CN113533723B - 一种被hiv和/或siv感染的细胞的标志物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物医药领域。具体涉及一种被HIV和/或SIV感染的细胞中的标志物及其应用，所述的生物标志物为PLK（Polo‑like kinase）。本发明通过抑制PLK蛋白的活性或将其清除，实现不激活储存库而使其释放病毒的目的，进而使其能在生理状态下被检测到，还能在体内被免疫***或药物所识别和清除。本发明还发现，增强PLK蛋白的活性可以在被HIV和/或SIV感染的细胞内直接抑制病毒的释放。本发明为HIV和/或SIV感染的诊断和抗病毒治疗提供了新的靶标，为病毒感染的早期快速检测以及极早期治疗提供用药依据和保障，具有重要临床价值。

Description

一种被HIV和/或SIV感染的细胞的标志物及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域。具体涉及一种被HIV和/或SIV感染的细胞中的标志物及其应用，更具体地说，本发明提供了将PLK蛋白用于检测HIV和/或SIV感染的细胞以及清除该细胞的用途，通过对HIV和/或SIV感染的细胞进行处理以检测和清除该细胞的方法，以及提供了抑制HIV和/或SIV感染的细胞内病毒释放的方法。
背景技术
HIV感染已对全球生命健康构成重大威胁，目前的抗HIV疗法，只能有效控制病毒的积极复制，而不能彻底根治。HIV感染者在进行抗病毒治疗(Highly ActiveAntiretroviral Therapy, HAART)后，血浆内的病毒载量迅速下降，直到最低检测限以下(<20拷贝/mL)。然而，一旦停止抗病毒治疗，体内的病毒会迅速反弹。因此，绝大多数艾滋病患者需要终身进行抗病毒治疗（极少数精英控制者除外）。停药后病毒将快速反弹、病情复发难以根治的主要原因是“HIV储存库细胞”的存在，这也是艾滋病难以实现彻底治愈的最根本原因。因此，需要寻找出有效且安全地针对这些被HIV感染的储存库细胞的检测方法和清除方法。
现有HIV储存库的检测方法基本都是在实验室条件下通过激活HIV储存库细胞，比如：采取通过添加类似植物凝集素（phytohemagglutinin，PHA）等物质激活HIV储存库细胞，使其大量释放子代病毒，从而对释放的病毒量进行检测并估算HIV储存库细胞的大致存量。该检测方法的缺点在于，（1）其无法做到标准化和定量化。（2）HIV储存库细胞一旦被激活后，虽能够促发病毒释放，但已经缺失了HIV储存库的重要生理特性。因此其释放的病毒已不具有潜伏病毒的特征。
本领域内都在研究以理论上国际广泛认可的震动疗法（Shock&Kill）为基本治疗原则的方法。与现有的检测方法类似的，在Shock&Kill治疗原则中，也首先需要潜伏逆转剂（Latent reversal agents，LRAs）激活/Shock储存库细胞内的潜伏病毒，然后被杀伤性CD8+ T细胞发现而被清除。然而，在治疗方法研究方面，目前遇到的关键问题在于：激活CD4+ T储存库细胞中潜伏病毒的LRAs并不能特异性作用于储存库细胞，而导致机体稳态失衡或使人体免疫***非特异性活化。因此，如果采取目前的策略进行Shock&Kill治疗，会使病人机体稳态失衡和免疫紊乱，甚至致命。因此，Shock&Kill疗法在基础实验上取得成功，却无法进入临床治疗。猴免疫缺陷病毒（Simian immunodeficiency virus，SIV），也称为非洲绿猴病毒，作为一种非洲灵长目的逆转录病毒，具有与HIV类似的特性。
综上所述，在被HIV和/或SIV感染的细胞中寻找一种标志物，达到不激活HIV储存库细胞，不造成机体稳态失衡仍然能够促发其释放大量子代病毒，从而能够在安全的生理条件下检测到这些细胞，并在体内被自身免疫***或者相关抗病毒药物所识别和清除，以及在被HIV和/或SIV感染的细胞内直接抑制病毒释放都具有重要的临床意义。
Polo样激酶（Polo-like kinase，PLK）是细胞周期进程中的重要调控因子，家族成员主要包括PLK1，PLK2 ，PLK3 ，PLK4和PLK5。其中，有研究指出PLK3与细胞应激反应和基因双链断裂修复有关。在细胞系中，PLK3蛋白以微管依赖的方式与中心体结合，参与有丝***并定位于有丝***装置。激酶缺陷突变体的表达导致了微管动力学的改变和细胞凋亡引起的细胞形态异常。然而截止目前，尚无任何关于PLK3蛋白在被HIV和/或SIV感染的细胞中的具体功能机制等信息的报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种被HIV和/或SIV感染的细胞中的标志物及其应用。借助该标志物（即PLK蛋白），通过对被HIV和/或SIV感染的细胞进行处理而使这类细胞释放子代病毒，以检测和清除该细胞的方法，以及提供了一种可以直接抑制被HIV和/或SIV感染的细胞释放子代病毒的方法。
