CN113388045A - 一种具有抗菌作用的铁皮石斛的提取方法及复方消杀制剂 - Google Patents

一种具有抗菌作用的铁皮石斛的提取方法及复方消杀制剂 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种半仿生酶‑超声法联用提取铁皮石斛提取物及复方消杀制剂的制备方法，铁皮石斛提取物的提取方法包括下列步骤：洗涤、干燥、粉碎、半仿生酶解、半仿生超声、脱色处理、浓缩、洗涤、纯化。本发明使用了半仿生酶辅助提取法，先酶解，后半仿生超声提取，优化了提取条件，提取了铁皮石斛提取物，本发明的整个工艺过程中具有无污染物排放，成本低，生产周期短，可操作性强，产量高的优点，适合于大规模生产，半仿生酶解后较常规提取收率高，有益于铁皮石斛资源的开发利用。用本法制备的铁皮石斛提取物具有较好的抗菌抗病毒的效果，可将其或与其它成分组合制备成喷雾剂、凝胶剂、软膏、洗手液、湿巾等消杀制剂。

Description

一种具有抗菌作用的铁皮石斛的提取方法及复方消杀制剂
技术领域
本发明涉及一种半仿生酶-超声法联用提取铁皮石斛提取物及复方消杀制剂的制备方法，属于消杀产品制备技术领域。
背景技术
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属植物铁皮石斛的茎，具有多种化学成分,除生物碱和多糖外，还有菲类、联苄类、芴酮类、倍半萜类、香豆素、提取物、甾体及挥发油等。
石斛提取物是指从石斛属植株提取获得的提取物类化合物。现代研究表明铁皮石斛多糖有增强免疫、抗氧化、抗菌、降血糖、降压、抗肿瘤等作用。多糖是由单糖聚合城的天然生物大分子，结构复杂，分子量大，极性大。随着对多糖的深入研究，越来越多的多糖被分离出来，并且发现多糖具有很多的生物活性和潜在的应用价值。但多糖结构复杂，种类繁多，并且常与脂质和蛋白结合成多糖复合物，这给植物多糖的提取带来不少困难。目前多糖常用的提取方法有溶剂提取法、超滤法、酶解法、超声辅助提取法、超临界流体萃取法、微波辅助提取法、闪式提取法和高压蒸煮法等。然而传统热水提取方法温度较高、时间长、提取液不宜长时间存放；酸碱提取法的的酸碱溶剂会破坏多糖结构，酸碱浓度过高会腐蚀设备；新型的提取方法微波提取时间过长会破坏多糖的结构，降低多糖的活性，微波辐射对人体有伤害；超临界流体萃取作为一种新兴技术，研究尚少，对油溶性成分溶解能力强而水溶性较低，设备造价高，设备清洗较困难；超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应和热效应来破坏植物细胞壁，加快细胞质中成分的传递，提高植物细胞中有效成分的溶出速度，可排除其它溶剂的干扰但超声时间过长会引起可溶性多糖发生降解；酶解法利用酶的专一性特点，酶解细胞壁，加速植物细胞中有效成分的溶出，提取率高，专一性好，减少大量溶剂使用造成的环境污染，但由于酶的活性受多种因素影响，在提取中须严格控制提取条件保持酶活性。单一使用提取方法存在收率低问题。例如，CN104926956A发明公开一种超声波优化提取铁坡石斛多糖方法，其步骤包括：先将铁皮石斛真空干燥粉碎；然后将铁皮石斛粉按固液比1:30加水搅拌混合后进行超声波水浴加热提取，超声功率为300W-400W，超声波频为45Hz，提取温度为50-65℃，保温提取时间1h-1.5h，超声波优化提取工艺铁皮石斛多糖的平均得率为15.3％，高于常规水提工艺多糖的平均得率10.2％。杨应合等在进行水提法与酶讲解法提取比较时，采用正交试验设计将，将粉末1g置入圆底烧瓶，加入不同量蒸馏水，于特定温度下计算时间和次数，主要分析提取时的水温、水量、提取时间以及次数对多糖提取的影响。每次提取完成后使用脱脂棉进行过滤，将滤液置入容量瓶中，对多糖含量进行测定最佳提取得率为12.07％。另外有报道单一多糖进行制备消毒剂，但对于增强更加广谱抗菌的复方多糖进行消杀剂的制备少有报道。
总体来说，上述传统技术对于铁皮石斛多糖的提取得率都还比较低，而新兴的技术又因本身单独的提取而具有提取时间过长而使多糖降解，破坏多糖结构，降低多糖活性，设备造价高等局限性。因此，一种低成本提高铁皮石斛多糖提取得率的提取方法，及其增强在各种场景中的广谱抗菌性能的消杀剂制备具有很好的现实价值。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种铁皮石斛提取物的提取方法及复方消杀剂制备方法。通过半仿生酶-超声法联用提取铁皮石斛提取物，该提取方法具有提取效率高、提取物具有更优的抗菌抗病毒效果。
