CN113528487B - 一种通过迭代饱和突变提高木聚糖酶热稳定性的方法 - Google Patents

一种通过迭代饱和突变提高木聚糖酶热稳定性的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种通过迭代饱和突变提高木聚糖酶热稳定性的方法，属于基因工程领域领域。本发明通过经过5轮筛选得到突变体A124P/A130N/T121V/T129L/I126V，最佳反应温度为60℃，较xynA上升10℃。野生型酶xynA的半衰期t1/2 50℃为18min，突变体在50℃下孵育1200min，酶活没有下降趋势。在55℃、60℃和下70℃孵育5min，仍然能保持76.8％、68.4％和35.5％的酶活力，且在pH 2.0‑9.0间很稳定，孵育1h仍能保持70％以上的酶活力，具有广阔的应用前景。

Description

一种通过迭代饱和突变提高木聚糖酶热稳定性的方法
技术领域
本发明涉及一种通过迭代饱和突变提高木聚糖酶热稳定性的方法，属于基因工程领域领域。
背景技术
木聚糖酶酶系包括β-1,4-D-木聚糖酶(EC 3.2.1.8)、β-D-1,4木糖苷酶(EC3.2.1.37)、α-L-***糖苷酶(EC 3.2.1.55)和α-L-葡萄糖醛酸苷酶(EC 3.2.1.139)，其中，β-1,4-D-木聚糖酶是最关键的酶，它以内切的方式将β-1,4-糖苷键断裂。该酶在食品、医药、饲料和新能源等方面应用广泛，但由于其热稳定性较差，在生产过程中限制了其使用。其中，11家族木聚糖酶由于其pH耐受性和底物特异性具有较大潜力，但热稳定性差是亟需解决的问题。
随着蛋白质工程技术和分子生物学的发展，已有许多学者运用这项技术成功对蛋白的热稳定性进行了改造。如专利CN104911163B中，发明人构建了5个突变体，最适温度提高了2-17℃，65-80℃范围内的半衰期提高了2-16倍。李治宏将11家族木聚糖酶loop区的T152突变为Phe，在70℃条件下活性比野生型提高27％。但目前的并没有热稳定性提高的同时保持pH稳定性的木聚糖酶。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是提供一种热稳定性提高且保持pH稳定性的木聚糖酶。
[技术方案]
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种木聚糖酶突变体，所述木聚糖酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
本发明还提供了编码上述木聚糖酶突变体的基因。
本发明还提供了携带上述基因的载体。
在一种实施方式中，所述载体以pET-22b(+)为表达载体。
本发明还提供了表达上述基因或上述载体的宿主细胞。
本发明还提供了一种重组菌，所述重组菌表达上述木聚糖酶突变体。
在一种实施方式中，所述重组菌以pET-22b(+)为表达载体。
在一种实施方式中，所述重组菌以大肠杆菌为宿主细胞。
在一种实施方式中，所述大肠杆菌包括E.coli JM109和E.coli BL21。
本发明还提供了一种提高木聚糖酶热稳定性的方法，所述方法为将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的木聚糖酶的第121位的苏氨酸突变为缬氨酸，第124位的丙氨酸突变为脯氨酸，第126位的异亮氨酸突变为缬氨酸，第129位的苏氨酸突变为亮氨酸和/或第130位的丙氨酸突变为天冬酰胺。
本发明还提供了一种用于降解木聚糖的组合物，所述组合物含有上述木聚糖酶突变体作为活性成分，以所述组合物的总重量为基准，所述木聚糖酶的含量为10-90重量％。
本发明还提供了上述木聚糖酶突变体，或上述基因，或上述载体，或上述重组菌，或上述组合物在降解木聚糖中的应用。
[有益效果]
1、本发明通过对氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的木聚糖酶的第121位苏氨酸，第124位丙氨酸，第126位异亮氨酸，第129位苏氨酸和第130位丙氨酸进行突变，得到的突变体酶分别在55℃、60℃和下70℃孵育5min，仍然能保持76.8％、68.4％和35.5％的酶活力；突变体酶在50℃下孵育1200min，酶活没有下降的趋势。
2、木聚糖酶突变体在pH 2.0-9.0间很稳定，孵育1h仍能保持70％以上的酶活力。
附图说明
图1：重组质粒pET-22b(+)-xynA的构建示意图。
图2：迭代饱和突变线路图。
图3：xynA和突变体的热稳定性图。
具体实施方式
木聚糖酶酶活测定：采用3，5-二硝基水杨酸测定木聚糖酶酶活的方法。将500μL稀释至适当浓度的酶液或发酵上清与500μL浓度为10mg/mL桦木木聚糖底物(pH 4.0)混合，在50℃条件下反应10min后用3，5-二硝基水杨酸试剂终止反应。将终止反应后的样品于沸水内反应5min后立即用水冷却至室温，并在545nm条件下测定吸光度，失活的酶液作为空白组。
酶活力单位(U/mL)定义：每分钟水解木聚糖所产生的1μmol还原糖所需的酶量。
比酶活代表每单位质量蛋白质的催化能力，能够反应酶活性大小，其值越大，表明酶活性越高，比活力的计算公式为：比酶活(U/mg)＝总酶活力单位数/mg总蛋白。
