CN113325101B - 一种盐酸氨基葡萄糖制剂在不同介质中溶出度的检测方法 - Google Patents

一种盐酸氨基葡萄糖制剂在不同介质中溶出度的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，以含正离子对试剂(四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵)的磷酸二氢钾缓冲液‑乙腈作为混合流动相进行等度洗脱，并优化了混合流动相的比例，在色谱分析时延长了盐酸氨基葡萄糖主峰在色谱柱(例如，C8柱)的保留时间，并且避免了主峰受溶出介质、辅料溶液的干扰，重现性好，灵敏度高。采用本发明提供的溶出度检测方法，在色谱分析的过程中对色谱柱的要求低，不需要采用氨基柱，也不需要柱前衍生化反应，可以适应不同溶出介质中盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的准确测定，排出空白溶剂和辅料存在的干扰，操作简单，灵敏度高，成本低，重现性好，准确度高，适用的范围广。

Description

一种盐酸氨基葡萄糖制剂在不同介质中溶出度的检测方法
技术领域
本发明属于药物制剂分析检测领域，具体涉及一种盐酸氨基葡萄糖制剂在不同介质中溶出度的检测方法。
背景技术
氨基葡萄糖是从甲壳动物外壳中提取的一种天然氨基单糖，是糖胺聚糖和透明质酸重要的结构成分。它是一种很特殊的药物，既属于药品又属于保健品。由于氨基葡萄糖属于生物提取，副作用较小，在国外将其作为食品或保健品直接出售；也因为其对骨性关节炎有良好的治疗作用，在20世纪80年代意大利首次将其申报为药品。在中国，氨基葡萄糖以盐酸盐或硫酸盐形式申报为基本药物。
在药物的口服片剂质量控制中，检查口服片剂的溶出度情况是必不可少的检查项。通过测定口服片剂的溶出度可以考察药物片剂在不同溶出介质条件下(模拟人体胃肠道溶解药片的环境)的体外释放的情况，间接评估药物片剂在体内的释放模式。
准确检测不同药物片剂的溶出度是保证溶出度实验准确可靠的基础。盐酸氨基葡萄糖含量的经典检测方法是Elson-Morgan反应后的紫外分光光度法，操作复杂，重现性差，文献报道的有衍生化高效液相色谱法、高效液相-蒸发光散射检测器法、高效液相-示差折光检测器法、高效液相-紫外检测器的氨基柱法等方法，或操作复杂或成本较高，或专属性不强。目前，美国药典(USP43)收载了氨基葡萄糖片溶出度检测方法，即为无需衍生化的高效液相色谱法，以辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(250×4.6mm，5μm)，以0.05％磷酸溶液(氢氧化钾调节pH为3.0)-乙腈(60:40)为流动相，检测波长为195nm，流速为0.6ml/min。然而，该检测方法在以pH4.5醋酸钠溶液和pH6.8磷酸盐溶液分别作为溶出介质测定溶出度时，空白溶剂严重干扰盐酸氨基葡萄糖峰的检测。
为了克服目前分析方法存在的不足，探索能够用于检测多种溶出介质条件下的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种盐酸氨基葡萄糖制剂在不同介质中溶出度的检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，它包括以下步骤：
(1)供试品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖制剂加入溶出介质中溶解并定量稀释，在t时取出溶出液过滤，取续滤液作为在时间t时的供试品溶液；
(2)对照品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖对照品，加入溶出介质溶解并定量稀释，摇匀，作为对照品溶液；
(3)空白溶液：溶出介质；
(4)高效液相色谱法检测：采用高效液相色谱法对供试品溶液、对照品溶液以及空白溶液进行检测，记录色谱图，根据峰面积计算盐酸氨基葡萄糖制剂中盐酸氨基葡萄糖的浓度和/或含量，进而得到盐酸氨基葡萄糖制剂在时间t时的溶出度；
其中，高效液相色谱法检测的色谱条件为：色谱柱以辛基硅烷键合硅胶为填充剂；以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为75～85:25～15；流动相A为含1～10mmol/L正离子对试剂的磷酸二氢钾缓冲液，以磷酸调其pH值至3.0-4.0，在流动相A中正离子对试剂为四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵；流动相B为乙腈。
在步骤(1)中，时间t时一个可以根据实际需要选择的时间点，例如，若时间t为5min，即步骤(4)中是测定盐酸氨基葡萄糖制剂在5min时的溶出度。
在步骤(4)中，等度洗脱的时间为6min，盐酸氨基葡萄糖峰的拖尾因子不超过2.0，符合要求。
本发明提供的溶出度的检测方法，可以测定不同介质中盐酸氨基葡萄糖制剂的溶出度，盐酸氨基葡萄糖制剂可以但不局限于盐酸氨基葡萄糖片剂、盐酸氨基葡萄糖胶囊剂、盐酸氨基葡萄糖颗粒剂或盐酸氨基葡萄糖分散剂，其中，盐酸氨基葡萄糖片剂的效果最佳。
进一步地，本发明提及的溶出介质可以但不局限于pH 3.8～5.8醋酸盐缓冲溶液、pH4.5～8.0磷酸盐缓冲溶液或水。例如，溶出介质为pH 4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液或水，具体参照中国药典2020年版四部通则0931第二法进行溶出度的测定。
本发明提供的溶出度的检测方法，以含正离子对试剂(四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵)的磷酸二氢钾缓冲液(流动相A)-乙腈(流动相B)作为混合流动相进行等度洗脱，在等度洗脱的过程中，限定了正离子对试剂的浓度以及混合流动相中流动相A和流动相B的比例，使得在色谱分析时延长了盐酸氨基葡萄糖主峰在色谱柱的保留时间，避免了主峰在低波长下受溶出介质、辅料溶液的干扰；在样品处理过程中，也不需要柱前衍生化反应，操作简单，重现性好，准确度高；在检测的过程中采用的检测器为灵敏度高、对环境不敏感、最普遍的紫外吸收检测器，而避免采用价格昂贵的蒸发光散射检测器或灵敏度低、对环境温度敏感的示差折光检测器，成本低，灵敏度高，操作简捷；在不同的介质中均可以准确测定盐酸氨基葡萄糖制剂的溶出度、排除了空白溶剂和辅料带来的干扰，重现性好，灵敏度高，适用的范围广。
现有技术中提供的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，普遍存在操作复杂、成本高、专属性低或空白溶剂严重干扰盐酸氨基葡萄糖峰的检测等问题。针对上述问题，本发明尝试通过调整色谱分析时流动相的组成和混合流动相的比例，结果发现以四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵作为正离子对试剂加入磷酸二氢钾缓冲液中，与乙腈作为混合流动相，在等度洗脱的过程中，调整正离子对试剂的浓度以及混合流动相的比例，可以延长了盐酸氨基葡萄糖主峰在色谱柱的保留时间，避免了主峰在低波长下受溶出介质、辅料溶液的干扰，具有成本低，灵敏度高，操作简捷的优点。采用本发明的检测方法，采用其他类似的正离子对试剂，例如，十二烷基三甲基氯化铵或十六烷基三甲基溴化铵，即使调整正离子对试剂的浓度和优化混合流动相的比例，也不能解决在以pH4.5醋酸钠溶液和pH6.8磷酸盐溶液或水分别作为溶出介质测定溶出度时，空白溶剂对盐酸氨基葡萄糖主峰的干扰问题，分离效率差，准确度低。