中药的半仿生提取法(Semi-bionic Bxtraction method,SBE)是从生物药剂学的角度，体现中医临床用药综合作用模拟口服给药经胃肠道转运吸收的环境，采用选定的pH值，依次连续提取，以获得成分高的活性物质。提取过程中由于提取条件不同，其提取效率也不同，其提取物的功效也不同。将半仿生、酶降解和超声方法联用，结合三种提取方法在铁皮石斛多糖的提取中发挥着各自的优势，加快提取速率，减少提取时间，防止破坏多糖结构，有效阻止多糖降解，提高提取得率的同时不破坏多糖活性。中药并非单体成分，而是众多活性成分的集合，并且其疗效发挥不仅与原形成分相关，也取决于提取过程中相互作用的代谢产物。半仿生法根据大部分药效成分未知的特点和中药物质基础整理特征，以提取物的生物活性进行导向分离，模拟口服药经胃肠道吸收和转运的过程，铁皮石斛经过固定pH的酸性、碱性溶剂依次提取，同时结合酶降解与超声辅助方法，接近人体温度而无需高温即可将铁皮石斛多糖得到最大提取的组合式提取方法，能够在不改变多糖功效的基础上，促进多糖的溶出，提高多糖的提取率，缩短生产周期，降低成本。半仿生法能够充分发挥混合物成分的综合作用特点，有利于以单体成分来控制铁皮石斛多糖质量，同时与酶催化和超声结合克服了传统半仿生提取法高温煎煮易破坏有效成分的缺点。铁皮石斛多糖分子量与粘度大，通过进入细胞或者吸附在细胞表面，调节整体免疫功能抑制病毒复制或封闭病毒感染细胞，直接杀灭病毒，阻止病毒致细胞病变。而由此提取方法制备的多糖具有较高的活性，对病毒具有更好的粘附作用。
通过半仿生酶-超声法联用提取铁皮石斛提取物，该提取方法具有提取效率高、提取物具有更优的抗菌抗病毒效果。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
将铁皮石斛清水洗涤后，加入复合酶，调节pH至pH＝2-3、7-8，反应，反应结束后，离心，将沉淀与70％乙醇混合，并分别用磷酸缓冲液调节pH＝2-3、7-8，超声，提取2-3次，合并上清液，脱色，浓缩。
具体地，本发明提供的铁皮石斛提取物的提取方法，包括下列步骤：
a.将新鲜的铁皮石斛用清水洗涤，除去泥沙，45℃烘干，干燥后的样品经粉碎机粉碎，过60-100目筛。
b.半仿生酶解：干燥后的样品以重量比1:20-1:40的料液比加入复合酶水溶液，复合酶包括纤维素酶和蛋白酶，两者的重量比例是1：3-3：1，优选为1:2-2:1。使用磷酸缓冲液节pH2-3，7-8在40-55℃下反应4-8h。
c.半仿生超声：酶解反应结束后，离心，得到沉淀；将沉淀依次与6-12倍体积的70％乙醇混合，并分别用磷酸缓冲液调节pH＝2-3、7-8，置于超声波提取器中，设置温度50-80℃，超声频率为40kHz，超声功率80-300w，进行超声波水浴加热提取1-2h，离心，收集上清液，对沉淀重复提取2次，并合并3次上清液。
d.脱色处理：收集上清，添加0.1％的活性炭进行脱色，过滤，收集滤液。
e.浓缩：将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏至1/4体积，缓冲液调节pH至2-3、7-8，加入3-6倍体积的70％乙醇，边加边搅拌，20-30℃静置4h后，离心，收集沉淀。
f.洗涤：分别调节pH 2-3、7-8，将沉淀用70％乙醇洗涤后，得到铁皮石斛粗提取物。
g.纯化：将得到的粗提取物分别加入3-6倍体积的70％乙醇，磷酸缓冲液调节pH＝2-3、7-8，离心，收集沉淀3次，得到铁皮石斛纯提取物。
按照如下方法制备的铁皮石斛提取物的得率为30％以上。
本发明所述的方法中，当所述的复合酶中，纤维素酶和蛋白酶重量比例是1：3-3：1时，样品与复合酶重量比1:30-1:40时，制备的铁皮石斛提取物的得率在30％以上。
进一步地，本发明提供了一种组合物，即所述的铁皮石斛提取物与其它抗菌剂或辅料制成消杀组合物，铁皮石斛提取物重量百分含量在0.5-30％范围内，其它抗菌剂在0.5-25％范围内。
所述的其它抗菌剂是金线莲提取物、黄精提取物、铁皮石斛花提取物或金线莲花提取物中的一种或几种，优选地，金线莲提取物、黄精提取物的重量百分含量为0.5-22％，铁皮石斛花提取物、金线莲花提取物的重量百分含量为0.5-3％。
进一步地，本发明提供了一系列消杀制剂，所述的消杀制剂以本发明制备的铁皮石斛提取物作为活性成分，加入消杀制剂常用的辅料，以本领域常规的方法制备。
所述的消杀制剂为喷雾剂、凝胶剂、洗手液、乳膏等。
本发明技术方案还包括制备复方消杀剂的工艺方法，包括以下流程步骤：步骤一包括按质量比0.5-30％铁皮石斛多糖与按质量比0.5-25％其他抗菌剂混合；步骤二包括加入剩余质量纯化水，搅拌混匀；步骤三加入处方量的香精；步骤四包括定量灌装，封口，检查重量，检测泄露，加盖，包装。所述制备方法可根据组分的实际配伍调整个别环节的工艺条件，例如将步骤二改为按质量比加入硬脂酸甘油酯1％，羊毛脂衍生物0.1-2％，橄榄油1％，甘油0.5％，乳化剂0.5％，加入纯化水，乳化。在前述各种制备方法的基础上还可以将步骤二改为加入表面活性剂3份，加入剩余质量纯化水，搅拌混匀。
本发明制备的铁皮石斛提取物、含有所述铁皮石斛提取物的组合物及其以铁皮石斛提取物作为主要活性成分的消杀制剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念球菌均有明显的抑菌效果，且对病毒具有明显的杀灭效果。
本发明使用了半仿生酶辅助超声提取法，先半仿生酶解，后半仿生超声提取，优化了提取条件，制备了铁皮石斛提取物，整个工艺过程中无污染物排放，适合于大规模生产，半仿生酶解后超声较常规提取得率高，有益于铁皮石斛资源的开发利用。步骤简单，成本低，绿色环保，有效成分损失少，生产周期短，可操作性强，产量高的优点，易于工业化生产。
本发明与现有技术相比较，其具有以下有益效果：
1、本发明引进半仿生法，模拟口服给药经胃肠道转运吸收的环境，采用选定的pH值，分别在pH2-3，pH7-8条件下依次连续提取，得到高含量铁皮石斛活性提取物。
