CN113447591B - 一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法 - Google Patents

一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法，包括：将药物制剂样品分为第一药物制剂样品和/或第二药物制剂样品，在第一药物制剂样品和/或第二药物制剂样品中分别加入有机溶剂溶解后超声提取、冷却、摇匀、过滤，取续滤液分别获得第一供试品溶液和/或第二供试品溶液，再采用高效液相色谱法分别进行检测，确定第一供试品溶液中石菖蒲的主要活性成分：β‑细辛醚和/或第二供试品溶液中石菖蒲的主要活性成分：α‑细辛醚的含量。本发明提供的一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法，精密度、重现性、稳定性良好，准确可靠，可真实反映药物制剂中石菖蒲的质量差异，完善药物制剂的质量控制体系。

Description

一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法
技术领域
本发明属于中药成分检测的技术领域，涉及一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法，具体涉及针对药物制剂中石菖蒲的主要活性成分：β-细辛醚和α-细辛醚的检测方法。
背景技术
药物制剂首载于唐·孙思邈的《备急千金要方》：“主好忘方，远志、人参(各四分)、茯苓(二两)、菖蒲(一两)，上四味治下筛，饮服方寸匕，日三。”用于心气不足、神志不宁、焦虑失眠、抑郁怔忡等中医情志性疾病，类似于西医的抑郁症，是中医益智养心、安神定志的基本方剂。药物制剂现代临床常用于治疗抑郁症、焦虑症、痴呆症，其临床表现多为神志不宁、精神恍惚、焦虑不安、健忘失眠、惊悸怔忡等症。
药物制剂为棕黄色粉末，由人参、远志、石菖蒲、茯苓4味中药组成。石菖蒲是天南星科植物石菖蒲Acorus tatarinowii Schott的干燥根茎，含有挥发油、有机酸、萜类、黄酮等成分，其中最主要的活性成分是挥发油，具有豁痰开窍、化湿开胃、醒神益智的功效，主要有β-细辛醚、α-细辛醚等。由于目前缺乏针对药物制剂中石菖蒲主要有效成分的定量检测方法，因此有必要建立相应的方法，对石菖蒲进行质量控制，完善药物制剂的质量控制体系。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法，用于解决现有技术中缺乏对药物制剂中石菖蒲的主要活性成分：β-细辛醚和α-细辛醚的含量测定方法的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法，包括：将药物制剂样品分为第一药物制剂样品和/或第二药物制剂样品，在第一药物制剂样品和/或第二药物制剂样品中分别加入有机溶剂溶解后超声提取、冷却、摇匀、过滤，取续滤液分别获得第一供试品溶液和/或第二供试品溶液，再采用高效液相色谱法分别进行检测，确定第一供试品溶液中石菖蒲的主要活性成分：β-细辛醚和/或第二供试品溶液中石菖蒲的主要活性成分：α-细辛醚的含量。
较佳地，所述β-细辛醚的CAS号为5273-86-9，α-细辛醚的CAS号为2883-98-9。
较佳地，所述第一药物制剂样品加入的质量与有机溶剂加入的体积之比为0.25～8:25，g/mL。优选地，所述第一药物制剂样品加入的质量与有机溶剂加入的体积之比为0.5:25，g/mL。
较佳地，所述第二药物制剂样品加入的质量与有机溶剂加入的体积之比为0.25～12:25，g/mL。优选地，所述第二药物制剂样品加入的质量与有机溶剂加入的体积之比为4：25，g/mL。
较佳地，所述有机溶剂选自甲醇、70％甲醇、50％甲醇、乙醇或乙酸乙酯中的一种。优选地，所述有机溶剂为甲醇。
上述70％甲醇、50％甲醇分别为体积百分比为70％、50％的甲醇水溶液。
较佳地，所述超声提取时间为30～60min。优选地，所述超声提取时间为30min。
较佳地，所述超声提取的功率为300～400W，所述超声提取的频率为50～60kHz。优选地，所述超声提取的功率为350W，所述超声提取的频率为53kHz。