在本发明提供的溶出度的检测方法中，在等度洗脱的过程中，即使以四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵作为正离子对试剂加入流动相A中，也需要严格流动相A中正离子对试剂的浓度，浓度过高或者过低均干扰盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的测定：正离子对试剂的浓度过低(小于1mmol/L)时，介质pH6.8磷酸盐溶液中的盐酸氨基葡萄糖峰的理论板数降低，拖尾因子>2.0，主峰与其后杂质峰达不到基线分离，无法准确测定该介质中的溶出度；当正离子对试剂的浓度过高，会出现缓冲盐与有机相混合时，析出或溶出介质干扰盐酸氨基葡萄溶出度峰的测定，例如，当四丁基溴化铵为18.6mmol/L时，其磷酸二氢钾缓冲液与有机相混合时，析出；而当四丁基氢氧化铵为(16mmol/L)时，介质pH4.5醋酸钠溶液中的杂质峰保留时间也延迟，杂质峰与盐酸氨基葡萄糖主峰的分离度减小，易干扰主峰的检测。
在步骤(4)中，在流动相A中正离子对试剂(四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵)的浓度为1～10mmol/L，可以但不局限于1mmol/L、3mmol/L、3.5mmol/L、3.85mmol/L、4.65mmol/L、5mmol/L、5.5mmol/L、6mmol/L、8mmol/L或1mmol/L，在一种优选方案中，在流动相A中正离子对试剂(四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵)的浓度为3～5mmol/L，例如，流动相A中四丁基氢氧化铵的浓度为3.85mmol/L或5mmol/L，流动相A中四丁基硫酸氢铵的浓度为3.85mmol/L，流动相A中四丁基溴化铵的浓度为4.65mmol/L。
在步骤(4)中，在流动相A中磷酸二氢钾的浓度为10-60mmol/L，可以但不局限于10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L、40mmol/L、50mmol/L或60mmol/L，优选地，在流动相A中磷酸二氢钾的浓度为50mmol/L。
在步骤(4)中，在配制所述流动相A时，以磷酸调其pH值至3.0-4.0，具体pH值可以但不局限于3.0、3.2、3.5、3.7或4.0，优选地，在配制所述流动相A时，以磷酸调其pH值至3.5。
在一种优选方案中，流动相A为含3.85mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液，具体制备包括如下步骤：取磷酸二氢钾6.8g至适量水中，再加入10％四丁基氢氧化铵水溶液10ml，搅拌溶解后加水稀释至1000ml，用磷酸调节pH至3.5。
在一种优选方案中，流动相A为含3.85mmol/L四丁基硫酸氢铵的磷酸二氢钾缓冲液，具体制备包括如下步骤：取磷酸二氢钾6.8g至适量水中，再加入四丁基硫酸氢铵1.3g，搅拌溶解后加水稀释至1000ml，用磷酸调节pH至3.5。
在一种优选方案中，流动相A为含4.65mmol/L四丁基溴化铵的磷酸二氢钾缓冲液，具体制备包括如下步骤：取磷酸二氢钾6.8g至适量水中，再加入四丁基溴化铵1.5g，搅拌溶解后加水稀释至1000ml，用磷酸调节pH至3.5。
在一种优选方案中，流动相A为含5mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液，具体制备包括如下步骤：取磷酸二氢钾6.8g至适量水中，加入10％四丁基氢氧化铵水溶液13ml，搅拌溶解后加水稀释至1000ml，用磷酸调节pH至3.5。
在步骤(4)中，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为75～85:25～15，可以但不局限于75:25、78:22、80:20、82:18或85:15，在一种优选方案中，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为78～82:22～18，进一步优选地，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为80:20。
采用高效液相色谱法进行检测时，色谱柱以辛基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱一般可以采用反相色谱柱(C8柱)，色谱柱可以但不局限于为InertsustainC8或Kromasil100-5C8；优选地，色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。例如，色谱柱为InertsustainC8(250×4.6mm，5μm)或Kromasil 100-5C8(250*4.6mm，5μm)。
在步骤(4)中，高效液相色谱法检测的色谱条件还包括：检测波长为190～200nm，优选为195nm；流速为0.8-1.2ml/min，优选为1.0ml/min；柱温为30～40℃，优选为35℃；进样体积为5～50μl，优选为10μl。
对于本发明提供的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，以500～1000ml溶出介质作为溶剂，转速为每分钟50～100转，5～60分钟后(或其他拟定时间点)取样，照中国药典2020年版四部通则0931第二法进行溶出度的测定。
在一种优选方案中，盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，它包括如下步骤：
(1)供试品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖片，以500～1000ml溶出介质作为溶剂，转速为每分钟50～100转，5～60分钟后，取溶出液过滤，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖对照品，加入溶出介质溶解并定量稀释制成每ml含盐酸氨基葡萄糖0.2～1.5mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)空白溶液：即溶出介质，其中，溶出介质为pH 4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液或水；
(4)精密量取供试品溶液、对照品溶液以及空白溶液进行检测，记录色谱图，根据外标法以峰面积计算盐酸氨基葡萄糖片中盐酸氨基葡萄糖的溶出度；
其中，高效液相色谱法检测的色谱条件为：色谱柱为InertsustainC8或Kromasil100-5C8；以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为80:20；流动相A为含3～5mmol/L四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵的磷酸二氢钾缓冲液，以磷酸调其pH值至3.0-4.0；流动相B为乙腈；检测波长为195nm；流速为1.0ml/min；柱温为35℃；进样体积为10μl。