2、本发明采用先半仿生酶解后半仿生超声提取的方法，增加了复合酶酶解的过程，复合酶由纤维素酶和蛋白酶组成。水解1，4一糖苷键，每次切下一个纤维二糖分子。促进铁皮石斛细胞间和细胞内结构破坏，可提高提取物的提取效率。
3、本发明优化了提取工艺：优化了复合酶酶解条件(复合酶比例，酶解温度，酶解时间)，优化了乙醇用量。
4、本发明的整个工艺过程中具有无污染物排放，有效成分损失少，成本低，生产周期短，可操作性强，产量高的优点，易于工业化生产，有益于铁皮石斛资源的开发利用。
5、本发明得到铁皮石斛提取物，粘附性强，对常见的致病菌均有较好的杀菌抑菌效果，较普通铁皮石斛提取物效果更佳。
6、本发明的创新性在于，以天然的植物成分，不含任何有毒有害化学成分，无毒副作用，无化学残留，可长期使用。
7、本发明具有天然抗菌活性，抗菌谱广大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念球菌均有明显的抑菌效果，对细菌病毒具有良好的杀灭效果。
以下列举数个实施例结合实验数据对本发明技术方案作进一步说明。
具体实施方式
实施例1对比单独酶解提取方法实验
参考文献制备铁皮石斛提取物。取铁皮石斛，粉碎过40目筛：加入4倍量复合酶缓冲液(果胶酶-纤维素酶-漆酶(1-2:1-3:0.5-2.5)，加冰乙酸溶液调节pH值至4.0)，控制酶解温度50℃恒温酶解140min；加饮用水5倍，回流提取2h，滤过(120目筛)，滤液浓缩至相对密度1.30(60℃)，加入乙醇使溶液含醇量达75％，搅拌均匀，静置12h后，收集沉淀物，挥去乙醇，70℃真空干燥，即得。结果见表-1，与上述提取方法所得提取物比较，先半仿生酶解后超声提取的方法得率提高9.4％，具有更高的提取率。
实施例2对比单独超声提取方法实验
参考文献制备铁皮石斛提取物。取铁皮石斛，在50℃条件下真空干燥2.5小时，粉碎过80目筛，将铁皮石斛粉按固液比1：30加水搅拌混合后置不锈钢圆筒，保持密闭状态，再将盛有料液的容器加入到超声波提取器中进行超声波水浴加热提取，超声功率为300W，超声波频率为45Hz，提取温度为50-65℃，保温提取时间1h-1.5h，提取结束后，抽滤，取出渣粕，得抽滤混合液；将抽滤混合液在5000-6000r/min的条件下离心分离10-15min，得上清提取液，浓缩，加95％乙醇，醇沉8h，离心，过大孔树脂后透析。结果见表-1，与上述提取方法所得提取物比较，先半仿生酶解后超声提取的方法得率提高9.8％，具有更高的提取率。
实施例3对比超声-酶提取方法实验
参考文献制备铁皮石斛提取物。取铁皮石斛，65℃干燥，取500g粉碎，15倍重量95％乙醇回流3次，合并药渣烘干，按固液重量比1/25加蒸馏水，功率400W超声25min，调节pH6.5，水浴45℃，加相当于药渣质量2.5％的纤维素酶和2.5％的果胶酶，酶解2.5h，水浴升温至55℃。调pH6.8，加相当于药渣质量1.5％的木瓜蛋白酶，酶解2.5h，加热92℃，25min，离心，过滤，脱色，浓缩，透析，加95％乙醇，25℃静置18h，过滤，挥干。结果见表-1，与上述提取方法所得提取物比较，先半仿生酶解后超声提取的方法得率提高4.2％，具有更高的提取率。
表-1不同提取方法提取铁皮石斛多糖的提取得率比较
Figure BDA0002411459450000081
实施例4一种具有抗菌作用的铁皮石斛的提取方法及复方消杀制剂
步骤一：铁皮石斛提取物的制备
a.将新鲜的铁皮石斛用清水洗涤，除去泥沙，45℃烘干，干燥后的样品经粉碎机粉碎，过60目筛。
b.半仿生酶解：干燥后的样品以重量比1:20的料液比加入复合酶水溶液，复合酶包括纤维素酶和蛋白酶，两者的重量比例是1：3。使用磷酸缓冲液调节pH2-3，7-8在40℃下反应8h。
c.半仿生超声：酶解反应结束后，离心,得到沉淀；将沉淀依次与6倍体积的70％乙醇，磷酸缓冲液调节pH 2-3、7-8，置于超声波提取器中，设置温度55℃，超声频率为40kHz，超声功率295w，进行超声波水浴加热提取1h，离心，收集上清液，对沉淀重复提取2次，并合并3次上清液。
d.脱色处理：收集上清，添加0.1％的活性炭进行脱色，过滤，收集滤液。
e.浓缩：将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏至1/4体积，缓冲液调节pH至2-3、7-8，加入3倍体积的70％乙醇，边加边搅拌，20-30℃静置4h后，离心，收集沉淀。
f.洗涤：分别调节pH 2-3、7-8，将沉淀用70％乙醇洗涤后，得到铁皮石斛粗提取物。
g.纯化：将得到的粗提取物分别加入3倍体积的70％乙醇,磷酸缓冲液调节pH 2-3、7-8，离心，收集沉淀3次，得到铁皮石斛纯提取物。先半仿生酶解后超声提取的方法得率较普通提取方法提高17.7％，制得的铁皮石斛多糖备用；
步骤二：按质量比加入铁皮石斛提取液25％，备用；
步骤三：加入剩余质量纯化水，搅拌混匀；
步骤四：加入处方量的香精；
步骤五：定量灌装，封口，检查重量，检测泄露，加盖，包装即得喷雾剂。