较佳地，所述第一药物制剂样品和/或第二药物制剂样品加入有机溶剂后，需精密称重。
较佳地，所述冷却后需再称重，并用有机溶剂补足失重。
较佳地，所述过滤是指：取摇匀后溶液的上清液过滤膜，放弃初滤液后，即得续滤液。
更优选地，所述滤膜为0.22μm滤膜。
较佳地，所述高效液相色谱法分别进行检测，包括以下步骤：
1)配制第一对照品溶液和/或第二对照品溶液：将β-细辛醚对照品和/或α-细辛醚对照品，分别加入有机溶剂溶解并定容，配成第一对照品溶液和/或第二对照品溶液；
2)样品检测：采用高效液相色谱法分别检测第一供试品溶液和/或第二供试品溶液、第一对照品溶液和/或第二对照品溶液，比较第一供试品溶液与第一对照品溶液的保留时间和/或第二供试品溶液与第二对照品溶液的保留时间进行定性，采用外标法进行定量，确定第一供试品溶液中β-细辛醚和/或第二供试品溶液中α-细辛醚的含量。
优选地，步骤1)中，所述有机溶剂选自甲醇、70％甲醇、50％甲醇、乙醇或乙酸乙酯中的一种。更优选地，所述有机溶剂为甲醇。
上述70％甲醇、50％甲醇分别为体积百分比为70％、50％的甲醇水溶液。
优选地，步骤1)中，所述第一对照品溶液中β-细辛醚的含量范围为10.125～324μg/mL。
优选地，步骤1)中，所述第二对照品溶液中α-细辛醚的含量范围为1.60～51.32μg/mL。
优选地，步骤1)中，所述第一对照品溶液和/或第二对照品溶液采用逐级稀释制得。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，采用检测器为二极管阵列检测器(DAD)。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，采用色谱柱为C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)，色谱柱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。
更优选地，所述高效液相色谱法中，采用色谱柱选自Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)、Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)或WatersC18色谱柱(4.6×250mm，5μm)中的一种，优选为AgilentZORBAX SB-C18色谱柱。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，采用检测器波长为250～260nm，优选为254nm。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，采用柱温为25～40℃。更优选地，所述柱温为35℃。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，流动相采用流速为1.3～1.7ml/min。更优选地，所述流动相采用流速为1.5ml/min。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，进样量为5～20μL。更优选地，所述进样量为10μL。
优选地，步骤2)中，所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.09～0.11％磷酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.09～0.11％磷酸水溶液；分析时间为25-60min；等度洗脱。
更优选地，所述高效液相色谱法中，流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.1％磷酸水溶液；分析时间为30min；等度洗脱。
更优选地，所述等度洗脱中，A相：B相体积比为35～45：55～65。
进一步优选地，所述等度洗脱中，A相：B相体积比为40：60。
上述0.09～0.11％磷酸水溶液为体积百分数为0.09～0.11％的磷酸水溶液。上述0.1％磷酸水溶液为体积百分数为0.1％的磷酸水溶液。优选地，步骤2)中，所述外标法包括以下步骤：