为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案。
本发明提供了一种被HIV和/或SIV感染的细胞中的标志物，其特征在于，所述标志物为PLK蛋白。
进一步地，所述标志物PLK蛋白为PLK3蛋白。
更进一步地，所述标志物PLK3蛋白为PLK3-201蛋白，所述PLK3-201蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了一种能够抑制PLK蛋白活性的物质在制备用于检测和清除被HIV和/或SIV感染的细胞的用途，其特征在于，所述能够抑制PLK蛋白活性的物质含有如下I-IV中至少一种物质：
I、小分子化合物；
II、PLK蛋白抑制剂，包括如下：Wortmannin、Volasertib、BI2536、GW843682X、TAK960、Poloxin、LFM-A13、SEB13 Hydrochloride、TC-S 7005、TAK-960 dihydrochloride、SEB13和TAK-960 hydrochloride；
III、PLK蛋白的特异性抗体或其抗原结合片段；
IV、作为PLK蛋白靶向抑制剂的siRNA或者shRNA。
进一步地，所述抑制PLK蛋白活性为抑制PLK3蛋白活性。
本发明还提供了一种检测被HIV和/或SIV感染细胞的方法，其特征在于，所述方法是通过抑制被感染的细胞中PLK蛋白活性使该细胞开始大量释放可被检测的子代病毒达到检测的目的。
本发明还提供了一种清除被HIV和/或SIV感染的细胞的方法，其特征在于，所述方法是通过抑制被HIV和/或SIV感染的细胞中PLK蛋白活性使被HIV和/或SIV感染的细胞开始大量释放子代病毒，进而能够被人体免疫***特异性识别或者被相关抗病毒药物所识别，以达到清除被HIV和/或SIV感染的细胞的目的。
进一步地，所述的检测和清除被HIV和/或SIV感染的细胞的方法，其特征在于，所述被HIV和/或SIV感染的细胞包括：被HIV和/或SIV感染的细胞、被HIV和/或SIV感染的外周血细胞、CD4+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突状细胞和神经胶质细胞。
进一步地，所述的检测和清除被HIV和/或SIV感染的细胞的方法，其特征在于，所述方法中抑制PLK蛋白活性为抑制PLK3蛋白活性。
本发明还提供了一种在被HIV和/或SIV感染的细胞内直接抑制病毒释放的方法，其特征在于，所述方法是通过增强PLK蛋白的活性可以直接抑制被HIV和/或SIV感染的细胞内病毒的释放。
优选地，所述一种在被HIV和/或SIV感染的细胞内直接抑制病毒释放的方法，其特征在于，所述被HIV和/或SIV感染的细胞包括：感染了HIV和/或SIV的外周血细胞、CD4+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突状细胞和神经胶质细胞。
进一步地，所述一种在被HIV和/或SIV感染的细胞内直接抑制病毒释放的方法，其特征在于，所述方法中增强PLK蛋白活性为增强PLK3蛋白表达。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下。
本发明首次发现了一种与被HIV和/或SIV感染的细胞释放病毒相关的新靶标。通过抑制PLK3蛋白的活性或将其清除，可达到不激活储存库而促发细胞释放大量子代病毒的目的，从而使其能在生理状态下被检测到，还能在体内被免疫***或者相关抗病毒药物所识别和清除。既往的检测方法需在体外强烈激活细胞，导致被感染细胞的生理（静息）特征改变，且由于不能区分前病毒是否完整而高估储存库大小，检测结果不够真实准确、也尚无法应用于临床。
同时，本发明首次发现，增强PLK3蛋白的活性可以在被HIV和/或SIV感染的细胞内直接抑制病毒的释放，可达到将病毒永久封闭在细胞内的目的。因此，无论是抑制PLK3蛋白的活性或将其清除，还是增强PLK3蛋白的活性均对HIV感染的抗病毒治疗有益。