在一种更优选方案中，盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，它包括如下步骤：
(1)供试品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖片，以900ml溶出介质作为溶剂，转速为每分钟50转，5～60分钟后，取溶出液过滤，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖对照品，加入溶出介质溶解并定量稀释制成每ml含盐酸氨基葡萄糖0.8mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
(3)空白溶液：即溶出介质，其中，溶出介质为pH 4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液或水；
(4)精密量取供试品溶液、对照品溶液以及空白溶液进行检测，记录色谱图，根据外标法以峰面积计算盐酸氨基葡萄糖片中盐酸氨基葡萄糖的溶出度；
其中，高效液相色谱法检测的色谱条件为：色谱柱为InertsustainC8；以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为80:20；流动相A为含3.85mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液，以磷酸调其pH值至3.5；流动相B为乙腈；检测波长为195nm；流速为1.0ml/min；柱温为35℃；进样体积为10μl。
采用本发明的技术方案，优势如下:
(1)本发明提供的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，以含正离子对试剂(四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵)的磷酸二氢钾缓冲液-乙腈作为混合流动相进行等度洗脱，并优化了混合流动相的比例，在色谱分析时延长了盐酸氨基葡萄糖主峰在色谱柱(例如，C8柱)的保留时间，并且避免了主峰在低波长(例如，195nm)下受溶出介质、辅料溶液的干扰，拖尾因子均在1.00～1.50之间，峰纯度均>990，盐酸氨基葡萄糖峰保留时间均在3.5～5min，检测时间快，准确度好，重现性好，灵敏度高。
(2)本发明提供的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，在介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水中的盐酸氨基葡萄糖峰峰面积与其浓度均呈良好的线性关系，其线性相关系数均大于0.999，各介质回收率也均在98％～102％范围内，RSD均小于10％，准确度均良好。
(3)本发明采用高效液相-紫外检测器法，与现有技术中高效液相-蒸发光散射检测器法、高效液相-示差折光检测器法或高效液相-紫外检测器的氨基柱法相比，在色谱分析的过程中对色谱柱的要求低，不需要采用氨基柱，也不需要柱前衍生化反应，可以适应不同溶出介质中盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的准确测定，排出空白溶剂和辅料存在的干扰，操作简单，灵敏度高，成本低，重现性好，准确度高，适用的范围广。
附图说明
图1是实施例1中以pH4.5醋酸钠溶液为溶出介质的空白溶液色谱图；
图2是实施例1中以pH4.5醋酸钠溶液为溶出介质的辅料溶液色谱图；
图3是实施例1中以pH4.5醋酸钠溶液为溶出介质的对照品溶液色谱图；
图4是实施例1中以pH4.5醋酸钠溶液为溶出介质的盐酸氨基葡萄糖片溶出度色谱图；
图5是实施例1中以pH6.8磷酸盐溶液为介质的空白溶液色谱图；
图6是实施例1中以pH6.8磷酸盐溶液为介质的辅料溶液色谱图；
图7是实施例1中以pH6.8磷酸盐溶液为介质的对照品溶液色谱图；
图8是实施例1中以pH6.8磷酸盐溶液为介质的盐酸氨基葡萄糖片溶出度色谱图；
图9是实施例1中以水为溶出介质的空白溶液色谱图；
图10是实施例1中以水为溶出介质的辅料溶液色谱图；
图11是实施例1中以水为溶出介质的对照品溶液色谱图；
图12是实施例1中以水为溶出介质的盐酸氨基葡萄糖片溶出度色谱图；
图13对比例1中参照美国药典溶出度检测方法检测的空白溶液色谱图(介质pH4.5醋酸钠溶液)；
图14对比例1中参照美国药典溶出度检测方法检测的对照品溶液色谱图(介质pH4.5醋酸钠溶液)；
图15对比例1中参照美国药典溶出度检测方法检测的空白溶液色谱图(介质pH6.8磷酸盐溶液)；
图16对比例1中参照美国药典溶出度检测方法检测的对照品溶液色谱图(介质pH6.8磷酸盐溶液)
图17是实施例2中以pH4.5醋酸钠溶液为溶出介质的标准曲线图；
图18是实施例2中以pH6.8磷酸钠盐溶液为介质的标准曲线图；
图19是实施例2中以水为溶出介质的标准曲线图；
图20是对比例2中以pH6.8磷酸盐溶液为介质的供试品溶液色谱图；
图21是对比例3中以pH4.5醋酸钠溶液为溶出介质的辅料溶液色谱图；
图22是对比例3中以pH4.5醋酸钠溶液为溶出介质的供试品溶液色谱图；
图23是实施例8中以pH4.5醋酸钠溶液为溶出介质的溶出曲线图；
图24是实施例8中以pH6.8磷酸盐溶液为介质的溶出曲线图；
图25是实施例8中以水为介质的溶出曲线图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，以下结合具体实施例对本发明的内容进一步详细说明，但不应就此理解为本发明内容仅限于以下实施例，在不脱离本发明上述技术前提下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明的范围内。除非特别说明，本发明所使用的试剂、设备均为本技术领域常规试剂、设备。
1、仪器
仪器名称 编号 来源
高效液相色谱仪 Agilent 1100 安捷伦科技(中国)有限公司
电子天平 AUW120D 岛津仪器有限公司
电子天平 SQP 赛多利斯(上海)贸易有限公司
电子天平 FA124 上海舜宇恒平科学仪器有限公司
电子天平 XPE204 梅特勒
超声波清洗器 KH-500DE 昆山禾创超声仪器有限公司
超声波清洗器 KQ-3200DE 昆山禾创超声仪器有限公司
数字酸度计 PHS-3C 上海精科
电热鼓风干燥箱 GZX-9240MBE 上海***实业有限公司医疗设备厂
冰箱 BCD-2372E3CS 美菱
溶出仪 FADT-800RC 上海富科思分析仪器有限公司
溶出仪 FADT-1200RC 上海富科思分析仪器有限公司
智能真空脱气仪 FAVD-25 上海富科思分析仪器有限公司
2、试剂
试剂名称 级别 来源
乙腈 HPLC 上海星可高纯试剂有限公司
磷酸二氢钾 AR 国药集团化学试剂有限公司
磷酸 HPLC 阿拉丁
四丁基氢氧化铵(10％水溶液) / Adamas
四丁基硫酸氢铵 / Adamas
四丁基溴化铵 / Adamas
氢氧化钠 AR 国药集团化学试剂有限公司
无水乙酸钠 AR GENERAL REAGENT
醋酸 AR 南京化学试剂股份有限公司
纯化水 / 南京海纳制药有限公司
超纯水 / Millipore
3、对照品、样品及辅料信息
名称 来源 批号 含量(％)
盐酸氨基葡萄糖对照品 中国食品药品检定研究院 140649-201606 100.0％
