CN113181183A - 卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，通过在小鼠LS进行埋管给药的实验结果显示：LS脑区的多巴胺受体参与调控小鼠焦虑样行为。当注射多巴胺D2受体激动剂卡麦角林时，小鼠的焦虑程度表现出了显著的降低。因此，提示卡麦角林激活LS脑区的多巴胺受体，可以缓解小鼠焦虑样行为，产生抗焦虑的作用。

Description

卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用

【技术领域】

本发明涉及抗焦虑药物技术领域，涉及卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，具体涉及多巴胺d2受体的激动剂卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用。

【背景技术】

焦虑是一种常见的精神障碍疾病的表现[Psychol Med，2005.35(12):1773-83，Int J Methods Psychiatr Res，2012.21(3):169-84.]。研究统计表明，在全球范围，焦虑障碍的终生患病率为5％-25％，12个月患病率为3.3％-20.4％[Alonso Depress Anxiety，2018，35(3):195-208]。据2019年发表的中国精神卫生调查显示，中国的焦虑障碍患病率居所有精神障碍的首位，终身患病率为7.6，12个月患病率为5.0％。焦虑症的核心特征是过度恐惧和焦虑以及相关的行为障碍，主要表现为发作性或持续性的紧张、害怕、躲避，并伴有自主神经功能的紊乱，给患有焦虑症的患者及其家庭带来了极大的痛苦。根据“精神疾病诊断和统计手册-第五版”(DSM-V)，焦虑症可分为：分离性焦虑症、选择性缄默症、特殊恐惧症(SP)、社交焦虑症(SAD)、恐慌症、广场恐惧症、广泛性焦虑症(GAD)、物质/药物引起的焦虑症和其他药物引起的焦虑症。大约四分之一的成年人会在一生中的某个时候患上焦虑症。焦虑症患者会经历严重的身体和情绪不适，并有更高的药物使用率和内科疾病。焦虑症的高患病率和与高功能残疾的结合导致了特别高的经济和社会成本。

对焦虑障碍临床常用的治疗方式包括心理治疗和药物治疗。例如中国专利CN02120351用于抑郁症和焦虑的联合治疗，公开了一种通过对哺乳动物施用与多巴胺D3受体***组合的单胺重摄取抑制剂而治疗哺乳动物(包括人)的抑郁症或焦虑的方法，它包含：(a)多巴胺D3受体***，或其可药用盐；(b)所描述和定义的式I的化合物，还涉及含可药用载体、单胺重摄取抑制剂和多巴胺D3受体***的药物组合物。

目前临床上治疗焦虑的药物主要是苯二氮卓类药物、螺酮类药物和抗抑郁药物等。尽管已有诸多治疗焦虑的方法，但焦虑的治疗仍然存在着大量的问题。目前已被批准临床使用的抗焦虑药物不能完全减轻焦虑症状，同时还存在许多不良反应。

因此，全面的了解焦虑这种情绪在大脑中的神经调控机制，改进焦虑障碍的治疗思路，为焦虑障碍患者提供更多的药物选择迫在眉睫。

【发明内容】

针对现有技术中已被批准临床使用的抗焦虑药物不能完全减轻焦虑症状、同时还存在许多不良反应的问题，本发明提供了卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，具体是多巴胺d2受体的激动剂卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用。

卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，具体是多巴胺d2受体的激动剂卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用。

进一步的，所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，所述药物组合物是以卡麦角林为主要成分，加上药学中可接受的辅料或辅助性成分制备成临床上可接受的药物制剂。

进一步的，所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，所述药物制剂包括口服制剂和注射制剂两种剂型。

进一步的，所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，所述口服制剂为口服胶囊，所述注射制剂为静脉注射液。

进一步的，所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，是将卡麦角林通过颅内给药的方式定位注射至外侧隔核脑区，产生抗焦虑的作用。

通常而言，作为药物，均是在制备成制剂后才临床应用。本发明所述的药物组合物，作为药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明药物组合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明药物组合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95％(w/w)。

本发明药物组合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、***、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明药物组合物可以制成普通制剂、也可以制成缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药***。为了将本发明药物组合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；润湿剂可以是水、乙醇、异丙醇等；黏合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、***胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明药物组合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明药物组合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明药物组合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明药物组合物的胶囊剂。

为将本发明药物组合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其他添加剂。

和现有技术相比，本发明具有如下优点：

1、本发明所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，提出了一个新的治疗焦虑障碍的药物靶点。

2、本发明所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，发现将卡麦角林用于焦虑障碍的治疗，扩大了卡麦角林的适用范围。