抗菌测试：取消杀剂用无菌水分别溶解成0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mg/mL5个梯度，将经过120℃干热灭菌的滤纸片放入其中浸泡0.5h备用。将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，于30℃培养24h进行活化；白色念珠球菌接种于改良马氏琼脂培养基上，25℃培养2～3d进行活化。然后在活化好的斜面试管中加入10mL无菌生理盐水，振荡数次，洗下斜面上的细菌，制成106CFU/mL的菌悬液，然后取100μL该菌悬液于相应的固体琼脂平板上，用菌棒涂均匀，在分别将浸泡过多糖的滤纸片小心地平铺于上述涂菌平板上，距离适中，于30℃下培养48h，观察有无抑菌圈形成，对有抑菌圈形成的试验组测定其直径，减去滤纸片的直径(6mm)后记录结果。试验重复3次。结果取平均值。结果如表-2，显示消杀剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌都有不同程度的抑制作用，且抑菌强度随着浓度的增加而增大。
表-2消杀剂对不同供试菌的抑菌活性
Figure BDA0002411459450000101
Figure BDA0002411459450000111
体外抗病毒测试：
取Vero细胞分别于96孔细胞培养板中生长成单层，弃去上清培养液，用不含血清培养基溶液洗涤三次，加入流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒液10μL/孔，40℃、5％CO2：置于培养箱中吸附2h，弃去病毒液，加入本实施例制备的消杀剂浓度分别为5、10、20、40、80mg/mL培养。设3个复孔，同时设病毒对照及正常细胞对照和空白调零孔。将流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒组放入恒温箱旋转培养，培养4h后，每孔加入100μL MTT，4h后加入100μL二甲亚砜，静置10min，用酶标仪测每孔OD值。计算病毒抑制率％＝(消杀剂组OD-病毒组OD)/(细胞对照组OD-病毒对照组OD)×100。结果如表-3所示，本实施例制备的消杀剂对病毒有明显的灭杀或增殖抑制作用。
表-3消杀剂体外抗流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒试验结果
Figure BDA0002411459450000112
Figure BDA0002411459450000121
实施例5一种具有抗菌作用的铁皮石斛的提取方法及复方消杀制剂
步骤一：铁皮石斛提取物的制备
a.将新鲜的铁皮石斛用清水洗涤，除去泥沙，45℃烘干，干燥后的样品经粉碎机粉碎，过100目筛。
b.半仿生酶解：干燥后的样品以重量比1:40的料液比加入复合酶液，复合酶包括纤维素酶和蛋白酶，两者的重量比例是3：1。使用磷酸缓冲液调节pH2-3，7-8在55℃下反应4h。
c.半仿生超声：酶解反应结束后，离心，得到沉淀；将沉淀依次与12倍体积的70％乙醇，磷酸缓冲液调节pH2-3、7-8，置于超声波提取器中，设置温度65℃，超声频率为40kHz，超声功率135w，进行超声波水浴加热提取2h，离心，收集上清液，对沉淀重复提取2次，并合并3次上清液。
d.脱色处理：收集上清，添加0.1％的活性炭进行脱色，过滤，收集滤液。
e.浓缩：将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏至1/4体积，缓冲液调节pH至2-3、7-8，加入6倍体积的70％乙醇，边加边搅拌，20-30℃静置4h后，离心，收集沉淀。
f.洗涤：分别调节pH 2-3、7-8，将沉淀用70％乙醇洗涤后，得到铁皮石斛粗提取物。
g.纯化：将得到的粗提取物分别加入6倍体积的70％乙醇，磷酸缓冲液调节pH2-3、7-8，离心，收集沉淀3次，先半仿生酶解后超声提取的方法得率较普通提取方法提高19.6％。制得的铁皮石斛多糖备用；
步骤二：按质量比加入铁皮石斛提取液30％，金线莲提取物5％、黄精提取物5％、铁皮石斛花提取物0.5％，金线莲花提取物0.5％混合，备用；
步骤三：加入表面活性剂3份，加入剩余质量纯化水，搅拌混匀；
步骤四：加入处方量的香精；
步骤五：定量灌装，封口，检查重量，检测泄露，加盖，包装即得洗手液。
抗菌测试：取消杀剂用无菌水分别溶解成0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mg/mL5个梯度，将经过120℃干热灭菌的滤纸片放入其中浸泡0.5h备用。将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，于30℃培养24h进行活化；白色念珠球菌接种于改良马氏琼脂培养基上，25℃培养2～3d进行活化。然后在活化好的斜面试管中加入10mL无菌生理盐水，振荡数次，洗下斜面上的细菌，制成106CFU/mL的菌悬液，然后取100μL该菌悬液于相应的固体琼脂平板上，用菌棒涂均匀，在分别将浸泡过多糖的滤纸片小心地平铺于上述涂菌平板上，距离适中，于30℃下培养48h，观察有无抑菌圈形成，对有抑菌圈形成的试验组测定其直径，减去滤纸片的直径(6mm)后记录结果。试验重复3次。结果取平均值。结果如表-4，显示消杀剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌都有不同程度的抑制作用，且抑菌强度随着浓度的增加而增大。