盐酸氨基葡萄糖片 南京海纳制药有限公司 200529121 /
盐酸氨基葡萄糖 扬州日兴生物科技股份有限公司 20181002 99.72
辅料 南京海纳医药科技股份有限公司 2020060301/ /
实施例1：高效液相色谱条件的确定
(1)取盐酸氨基葡萄糖片，参照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法测定)，以pH4.5醋酸钠溶液900ml作为溶剂，转速为50转每分钟，依法操作，在45min取溶出液，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加溶出介质溶解并稀释制成每1ml中含盐酸氨基葡萄糖0.8mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；按照盐酸氨基葡萄糖片的中辅料的配方，将不含主成分的各辅料，以pH4.5醋酸钠溶液900ml作为溶剂，转速为50转每分钟，依法操作，在45min取溶出液，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为辅料溶液；以溶出介质pH4.5醋酸钠溶液作为空白溶液。
采用下列高效液相色谱条件进行溶出度检测：
色谱柱：InertsustainC8，250×4.6mm，5μm；以辛基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相A：含3.85mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g至适量水中，再加入10％四丁基氢氧化铵水溶液10ml，搅拌溶解后加水稀释至1000ml，用磷酸调节pH至3.5)；流动相B为乙腈；流动相A和流动相B以体积比为80:20进行等度洗脱，运行时间6min；检测波长：195nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：35℃。***适用性要求：盐酸氨基葡萄糖峰的拖尾因子不得过2.0。
测定法：分别精密量取上述空白溶液、辅料溶液、对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，如图1-图4所示。
由图1～图4可知，以pH4.5醋酸钠溶液作为溶出介质，空白溶液和辅料溶液对盐酸氨基葡萄糖主峰均无干扰；对照品溶液和盐酸氨基葡萄糖片溶出度供试品溶液中的盐酸氨基葡萄糖峰拖尾因子均符合规定，检测结果见表1。
(2)取盐酸氨基葡萄糖片，参照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法测定)，以pH6.8磷酸盐溶液900ml作为溶剂，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液、辅料溶液。以溶出介质pH6.8磷酸盐溶液作为空白溶液。分别精密量取上述空白溶液、辅料溶液、对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照步骤(1)中的色谱条件进行检测，记录色谱图，如图5-图8所示。
由图5～图8可知，以pH6.8磷酸盐溶液作为溶出介质，空白溶液和辅料溶液对盐酸氨基葡萄糖主峰均无干扰；对照品溶液和盐酸氨基葡萄糖片溶出度供试品溶液中的盐酸氨基葡萄糖峰拖尾因子均符合规定，检测结果见表1。
(3)取盐酸氨基葡萄糖片，参照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法测定)，以水900ml作为溶剂，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液、辅料溶液。以溶出介质水作为空白溶液。分别精密量取上述空白溶液、辅料溶液、对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照步骤(1)中的色谱条件进行检测，记录色谱图，如图9-图12所示。
由图9～图12可知，以水作为溶出介质，空白溶液和辅料溶液对盐酸氨基葡萄糖主峰均无干扰；对照品溶液和盐酸氨基葡萄糖片溶出度供试品溶液中的盐酸氨基葡萄糖峰拖尾因子均符合规定，检测结果见表1。
表1色谱分析数据
Figure BDA0003087836290000101
对比例1：
参照美国药典(USP43)收载的氨基葡萄糖片溶出度检测方法，具体色谱条件为：以辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(InertsustainC8，250×4.6mm，5μm)，以0.05％磷酸溶液(氢氧化钾调节pH为3.0)-乙腈(60:40)为混合流动相进行等度洗脱；检测波长为195nm，流速为0.6ml/min，进样体积为10μl，柱温：35℃。
分别精密量取实施例1步骤(1)中空白溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件进行检测，记录色谱图，图谱见图13～图14。
由图13～图14可知，以不含正离子对试剂四丁基氢氧化铵的磷酸溶液-乙腈作为混合流动相进行等度洗脱检测盐酸氨基葡萄糖片的溶出度时，溶出介质pH4.5醋酸钠溶液干扰盐酸氨基葡萄糖峰的检测，无法准确测定溶出度，准确度低。
分别精密量取实施例1步骤(1)中空白溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件进行检测，记录色谱图，图谱见图15～图16。
由图15～图16可知，以不含正离子对试剂四丁基氢氧化铵的磷酸溶液-乙腈作为混合流动相进行等度洗脱检测盐酸氨基葡萄糖片的溶出度时，溶出pH6.8磷酸盐溶液也干扰盐酸氨基葡萄糖峰的检测，无法准确测定溶出度，准确度低。
针对上述问题，本发明通过优化等度洗脱过程中流动相的比例，尝试不同的色谱柱以及调节柱温等方式期望筛选出最佳的色谱条件，从而克服溶出介质对盐酸氨基葡萄糖峰的干扰问题，结果都失败了。例如，调节等度洗脱过程中混合流动相中磷酸溶液-乙腈的比例为95:5、90:10或80:20；色谱柱的温度为25℃或35℃或40℃，筛选不同品牌的色谱柱Kromasil 100-5C8(250×4.6mm，5μm)、SHIMADZU Shim-pack GIST C8(250×4.6mm，5μm)、Inertsustain C8(250×4.6mm，5μm)、Inertsustain C8(150×4.6mm，5μm)、Inertsil C8-4(4.6*250mm，3μm)，均不能改善溶出介质对盐酸氨基葡萄糖峰的干扰。
实施例2：盐酸氨基葡萄糖在介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液和水中的线性
精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品42mg(平行3份)，分别加介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水溶解并稀释至10ml，摇匀，即得介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水的线性贮备液。分别精密移取各介质的线性贮备液依次0.16ml、0.4ml、1ml、1.6ml、2ml、2.4ml置不同的10ml量瓶中，分别加介质稀释至刻度，摇匀；即得介质pH4.5醋酸钠、pH6.8磷酸盐溶液、水的线性溶液。
