CN113151140B - 一种提高乳杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高乳杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法，属于微生物工程发酵领域。为了解决发酵乳杆菌受环境因素的影响降低活性和抗逆性差的问题。本发明提供了一种提高双歧杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法，步骤为利用含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素中任意一种或任意多种的发酵培养基培养双歧杆菌。调节双歧杆菌细胞膜后双歧杆菌的冻干存活率在85％以上，37℃储藏2个月后存活率为50％以上。

Description

一种提高乳杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法
技术领域
本发明涉及一种提高乳杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法，属于微生物发酵工程领域。
背景技术
乳杆菌或乳酸杆菌(Lactobacillus)是益生菌最重要的组成部分，乳杆菌作为有益健康的微生物应用广泛，而且对人类健康没有明确风险，是作用机制研究最透彻、最清晰，且安全性最高的一类益生菌。常见乳杆菌的有植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌等。乳杆菌作为一类优良的益生菌，具有维持肠道菌群稳态、缓解便秘与腹泻、提高免疫力、拮抗病菌、治疗炎症等益生作用。
要使乳杆菌产品可以发挥理想的益生效果，必须要保证数量足够并且具有活力，所以工业上通常使用冷冻干燥的方法制备乳杆菌益生菌粉。益生菌菌粉的制备有两个最重要的参数，出厂活菌数和储藏稳定性，这两个因素极大的影响乳杆菌菌粉的效果。
为了提高乳杆菌冻干存活率以及保证乳杆菌的储藏稳定性一般要添加合适的冻干保护剂，冻干保护剂的价格昂贵。然而通过复配优化出来的冻干保护剂往往存在着保护效果的菌株差异性，而对每种乳杆菌都进行保护剂的筛选往往费时费力并且应用范围很小。如文献“吴晟，崔树茂，毛丙永，等.干酪乳杆菌菌体表面物质对冻干存活率的影响[J].食品与发酵工业，2020，46(17)：73-79.”中吴晟等人使用相同浓度的水苏糖作为冻干保护剂对三株鼠李糖乳杆菌进行冻干，存活率分别为(30.46±6.08)％、(23.82±8.68)％和(35.71±3.59)％具有显著差异。公开号为CN106047709A的专利申请文本中,崔树茂等人使用含有乳清分离蛋白(WPI)、菊粉、山梨醇和抗坏血酸的冻干保护剂冻干植物乳杆菌时，冻干存活率高达100％,然而，使用同样的冻干保护剂冻干罗伊氏乳杆菌时，冻干存活率仅有50％。上述内容均表明现有的大多数复配优化出的冻干保护剂往往只能对特定菌株有很好的保护效果，对其他种属的乳杆菌使用效果往往变差。
已有通过调节细胞膜不饱和脂肪酸的方法来提高乳杆菌冻干存活的研究报道如文献“杨婕，郭金凤，李宝坤,等.酸-冷交互胁迫对保护冷冻干燥发酵乳杆菌活性的作用[J].食品科学,2020,41(02):101-106.”中通过环境胁迫使乳杆菌细胞膜脂肪酸组成发生变化，但是效果并不理想仅从对照组的30.86％提高至44.66％。
发明内容
本发明的目的是为了在节约成本的前提下，提高乳杆菌的冻干存活率和储存稳定性，解决了乳杆菌受环境因素的影响降低活性和抗逆性差的问题。
一种含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素中任意两种或任意多种的发酵培养基在提高乳杆菌抗逆性中的应用。
本发明还提供了一种提高乳杆菌抗逆性的培养基，所述培养基是含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素中任意两种或任意多种的发酵培养基。
在一种实施方式中，所述培养基还包括碳源和氮源。
本发明提供了一种提高乳杆菌抗逆性的方法，所述方法是利用含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素中任意两种或任意多种的发酵培养基培养乳杆菌。