3、本发明所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，给药方式为颅内定点给药，与其他给药方式相比，减少了药物的副作用。

【附图说明】

图1是本发明实施例中给予LS卡麦角林在旷场实验中对小鼠焦虑样行为的影响的图。

图2是本发明实施例中给予LS多巴胺受体激动剂在高架十字迷宫实验中对小鼠焦虑样行为的影响的图。

图3是本发明实施例中给予LS卡麦角林在摄食饮水实验中对小鼠焦虑样行为的影响的图。

图4是本发明实施例中给予LS卡麦角林在新环境摄食抑制实验中对小鼠焦虑样行为的影响的图。

图5是本发明实施例中给予LS卡麦角林在糖水偏好实验中对小鼠焦虑样行为的影响的图。

【具体实施方式】

以下结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步说明。

实施例：

1、卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用：

2、实验方法

2.1埋管给药：

(1)取实验用C57BL/6J小鼠，称重，将小鼠放入麻醉诱导箱，使用异氟烷气体麻醉小鼠。

(2)待小鼠完全麻醉后，将小鼠的头部固定于脑立体定位仪上，使其头部保持水平。头顶皮肤剃毛，切开头皮筋膜，以无菌干棉球涂擦颅骨表面清楚暴露前囟、后囟点。

(3)以前囟为原点，按照脑图谱的坐标找到LS脑区的位置，并在LS脑区周围的颅骨表面找三个点用于固定颅骨钉，用中性笔做好标记。

(4)标记处用牙科电钻在颅骨上进行打孔，角度尽量小于30°，至硬脑膜处停止，换用手术刀刀尖挑破硬脑膜，充分暴露脑组织，尽量不伤及血管和皮层。

(5)将套管缓慢***对应脑区，并在其他三个孔埋入颅骨钉。

(6)采用牙托水泥将套管、颅骨、颅骨钉紧密粘合，将粉剂和溶剂按比例混合后凝固时间为5-10min，应避免粘合物体表面有水，否则粘合不牢。

(7)待牙托粉自凝塑料完全凝固后松开固定套管的装置，术后涂抹林可霉素利多卡因凝胶，防止感染。

(8)将小鼠放回笼中，休息5-7d，恢复后再进行后续实验。

(9)给药时将内芯取出，给药针从套管进入给药。给药结束后将内芯***。

2.2药物浓度：

2.2.1向LS脑区内注射多巴胺D2受体的激动剂卡麦角林(Cabergoline，selleck公司)，注射体积0.5μl，注射浓度2μg/μl，注射速率0.05μl/min，注射时间10min，留针5分钟。

2.2.2向LS脑区内注射多D2巴胺受体的激动剂卡麦角林(Cabergoline，selleck公司)，注射体积0.5μl，注射浓度4μg/μl，注射速率0.05μl/min，注射时间10min，留针5分钟。

2.3行为学实验

2.3.1旷场实验：此实验通过Anymaze软件进行，在软件中将旷场底部均匀分为25个小格子，设定中间九个方格为中央区域，周围16个方格为周围区域。用手提拉小鼠尾部将其至于箱体底部中央区域，同时单击软件开始按钮开始记录和分析，观察时间为5min，期间需保持安静。到达时间后，将动物取回，用酒精清洗旷场内壁的动物***物，更换动物后重复上述操作。

2.3.2高架十字迷宫实验：本实验最常用于评估小鼠焦虑程度，小鼠由于天生恐高，一般会呆在闭臂，但是出于好奇心，偶尔也会去开臂探索。将小鼠轻轻放入高架十字迷宫的中心，面向开臂一侧。记录5min，统计小鼠去开臂和闭臂的时间，次数，以及焦虑相关的不动、凝滞等行为学参数。到达时间后，将动物取回，用酒精清洗开、闭臂及动物***物，更换动物后重复上述操作。

2.3.3摄食饮水实验：实验开始前不限制动物的进食和饮水，每只小鼠单笼饲养。实验开始后将小鼠放入实验笼中，每个鼠笼中称取20g食物，200g水，分别记录第30min、60min、90min时的剩余食物及水量。

2.3.4新环境摄食抑制实验：糖水偏好实验分为适应训练部分和测试部分两部分。

在适应训练部分，第一个24小时，在小鼠的饲养笼中，每笼放入两瓶1％(w/v)的蔗糖溶液，在第二个24小时，将其中的一瓶蔗糖溶液换成纯净水，在适应期结束后，撤掉小鼠的食物和水，禁食禁水24h。