综上所述，本发明为HIV和/或SIV感染的诊断和抗病毒治疗提供了全新的理论依据和全新的靶标，并且本发明可以有效缩短病毒检测的窗口期，在感染极早期即可通过细胞水平检测到微量的感染性病毒，为HIV和/或SIV感染的早期诊断以及极早期治疗提供用药依据和保障，具有重要的临床应用价值。
附图说明
图1：PLK3蛋白表达载体转染后，上清液中HIV的感染率对比图。
图2：PLK3蛋白表达载体转染后，p24含量对比图。
图3：PLK3蛋白表达载体转染后，病毒粒子有关的基因组RNA含量对比图。
图4：PLK3蛋白表达载体转染后，HIV Gag RNA含量对比图。
图5：PLK3蛋白表达载体转染后，野生型Gag蛋白和密码子优化的Gag蛋白含量对比图。
图6：PLK3蛋白表达载体转染后，上清液中HBV病毒含量对比图。
图7：PLK1、PLK2、PLK3、PLK4和PLK5蛋白表达载体转染293T细胞后，上清液中HIV-1的含量对比图。
图8：PLK3蛋白表达载体转染后，上清液中HIV-1的含量对比图。
图9：PLK3蛋白表达载体转染后，上清液中不同包膜（VSV-G、HIV-1DoL、HIV-1SF162、HIV-189.6、HIV-1AD8）病毒的含量对比图。
图10：PLK3蛋白表达载体转染后，HIV Gag RNA含量对比图。
图11：PLK1、PLK2、PLK3、PLK4和PLK5蛋白表达载体转染后，上清液中CCR5嗜性HIV-1AD8含量对比图。
图12：PLK1、PLK2、PLK3、PLK4和PLK5蛋白表达载体转染后，上清液中CCR5和CXCR4（双嗜性）HIV-189.6含量对比图。
图13：PLK1、PLK2、PLK3、PLK4和PLK5蛋白表达载体转染后，上清液中CCR5嗜性HIV-1BaL含量对比图。
图14：PLK1、PLK2、PLK3、PLK4和PLK5蛋白表达载体转染后，上清液中HIV-2ROD含量对比图。
图15：PLK1、PLK2、PLK3、PLK4和PLK5蛋白表达载体转染后，上清液中SIVagm含量对比图。
图16：PLK3激酶抑制剂GW843682X对于HIV-1感染的作用的影响图。
图17：PLK3激酶缺失突变表达载体转染后对HIV-1感染的作用的影响图。
具体实施例
以下结合具体的实施方式，对本发明进行详细描述，目的是为了公众更好的理解所述的技术内容，而不是对所述技术内容进行限制，事实上，在以相同或近似的原理进行的改进，都在本发明所要求保护的权利要求范围之内。
实施例1。
HIV储存库细胞的人类PLK3蛋白具有抑制HIV-1病毒蛋白翻译的作用，对于HIV-1有特异性的抑制性。
为了验证PLK3的作用，将HIV-1病毒载体处理具有不同PLK3蛋白表达水平的293T细胞，发现相较于不具有PLK3蛋白表达的293T细胞，这些含有PLK3蛋白表达的293T细胞在HIV侵染性能够下降至最多约1/150的水平。具体试验步骤如下：293T细胞用3×FLAG标记的PLK3蛋白表达载体转染，包括阴性对照组在内使用pNL4.3处理。在转染48小时，上清液用于感染TZM-bl报告细胞，以得到病毒的感染水平。每次测量数据均已减去背景RLU（图1）。
在具有PLK3蛋白过量表达的情况下，培养上清液中的病毒粒子的核心抗原p24以及病毒颗粒的基因组RNA的含量也大幅度下降。具体试验步骤如下：采用与图1类似的前处理步骤，进行p24酶联免疫吸附测定（ELISA）（图2），以及基于特定的探针的qPCR测量病毒粒子有关的基因组RNA（Virion RNA）（图3）。
然而，PLK3蛋白过量表达并不影响细胞内病毒Gag转录水平。这说明了PLK3蛋白过量表达显著降低了HIV-1的蛋白表达，但不影响HIV-1转录。同时，与PLK3蛋白相关的病毒Gag蛋白也显著降低，说明PLK3参与特异性抑制HIV蛋白翻译的过程。具体试验步骤如下：提取所有RNA进行qPCR以测量HIV-1的 Gag 转录水平（图4）。收集细胞进行流式细胞术试验，并使用特异性抗体检测HIV-1 p24蛋白表达水平（图5）。
检测在293T细胞中PLK3蛋白的过表达对于CMV启动子驱动的HBV（Hepatitis Bvirus）病毒的作用，以判断PLK3蛋白是否特异性的作用于HIV-1，结果发现了完整的HBV复制，即PLK3蛋白并不影响HBV的复制和释放。具体试验步骤如下：实验组的293T细胞由3×FLAG标记的PLK3表达载体转染，与阴性对照组一同使用HBV 复制子（CMV启动子）处理。48小时后，使用HBs酶联免疫吸附测定检验培养上清液中的HBV病毒粒子（图6）。