在一种实施方式中，所述乳杆菌为植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆或罗伊氏乳杆。
在一种实施方式中，所述吐温80的浓度为0.1g/L～2.0g/L；所述胡萝卜素的浓度为0.1g/L～2.0g/L；所述褪黑素的浓度为0.1g/L～2.0g/L。
本发明还提供了一种制备乳杆菌冻干粉的方法，所述方法的步骤如下：
(1)利用上述的发酵培养基培养乳杆菌；
(2)收集步骤(1)得到的乳杆菌与冻干保护剂按照质量比为1:1混合，再进行冻干处理后获得乳杆菌冻干粉。
在一种实施方式中，所述冻干保护剂的成分为：低聚异麦芽糖、胶原蛋白、硫酸镁、谷胱甘肽和硫酸锰中的任意一种或任意多种。
在一种实施方式中，所述冻干保护剂的成分为：低聚异麦芽糖20-22g，胶原蛋白6-8g，硫酸镁0.5-0.7g，谷胱甘肽0.3-0.5g，硫酸锰0.2-0.4g。
本发明还提供了一种乳杆菌冻干粉，所述乳杆菌冻干粉是由所述的方法得到的。
在一种实施方式中，所述乳杆菌为植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆或罗伊氏乳杆。
本发明提供了上述的培养基或上述提高乳杆菌抗逆性的方法在制备乳杆菌冻干粉和提高乳杆菌的冻干存活率及储藏稳定性中的应用。
有益效果：
(1)本发明提供了一种可显著提高不同种属乳杆菌冻干存活率及储藏稳定性的方法，此方法包括在培养基中添加吐温80、β胡萝卜素、褪黑素调节乳杆菌细胞膜组成；调节乳杆菌细胞膜后各类乳杆菌的冻干存活率均大于85％，37℃储藏3个月后存活率均大于50％。
(2)本发明提供了一种提高乳抗逆性的培养基用于培养双歧杆菌，从提高乳杆菌自身抗逆性角度出发，提高乳杆菌细胞膜的流动性及稳定性从而减少乳杆菌在冷冻干燥和储藏过程中受到的损伤，提高最终冻干菌粉的质量。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的β胡萝卜素、维生素K1、角鲨烯、维生素E、褪黑素、胆固醇、豆甾醇、吐温80、吐温20购自上海萨恩化学技术有限公司。
下述实施例中涉及的植物乳杆菌记载于公开号为CN102827796B的专利文本中,保藏编号为CGMCC No.6077；下述实施例涉及的干酪乳杆菌记载于公开号为CN108018248B的专利文本中，保藏编号为CGMCC 12435；下述实施例涉及的鼠李糖乳杆菌记载于公开号为CN111575223A的专利申请文本中，保藏编号为GDMCC No.60705；下述实施例涉及的罗伊氏乳杆菌记载于公开号为CN111621443A的专利申请文本中，保藏编号为GDMCC No.60735。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS液体培养基：蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、牛肉浸膏10g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、K2HPO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、MnSO4·7H2O0.25g/L、蒸馏水1000g/L。
MRS固体培养基：蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、牛肉浸膏10g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、K2HPO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、MnSO4·7H2O0.25g/L、吐温80 1g/L、琼脂20g/L、蒸馏水1000g/L。
下述实施例中涉及的检测方法如下：
不同种属乳杆菌活菌数的检测方法：采用国标《GB 4789.35-2016食品安全国家标准食品微生物学检测乳酸菌检测》。
冻干存活率的计算公式为：
Figure GDA0004141854000000031
实施例1.控制不同培养基成分制备植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)冻干粉
