；
步骤503、将步骤501灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于步骤502改性类人胶原蛋白溶液中，得到含M@D体系；所述含M@D体系中，灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒的浓度为6mg/mL；
步骤504、将步骤503所述含M@D体系与步骤502所述HA-EGCG溶液混合后迅速加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料；所述含M@D体系与HA-EGCG溶液的体积比为1:2，所述酪氨酸酶溶液的体积为含M@D体系的1倍，所述酪氨酸酶溶液中，酪氨酸酶的浓度为4KU/mL。
本实施例的仿细胞外基质水凝胶敷料效果与实施例1基本一致。
实施例5
本实施例提供一种制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，包括：
步骤一、制备负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)，具体包括：
步骤101、将0.40g表面活性剂Pluronic F-127和450μL的1,3,5-三甲苯(TMB)溶解于200mL去离子水中，然后加入60mL无水乙醇，搅拌使混合均匀，得到TMB溶液；所述搅拌的时间可以为30min；
步骤102、将75mg盐酸多巴胺和80mg三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)加入步骤101所述TMB溶液中，室温条件下搅拌反应30h，离心，清洗，冻干，得到聚多巴胺纳米粒子(MPDA)；所述清洗为用体积比为2:1的无水乙醇和丙酮混合液清洗，所述清洗的次数为3次；
步骤103、将200mg步骤102所述聚多巴胺纳米粒子和75μg甲磺酸去铁胺(DFO)加入100mL去离子水中，反应36h，得到负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒(M@D)；所述M@D粒径与实施例1基本一致；
步骤二、制备改性类人胶原蛋白(HLC-TA)，具体包括：
步骤201、将3g类人胶原蛋白(HLC)溶解于200mL 4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，得到含HLC体系；所述4-吗啉乙磺酸(MES)水溶液中，4-吗啉乙磺酸(MES)的浓度为50mM；
步骤202、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和酪胺加入步骤201所述含HLC体系中，得到含HLC反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为类人胶原蛋白物质的量的4.5倍，所述酪胺物质的量为类人胶原蛋白物质的量的4倍；
步骤203、调节步骤202所述含HLC反应物体系的pH为7，于室温条件下搅拌反应24h，透析，冻干，得到改性类人胶原蛋白(HLC-TA)；所述透析的时间为5天；
步骤三、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)，具体包括：
步骤301、将140μL2,2-二乙氧基乙胺(DA)溶解于1.2mL含甲磺酸(MSA)和四氢呋喃(THF)的混合液中，得到含DA体系；所述含甲磺酸和四氢呋喃的混合液中，甲磺酸和四氢呋喃的体积比1:3；
步骤302、将4.2mL四氢呋喃和3μL甲磺酸混合，然后加入4g表没食子儿茶素没食子酸酯，得到含EGCG体系；
步骤303、向步骤302所述含EGCG体系中加入步骤301所述含DA体系，于室温条件下搅拌反应24h后浓缩，真空干燥，萃取分离，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体(EGCG-dimers)；所述室温为20℃～25℃；
步骤四、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)，具体包括：
步骤401、将1.2g透明质酸(HA)溶解于100mL水中，得到HA溶液；
步骤402、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)加入步骤401所述HA溶液中，调整pH为7，得到含HA反应物体系；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)物质的量为透明质酸物质的量的4倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为透明质酸物质的量的4倍；
步骤403、将步骤303所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体加入步骤402所述含HA反应物体系中，室温条件下搅拌反应24h，透析，冻干，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)；所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体物质的量为透明质酸物质的量的2倍；所述透析的时间为5天；所述室温为20℃～25℃；
步骤五、制备仿细胞外基质水凝胶敷料，具体包括：
步骤501、将步骤103所述负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒、步骤203所述改性类人胶原蛋白(HLC-TA)和步骤403所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸(HA-EGCG)均利用Co60照射灭菌；
步骤502、将步骤501灭菌后改性类人胶原蛋白溶解于水中，配制成HLC-TA溶液，将步骤501灭菌后表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶解于水中，配制成HA-EGCG溶液；所述HLC-TA溶液中，灭菌后改性类人胶原蛋白的质量百分含量为10％；所述HA-EGCG溶液中，表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸的质量百分含量为1.5％；
步骤503、将步骤501灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于步骤502改性类人胶原蛋白溶液中，得到含M@D体系；所述含M@D体系中，灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒的浓度为6mg/mL；
步骤504、将步骤503所述含M@D体系与步骤502所述HA-EGCG溶液混合后迅速加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料；所述含M@D体系与HA-EGCG溶液的体积比为1:3，所述酪氨酸酶溶液的体积为含M@D体系的0.2倍，所述酪氨酸酶溶液中，酪氨酸酶的浓度为3KU/mL。
本实施例的仿细胞外基质水凝胶敷料效果与实施例1基本一致。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何限制，凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (10)

1.一种制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，包括：将负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于改性类人胶原蛋白溶液中，然后与表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶液混合，加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料。
2.根据权利要求1所述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，具体包括：