A)按步骤1)制备一系列不同浓度的第一对照品溶液和/或第二对照品溶液，分别进行高效液相色谱法(HPLC)检测，获得β-细辛醚和/或α-细辛醚的色谱峰面积与对应β-细辛醚和/或α-细辛醚的浓度之间线性关系，绘制相应的标准工作曲线，计算得到β-细辛醚和/或α-细辛醚的标准工作曲线的回归方程；
B)将第一供试品溶液和/或第二供试品溶液进行高效液相色谱法(HPLC)检测，将获得的β-细辛醚和/或α-细辛醚的色谱峰面积，代入步骤A)中相应的β-细辛醚和/或α-细辛醚的标准工作曲线的回归方程，计算得到第一供试品溶液中β-细辛醚和/或第二供试品溶液中α-细辛醚的含量。
更优选地，所述标准工作曲线中，以β-细辛醚和/或α-细辛醚的色谱峰面积为纵坐标(Y轴)，其相应β-细辛醚和/或α-细辛醚的浓度为横坐标(X轴)。
本发明第二方面提供一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法在药物制剂中石菖蒲的质量检测中的用途。
所述药物制剂为含有石菖蒲的药物制剂，具体包括且不限于开心散等。
本发明第三方面提供一种药物制剂中石菖蒲的质量检测方法，所述药物制剂中石菖蒲以β-细辛醚(C12H16O3)计≥0.06％，以α-细辛醚(C12H16O3)计≥0.04％。
如上所述，本发明提供的一种药物制剂中石菖蒲的活性成分的检测方法，采用优化条件的前处理和仪器检测方法，对药物制剂中石菖蒲中主要活性成分：β-细辛醚和α-细辛醚进行准确的定量定性检测。本方法通过两次样品制备，即制备两份不同料液比的供试品溶液，进行2次液相色谱分析测定，分别测定药物制剂中β-细辛醚和α-细辛醚的含量。该种方法精密度、重现性、稳定性良好，结果准确可靠，可真实反映药物制剂中石菖蒲的质量差异，确保批次间生产工艺与质量的稳定性，全面完善药物制剂的质量控制体系。
附图说明
图1显示为本发明中实施例2的β-细辛醚专属性色谱图
图2显示为本发明中实施例2的α-细辛醚专属性色谱图
图3显示为本发明中实施例3的β-细辛醚的浓度-峰面积曲线图
图4显示为本发明中实施例3的α-细辛醚的浓度-峰面积曲线图
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
以下实施例使用的试剂和仪器如下：
1、试剂
药物制剂(上海和黄药业有限公司)；β-细辛醚对照品(纯度99.3％，中国食品药品检定研究院，批号为112018-201802)；α-细辛醚对照品(纯度≥98％，上海诗丹德标准技术服务有限公司，批号为4940)；乙腈(色谱纯，批号为JA089830，默克公司)；磷酸(色谱纯，国药)；甲醇、乙醇、乙酸乙酯(分析纯，国药)；去离子水(纯水机自制)。
2、仪器
SK7200H超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；ME204E/02型电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；Agilent 1260高效液相色谱仪(美国Agilent科技有限公司)、Agilent 1260II高效液相色谱仪(美国Agilent科技有限公司)。
对于药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的含量，包括以下的测定过程。
1、供试品溶液的制备
取药物制剂样品分成第一药物制剂样品和/或第二药物制剂样品，分别加入有机溶剂溶解后密封，超声提取(300～400w，50～60kHz)30～60分钟、冷却、摇匀、取上清液过滤，取续滤液分别获得第一供试品溶液和/或第二供试品溶液。其中，第一药物制剂样品加入的质量与有机溶剂加入的体积之比为0.25～8:25，g/mL。第二药物制剂样品加入的质量与有机溶剂加入的体积之比为0.25～12:25，g/mL。有机溶剂选自甲醇、70％甲醇、50％甲醇、乙醇或乙酸乙酯中的一种。
2、对照品溶液的制备
将β-细辛醚对照品加入有机溶剂溶解并定容，配制第一对照品溶液，其含量范围为10.125～324μg/mL。将α-细辛醚对照品加入有机溶剂溶解并定容，配制第二对照品溶液，其含量范围为1.60～51.32μg/mL。上述有机溶剂选自选自甲醇、70％甲醇、50％甲醇、乙醇或乙酸乙酯中的一种。