黑曲霉(A.niger)：公开于CN110438018B，保藏编号为CCTCC M 2018881。
实施例1木聚糖酶突变体的制备
(1)重组质粒pET-22b(+)-xynA的构建
以黑曲霉(A.niger)的基因组为模板，通过引物F1和R1进行PCR扩增得到基因片段xynA。以pET-22b(+)载体为模板，用intron primeF和intro primerR扩增得到pET-22b(+)载体片段，将基因片段xynA和pET-22b(+)载体片段分别进行琼脂糖凝胶电泳，并胶回收产物，将回收的基因片段xynA***至pET-22b(+)载体的酶切位点NcoI和XhoI之间，并用磷酸化酶和Solution I去除内含子得到表达载体pET-22b(+)-xynA(图1)。将表达载体pET-22b(+)-xynA转化至E.coli JM109，在含有50μg/mL氨苄青霉素的LB固体培养基培养过夜后，挑单克隆于50μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基培养12～16h，提取质粒，并进行测序验证，成功构建表达野生型木聚糖酶基因xynA(核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)的重组质粒pET-22b(+)-xynA。
PCR反应体系均为：正向引物(10μM)1μL，反向引物(10μM)1μL，模板DNA 1μL，2×Phanta Max Master Mix 25μL，加入双蒸水至50μL。
PCR扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性10s，55℃退火15s，72℃延伸50s，循环34次；最后72℃延伸5min。
(2)含有木聚糖酶突变体的重组质粒的构建及筛选
以步骤(1)构建的pET-22b(+)-xynA为模板，针对木聚糖酶xynA的第121～130位的单个氨基酸位点设计简并引物(表1)，分别通过PCR进行饱和突变，构建获得含有木聚糖酶突变体的重组质粒。
PCR反应体系均为：正向引物(10μM)1μL，反向引物(10μM)1μL，模板DNA 1μL，2×Phanta Max Master Mix 25μL，加入双蒸水至50μL。
PCR扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性10s，55℃退火15s，72℃延伸50s，循环34次；最后72℃延伸5min。
将含有木聚糖酶突变体的重组质粒转入大肠杆菌E.coli JM109感受态细胞37℃培养12～16h，挑取不同的转化子至含有LB培养基的96孔板中发酵培养，37℃、750r/min下恒温摇床振荡培养到OD600至0.8，加入终浓度为0.5mM的IPTG(异丙基硫代半乳糖苷，Isopropylβ-D-Thiogalactoside)，25℃、750rpm诱导24h后取上清初次测定酶活。再将上清置于55℃下孵育10min后再次测定酶活，计算在50℃和55℃测定的突变体酶的酶活相对值来表征突变体酶的热稳定性。
当木聚糖酶xynA的氨基酸位点第121、124、126、127、129、130发生单点突变时，可以提高木聚糖酶的热稳定性，其余位点不能提高木聚糖酶xynA的热稳定性。在最佳突变体A124P、I126V的基础上依次对剩余的正向突变位点121、127、129、130再次进行饱和突变，逐步形成更加稳定的结构(图2)，每次突变都进行热稳定性的筛选以得到最佳突变体。经过5轮饱和突变和热稳定性筛选后，最终得到重组质粒pET-22b(+)-A124P/A130N/T121V/T129L/I126V。突变的PCR反应体系和扩增程序与步骤(1)相同。
表1各质粒构建引物表
注：下划线为酶切位点。
实施例2：XynA和突变体的表达纯化及酶学性质测定
(1)表达与纯化
将实施例1构建的重组质粒pET-22b(+)-xynA和pET-22b(+)-A124P/A130N/T121V/T129L/I126V分别转入E.coli BL21感受态细胞中，并涂布于LB固体培养基37℃过夜培养，挑取单菌落接种于LB液体培养基，在37℃，220rpm条件下，过夜培养获得种子液，将种子液以体积比2％的量接种于30mL新鲜的PDA液体培养基中，在37℃，220rpm条件下，培养至OD600为0.8时，用终浓度为0.5mM的IPTG诱导并在25℃，220rpm条件下培养24h。收集发酵液12000rpm离心收集上清，并将上清用0.22μM滤膜过滤后经HisTrapTM FF纯化，脱盐柱Sephadex G25脱盐，获得纯化的野生型酶xynA和突变体酶。SDS-PAGE电泳显示纯化的野生型酶和突变体酶的分子量一致，且大小与理论值相同。
(2)酶学性质测定
最适反应温度的测定：用pH 7.5，浓度为50mM的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲体系，在不同温度下(40-60℃)进行酶促反应，分别测定酶活，以测定纯化的野生型酶xynA和突变体酶的最适温度。以最高酶活为100％，计算各温度下的相对酶活。结果显示，突变体A124P/A130N/T121V/T129L/I126V的最适反应温度为60℃，较野生型酶xynA上升了10℃。