分析检测方法采用实施例1中步骤(1)中所述的分析方法进行色谱检测。
精密量取上述各浓度线性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样浓度(mg/ml)为横坐标(X轴)，峰面积为纵坐标(Y轴)，进行线性回归，绘制标准曲线，结果见表2，线形图如图17～图19。
表2线性关系考察数据
介质 浓度范围(ug/ml) 回归方程 相关系数
pH4.5醋酸钠溶液 67.408～1011.120 y＝0.4709x+4.4096 0.9999
pH6.8磷酸盐溶液 67.872～1018.080 y＝0.4711x+2.1895 0.9999
水 68.032～1020.480 y＝0.4501x+4.8383 0.9998
由表2可以看出：盐酸氨基葡萄糖的介质pH4.5醋酸钠溶液在67.408～1011.120ug/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.9999；盐酸氨基葡萄糖的介质pH6.8磷酸盐溶液在67.872～1018.080ug/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.9999；盐酸氨基葡萄糖的介质水在68.032～1020.480ug/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.9998。
实施例3：盐酸氨基葡萄糖在介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水中的回收率
取盐酸氨基葡萄糖对照品适量(平行6份)，精密称定，分别加介质pH4.5醋酸钠、pH6.8磷酸盐溶液、水溶解并稀释制成每1ml中约含盐酸氨基葡萄糖0.8mg的溶液，各介质平行2份。
精密称取盐酸氨基葡萄糖约1042mg(平行3份)，分别加介质pH4.5醋酸钠、pH6.8磷酸盐溶液、水溶解并稀释至50ml，作为各介质的贮备液。
10％限度：称取辅料适量，置50ml量瓶中，精密移取贮备液0.2ml，加介质溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；各介质平行3份。
50％限度：称取辅料适量，置50ml量瓶中，精密移取贮备液1.0ml，加介质溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；各介质平行3份。
100％限度：称取辅料适量，置50ml量瓶中，精密移取贮备液2.0ml，加介质溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；各介质平行3份。
120％限度：称取辅料适量，置50ml量瓶中，精密移取贮备液2.4ml，加介质溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液；各介质平行3份。
分析检测方法采用实施例1中步骤(1)中所述的分析方法进行色谱检测。
精密量取对照品溶液和回收率溶液各10μl，记录色谱图，结果见表3。
表3回收率试验数据
介质 平均回收率(％) RSD(％)
pH4.5醋酸钠溶液 100.8 2.53
pH6.8磷酸盐溶液 101.8 1.53
水 101.1 1.06
由表3可以看出：介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水中的溶出度回收率在98％～102％范围内，RSD均小于10％，说明准确度均良好。
实施例4：
(1)取盐酸氨基葡萄糖片，参照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法测定)，以pH4.5醋酸钠溶液900ml作为溶剂，转速为50转每分钟，依法操作，在45min取溶出液，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加溶出介质溶解并稀释制成每1ml中含盐酸氨基葡萄糖0.8mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；按照盐酸氨基葡萄糖片的中辅料的配方，将不含主成分的各辅料，以pH4.5醋酸钠溶液900ml作为溶剂，转速为50转每分钟，依法操作，在45min取溶出液，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为辅料溶液；以溶出介质pH4.5醋酸钠溶液作为空白溶液。
(2)将步骤(1)中溶出介质替换成pH6.8磷酸盐溶液，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液、辅料溶液。以溶出介质pH6.8磷酸盐溶液作为空白溶液。
(3)将步骤(1)中溶出介质替换成水，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液、辅料溶液。以溶出介质水作为空白溶液。
将步骤(1)-(3)中配制的溶液，分别采用下列高效液相色谱条件进行溶出度检测：
色谱柱：InertsustainC8，250×4.6mm，5μm；以辛基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相A：含3.85mmol/L四丁基硫酸氢铵的磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g至适量水中，再加入四丁基硫酸氢铵1.3g，搅拌溶解后加水稀释至1000ml，用磷酸调节pH至3.5)；流动相B为乙腈；流动相A和流动相B以体积比为80:20进行等度洗脱，运行时间6min；检测波长：195nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：35℃。***适用性要求：盐酸氨基葡萄糖峰的拖尾因子不得过2.0。
实验结果：选用含3.85mmol/L四丁基硫酸氢铵的磷酸二氢钾缓冲液-乙腈作为混合流动相，检测盐酸氨基葡萄糖片溶出度时，介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水及其辅料溶液对盐酸氨基葡萄糖主峰均无干扰，对照品溶液和盐酸氨基葡萄糖片溶出度供试品溶液中的盐酸氨基葡萄糖峰拖尾因子均符合规定，可以准确测定三种不同介质中盐酸氨基葡萄糖片的溶出度。
实施例5：
(1)取盐酸氨基葡萄糖片，参照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法测定)，以pH4.5醋酸钠溶液900ml作为溶剂，转速为50转每分钟，依法操作，在45min取溶出液，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加溶出介质溶解并稀释制成每1ml中含盐酸氨基葡萄糖0.8mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；按照盐酸氨基葡萄糖片的中辅料的配方，将不含主成分的各辅料，以pH4.5醋酸钠溶液900ml作为溶剂，转速为50转每分钟，依法操作，在45min取溶出液，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为辅料溶液；以溶出介质pH4.5醋酸钠溶液作为空白溶液。