3、测定
采用高效液相色谱法分别检测第一供试品溶液和/或第二供试品溶液、第一对照品溶液和/或第二对照品溶液，比较第一供试品溶液与第一对照品溶液的保留时间和/或第二供试品溶液与第二对照品溶液的保留时间进行定性，采用外标法进行定量，即将一系列不同浓度的第一对照品溶液和/或第二对照品溶液，分别进行高效液相色谱法(HPLC)检测，获得β-细辛醚和/或α-细辛醚的色谱峰面积与对应β-细辛醚和/或α-细辛醚的浓度之间线性关系，绘制相应的标准工作曲线，计算得到β-细辛醚和/或α-细辛醚的标准工作曲线的回归方程。再将第一供试品溶液和/或第二供试品溶液进行高效液相色谱法(HPLC)检测，将获得的β-细辛醚和/或α-细辛醚的色谱峰面积，代入相应的β-细辛醚和/或α-细辛醚的标准工作曲线的回归方程，计算得到第一供试品溶液中β-细辛醚和/或第二供试品溶液中α-细辛醚的含量。
其中，高效液相色谱法包括以下检测条件：
检测器为二极管阵列检测器(DAD)；谱柱为C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)，色谱柱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；检测器波长为250～260nm；柱温为25～40℃；流速为1.3～1.7ml/min；进样量为5～20μL；流动相为乙腈-0.09～0.11％磷酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.09～0.11％磷酸水溶液；分析时间为25-60min；等度洗脱。等度洗脱中，A相：B相体积比为35～45：55～65。
实施例1
1、供试品溶液的制备
取药物制剂样品分成第一药物制剂样品和第二药物制剂样品。
取第一药物制剂样品0.50g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密封，超声处理(350w，53kHz)30分钟，冷却、摇匀、取上清液过0.22μm滤膜，取续滤液获得第一供试品溶液1#。
取第二药物制剂样品4.00g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密封，超声处理(350w，53kHz)30分钟，摇匀，取上清液过0.22μm滤膜，取续滤液获得第二供试品溶液1#。
2、对照品溶液的制备
将β-细辛醚对照品精密称定，加甲醇溶解并定容，配制成第一对照品溶液1#，其含量范围为10.125～324μg/mL。将α-细辛醚对照品精密称定，加甲醇溶解并定容，配制成第二对照品溶液1#，其含量范围为1.60～51.32μg/mL。
3、测定
采用高效液相色谱法分别检测第一供试品溶液1#、第一对照品溶液1#，比较第一供试品溶液1#与第一对照品溶液1#的保留时间进行定性，采用外标法进行定量，即将一系列不同浓度的第一对照品溶液1#，分别进行高效液相色谱法(HPLC)检测，获得β-细辛醚的色谱峰面积与对应β-细辛醚的浓度之间线性关系，绘制相应的标准工作曲线，计算得到β-细辛醚的标准工作曲线的回归方程。再将第一供试品溶液1#进行高效液相色谱法(HPLC)检测，将获得的β-细辛醚的色谱峰面积，代入相应的β-细辛醚的标准工作曲线的回归方程，计算得到第一供试品溶液1#中β-细辛醚的含量。
采用高效液相色谱法分别检测第二供试品溶液1#、第二对照品溶液1#，比较第二供试品溶液1#与第二对照品溶液1#的保留时间进行定性，采用外标法进行定量，即将一系列不同浓度的第二对照品溶液1#，分别进行高效液相色谱法(HPLC)检测，获得α-细辛醚的色谱峰面积与对应α-细辛醚的浓度之间线性关系，绘制相应的标准工作曲线，计算得到α-细辛醚的标准工作曲线的回归方程。再将第二供试品溶液1#进行高效液相色谱法(HPLC)检测，将获得的α-细辛醚的色谱峰面积，代入相应的α-细辛醚的标准工作曲线的回归方程，计算得到第二供试品溶液1#中α-细辛醚的含量。
其中，高效液相色谱法包括以下检测条件：