温度稳定性的测定：将纯化的野生型酶xynA和突变体酶分别在50-70℃条件下孵育0-80min后置于冰上保存，测定各条件下的酶活。以孵育0min时的酶活为100％，计算各孵育时间下的相对酶活。突变体酶在55℃下孵育5min，仍然能保持76.8％的酶活力，在60℃下孵育5min，仍然能保持68.4％的酶活力，在70℃下孵育5min，仍然能保持35.5％的酶活力而野生型酶xynA在55℃下孵育10min时几乎全部失活(图3)。
半衰期为拟合野生型酶xynA和突变体酶在不同温度下的相对酶活的回归方程后计算得到的，结果显示，野生型酶xynA的半衰期t1/2 50℃为18min，突变体酶在50℃下孵育1200min，酶活没有下降趋势。
最适反应pH的测定：在40℃下，纯化的野生型酶xynA和突变体酶在不同pH值(pH2.0-9.0)的缓冲液中进行酶促反应以测定其最适pH值，所用缓冲液为Na2HPO4-柠檬酸(pH2.0-5.0)、Na2HPO4-NaH2PO4(pH 6.0-7.0)、Tris-HCl(pH 8.0)和甘氨酸-NaOH(pH 9.0)缓冲液。结果显示，突变体A124P/A130N/T121V/T129L/I126V和野生型酶xynA的最适pH值保持一致，均为4.0。
pH稳定性的测定：将酶液在不同pH(pH 2.0-9.0)的缓冲液中于40℃下处理1h，再测定酶活性以研究酶的pH稳定性，所用缓冲液如上所述。结果显示，突变体酶在pH 2.0-9.0间均很稳定，保持了70％以上的酶活力。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
SEQUENCE LISTING
<110> 江南大学
<120> 一种通过迭代饱和突变提高木聚糖酶热稳定性的方法
<130> BAA210983A
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 564
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
tcgaccccga gctcgaccgg cgagaacaac ggcttctact actccttctg gaccgacggc 60
ggtggcgacg tgacctacac caacggagat gctggtgcct acactgttga gtggtccaac 120
gtgggcaact ttgtcggtgg aaagggctgg aaccccggaa gtgcgcagga catcacctac 180
agcggcacct tcacccctag cggcaacggc tatctctccg tctatggctg gaccactgac 240
cccctgatcg agtactacat cgtcgagtcc tacggcgact acaaccccgg cagtggaggc 300
acatacaagg gcaccgtcac ctcggacgga tccgtttacg atatctacac ggctacccgt 360
accaatgctg cttccattca gggaaccgct accttcactc agtactggtc cgtccgccag 420
aacaagagag ttggcggaac tgttaccacc tccaaccact tcaatgcttg ggctaagctg 480
ggaatgaacc tgggtactca caactaccag atcgtggcta ccgagggtta ccagagcagt 540
ggatcttcgt ccatcactgt tcag 564
<210> 2
<211> 188
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Ser Thr Pro Ser Ser Thr Gly Glu Asn Asn Gly Phe Tyr Tyr Ser Phe
1 5 10 15
Trp Thr Asp Gly Gly Gly Asp Val Thr Tyr Thr Asn Gly Asp Ala Gly
20 25 30
Ala Tyr Thr Val Glu Trp Ser Asn Val Gly Asn Phe Val Gly Gly Lys
35 40 45
Gly Trp Asn Pro Gly Ser Ala Gln Asp Ile Thr Tyr Ser Gly Thr Phe
50 55 60
Thr Pro Ser Gly Asn Gly Tyr Leu Ser Val Tyr Gly Trp Thr Thr Asp
65 70 75 80
Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr Ile Val Glu Ser Tyr Gly Asp Tyr Asn Pro
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Thr Tyr Lys Gly Thr Val Thr Ser Asp Gly Ser Val
100 105 110
Tyr Asp Ile Tyr Thr Ala Thr Arg Thr Asn Ala Ala Ser Ile Gln Gly
