CN113425635A

CN113425635A - 一种香薷提取物、制备方法及其应用

Info

Publication number: CN113425635A
Application number: CN202110504883.XA
Authority: CN
Inventors: 韦敏; 汤毅; 宋萍萍; 汤承翰; 颜露; 钱怡云; 王晨
Original assignee: Gansu Fuleige Vanilla Development Co ltd; Institute of Botany of CAS
Current assignee: Gansu Fuleige Vanilla Development Co ltd; Institute of Botany of CAS
Priority date: 2021-05-10
Filing date: 2021-05-10
Publication date: 2021-09-24

Abstract

本发明提供了一种香薷提取物、制备方法及其应用，属于植物提取物技术领域，其包含以下组分：芹菜素0.62‑3.78mg/g、黄芩素‑7‑甲醚2.19‑4.44 mg/g、槲皮素30‑120μg/g、山奈酚0.79‑3.29 mg/g、木犀草素34‑120μg/g、金圣草黄素4.22‑6.67μg/g，通过渗漉辅助酶解工艺制备而成。本发明的香薷提取物可通过抑制酪氨酸酶活性而达到美白作用。

Description

一种香薷提取物、制备方法及其应用

技术领域

本发明属于植物提取物技术领域，尤其涉及一种美白植物提取物及其制备方法和应用。

背景技术

随着人们生活水平和审美标准的提高，光洁白皙的肌肤越来越被女性所推崇，在日化产品市场中美白类产品所占的比重也越来越大。由于天然功效物质具有安全、健康的性能，因此含有天然植物美白功效成分的日化产品逐步成为人们推崇的消费对象和行业的产品导向，常用商品化的天然美白提取物为光果甘草根提取物、牡丹根提取物和茶叶提取物等。

天然来源的酪氨酸酶抑制剂由于其安全、有效，能够有效减缓和防止黑色素生成，从而越来越受到人们广泛的关注，但目前可用于商业用途的天然酪氨酸酶抑制剂种类很少，较为公认的美白剂熊果苷和VC仍存在一定的局限性，因此日化行业急需开发稳定性强、绿色、安全高效且对人体无不良反应的纯天然美白剂。

香薷系唇形科植物，为一年生草本。《中国药典》指定的入药植物有石香薷Moslachinensis Maxim和江香薷Mosla chinensis‘Jiangxiangru’2个品种，药用部位均为其干燥地上部分，前者习称“青香薷”，后者习称“江香需”。本品味辛，微温；归肺、胃经，具有发汗解表、化湿和中的功效，为药食两用的植物药。虽然对香薷的研究已经进入成品药领域，但由于植物的化学成分纷繁杂样且具有显著的生物活性功能，故对香薷的化学成分及生物活性还需要进一步探究。

金圣草黄素是天然黄酮类化合物,存在于很多植物中，如从怀庆地黄新鲜的叶和根、白沙蒿、粘毛黄芩、忍冬、紫苜蓿叶、酸藤子、酸浆、菊科蓝刺头、棕榈叶、胡萝卜的根、牡丹花瓣、槟榔、菊花脑、淫羊藿和冬凌草等中都可以分离出金圣草黄。金圣草黄素具有抗过敏和抗炎活性，其在化妆品领域已报道其能有效地防护因紫外线引起的损伤、具有强的紫外线吸收作用、抗炎、抗过敏等作用，但未见其具有美白活性报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种香薷提取物、提取分离方法及其应用，本发明的香薷提取物能有效抑制酪氨酸酶活性，可用于制备美白化妆品，应用前景好。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种香薷提取物，包含以下组分：芹菜素0.62-3.78mg/g、黄芩素-7-甲醚2.19-4.44mg/g、槲皮素30-120μg/g、山奈酚0.79-3.29mg/g、木犀草素34-120μg/g、金圣草黄素4.22-6.67μg/g。

本发明的第二个目的是提供上述香薷提取物的提取分离方法，包括以下步骤：(1)将香薷粉末置于乙醇溶液中采用渗漉法进行提取，得乙醇提取液，回收乙醇溶剂，得到第一浸膏； (2)向所述第一浸膏中加少量水，形成悬浮液，将悬浮液调节pH值在4.5-6.0之间；(3)悬浮液加入适量纤维素酶，40-50℃水浴反应60min；(4)转移反应液置于索氏提取器，加入95％乙醇，浸提90min，冷却后过滤分离，将滤液浓缩制备得到目的提取物。该渗漉辅助酶解工艺黄酮类成分转移率高，提取物纯度高。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

1、本发明的香薷提取物，通过渗漉辅助酶解工艺制备而成，该方法比其他溶剂提取方法提取率更高，而提取得到的提取物酪氨酸酶抑制活性更高，显示其具有更好的美白活性。

2、本发明的香薷提取物，包含以下组分：芹菜素0.62-3.78mg/g、黄芩素-7-甲醚2.19-4.44 mg/g、槲皮素30-120μg/g、山奈酚0.79-3.29mg/g、木犀草素34-120μg/g、金圣草黄素4.22-6.67 μg/g。这种提取物的酪氨酸酶抑制活性、黑色素细胞抑制活性比该提取物中的任一种成分均高，显示该提取物中化合物有协同增效作用。