表-4消杀剂对不同供试菌的抑菌活性
Figure BDA0002411459450000131
Figure BDA0002411459450000141
体外抗病毒测试：
取Vero细胞分别于96孔细胞培养板中生长成单层，弃去上清培养液，用不含血清培养基溶液洗涤三次，加入流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒液10μL/孔，40℃、5％CO2：置于培养箱中吸附2h，弃去病毒液，加入本实施例制备的消杀剂浓度分别为5、10、20、40、80mg/mL培养。设3个复孔，同时设病毒对照及正常细胞对照和空白调零孔。将流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒组放入恒温箱旋转培养，培养4h后，每孔加入100μL MTT，4h后加入100μL二甲亚砜，静置10min，用酶标仪测每孔OD值。计算病毒抑制率％＝(消杀剂组OD-病毒组OD)/(细胞对照组OD-病毒对照组OD)×100。结果如表-5所示，本实施例制备的消杀剂对病毒有明显的灭杀或增殖抑制作用。
表-5消杀剂体外抗流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒试验结果
Figure BDA0002411459450000142
Figure BDA0002411459450000151
实施例6一种具有抗菌作用的铁皮石斛的提取方法及复方消杀制剂
步骤一：铁皮石斛提取物的制备
a.将新鲜的铁皮石斛用清水洗涤，除去泥沙，45℃烘干，干燥后的样品经粉碎机粉碎，过80目筛。
b.半仿生酶解：干燥后的样品以重量比1:30的料液比加入复合酶水溶液，复合酶包括纤维素酶和蛋白酶，两者的重量比例是1：1。使用磷酸缓冲液调节pH2-3，7-8在50℃下反应6h。
c.半仿生超声：酶解反应结束后，离心,得到沉淀；将沉淀依次与8倍体积的70％乙醇，磷酸缓冲液调节pH2-3、7-8，置于超声波提取器中，设置温度65℃，超声频率为40kHz，超声功率190w，进行超声波水浴加热提取1.5h，离心，收集上清液，对沉淀重复提取2次，并合并3次上清液。
d.脱色处理：收集上清，添加0.1％的活性炭进行脱色，过滤，收集滤液。
e.浓缩：将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏至1/4体积，缓冲液调节pH至2-3、7-8，加入5倍体积的70％乙醇，边加边搅拌，20-30℃静置4h后，离心，收集沉淀。
f.洗涤：分别调节pH2-3、7-8，将沉淀用70％乙醇洗涤后，得到铁皮石斛粗提取物。
g.纯化：将得到的粗提取物分别加入5倍体积的70％乙醇，磷酸缓冲液调节pH2-3、7-8，离心，收集沉淀3次，得到铁皮石斛纯提取物。先半仿生酶解后超声提取的方法得率较普通提取方法提高18.2％。制得的铁皮石斛多糖备用；
步骤二：按质量比加入铁皮石斛提取液20％份，其它抗菌剂1％份混合，备用；
步骤三：硬脂酸甘油酯1％，羊毛脂衍生物0.1-2％，橄榄油1％，甘油0.5％，乳化剂0.5％，加入纯化水，乳化；
步骤四：加入处方量的香精；
步骤五：定量灌装，封口，检查重量，检测泄露，加盖，包装即得乳膏。
抗菌测试：取消杀剂用无菌水分别溶解成0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mg/mL5个梯度，将经过120℃干热灭菌的滤纸片放入其中浸泡0.5h备用。将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，于30℃培养24h进行活化；白色念珠球菌接种于改良马氏琼脂培养基上，25℃培养2～3d进行活化。然后在活化好的斜面试管中加入10mL无菌生理盐水，振荡数次，洗下斜面上的细菌，制成106CFU/mL的菌悬液，然后取100μL该菌悬液于相应的固体琼脂平板上，用菌棒涂均匀，在分别将浸泡过多糖的滤纸片小心地平铺于上述涂菌平板上，距离适中，于30℃下培养48h，观察有无抑菌圈形成，对有抑菌圈形成的试验组测定其直径，减去滤纸片的直径(6mm)后记录结果。试验重复3次。结果取平均值。结果如表-6，显示消杀剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌都有不同程度的抑制作用，且抑菌强度随着浓度的增加而增大。
表-6消杀剂对不同供试菌的抑菌活性
Figure BDA0002411459450000161
Figure BDA0002411459450000171
体外抗病毒测试：
取Vero细胞分别于96孔细胞培养板中生长成单层，弃去上清培养液，用不含血清培养基溶液洗涤三次，加入流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒液10μL/孔，40℃、5％CO2：置于培养箱中吸附2h，弃去病毒液，加入本实施例制备的消杀剂浓度分别为5、10、20、40、80mg/mL培养。设3个复孔，同时设病毒对照及正常细胞对照和空白调零孔。将流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒组放入恒温箱旋转培养，培养4h后，每孔加入100μL MTT，4h后加入100μL二甲亚砜，静置10min，用酶标仪测每孔OD值。计算病毒抑制率％＝(消杀剂组OD-病毒组OD)/(细胞对照组OD-病毒对照组OD)×100。结果如表-7所示，本实施例制备的消杀剂对病毒有明显的灭杀或增殖抑制作用。