实施例2。
人类PLK（PLK1，PLK2，PLK3，PLK4和PLK5）蛋白家族中只有PLK3蛋白具有抑制HIV-1蛋白翻译的作用，对于HIV-1有特异性的抑制性。同时，黑猩猩的PLK3蛋白也具有抑制HIV-1蛋白翻译的作用，对于HIV-1有特异性的抑制性。
人类PLK蛋白具体有五种，PLK1蛋白、PLK2蛋白、PLK3蛋白、PLK4蛋白以及PLK5蛋白。检测所有五种人类PLK蛋白和灵长类PLK3蛋白的抗HIV-1活性。相对于阴性对照组，不同表达量的人类PLK3将HIV-1的侵染性降低至阴性对照组的1/11和1/115。而人类PLK1蛋白、PLK2蛋白、PLK4蛋白和PLK5蛋白没有显示出抗HIV-1活性。黑猩猩（chimpanzee）PLK3蛋白和猕猴（macaca）PLK3蛋白也能够降低HIV-1的侵染性，只不过降低幅度与人类PLK3蛋白相比稍稍不同。这说明灵长类的PLK3家族蛋白都可能具有抗HIV-1活性。具体试验步骤如下：293T细胞分别用3×FLAG标记的人类PLK1、PLK2、PLK3、PLK4和PLK5蛋白表达载体, 3×FLAG标记的黑猩猩PLK3蛋白表达载体和3×FLAG标记的猕猴PLK3蛋白载体转染，包括阴性对照组在内均用pNL4.3处理。在转染后48小时，上清液用于感染TZM-bl报告细胞，以得到病毒的感染水平。每次测量数据均已减去背景RLU（图7，8）。
实施例3。
PLK3蛋白对于HIV-1具有抑制性，该抑制性体现在对CXCR4嗜性和CCR5嗜性包膜蛋白包裹的HIV均具有抑制作用，而不影响Gag的转录。
人类PLK3蛋白表现出了非常强的阻止HIV-1侵染的能力，并且不会影响Gag转录。具体试验步骤如下：用3×FLAG标记的PLK3蛋白表达载体转染293T细胞，包括阴性对照组在内用pNL4.3∆E-GFP以及分别表达VSV-G、pDoL-gp160、pSF162-gp160、pAD8-gp160或者p89.6-gp160的载体处理。在转染48小时后，上清液用于感染TZM-bl报告细胞，以得到病毒的感染水平，每次测量数据均已减去背景RLU（图9）。提取的所有RNA都进行qPCR以量化的Gag转录物，以磷酸甘油醛脱氢酶进行归一化（图10）。
实施例4。
PLK3蛋白对于HIV-1、HIV-2和SIV具有抑制性，该抑制性体现在对野生型CCR5嗜性病毒（AD8和BaL）、双嗜性病毒（89.6）、HIV-2ROD和SIVagm均具有抑制作用。
人类PLK3的表达也展现出了对于HIV-1AD8、HIV-1BaL、HIV-189.6、HIV-2ROD和SIVagm侵染的限制能力。具体试验步骤如下：用3×FLAG标记的PLK3蛋白表达载体转染293T细胞，包括阴性对照组在内均用病毒载体pAD8（图11）、p89.6（图12）、pBaL（图13）、pHIV-2ROD（图14）和pSIVagm（图15）处理。在转染48小时后，上清液用于感染TZM-bl报告细胞，以得到病毒的感染水平，每次测量数据均已减去背景RLU。
实施例5。
PLK3需要其激酶活性以实现其对于HIV-1的抑制作用。PLK3激酶抑制剂或激酶结构域缺失突变能够抑制PLK3对于HIV-1的抑制作用。
人类PLK3是Polo样激酶。使用PLK3激酶抑制剂GW843682X处理，虽然PLK3的表达水平没有变化，但是其抗病毒能力受到抑制。使用GW843682X或PLK3激酶结构域突变载体分别处理并观察结果。GW843682X或PLK3激酶结构域突变能够抑制人类PLK3的抗HIV-1病毒能力。具体试验步骤如下：用3×FLAG标记的PLK3蛋白表达载体，转染24小时后，包括阴性对照组在内均用NL4.3.Luc（VSV-G）进行处理。同时使用GW843682X处理细胞。在转染48小时后收集细胞进行流式细胞术检测（图16）。用3×FLAG标记的PLK3激酶结构域缺失突变蛋白表达载体，转染24小时后，包括阴性对照组在内均用NL4.3.Luc（VSV-G）进行处理。在转染48小时后收集细胞进行流式细胞术检测（图17）。
序列表
<110> 中国医科大学附属第一医院
<120> 一种被HIV和/或SIV感染的细胞的标志物及其应用
<141> 2021-07-26
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 646