检测器为二极管阵列检测器(DAD)；谱柱为Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(4.6×250mm，5μm；内径×柱长，填充剂粒径)；检测器波长为254nm；柱温为35℃；流速为1.5ml/min；进样量为10μL；流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.1％磷酸水溶液；分析时间为30min；等度洗脱。等度洗脱中，A相：B相体积比为40：60。
实施例2
取批号20200514的药物制剂样品，采用实施例1中的步骤1中配制第一供试品溶液和第二供试品溶液。取除去石菖蒲的药物制剂阴性样品，采用实施例1中的步骤1中配制第一阴性供试品溶液和第二阴性供试品溶液。
同时，按实施例1中的步骤2中配制第一对照品溶液和第二对照品溶液，其中，第一对照品溶液中β-细辛醚含量为10.125μg/mL，第二对照品溶液中α-细辛醚含量为12.83μg/mL。
取第一供试品溶液、第一对照品溶液、第一阴性供试品溶液分别按实施例1中步骤3进行测定，比较保留时间进行定性，具体结果见图1。取第二供试品溶液、第二阴性供试品溶液、第二对照品溶液分别按实施例1中步骤3进行测定，比较保留时间进行定性，具体结果见图2。由图1、2所示，确定表明阴性样品对供试品无干扰，专属性良好。
实施例3
对本发明的药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法进行方法学验证，其性能指标结果如下。
1、检测方法的线性关系
分别精密称取β-细辛醚、α-细辛醚对照品适量，按实施例1中步骤2加甲醇配成一系列不同浓度的第一对照品溶液和第二对照品溶液。按实施例1中步骤3的色谱条件，精密吸取10μl第一对照品溶液和第二对照品溶液注入高效液相色谱仪，以β-细辛醚和α-细辛醚的浓度为横坐标，β-细辛醚和α-细辛醚的色谱峰面积为纵坐标作图，测定并计算获得2种成分的标准回归方程、相关系数和线性范围，具体结果见表1、图3-4。根据表1、图3-4可知，β-细辛醚的线性方程为：y＝20.39906x+22.17463，r＝0.99996，表明在0.10125～3.24μg的线性范围内具有良好的线性关系；α-细辛醚的线性方程为：y＝27.44851x+2.58433，r＝0.99999，表明在0.0160375～0.5132μg。
表1
2、稳定性
取药物制剂样品(批号：20200514)，按实施例1中步骤1制备获得第一供试品溶液和第二供试品溶液，按实施例1中步骤3的色谱条件，分别于0h、2h、4h、6h、12h、18h、24h、36h进样分析，测定峰面积，并计算β-细辛醚和α-细辛醚的含量，稳定性具体结果见表2。结果表明，β-细辛醚含量的RSD为0.17％，α-细辛醚含量的RSD为0.41％。表明第一供试品溶液和第二供试品溶液含量的RSD均小于0.5％，在36h内基本稳定，说明该方法稳定性良好。
表2
3、精密度
3.1仪器精密度
取β-细辛醚、α-细辛醚对照品适量，精密称定，按实施例1中步骤2加入甲醇配制成一定浓度的第一对照品溶液和第二对照品溶液，按照实施例1中步骤3的色谱条件，分别连续进样6次，测定峰面积，结果见表3。由表3所示，β-细辛醚6次进样峰面积的RSD为0.15％，α-细辛醚6次进样峰面积的RSD为0.12％，2种成分的色谱峰面积RSD均小于0.2％，表明仪器精密度良好。
表3
3.2重复性
取同一批药物制剂样品(批号：20200514)6份，按实施例1中步骤1制备获得6份第一供试品溶液和6份第二供试品溶液，按实施例1中步骤3的色谱条件，分别进样分析，测定峰面积，重复性具体结果见表4。结果表明，2种成分的色谱峰面积RSD均小于0.4％，说明该方法重复性良好。
表4
3.3中间精密度
由不同实验员取同一批的药物制剂样品，采用实施例1中的步骤1中各配制2份第一供试品溶液和2份第二供试品溶液，按照实施例1中步骤3的色谱条件，在不同液相色谱仪进行试验，结果见表5。不同实验员及不同仪器试验测得的样品中2种成分含量的RSD均小于5％，表明中间精密度良好。
表5
4、加样回收率