表-7消杀剂体外抗流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒试验结果
Figure BDA0002411459450000172
Figure BDA0002411459450000181
实施例7一种具有抗菌作用的铁皮石斛的提取方法及复方消杀制剂
步骤一：制备适量铁皮石斛多糖备用；
步骤二：按质量比加入铁皮石斛提取液10％，金线莲提取物20％、黄精提取物2.5％、铁皮石斛花提取物2％金线莲花提取物0.5％混合，备用；
步骤三：加入剩余质量纯化水，搅拌混匀；
步骤四：加入处方量的香精；
步骤五：定量灌装，封口，检查重量，检测泄露，加盖，包装即得纳米喷雾剂。
抗菌测试：取消杀剂用无菌水分别溶解成0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mg/mL5个梯度，将经过120℃干热灭菌的滤纸片放入其中浸泡0.5h备用。将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，于30℃培养24h进行活化；白色念珠球菌接种于改良马氏琼脂培养基上，25℃培养2～3d进行活化。然后在活化好的斜面试管中加入10mL无菌生理盐水，振荡数次，洗下斜面上的细菌，制成106CFU/mL的菌悬液，然后取100μL该菌悬液于相应的固体琼脂平板上，用菌棒涂均匀，在分别将浸泡过多糖的滤纸片小心地平铺于上述涂菌平板上，距离适中，于30℃下培养48h，观察有无抑菌圈形成，对有抑菌圈形成的试验组测定其直径，减去滤纸片的直径(6mm)后记录结果。试验重复3次。结果取平均值。结果如表-8，显示消杀剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌都有不同程度的抑制作用，且抑菌强度随着浓度的增加而增大。
表-8消杀剂对不同供试菌的抑菌活性
Figure BDA0002411459450000191
体外抗病毒测试：
取Vero细胞分别于96孔细胞培养板中生长成单层，弃去上清培养液，用不含血清培养基溶液洗涤三次，加入流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒液10μL/孔，40℃、5％CO2：置于培养箱中吸附2h，弃去病毒液，加入本实施例制备的消杀剂浓度分别为5、10、20、40、80mg/mL培养。设3个复孔，同时设病毒对照及正常细胞对照和空白调零孔。将流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒组放入恒温箱旋转培养，培养4h后，每孔加入100μL MTT，4h后加入100μL二甲亚砜，静置10min，用酶标仪测每孔OD值。计算病毒抑制率％＝(消杀剂组OD-病毒组OD)/(细胞对照组OD-病毒对照组OD)×100。结果如表-9所示，本实施例制备的消杀剂对病毒有明显的灭杀或增殖抑制作用。
表-9消杀剂体外抗流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒试验结果
Figure BDA0002411459450000201
实施例8一种具有抗菌作用的铁皮石斛的提取方法及复方消杀制剂
步骤一：制备适量铁皮石斛多糖备用；
步骤二：按质量比加入铁皮石斛提取液0.5％，金线莲提取物15％、黄精提取物5％、铁皮石斛花提取物3％、金线莲提取物3％混合，备用；
步骤三：加入剩余质量纯化水，搅拌混匀；
步骤四：加入处方量的香精；
步骤五：定量灌装，封口，检查重量，检测泄露，加盖，包装即得纳米喷雾剂。
抗菌测试：取消杀剂用无菌水分别溶解成0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mg/mL5个梯度，将经过120℃干热灭菌的滤纸片放入其中浸泡0.5h备用。将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，于30℃培养24h进行活化；白色念珠球菌接种于改良马氏琼脂培养基上，25℃培养2～3d进行活化。然后在活化好的斜面试管中加入10mL无菌生理盐水，振荡数次，洗下斜面上的细菌，制成106CFU/mL的菌悬液，然后取100μL该菌悬液于相应的固体琼脂平板上，用菌棒涂均匀，在分别将浸泡过多糖的滤纸片小心地平铺于上述涂菌平板上，距离适中，于30℃下培养48h，观察有无抑菌圈形成，对有抑菌圈形成的试验组测定其直径，减去滤纸片的直径(6mm)后记录结果。试验重复3次。结果取平均值。结果如表-10，显示消杀剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌都有不同程度的抑制作用，且抑菌强度随着浓度的增加而增大。
表-10消杀剂对不同供试菌的抑菌活性