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Glu Pro Ala Ala Gly Phe Leu Ser Pro Arg Pro Phe Gln Arg Ala
1 5 10 15
Ala Ala Ala Pro Ala Pro Pro Ala Gly Pro Gly Pro Pro Pro Ser Ala
20 25 30
Leu Arg Gly Pro Glu Leu Glu Met Leu Ala Gly Leu Pro Thr Ser Asp
35 40 45
Pro Gly Arg Leu Ile Thr Asp Pro Arg Ser Gly Arg Thr Tyr Leu Lys
50 55 60
Gly Arg Leu Leu Gly Lys Gly Gly Phe Ala Arg Cys Tyr Glu Ala Thr
65 70 75 80
Asp Thr Glu Thr Gly Ser Ala Tyr Ala Val Lys Val Ile Pro Gln Ser
85 90 95
Arg Val Ala Lys Pro His Gln Arg Glu Lys Ile Leu Asn Glu Ile Glu
100 105 110
Leu His Arg Asp Leu Gln His Arg His Ile Val Arg Phe Ser His His
115 120 125
Phe Glu Asp Ala Asp Asn Ile Tyr Ile Phe Leu Glu Leu Cys Ser Arg
130 135 140
Lys Ser Leu Ala His Ile Trp Lys Ala Arg His Thr Leu Leu Glu Pro
145 150 155 160
Glu Val Arg Tyr Tyr Leu Arg Gln Ile Leu Ser Gly Leu Lys Tyr Leu
165 170 175
His Gln Arg Gly Ile Leu His Arg Asp Leu Lys Leu Gly Asn Phe Phe
180 185 190
Ile Thr Glu Asn Met Glu Leu Lys Val Gly Asp Phe Gly Leu Ala Ala
195 200 205
Arg Leu Glu Pro Pro Glu Gln Arg Lys Lys Thr Ile Cys Gly Thr Pro
210 215 220
Asn Tyr Val Ala Pro Glu Val Leu Leu Arg Gln Gly His Gly Pro Glu
225 230 235 240
Ala Asp Val Trp Ser Leu Gly Cys Val Met Tyr Thr Leu Leu Cys Gly
245 250 255
Ser Pro Pro Phe Glu Thr Ala Asp Leu Lys Glu Thr Tyr Arg Cys Ile
260 265 270
Lys Gln Val His Tyr Thr Leu Pro Ala Ser Leu Ser Leu Pro Ala Arg
275 280 285
Gln Leu Leu Ala Ala Ile Leu Arg Ala Ser Pro Arg Asp Arg Pro Ser
290 295 300
Ile Asp Gln Ile Leu Arg His Asp Phe Phe Thr Lys Gly Tyr Thr Pro
305 310 315 320
Asp Arg Leu Pro Ile Ser Ser Cys Val Thr Val Pro Asp Leu Thr Pro
325 330 335
Pro Asn Pro Ala Arg Ser Leu Phe Ala Lys Val Thr Lys Ser Leu Phe
340 345 350
Gly Arg Lys Lys Lys Ser Lys Asn His Ala Gln Glu Arg Asp Glu Val
355 360 365
Ser Gly Leu Val Ser Gly Leu Met Arg Thr Ser Val Gly His Gln Asp
370 375 380
Ala Arg Pro Glu Ala Pro Ala Ala Ser Gly Pro Ala Pro Val Ser Leu