在测试期，提前称量200g1％糖水和200g纯净水，小鼠可以自由活动在装有等量体积的两个水瓶之间，分别在30min、60min、90min的时候测量小鼠糖水消耗和纯净水消耗。取走两瓶并称重，记录小鼠的总液体消耗，糖水消耗和纯水消耗。

2.3.5糖水偏好实验：实验开始前动物禁食禁水24h，实验前将固定有食物的白色滤纸固定在底部中央区。实验时从箱体的任意角落将放小鼠入箱内，通过箱体上方摄像头记录小鼠5min在箱体内的活动，同时计算由放入小鼠到小鼠前肢抱起食物进食的时间(摄食潜伏期)，进入食物所在区域的次数，在食物所在区域待的时间。

3、实验结果

3.1给予外侧隔核卡麦角林在旷场实验中对小鼠焦虑样行为的影响

在野生型小鼠的LS脑区埋置套管，消毒修复一周后，通过微量注射泵向LS脑区内注射多巴胺受体的激动剂卡麦角林(Cabergoline，selleck公司，注射体积0.5μl，注射浓度2μg/μl、4μg/μl，注射速率0.05μl/min，注射时间10min，留针5分钟)。

在旷场实验中，同给生理盐水组相比，注射多巴胺受体激动剂的小鼠表现出焦虑状态下降。在给药半小时，2小时和24小时这三个时间中，给药两小时后药物的作用效果达到最佳。给药小鼠***区域探索的时间增加(附图1A，双因素方差分析，F＝6.419，p＝0.014；F＝6.716，p＝0.019；F＝5.126，p＝0.020)。给药小鼠在旷场中的运动速度较对照组增高，并具有统计学意义(附图1B，双因素方差分析，F＝5.266，p＝0.002；F＝17.3006，p＝0.000；F＝16.86，p＝0.001)。在旷场中不动的时间给药组和对照组无显著差异(附图1C)。

附图1，给予LS卡麦角林在旷场实验中对小鼠焦虑样行为的影响

A：SD：control＝15.22％±14.03％，2hDA(+)2ug-ul＝33.47％±6.72％，2hDA(+)4ug-ul＝31.62％±6.77％，24hDA(+)4ug-ul＝31.40％±8.68％；

B：SD：control＝0.85±0.34，30minDA(+)2ug-ul＝1.44±0.26，2hDA(+)2ug-ul＝1.54±0.81，24hDA(+)2ug-ul＝1.50±0.29

3.2给予外侧隔核卡麦角林在高架十字迷宫实验中对小鼠焦虑样行为的影响

在高架十字迷宫实验中，同给生理盐水组相比，在2μg/μl和4μg/μl两个浓度下注射多巴胺受体激动剂组均表现出焦虑水平降低。给药小鼠去开臂区域探索的时间较对照组小鼠相比显著增多(附图2B，双因素方差分析，F＝5.118，p＝0.006；F＝3.76，p＝0.026；F＝10.47，p＝0.007；F＝8.760，p＝0.000；F＝3.24，p＝0.016)。给药小鼠的不动时间和凝滞时间与对照组比较都有降低(附图2C-D)。给药小鼠在旷场中的运动速度与对照组无明显差异(附图2E)。

附图1，给予LS多巴胺受体激动剂在高架十字迷宫实验中对小鼠焦虑样行为的影响

B：SD：control＝2.21％±2.86％，2hDA(+)2ug-ul＝18.34％±17.20％，24hDA(+)2ug-ul＝15.13％±8.77％，30minDA(+)4ug-ul＝17.34％±11.25％，2hDA(+)4ug-ul＝25.16％±13.51％，24hDA(+)4ug-ul＝16.32％±11.19％

C：SD：control＝66.84％±13.31％，2hDA(+)2ug-ul＝40.26％±31.66％，30minDA(+)4ug-ul＝40.58％±11.39％，2hDA(+)4ug-ul＝40.76％±9.17％，24hDA(+)4ug-ul＝49.21％±14.17％

D：SD：control＝66.88％±12.05％，2hDA(+)2ug-ul＝47.96％±26.29％，30minDA(+)4ug-ul＝42.18％±6.55％，2hDA(+)4ug-ul＝49.38％±15.00％，24hDA(+)4ug-ul＝47.36％±20.60％