Figure BDA0002411459450000211
体外抗病毒测试：
取Vero细胞分别于96孔细胞培养板中生长成单层，弃去上清培养液，用不含血清培养基溶液洗涤三次，加入流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒液10μL/孔，40℃、5％CO2：置于培养箱中吸附2h，弃去病毒液，加入本实施例制备的消杀剂浓度分别为5、10、20、40、80mg/mL培养。设3个复孔，同时设病毒对照及正常细胞对照和空白调零孔。将流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒组放入恒温箱旋转培养，培养4h后，每孔加入100μL MTT，4h后加入100μL二甲亚砜，静置10min，用酶标仪测每孔OD值。计算病毒抑制率％＝(消杀剂组OD-病毒组OD)/(细胞对照组OD-病毒对照组OD)×100。结果如表-11所示，本实施例制备的消杀剂对病毒有明显的灭杀或增殖抑制作用。
表-11消杀剂体外抗流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒试验结果
Figure BDA0002411459450000221
实施例9一种具有抗菌作用的铁皮石斛的提取方法及复方消杀制剂
步骤一：制备适量铁皮石斛多糖备用；
步骤二：按质量比加入铁皮石斛提取液25％，金线莲提取物15％混合，备用；
步骤三：加入硬脂酸甘油酯1％，羊毛脂衍生物0.1-2％，橄榄油1％，甘油0.5％，乳化剂0.5％，加入纯化水，乳化；
步骤四：加入处方量的香精；
步骤五：定量灌装，封口，检查重量，检测泄露，加盖，包装即得纳米喷雾剂。
抗菌测试：取消杀剂用无菌水分别溶解成0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mg/mL5个梯度，将经过120℃干热灭菌的滤纸片放入其中浸泡0.5h备用。将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，于30℃培养24h进行活化；白色念珠球菌接种于改良马氏琼脂培养基上，25℃培养2～3d进行活化。然后在活化好的斜面试管中加入10mL无菌生理盐水，振荡数次，洗下斜面上的细菌，制成106CFU/mL的菌悬液，然后取100μL该菌悬液于相应的固体琼脂平板上，用菌棒涂均匀，在分别将浸泡过多糖的滤纸片小心地平铺于上述涂菌平板上，距离适中，于30℃下培养48h，观察有无抑菌圈形成，对有抑菌圈形成的试验组测定其直径，减去滤纸片的直径(6mm)后记录结果。试验重复3次。结果取平均值。结果如表-12，显示消杀剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌都有不同程度的抑制作用，且抑菌强度随着浓度的增加而增大。
表-12消杀剂对不同供试菌的抑菌活性
Figure BDA0002411459450000231
Figure BDA0002411459450000241
体外抗病毒测试：
取Vero细胞分别于96孔细胞培养板中生长成单层，弃去上清培养液，用不含血清培养基溶液洗涤三次，加入流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒液10μL/孔，40℃、5％CO2：置于培养箱中吸附2h，弃去病毒液，加入本实施例制备的消杀剂浓度分别为5、10、20、40、80mg/mL培养。设3个复孔，同时设病毒对照及正常细胞对照和空白调零孔。将流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒组放入恒温箱旋转培养，培养4h后，每孔加入100μL MTT，4h后加入100μL二甲亚砜，静置10min，用酶标仪测每孔OD值。计算病毒抑制率％＝(消杀剂组OD-病毒组OD)/(细胞对照组OD-病毒对照组OD)×100。结果如表-13所示，本实施例制备的消杀剂对病毒有明显的灭杀或增殖抑制作用。
表-13消杀剂体外抗流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒试验结果
Figure BDA0002411459450000242
Figure BDA0002411459450000251
上面所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的构思和范围进行限定。在不脱离本发明设计构思的前提下，本领域普通人员对本发明的技术方案做出的各种变型和改进，均应落入到本发明的保护范围，本发明请求保护的技术内容，已经全部记载在权利要求书中。

Claims (10)

1.一种铁皮石斛提取物的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：
a.将新鲜的铁皮石斛茎、叶用清水洗涤，干燥后，经粉碎机粉碎；
b.半仿生酶解：模拟人体消化道体液环境，用磷酸缓冲液调节pH值，铁皮石斛干燥粉末加入复合酶液进行酶解反应；
c.半仿生超声：模拟人体消化道体液环境，磷酸缓冲液调节pH值，酶解反应结束后，离心，得到沉淀；将沉淀物加入乙醇后超声，水浴提取，离心，收集上清液，重复提取，并合并上清液；