385 390 395 400
Val Glu Thr Ala Pro Glu Asp Ser Ser Pro Arg Gly Thr Leu Ala Ser
405 410 415
Ser Gly Asp Gly Phe Glu Glu Gly Leu Thr Val Ala Thr Val Val Glu
420 425 430
Ser Ala Leu Cys Ala Leu Arg Asn Cys Ile Ala Phe Met Pro Pro Ala
435 440 445
Glu Gln Asn Pro Ala Pro Leu Ala Gln Pro Glu Pro Leu Val Trp Val
450 455 460
Ser Lys Trp Val Asp Tyr Ser Asn Lys Phe Gly Phe Gly Tyr Gln Leu
465 470 475 480
Ser Ser Arg Arg Val Ala Val Leu Phe Asn Asp Gly Thr His Met Ala
485 490 495
Leu Ser Ala Asn Arg Lys Thr Val His Tyr Asn Pro Thr Ser Thr Lys
500 505 510
His Phe Ser Phe Ser Val Gly Ala Val Pro Arg Ala Leu Gln Pro Gln
515 520 525
Leu Gly Ile Leu Arg Tyr Phe Ala Ser Tyr Met Glu Gln His Leu Met
530 535 540
Lys Gly Gly Asp Leu Pro Ser Val Glu Glu Val Glu Val Pro Ala Pro
545 550 555 560
Pro Leu Leu Leu Gln Trp Val Lys Thr Asp Gln Ala Leu Leu Met Leu
565 570 575
Phe Ser Asp Gly Thr Val Gln Val Asn Phe Tyr Gly Asp His Thr Lys
580 585 590
Leu Ile Leu Ser Gly Trp Glu Pro Leu Leu Val Thr Phe Val Ala Arg
595 600 605
Asn Arg Ser Ala Cys Thr Tyr Leu Ala Ser His Leu Arg Gln Leu Gly
610 615 620
Cys Ser Pro Asp Leu Arg Gln Arg Leu Arg Tyr Ala Leu Arg Leu Leu
625 630 635 640
Arg Asp Arg Ser Pro Ala
645

Claims (7)

1.检测PLK3蛋白的试剂在制备检测被HIV感染的细胞产品中的应用，所述PLK3蛋白为PLK3-201蛋白，所述PLK3-201蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种能够抑制PLK3蛋白活性的物质在制备用于检测和清除HIV感染的细胞产品中的应用，其特征在于，所述PLK3蛋白为PLK3-201蛋白，所述PLK3-201蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.1所示；所述能够抑制PLK3蛋白活性的物质含有如下I-IV中至少一种物质：
I、小分子化合物；
II、PLK3蛋白抑制剂，包括如下：Wortmannin、Volasertib、BI2536、GW843682X、TAK960、Poloxin、LFM-A13、SEB13 Hydrochloride、TC-S 7005、TAK-960 dihydrochloride、SEB13和TAK-960 hydrochloride；
III、PLK3蛋白的特异性抗体或其抗原结合片段；
IV、作为PLK3蛋白靶向抑制剂的siRNA或者shRNA。