步骤一、制备负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒，具体包括：
步骤101、将表面活性剂和1,3,5-三甲苯溶解于去离子水中，然后加入无水乙醇，搅拌使混合均匀，得到TMB溶液；
步骤102、将盐酸多巴胺和三(羟甲基)氨基甲烷加入步骤101所述TMB溶液中，室温条件下搅拌反应20h～30h，离心，清洗，冻干，得到聚多巴胺纳米粒子；
步骤103、将步骤102所述聚多巴胺纳米粒子和甲磺酸去铁胺加入去离子水中，反应12h～36h，得到负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒；
步骤二、制备改性类人胶原蛋白，具体包括：
步骤201、将类人胶原蛋白溶解于4-吗啉乙磺酸水溶液中，得到含HLC体系；
步骤202、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和酪胺加入步骤201所述含HLC体系中，得到含HLC反应物体系；
步骤203、调节步骤202所述含HLC反应物体系的pH为5～7，于室温条件下搅拌反应12h～24h，透析，冻干，得到改性类人胶原蛋白；
步骤三、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体，具体包括：
步骤301、将2,2-二乙氧基乙胺溶解于含甲磺酸和四氢呋喃的混合液中，得到含DA体系；
步骤302、将四氢呋喃和甲磺酸混合，然后加入表没食子儿茶素没食子酸酯，得到含EGCG体系；
步骤303、向步骤302所述含EGCG体系中加入步骤301所述含DA体系，搅拌反应12h～24h后浓缩，真空干燥，萃取分离，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体；
步骤四、制备表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸，具体包括：
步骤401、将透明质酸溶解于水中，得到HA溶液；
步骤402、将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺加入步骤401所述HA溶液中，调整pH为5～7，得到含HA反应物体系；
步骤403、将步骤303所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体加入步骤402所述含HA反应物体系中，搅拌反应12h～24h，透析，冻干，得到表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸；
步骤五、制备仿细胞外基质水凝胶敷料，具体包括：
步骤501、将步骤103所述负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒、步骤203所述改性类人胶原蛋白和步骤403所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸均利用Co60照射灭菌；
步骤502、将步骤501灭菌后改性类人胶原蛋白溶解于水中，配制成HLC-TA溶液，将步骤501灭菌后表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸溶解于水中，配制成HA-EGCG溶液；
步骤503、将步骤501灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒分散于步骤502的HLC-TA溶液中，得到含M@D体系；
步骤504、将步骤503所述含M@D体系与步骤502所述HA-EGCG溶液混合后加入酪氨酸酶溶液，得到仿细胞外基质水凝胶敷料。
3.根据权利要求2所述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤101中，所述表面活性剂为PluronicF-127，所述1,3,5-三甲苯的体积为表面活性剂质量的1125倍～1158倍，所述1,3,5-三甲苯的体积的单位为μL，所述表面活性剂质量的单位为g；步骤101中，所述去离子水的体积为表面活性剂质量的160倍～600倍，所述去离子水体积的单位为mL，所述表面活性剂质量的单位为g；步骤101中，所述乙醇的体积为表面活性剂质量的150倍～160倍，所述乙醇体积的单位为mL，所述表面活性剂质量的单位为g。
4.根据权利要求2所述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤102中，所述盐酸多巴胺质量为表面活性剂质量的0.13倍～0.19倍，所述三(羟甲基)氨基甲烷质量为盐酸多巴胺质量的1倍～1.5倍；步骤103中，所述聚多巴胺纳米粒子的质量为甲磺酸去铁胺质量的1300倍～5300倍，所述去离子水体积为多巴胺纳米粒子质量的0.25倍～1倍，所述去离子水体积单位为mL，所述多巴胺纳米粒子质量单位为mg。
5.根据权利要求2所述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤201中，所述4-吗啉乙磺酸水溶液体积为类人胶原蛋白质量的50倍～100倍，所述4-吗啉乙磺酸水溶液体积的单位为mL，所述类人胶原蛋白质量的单位为g；步骤202中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2倍～4.5倍，所述酪胺物质的量为类人胶原蛋白物质的量的2.5倍～4倍。
6.根据权利要求2所述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤301中，所述含甲磺酸和四氢呋喃的混合液中，甲磺酸和四氢呋喃的体积比1:(3～6)，所述含甲磺酸和四氢呋喃的混合液的体积为2,2-二乙氧基乙胺体积的8倍～10倍。
7.根据权利要求2所述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤302中，所述四氢呋喃体积为甲磺酸体积的1400倍～6000倍，所述四氢呋喃体积为表没食子儿茶素没食子酸酯质量的1.0倍～1.7倍，所述四氢呋喃体积的单位为mL，所述表没食子儿茶素没食子酸酯质量的单位为g；步骤303中，所述2,2-二乙氧基乙胺体积为表没食子儿茶素没食子酸酯质量的37.5倍～46.8倍，所述2,2-二乙氧基乙胺体积单位为μL，所述表没食子儿茶素没食子酸酯质量单位为g。
8.根据权利要求2所述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤401中，所述水的体积为透明质酸质量的66倍～100倍，所述水体积的单位为mL，透明质酸质量的单位为g；步骤402中，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)物质的量为透明质酸物质的量的2倍～4倍，所述N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)物质的量为透明质酸物质的量的2.5倍～4倍；步骤403中，所述表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体物质的量为透明质酸物质的量的2倍，所述透析的时间为3天～5天。
9.根据权利要求2所述的制备用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料的方法，其特征在于，步骤502中，所述HLC-TA溶液中，灭菌后改性类人胶原蛋白的质量百分含量为8％～10％，所述HA-EGCG溶液中，表没食子儿茶素没食子酸酯二聚体接枝的透明质酸的质量百分含量为0.5％～1.5％；步骤503中，所述含M@D体系中，灭菌后负载有甲磺酸去铁胺的聚多巴胺纳米颗粒的浓度为4mg/mL～6mg/mL；步骤504中，所述含M@D体系与HA-EGCG溶液的体积比为1:(0.5～3)，所述酪氨酸酶溶液的体积为含M@D体系的0.2倍～1倍，所述酪氨酸酶溶液中，酪氨酸酶的浓度为2KU/mL～4KU/mL。
10.一种采用权利要求1～9任一权利要求所述方法制备得到的用于糖尿病足溃疡的仿细胞外基质水凝胶敷料。
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