附图说明

图1为香薷提取物UPLC-DAD-QTOF MS色谱图(图A：330nm图谱图B：254nm图谱)

具体实施方式

为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处描述的具体实施例仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术术语和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同，本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

实施例1香薷提取物的制备

(1)将香薷粉末置于60％乙醇溶液中采用渗漉法进行提取，得乙醇提取液，回收乙醇溶剂，得到第一浸膏；(2)向所述第一浸膏中加少量水，形成悬浮液，将悬浮液调节PH值在4.5-6.0之间；(3)悬浮液加入适量纤维素酶，45℃水浴反应60min；(4)转移反应液置于索氏提取器，加入95％乙醇，浸提90min，冷却后过滤分离，将滤液浓缩制备得到目的提取物 (以下称样品1)。

实施例2香薷提取物不同制备方法比较

将香薷粉末置于60％乙醇溶液中采用渗漉法进行提取，得乙醇提取液，回收乙醇溶剂，得到醇提样品(以下称样品2)

将香薷粉末置于60％乙醇溶液中采用渗漉法进行提取，得乙醇提取液，回收乙醇溶剂，得到第一浸膏，将第一浸膏用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，回收得到乙酸乙酯样品(以下称样品 3)

将香薷粉末置于60％乙醇溶液中采用渗漉法进行提取，得乙醇提取液，回收乙醇溶剂，得到第一浸膏，将第一浸膏用正丁醇萃取，合并萃取液，回收得到正丁醇样品(以下称样品4)

将香薷粉末置于甲醇溶液中采用渗漉法进行提取，得甲醇提取液，回收甲醇溶剂，得到甲醇提样品(以下称样品5)

按照下列公式分别计算样品中黄酮类化合物提取率及纯度

提取率(％)＝粗提物中黄酮类化合物质量/原料中黄酮类化合物质量×100

黄酮纯度(％)＝粗提物中黄酮类化合物质量/粗提物质量×100

表1不同制备方法提取效率比较研究

	总黄酮转移率(％)	提取纯度(％)
			样品1	91	63
样品2	91	32
			样品3	86	50
样品4	73	53
			样品5	85	46

比较样品1-5的制备结果可见，样品1通过渗漉辅助酶解工艺制备而成，该法黄酮类成分转移率高，提取物纯度高。

实施例3不同制备方法酪氨酸酶活性比较

作为本领域技术人员，大家都知道不同提取方法提取出的部位所含的化合物不同，活性也不同。在化学成分未全部明确的前提下，故通过酪氨酸活性来比较实施例1和实施例2制备得到的样品的活性。

酪氨酸酶(TYR)活性的测定：量取3mL 50mmol/L的PBS(pH＝6.8)，加入2.9mL 1mmol/L的左旋多巴溶液，置于32℃水浴中保温20min，加入0.1mL的TYR溶液(0.01g/L) 混匀，在恒温条件下测定混合液吸光度随时间的增长曲线。规定以每分钟反应液在475nm波长的吸光度值增加0.001为一个TYR活力单位(U/min)，以曲酸作为阳性对照。

计算酪氨酸酶抑制率：

抑制率(％)＝(1-(T-T₀)/(C-C₀))*100％

式中：T-样品管吸光值，即样品与酪氨酸酶反应后溶液吸光值；T₀-样品本底吸光值；C-酶反应管吸光值3次平均值，即未加样品时酪氨酸酶和多巴反应的吸光值；C₀-溶剂本底吸光值。

表2不同制备方法酪氨酸酶活性比较研究

比较样品1-5的制备结果可见，样品1通过渗漉辅助酶解工艺制备而成，该样品不论是 1mg/ml还是0.2mg/ml，其酪氨酸酶抑制活性均高于样品2-5，也高于阳性对照曲酸。

实施例4含量测定

收集不同来源香薷10份，分别按照实施例1方法制备样品。

样品进行UPLC-DAD-QTOF MS色谱检测，色谱条件为：色谱仪器为：安捷伦ZorbaxSB-C18 600bar；色谱柱为C₁₈；柱温为35℃；流速为0.3mL/min；进样量为5μL；流动相采用乙腈-0.1％甲酸水溶液的梯度洗脱程序。质谱条件条件为：质谱检测器ESI离子源，负离子模式，雾化器压力50psi，干燥气流速10ml/min，干燥气温度350℃，毛细管电压4000V，Fragmentor电压150V (可优化)，MS/MS碰撞能量25V(可优化)。

检测结果见图1，结合330nm和254nm下检测数据显示提取物中含有芹菜素 0.62-3.78mg/g、黄芩素-7-甲醚2.19-4.44mg/g、槲皮素30-120μg/g、山奈酚0.79-3.29mg/g、木犀草素34-120μg/g、金圣草黄素4.22-6.67μg/g。