(2)将步骤(1)中溶出介质替换成pH6.8磷酸盐溶液，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液、辅料溶液。以溶出介质pH6.8磷酸盐溶液作为空白溶液。
(3)将步骤(1)中溶出介质替换成水，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液、辅料溶液。以溶出介质水作为空白溶液。
将步骤(1)-(3)中配制的溶液，分别采用下列高效液相色谱条件进行溶出度检测：
色谱柱：InertsustainC8，250×4.6mm，5μm；以辛基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相A：含4.65mmol/L四丁基溴化铵的磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g至适量水中，再加入四丁基溴化铵1.5g，搅拌溶解后加水稀释至1000ml，用磷酸调节pH至3.5)；流动相B为乙腈；流动相A和流动相B以体积比为80:20进行等度洗脱，运行时间6min；检测波长：195nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：35℃。***适用性要求：盐酸氨基葡萄糖峰的拖尾因子不得过2.0。
实验结果：选用含4.65mmol/L四丁基溴化铵的磷酸二氢钾缓冲液-乙腈作为混合流动相，检测盐酸氨基葡萄糖片溶出度时，介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水及其辅料溶液对盐酸氨基葡萄糖主峰均无干扰，对照品溶液和盐酸氨基葡萄糖片溶出度供试品溶液中的盐酸氨基葡萄糖峰拖尾因子均符合规定，可以准确测定三种不同介质中盐酸氨基葡萄糖片的溶出度。
实施例6：
(1)取盐酸氨基葡萄糖片，参照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法测定)，以pH4.5醋酸钠溶液900ml作为溶剂，转速为50转每分钟，依法操作，在45min取溶出液，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加溶出介质溶解并稀释制成每1ml中含盐酸氨基葡萄糖0.8mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；按照盐酸氨基葡萄糖片的中辅料的配方，将不含主成分的各辅料，以pH4.5醋酸钠溶液900ml作为溶剂，转速为50转每分钟，依法操作，在45min取溶出液，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为辅料溶液；以溶出介质pH4.5醋酸钠溶液作为空白溶液。
(2)将步骤(1)中溶出介质替换成pH6.8磷酸盐溶液，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液、辅料溶液。以溶出介质pH6.8磷酸盐溶液作为空白溶液。
(3)将步骤(1)中溶出介质替换成水，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液、辅料溶液。以溶出介质水作为空白溶液。
将步骤(1)-(3)中配制的溶液，分别采用下列高效液相色谱条件进行溶出度检测：
色谱柱：以辛基硅烷键合硅胶(InertsustainC8，250×4.6mm，5μm)为填充剂；
流动相A：含5mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g至适量水中，再加入10％四丁基氢氧化铵水溶液13ml，搅拌溶解后加水稀释至1000ml，用磷酸调节pH至3.5)；流动相B为乙腈；流动相A和流动相B以体积比为80:20进行等度洗脱，运行时间6min；检测波长：195nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：35℃。***适用性要求：盐酸氨基葡萄糖峰的拖尾因子不得过2.0。
实验结果：选用含5mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液-乙腈作为混合流动相，检测盐酸氨基葡萄糖片溶出度时，介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水及其辅料溶液对盐酸氨基葡萄糖主峰均无干扰，对照品溶液和盐酸氨基葡萄糖片溶出度供试品溶液中的盐酸氨基葡萄糖峰拖尾因子均符合规定，可以准确测定三种不同介质中盐酸氨基葡萄糖片的溶出度。
对比例2：
分别精密量取实施例6步骤(2)中pH6.8介质的空白溶液与供试品溶液各10μl，采用下列高效液相色谱条件进行溶出度检测：
色谱柱：以辛基硅烷键合硅胶(InertsustainC8，250×4.6mm，5μm)为填充剂；
流动相A：含0.6mmol/L四丁基硫酸氢铵的磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g至1000ml水中，搅拌溶解后，再加入四丁基硫酸氢铵0.2g，搅拌溶解，用磷酸调节pH至3.5)；流动相B为乙腈；流动相A和流动相B以体积比为80:20进行等度洗脱，运行时间10min；检测波长：195nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：35℃。
检测结果见表4，色谱图见图20。
表4色谱数据汇总
溶出介质 样品名称 保留时间(min) 理论板数 拖尾因子
pH6.8磷酸盐溶液 供试品溶液 6.312 7830 2.22
从上述表4和图20可以看出：当流动相中正离子对试剂四丁基硫酸氢铵的浓度约为0.6mmol/L时，盐酸氨基葡萄糖峰的拖尾因子增大(>2.0)，且理论板数降低(<10000)；说明当正离子对试剂的浓度过低时，盐酸氨基葡萄糖主峰拖尾严重，与其后杂质峰达不到基线分离，无法准确测定pH6.8磷酸盐溶液介质中的溶出度。
对比例3：
以溶出介质pH4.5醋酸钠溶液作为空白溶液，按照实施例6中步骤(1)配制辅料溶液、供试品溶液及对照品溶液，分别精密量取空白溶液、辅料溶液、供试品溶液与对照品溶液各10μl，采用下列高效液相色谱条件进行溶出度检测：
色谱柱：以辛基硅烷键合硅胶(InertsustainC8，250×4.6mm，5μm)为填充剂；
流动相A：含16mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g至1000ml水中，搅拌溶解后，再加入10％四丁基氢氧化铵40ml，搅拌溶解，用磷酸调节pH至3.5)；流动相B为乙腈；流动相A和流动相B以体积比为80:20进行等度洗脱，运行时间10min；检测波长：195nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：35℃。
检测结果见表5，色谱图见图21～图22。
表5色谱数据汇总
Figure BDA0003087836290000161
从上述表5和图21～图22可以看出：当流动相中正离子对试剂浓度为16mmol/L，介质pH4.5醋酸钠溶液中的杂质峰保留时间也延迟，杂质峰与盐酸氨基葡萄糖主峰的分离度小于2.0；说明当正离子对试剂的浓度过高时，介质pH4.5醋酸钠溶液的杂质峰与主峰分离度减小，易干扰主峰的检测。