115 120 125
Thr Ala Thr Phe Thr Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Asn Lys Arg Val
130 135 140
Gly Gly Thr Val Thr Thr Ser Asn His Phe Asn Ala Trp Ala Lys Leu
145 150 155 160
Gly Met Asn Leu Gly Thr His Asn Tyr Gln Ile Val Ala Thr Glu Gly
165 170 175
Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ile Thr Val Gln
180 185
<210> 3
<211> 188
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Ser Thr Pro Ser Ser Thr Gly Glu Asn Asn Gly Phe Tyr Tyr Ser Phe
1 5 10 15
Trp Thr Asp Gly Gly Gly Asp Val Thr Tyr Thr Asn Gly Asp Ala Gly
20 25 30
Ala Tyr Thr Val Glu Trp Ser Asn Val Gly Asn Phe Val Gly Gly Lys
35 40 45
Gly Trp Asn Pro Gly Ser Asn Gln Ser Ile Asn Tyr Ser Gly Thr Phe
50 55 60
Thr Pro Ser Gly Asn Gly Tyr Leu Ser Val Tyr Gly Trp Thr Thr Asp
65 70 75 80
Pro Leu Ile Glu Tyr Tyr Ile Val Glu Ser Tyr Gly Asp Tyr Asn Pro
85 90 95
Gly Ser Gly Gly Thr Tyr Lys Gly Thr Val Thr Ser Asp Gly Ser Val
100 105 110
Tyr Asp Ile Tyr Thr Ala Thr Arg Thr Asn Ala Ala Ser Ile Gln Gly
115 120 125
Thr Ala Thr Phe Thr Gln Tyr Trp Ser Val Arg Gln Asn Lys Arg Val
130 135 140
Gly Gly Thr Val Thr Thr Ser Asn His Phe Asn Ala Trp Ala Lys Leu
145 150 155 160
Gly Met Asn Leu Gly Thr His Asn Tyr Gln Ile Val Ala Thr Glu Gly
165 170 175
Tyr Gln Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ile Thr Val Gln
180 185

Claims (10)

1.一种热稳定性提高的木聚糖酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列为将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的木聚糖酶的第121位的苏氨酸突变为缬氨酸，第124位的丙氨酸突变为脯氨酸，第126位的异亮氨酸突变为缬氨酸，第129位的苏氨酸突变为亮氨酸和第130位的丙氨酸突变为天冬酰胺获得。
2.编码权利要求1所述木聚糖酶突变体的基因。
3.携带权利要求2所述基因的载体。
4.表达权利要求2所述基因或权利要求3所述载体的宿主细胞。
5.一种重组菌，其特征在于，表达权利要求1所述的木聚糖酶突变体。
6.如权利要求5所述的一种重组菌，其特征在于，以pET-22b(+)为表达载体。
7.如权利要求5所述的一种重组菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主细胞。
8.一种提高木聚糖酶热稳定性的方法，其特征在于，将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的木聚糖酶的第121位的苏氨酸突变为缬氨酸，第124位的丙氨酸突变为脯氨酸，第126位的异亮氨酸突变为缬氨酸，第129位的苏氨酸突变为亮氨酸和第130位的丙氨酸突变为天冬酰胺。
9.一种用于降解木聚糖的组合物，其特征在于，该组合物含有权利要求1所述的木聚糖酶突变体作为活性成分，以所述组合物的总重量为基准，所述木聚糖酶突变体的含量为10-90重量％。
10.权利要求1所述的木聚糖酶突变体、权利要求2所述的基因、权利要求3所述的载体、权利要求5-7中任意一项所述的重组菌以及权利要求9所述的组合物在降解木聚糖中的应用。
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109355272A (zh) * 2018-12-28 2019-02-19 江南大学 一种催化效率提高的木聚糖酶突变体

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