精密称取9份已知浓度的药物制剂(批号20200514)0.25g，分别按含量的50％、100％、150％三个水平加入β-细辛醚的对照品溶液，每个水平平行三份；精密称取9份已知浓度的药物制剂(批号20200514)2.00g，分别按含量的50％、100％、150％三个水平加入α-细辛醚的对照品溶液，每个水平平行三份。采用实施例1中的步骤1中分别配制第一供试品和第二供试品溶液，按照实施例1中步骤3的色谱条件，进行分析，结果见表6。由表6可知，β-细辛醚的加样回收率在90～108％之间，α-细辛醚的加样回收率在80～115％之间，符合2020版《中国药典》(四部)规定的回收率限度，说明本方法的回收率良好。
表6
实施例4
对药物制剂批号S210301R01的6个不同取样点样品采用实施例1中的步骤1中配制第一供试品溶液和第二供试品溶液，按照实施例1中步骤3的色谱条件，进行分析。其含量测定结果见表7。由表7可知，S210301R01批药物制剂6个不同取样点样品中的β-细辛醚和α-细辛醚含量的RSD均小于5％，表明S210301R01批开心散粉满足混合均匀度要求。
表7药物制剂样品中的含量均匀度测定结果
综上所述，本发明提供的一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法，精密度、重现性、稳定性良好，准确可靠，可真实反映药物制剂中石菖蒲的质量差异，完善药物制剂的质量控制体系。所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (4)

1.一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法，包括：将药物制剂样品分为第一药物制剂样品和第二药物制剂样品，在第一药物制剂样品和第二药物制剂样品中分别加入有机溶剂溶解后超声提取、冷却、摇匀、过滤，取续滤液分别获得第一供试品溶液和第二供试品溶液，再采用高效液相色谱法分别进行检测，确定第一供试品溶液中石菖蒲的主要活性成分：β-细辛醚和第二供试品溶液中石菖蒲的主要活性成分：α-细辛醚的含量；
所述药物制剂为开心散；
所述高效液相色谱法分别进行检测，包括以下步骤：
1）配制第一对照品溶液和第二对照品溶液：将β-细辛醚对照品和α-细辛醚对照品，分别加入有机溶剂溶解并定容，配成第一对照品溶液和第二对照品溶液；
2）样品检测：采用高效液相色谱法分别检测第一供试品溶液和第二供试品溶液、第一对照品溶液和第二对照品溶液，比较第一供试品溶液与第一对照品溶液的保留时间和第二供试品溶液与第二对照品溶液的保留时间进行定性，采用外标法进行定量，确定第一供试品溶液中β-细辛醚和第二供试品溶液中α-细辛醚的含量；
所述第一药物制剂样品加入的质量与有机溶剂加入的体积之比为0.5:25，g/mL；
所述第二药物制剂样品加入的质量与有机溶剂加入的体积之比为4：25，g/mL；
所述有机溶剂为甲醇；
步骤2）中，所述高效液相色谱法中，检测器为二极管阵列检测器；色谱柱选自AgilentZORBAX SB-C18色谱柱、Agilent Eclipse Plus C18色谱柱或Waters XBridge® C18色谱柱中的一种，色谱柱规格为4.6×250 mm、5μm，色谱柱中填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；检测器波长为254nm；流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.1%磷酸水溶液；分析时间为30min；等度洗脱；
所述等度洗脱中，A相：B相体积比为40：60；
步骤2）中，所述高效液相色谱法中，柱温为35℃；流速为1.5ml/min；进样量为10μL。
2.根据权利要求1所述的一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法，其特征在于，超声提取时间为30~60min。
3.根据权利要求1所述的一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法，其特征在于，步骤1）中，所述第一对照品溶液中β-细辛醚的含量范围为10.125~324μg/mL；所述第二对照品溶液中α-细辛醚的含量范围为1.60~51.32μg/mL。
4.根据权利要求1-3任一所述的一种药物制剂中石菖蒲的主要活性成分的检测方法在药物制剂中石菖蒲的质量检测中的用途。
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