对比例4：
流动相A：含18.6mmol/L四丁基溴化铵的磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g至1000ml水中，搅拌溶解后，再加入四丁基溴化铵6g，搅拌溶解，用磷酸调节pH至3.5)；流动相B为乙腈；流动相A和流动相B以体积比为80:20时，浑浊。说明正离子对试剂四丁基溴化铵的浓度不能太高，否则与有机相混合时，析出，不能作为高效液相的流动相使用。
通过筛选流动相A中正离子对试剂(四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵)的浓度(1mmol/L、3mmol/L、3.5mmol/L、3.85mmol/L、4.65mmol/L、5mmol/L、5.5mmol/L、6mmol/L、8mmol/L或10mmol/L)，其应为1～10mmol/L，优选为3～5mmol/L，这样正离子对试剂的磷酸二氢钾缓冲液与有机相按80:20比例混合时，澄清，不析出；色谱图中杂质峰能与主峰达到基线分离，专属性良好，能准确地测定各介质(介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水)中的溶出度。
实施例7：盐酸氨基葡萄糖片溶出度的测定
取本品三批各6片，照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法测定)，以水900ml作为溶剂，转速为75转每分钟，依法操作，经30分钟时，取溶液适量，0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取干燥至恒重的对照品适量，加溶出介质水溶解并稀释制成每1ml中约含盐酸氨基葡萄糖0.8mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。取介质水作为空白溶液。采用下列高效液相色谱法进行溶出度检测：色谱柱：辛基硅烷键合硅胶为填充剂(InertsustainC8，250×4.6mm，5μm；流动相：3.85mmol/L四丁基氢氧化铵缓冲溶液(取磷酸二氢钾6.8g至水1000ml中，加入10％四丁基氢氧化铵水溶液10ml，用磷酸调节pH至3.5)-乙腈(80：20)；流速：1.0ml/min，进样量：10μl，柱温：35℃，检测波长：195nm，等度洗脱，运行时间6min；***适用性要求：盐酸氨基葡萄糖峰的拖尾因子不得过2.0。分别精密量取上述空白溶液、供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算出每片的溶出度。结果见表6。
表6溶出度测定结果
Figure BDA0003087836290000171
结果表明：各批次的溶出度RSD<2.0％，均一性良好。
实施例8：盐酸氨基葡萄糖片在不同介质中的溶出曲线的测定
(1)取本品三批各12片，参照溶出度与释放度测定法(中国药典2020年版四部通则0931第二法测定)，以pH4.5醋酸钠溶液900ml作为溶剂，转速为50转每分钟，依法操作，经5、10、15、20、30、45min时，取5ml溶出液(同时补加相同体积的介质)，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；另精密称取干燥至恒重的盐酸氨基葡萄糖对照品适量，加溶出介质溶解并稀释制成每1ml中含盐酸氨基葡萄糖0.8mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；以溶出介质pH4.5醋酸钠溶液作为空白溶液。
(2)将步骤(1)中溶出介质替换成pH6.8磷酸盐溶液，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液。以溶出介质pH6.8磷酸盐溶液作为空白溶液。
(3)将步骤(1)中溶出介质替换成水，按照步骤(1)中步骤分别配制供试品溶液、对照品溶液。以溶出介质水作为空白溶液。
将步骤(1)-(3)中配制的溶液，分别采用下列高效液相色谱条件进行溶出度检测：
色谱柱：Kromasil 100-5C8(250×4.6mm，5μm)；流动相A：含5mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾6.8g至适量水中，再加入10％四丁基氢氧化铵水溶液13ml，搅拌溶解后加水稀释至1000ml，用磷酸调节pH至3.5)；流动相B为乙腈；流动相A和流动相B以体积比为80:20进行等度洗脱，运行时间6min；检测波长：195nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：35℃。***适用性要求：盐酸氨基葡萄糖峰的拖尾因子不得过2.0。按外标法以峰面积计算出每片在不同时间的溶出度。实验结果见表7～表9，溶出曲线见图23～25。
表7溶出度测定结果
Figure BDA0003087836290000181
Figure BDA0003087836290000191
表8溶出度测定结果
Figure BDA0003087836290000192
Figure BDA0003087836290000201
表9溶出度测定结果
Figure BDA0003087836290000202
Figure BDA0003087836290000211
实验结果表明：选用含5mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液-乙腈作为混合流动相，不同品牌的C8(250×4.6mm，5μm)为色谱柱，可以准确测定三种不同介质(介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水)中盐酸氨基葡萄糖片的溶出度。
综上实施例1-7所述，本发明提供的盐酸氨基葡萄糖片溶出度检测方法，在测定溶出介质分别是pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水的盐酸氨基葡萄糖片溶出度实验中，专属性均良好，介质及辅料溶液对盐酸氨基葡萄糖主峰均无干扰；拖尾因子均在1.00～1.50之间，峰纯度均>990，盐酸氨基葡萄糖峰保留时间均在3.5～5min，非常快。
在介质pH4.5醋酸钠溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水中的盐酸氨基葡萄糖峰峰面积与其浓度均呈良好的线性关系，其线性相关系数均大于0.999，各介质回收率也均在98％～102％范围内，RSD均小于10％，准确度均良好。
因此，本发明提供的检测方法方便、高效、准确、专属性好。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可能对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (15)

1.一种盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，它包括以下步骤：
（1）供试品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖制剂加入溶出介质中溶解并定量稀释，在t时取出溶出液过滤，取续滤液作为在时间t时的供试品溶液；