3.一种抑制PLK3蛋白活性的物质在制备检测被HIV感染的细胞的产品中的应用，所述产品通过抑制被感染的细胞中PLK3蛋白活性使该细胞释放可被检测的子代病毒实现；所述PLK3蛋白为PLK3-201蛋白，所述PLK3-201蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种抑制PLK3蛋白活性的物质在制备清除被HIV感染的细胞的产品中的应用，所述产品通过抑制被HIV感染的细胞中PLK3蛋白活性使该细胞释放子代病毒，进而能够被以杀伤性CD8+T细胞为主要效应细胞的人体免疫***特异性识别或者被相关抗病毒药物所识别实现；所述PLK3蛋白为PLK3-201蛋白，所述PLK3-201蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述被HIV感染的细胞包括：外周血细胞、CD4+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突状细胞和神经胶质细胞。
6.一种增加PLK3蛋白表达的试剂在制备抗HIV病毒的产品中的应用，所述产品通过增强PLK3蛋白的表达直接抑制被HIV感染的细胞内病毒的释放实现；所述PLK3蛋白为PLK3-201蛋白，所述PLK3-201蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述被HIV感染的细胞包括：外周血细胞、CD4+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、树突状细胞和神经胶质细胞。
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DE102005020105A1 (de) * 2005-04-25 2006-10-26 Schering Ag Neue Thiazolidinone ohne basischen Stickstoff, deren Herstellung und Verwendung als Arzneimittel
EP2215091B1 (en) * 2007-12-04 2016-03-30 Nerviano Medical Sciences S.r.l. Substituted dihydropteridin-6-one derivatives, process for their preparation and their use as kinase inhibitors
US8759010B2 (en) * 2008-09-26 2014-06-24 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Host cell kinases as targets for antiviral therapies against HCV infection
US20140011812A1 (en) * 2010-10-08 2014-01-09 The Broad Institute, Inc. Methods of Treating Inflammation
CN104069106A (zh) * 2013-03-27 2014-10-01 南通瑞思医药技术有限公司 苯甲酰胺类化合物在制备激活潜伏艾滋病病毒药物中的应用
WO2016135046A1 (en) * 2015-02-24 2016-09-01 Academisch Medisch Centrum Inhibitors of raf1, mst1, and pkl1 for use in the treatment of a retrovirus
EP3636781A1 (en) * 2018-10-10 2020-04-15 Heinrich-Pette-Institut Leibniz-Institut für Experimentelle Virologie Novel screening assays for identifying compounds resersing hiv-1 latency
CN109374896A (zh) * 2018-11-22 2019-02-22 中山大学孙逸仙纪念医院 Plk3***癌预后诊断检测试剂及其试剂盒
CN110343175B (zh) * 2019-06-26 2021-02-26 深圳市再生之城生物医药技术有限公司 抑制HIV-1病毒感染的scFv序列及其应用
CN111500706A (zh) * 2020-04-30 2020-08-07 劲牌有限公司 补肾蛋白或其编码基因在保健酒补肾功能评价中的应用

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