实施例5组分不同配比酪氨酸酶活性比较

为了明确该提取物的活性，我们按照实施例3的方法检测了样品的酪氨酸酶抑制活性。

表3酪氨酸酶抑制活性比较研究

由表3检测结果显示：本发明制备得到的香薷提取物(样品1)其酪氨酸酶抑制活性比提取物中任一单一化合物活性均要强，可见其提取物中化合物有协同增效作用。其中金圣草黄素活性也强于阳性药曲酸，可见是该提取物中主要活性成分。

本发明制备的提取物有酪氨酸酶抑制活性，酪氨酸酶具有独特催化功能，是生物体控制黑色素生成的关键酶，与衰老以及美容都有密切联系，酪氨酸酶抑制剂可用于常见的色素沉着性皮肤病，通过抑制酪氨酸酶的活性而达到抑制黑色素合成，从而实现美白的作用，因此香薷提取物具有美白的功效。

实施例6样品黑色素细胞活性确定研究

小鼠B16黑色素细胞培养：无菌条件下，将1x10⁵个/mL的B16细胞接种于含10％(体积分数) 的小牛血清的RPMI1640培养基的培养瓶中，在5％(体积分数)CO₂培养箱中培养，每3d用 0.25％胰酶消化传代一次。待细胞生长到对数期，用PBS洗涤，0.25％胰酶消化，细胞计数板计数。电镜观察细胞形态变化。调整细胞2x10⁴个/mL。分别接种于两个96孔板中，每孔100 μL，置37℃5％CO₂孵箱中孵育24h后，弃上清液，添加待测药物，每组药物最终质量浓度分别为1000mg/L、500mg/L、100mg/L。每一浓度设4个孔，对照组不加药物，代之同量维持液，空白孔不接种细胞。37℃5％CO₂孵箱中孵育72h。

酪氨酸酶活力测定：抑制小鼠黑色素细胞中酪氨酸酶活力试验：药物作用3d后，弃去上清液，用pH 6.8PBS冲洗两遍，每孔加90μL含1％(体积分数)Triton X-100的PBS。冰浴中超声破碎，每孔加10μL 1×10^-2moL/L的L-dopa，37℃孵育60min，于490nm处比色，空白孔调零，测各孔吸光度值。

黑色素含量测定：将B16黑色素细胞以1x10⁵个/mL的密度接种于3个6孔板。每孔3mL，置 37℃含5％CO₂孵箱中孵育24h后，弃上清液，添加待测药物，每浓度3个孔，最终的药物质量浓度分别为1000mg/L、500mg/L、100mg/L。药物作用3d后，弃上清液，PBS洗涤，每孔加入0.5mL胰酶消化细胞3min，每孔加2mL维持液终止消化。吹打混匀后，每种浓度取出0.5mL做细胞计数。其余细胞悬液以1500r/min离心10min，弃上清液，加入200μL 蒸馏水和体积比为1：1的乙醇、***混合液(除去一些不透明物质)，摇匀，室温放置15min， 3000r/min离心5min。弃上清液，于沉淀中加入1mL含10％(质量分数)DMSO的1mol/L NaOH 水溶液。80℃加热30min(具塞)，选择490nm波长在酶联免疫检测仪上测吸光度值。

通过酪氨酸酶活力测定和黑色素含量测定，均显示样品1强于提取物中的任一单一化合物(芹菜素、黄芩素-7-甲醚、槲皮素、山奈酚、木犀草素、金圣草黄素)，可见提取物中化合物有协同增效作用。其中金圣草黄素活性强于阳性药曲酸，再一次明确其是该提取物中主要活性成分。

Claims

1.一种香薷提取物，其特征在于，所述香薷提取物通过渗漉辅助酶解工艺制备得到。

2.根据权利要求1所述的香薷提取物，其特征在于，所述的香薷提取物通过包括下述步骤的方法制备得到：

（1）将香薷粉末置于乙醇溶液中采用渗漉法进行提取，得乙醇提取液，回收乙醇溶剂，得到第一浸膏；

（2）向所述第一浸膏中加少量水，形成悬浮液，将悬浮液调节pH值在4.5 - 6.0之间；

（3）悬浮液加入适量纤维素酶，40-50℃水浴反应60min；

（4）转移反应液置于索氏提取器，加入95%乙醇，浸提90min，冷却后过滤分离，将滤液浓缩制备得到目的提取物。

3.根据权利要求2所述的香薷提取物，其特征在于，所述制备步骤（1）中乙醇溶液为60- 70% 浓度。

4.根据权利要求2所述的香薷提取物，其特征在于，所述制备步骤（3）中纤维素酶添加量为原料香薷质量的0.25wt%。

5.根据权利要求2-4任意一项所述的香薷提取物，其特征在于，该提取物进行UPLC-DAD-QTOF MS色谱检测，其包含以下组分：芹菜素 0.62-3.78mg/g、黄芩素-7-甲醚 2.19-4.44 mg/g、槲皮素30-120μg/g、山奈酚0.79-3.29 mg/g、木犀草素34-120μg/g、金圣草黄素4.22-6.67μg/g。

6.根据权利要求1所述的香薷提取物在制备美白产品方面的应用。