d.脱色浓缩沉淀：活性炭脱色后将得到的滤液在减压浓缩蒸馏，调节pH，加入乙醇溶液，离心收集沉淀；将沉淀用乙醇洗涤后，得到铁皮石斛粗提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，粉碎后的粒径为，60-100目筛之间。酶解反应调节pH至2-3，7-8，在40-55℃。复合酶包括纤维素酶和蛋白酶，两者的重量比例是1：3-3：1。铁皮石斛干燥粉末与复合酶液以重量比1:20-1:40。酶解反应为4-8小时。
3.根据权利要求1所述的制备方法，调节pH至2-3，7-8，与6-12倍体积70％乙醇溶液混合，水浴50-80℃，提取1-2小时，离心，收集上清液，对沉淀重复提取2次，并合并3次上清液；活性炭脱色后，浓缩时加入3-6倍体积的70％的乙醇溶液，调节pH至2-3，7-8，离心收集沉淀；将沉淀用70％的乙醇洗涤后，得到铁皮石斛粗提取物。
4.根据权利要求1所述的制备方法，如需纯化：将得到的粗提取物加入3-6倍70％的乙醇溶液溶解；离心，收集沉淀，得到高纯度铁皮石斛提取物。
5.根据权利要求1所述的制备方法制备的铁皮石斛提取物具有一定的抗菌、抗病毒作用。
6.根据权利要求1所述铁皮提取物与其它抗菌剂或辅料制成消杀产品。铁皮石斛提取物含量在0.5-30％范围内的消杀产品组合物。
7.根据权利要求6所述其它抗菌剂可以是金线莲提取物、黄精提取物、铁皮石斛花提取物、金线莲花提取物等的消杀产品组合物。
8.根据权利要求6所述其它抗菌剂在0.5-25％范围内的消杀产品组合物。
9.根据权利要求7所述金线莲提取物、黄精提取物在0.5-22％铁皮石斛花提取物、金线莲花提取物等在0.5-3％范围内的消杀产品组合物。
10.根据权利要5-7任何一项所述铁皮石斛提取物及复方组合物制备的消杀产品可以是喷雾剂、凝胶、洗手液、湿巾、膏剂、乳剂等。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113861305A (zh) * 2021-11-03 2021-12-31 大冶康之堂农业发展有限公司 一种同时提取铁皮石斛中多糖和生物碱的方法
CN114437598A (zh) * 2022-02-10 2022-05-06 郑州宸博建筑科技有限公司 一种长效抗菌防霉抗藻涂料及其制备方法
CN114632021A (zh) * 2022-05-20 2022-06-17 广州优理氏生物科技有限公司 一种多肽酶解制剂及其制备方法与在护肤品中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102512458A (zh) * 2011-12-23 2012-06-27 正源堂（天津）生物科技有限公司 蛹虫草活性组分的半仿生提取方法
CN105085695A (zh) * 2015-06-12 2015-11-25 浙江仙人草保健品有限公司 一种铁皮石斛浸膏粉制备方法
CN108210746A (zh) * 2018-01-30 2018-06-29 浙江理工大学 超声辅助复合酶法提取铁皮石斛叶黄酮的方法
CN110872359A (zh) * 2018-08-30 2020-03-10 南京泽朗生物科技有限公司 一种利用半仿生学原理提取黄芪多糖的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102512458A (zh) * 2011-12-23 2012-06-27 正源堂（天津）生物科技有限公司 蛹虫草活性组分的半仿生提取方法
CN105085695A (zh) * 2015-06-12 2015-11-25 浙江仙人草保健品有限公司 一种铁皮石斛浸膏粉制备方法
CN108210746A (zh) * 2018-01-30 2018-06-29 浙江理工大学 超声辅助复合酶法提取铁皮石斛叶黄酮的方法
CN110872359A (zh) * 2018-08-30 2020-03-10 南京泽朗生物科技有限公司 一种利用半仿生学原理提取黄芪多糖的制备方法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113861305A (zh) * 2021-11-03 2021-12-31 大冶康之堂农业发展有限公司 一种同时提取铁皮石斛中多糖和生物碱的方法
CN113861305B (zh) * 2021-11-03 2022-06-14 大冶康之堂农业发展有限公司 一种同时提取铁皮石斛中多糖和生物碱的方法
CN114437598A (zh) * 2022-02-10 2022-05-06 郑州宸博建筑科技有限公司 一种长效抗菌防霉抗藻涂料及其制备方法
CN114632021A (zh) * 2022-05-20 2022-06-17 广州优理氏生物科技有限公司 一种多肽酶解制剂及其制备方法与在护肤品中的应用
CN114632021B (zh) * 2022-05-20 2022-08-02 广州优理氏生物科技有限公司 一种多肽酶解制剂及其制备方法与在护肤品中的应用

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