3.3给予外侧隔核卡麦角林在摄食饮水实验中对小鼠焦虑样行为的影响

在摄食饮水实验中，同给生理盐水组相比，注射多巴胺受体激动剂组小鼠的摄食量无变化(附图3A-C)。给药小鼠的饮水量显著减少(附图3D-F，单因素方差分析，waterintake in 30min p＝0.036，p＝0.006；water intake in 60min p＝0.005，p＝0.034；water intake in 90min p＝0.002)。

附图2给予LS卡麦角林在摄食饮水实验中对小鼠焦虑样行为的影响

D：SD：saline＝0.467±0.144，DA(+)2ug-ul＝0.267±0.172，DA(+)4ug-ul＝0.192±0.132

E：SD：saline＝1.050±0.126，DA(+)2ug-ul＝0.850±0.230，DA(+)4ug-ul＝0.542±0.180

F：SD：saline＝1.517±0.178，DA(+)2ug-ul＝1.358±0.412，DA(+)4ug-ul＝1.108±0.220

3.4给予外侧隔核卡麦角林在新环境摄食抑制实验中对小鼠焦虑样行为的影响

在新环境摄食抑制实验中，同注射生理盐水组相比，注射多巴胺受体激动剂组小鼠去食物所在区域探索的时间增加(附图4A，双因素方差分析，F＝5.560，p＝0.002；F＝9.887，p＝0.005；F＝14.887，p＝0.000)，摄食的潜伏期减少(附图4B，双因素方差分析，F＝6.893，p＝0.000；F＝4.792，p＝0.002；F＝7.42，p＝0.004；F＝9.748，p＝0.001)，进入食物所在区域的次数显著增多(附图4C，双因素方差分析，F＝3.211，p＝0.010)。

附图3给予LS卡麦角林在新环境摄食抑制实验中对小鼠焦虑样行为的影响

A：SD：saline＝21.16％±12.80％，2hDA(+)2ug-ul＝56.88％±17.90％，30minDA(+)4ug-ul＝53.36％±29.01％，2hDA(+)4ug-ul＝69.72％±14.89％

B：SD：saline＝123.33±87.42，30minDA(+)2ug-ul＝21.33±11.27，2hDA(+)2ug-ul＝15.83±4.79，30minDA(+)4ug-ul＝40.50±16.97，2hDA(+)4ug-ul＝30.00±19.75

C：SD：saline＝26.83±7.41，2hDA(+)2ug-ul＝58.67±18.21

3.5给予外侧隔核卡麦角林在糖水偏好实验中对小鼠焦虑样行为的影响

在糖水偏好实验中，同注射生理盐水组相比，注射多巴胺激动剂组小鼠的糖水偏好升高，并具有统计学意义(附图5A-C，单因素方差分析，sucrose preference in 30min p＝0.000，p＝0.000；sucrose preference in 60min p＝0.000，p＝0.000；sucrosepreference in 90min p＝0.000，p＝0.000)。

附图4给予LS卡麦角林在糖水偏好实验中对小鼠焦虑样行为的影响

A：SD：saline＝49.56％±8.53％，DA(+)2ug-ul＝95.22％±4.74％，DA(+)4ug-ul＝96.81％±3.91％

B：SD：saline＝44.36％±6.11％，DA(+)2ug-ul＝91.81％±6.58％，DA(+)4ug-ul＝93.65％±2.56％

C：SD：saline＝46.49％±3.54％，DA(+)2ug-ul＝88.77％±4.59％，DA(+)4ug-ul＝90.55％±2.85％

结论：

在小鼠LS进行埋管给药的实验结果显示：LS脑区的多巴胺受体参与调控小鼠焦虑样行为。当注射多巴胺D2受体激动剂卡麦角林时，小鼠的焦虑程度表现出了显著的降低。

因此，提示卡麦角林激活LS脑区的多巴胺受体，可以缓解小鼠焦虑样行为，产生抗焦虑的作用。

上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (5)

1.卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，其特征在于：具体是多巴胺d2受体的激动剂卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用。

2.根据权利要求1所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，其特征在于：所述药物组合物是以卡麦角林为主要成分，加上药学中可接受的辅料或辅助性成分制备成临床上可接受的药物制剂。

3.根据权利要求2所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，其特征在于：所述药物制剂包括口服制剂和注射制剂两种剂型。

4.根据权利要求3所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，其特征在于：所述口服制剂为口服胶囊，所述注射制剂为静脉注射液。

5.根据权利要求1所述的卡麦角林在制备治疗焦虑障碍的药物组合物中的应用，其特征在于：将卡麦角林通过颅内给药的方式定位注射至外侧隔核脑区，产生抗焦虑的作用。

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