（2）对照品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖对照品，加入溶出介质溶解并定量稀释，摇匀，作为对照品溶液；
（3）空白溶液：溶出介质；所述溶出介质为pH 3.8~5.8醋酸钠缓冲溶液，pH4.5~8.0磷酸盐缓冲溶液，或水；
（4）高效液相色谱法检测：采用高效液相色谱法对供试品溶液、对照品溶液以及空白溶液进行检测，记录色谱图，根据峰面积计算盐酸氨基葡萄糖制剂中盐酸氨基葡萄糖的浓度和/或含量，进而得到盐酸氨基葡萄糖制剂在时间t时的溶出度；
所述高效液相色谱法检测的色谱条件为：色谱柱以辛基硅烷键合硅胶为填充剂；以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为75~85:25~15；所述流动相A为含1~10mmol/L正离子对试剂的磷酸二氢钾缓冲液，以磷酸调其pH值至3.0-4.0，所述正离子对试剂为四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵；在所述流动相A中磷酸二氢钾的浓度为10-60mmol；所述流动相B为乙腈。
2.根据权利要求1所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（4）中，在所述流动相A中正离子对试剂的浓度为3~5mmol/L。
3.根据权利要求2所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（4）中，在所述流动相A中正离子对试剂的浓度为3.85 mmol/L。
4.根据权利要求3所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（4）中，在所述流动相A中磷酸二氢钾的浓度为10-50mmol；在配制所述流动相A时，以磷酸调其pH值至3.5。
5.根据权利要求1所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（4）中，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为78~82:22~18。
6.根据权利要求5所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（4）中，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为80:20。
7.根据权利要求1所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述盐酸氨基葡萄糖制剂为盐酸氨基葡萄糖片剂、盐酸氨基葡萄糖胶囊剂、盐酸氨基葡萄糖颗粒剂或盐酸氨基葡萄糖分散剂。
8.根据权利要求7所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述盐酸氨基葡萄糖制剂为盐酸氨基葡萄糖片剂。
9.根据权利要求1所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，所述的溶出介质为pH 4.5醋酸钠溶液，pH6.8磷酸盐溶液，或水。
10.根据权利要求1所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（4）中，所述色谱柱为InertsustainC8或Kromasil 100-5 C8。
11.根据权利要求10所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的长度为250mm，直径为4.6mm，填料粒径为5μm。
12.根据权利要求1所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（4）中，所述高效液相色谱法检测的色谱条件包括：检测波长为190~200nm；流速为0.8-1.2ml/min；柱温为30~40℃；进样体积为5~50µl。
13.根据权利要求12所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，在步骤（4）中，所述高效液相色谱法检测的色谱条件包括：检测波长为195nm；流速为1.0 ml/min；柱温为35℃；进样体积为10µl。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，它包括如下步骤：
（1）供试品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖片，以500~1000 ml溶出介质作为溶剂，转速为每分钟50~100转，5~60分钟后，取溶出液过滤，作为供试品溶液；
（2）对照品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖对照品，加入溶出介质溶解并定量稀释制成每ml含盐酸氨基葡萄糖0.2~1.5mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
（3）空白溶液：即溶出介质，所述溶出介质为pH 4.5醋酸钠溶液，pH6.8磷酸盐溶液，或水；
（4）精密量取供试品溶液、对照品溶液以及空白溶液进行检测，记录色谱图，根据外标法以峰面积计算盐酸氨基葡萄糖片中盐酸氨基葡萄糖的溶出度；
所述高效液相色谱法检测的色谱条件为：色谱柱为InertsustainC8或Kromasil 100-5C8；以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为80:20；所述流动相A为含3~5mmol/L四丁基氢氧化铵、四丁基硫酸氢铵或四丁基溴化铵的磷酸二氢钾缓冲液，以磷酸调其pH值至3.0-4.0；所述流动相B为乙腈；检测波长为195nm；流速为1.0 ml/min；柱温为35℃；进样体积为10µl。
15.根据权利要求14所述的盐酸氨基葡萄糖制剂溶出度的检测方法，其特征在于，它包括如下步骤：
（1）供试品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖片，以900 ml溶出介质作为溶剂，转速为每分钟50转，5~60分钟后，取溶出液过滤，作为供试品溶液；
（2）对照品溶液的配制：取盐酸氨基葡萄糖对照品，加入溶出介质溶解并定量稀释制成每ml含盐酸氨基葡萄糖0.8mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
（3）空白溶液：即溶出介质，所述溶出介质为pH 4.5醋酸钠溶液，pH6.8磷酸盐溶液，或水；
（4）精密量取供试品溶液、对照品溶液以及空白溶液进行检测，记录色谱图，根据外标法以峰面积计算盐酸氨基葡萄糖片中盐酸氨基葡萄糖的溶出度；
所述高效液相色谱法检测的色谱条件为：色谱柱为InertsustainC8；以流动相A和流动相B为混合流动相进行等度洗脱，在等度洗脱的过程中流动相A和流动相B的体积比为80:20；所述流动相A为含3.85mmol/L四丁基氢氧化铵的磷酸二氢钾缓冲液，以磷酸调其pH值至3.5；所述流动相B为乙腈；检测波长为195nm；流速为1.0 ml/min；柱温为35℃；进样体积为10µl。
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