1.配制培养基：按照表1的配方在MRS培养基中额外添加可以调节乳杆菌细胞膜组成与性质的物质；各类调节物质均使用5mL无水乙醇溶解混匀后添加至MRS培养基中，后115℃灭菌20min。
2.制备植物植物乳杆菌冻干粉：用接种环蘸取保菌管中的植物乳杆菌CGMCCNo.6077菌液在MRS固体培养基上划线，于37℃恒温培养36h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃恒温培养12h，得到种子液:将种子液按2％(v/v)的接种量接种至添加调节物质1-12的MRS液体培养基中，37℃恒温培养12h至对数生长末期，得到菌液；将菌液8000g下离心20min，收集菌泥；将菌泥与冻干保护剂按体积质量比1：1混合，得到混合液1-12；将混合液1-12进行冷冻干燥,得到植物乳杆菌冻干粉1-12，冷冻干燥在冷冻干燥机(购自西班牙泰事达公司)内完成,包括预冻、一次干燥和二次干燥，预冻为控制层板1h内降温至-50℃，保持4h，一次干燥为控制层板1.5h升温至-30℃，保持30h，二次干燥为控制层板1h升温至25℃,保持20h。其中，冻干保护剂配制方法为准确称量低聚异麦芽糖21.49g，胶原蛋白7.16g，硫酸镁0.6g，谷胱甘肽0.45g，硫酸锰0.3g，定容至100mL；
3.检测植物乳杆菌冻干粉1-12中植物乳杆菌的活菌数,并且,计算植物乳杆菌冻干粉1-12中植物乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表2)；
结果：由表1-2可知在MRS培养基中添加吐温80 1g/L、β胡萝卜素0.5g/L和褪黑素0.5g/L后培养的植物乳杆菌制备得到的植物乳杆菌冻干粉中的植物乳杆菌的冻干存活率最高，高达98.87±4.76％，并且37℃储藏3个月后存活率最高为66.24±2.21％。
表1通过向发酵培养基添加物质调节细胞膜组成的方法
组别 配方
调节物质1 维生素E 0.5g/L
调节物质2 维生素K1 0.5g/L
调节物质3 角鲨烯0.5g/L
调节物质4 β胡萝卜素0.5g/L
调节物质5 胆固醇0.5g/L
调节物质6 豆甾醇0.5g/L
调节物质7 褪黑素0.5g/L
调节物质8 吐温80 1g/L
调节物质9 吐温80 1g/L+β胡萝卜素0.5g/L
调节物质10 吐温80 1g/L+褪黑素0.5g/L
调节物质11 β胡萝卜素0.5g/L+褪黑素0.5g/L
调节物质12 吐温80 1g/L+β胡萝卜素0.5g/L+褪黑素0.5g/L
表2植物乳杆菌冻干粉1-12中植物乳杆菌的冻干存活率及储藏存活率
Figure GDA0004141854000000041
Figure GDA0004141854000000051
实施例2.控制不同培养基成分制备干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)冻干粉
1.制备干酪乳杆菌冻干粉：在实施例1的基础上，将植物乳杆菌CGMCC No.6077替换为干酪乳杆菌CGMCC12435，得到干酪乳杆菌冻干粉1-12。
2.检测干酪乳杆菌冻干粉1-12中干酪乳杆菌的活菌数，并且计算干酪乳杆菌冻干粉1-12中干酪乳杆菌的冻干存活率及干酪乳杆菌冻干粉储藏3个月后对比冻干前的冻干存活率(检测结果见表3)。
结果：由表3可知在MRS培养基中添加吐温80 1g/L、β胡萝卜素0.5g/L和褪黑素0.5g/L后培养的干酪乳杆菌制备得到的干酪乳杆菌冻干粉中的干酪乳杆菌的冻干存活率最高，高达96.84±4.26％，并且37℃储藏3个月后存活率最高为64.76±3.79％。
表3干酪乳杆菌冻干粉1-12中干酪乳杆菌的冻干存活率及储藏存活率
Figure GDA0004141854000000052
实施例3.控制不同培养基成分制备鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)冻干粉
1.制备鼠李糖乳杆菌冻干粉：在实施例1的基础上，将植物乳杆菌CGMCC No.6077替换为鼠李糖乳杆菌GDMCC No.60705，得到鼠李糖乳杆菌冻干粉1-12。
2.检测鼠李糖乳杆菌冻干粉1-12中鼠李糖乳杆菌的活菌数，并且计算鼠李糖乳杆菌冻干粉1-12中鼠李糖乳杆菌的冻干存活率及鼠李糖乳杆菌冻干粉储藏3个月后对比冻干前的冻干存活率(检测结果见表4)。
结果：由表3可知在MRS培养基中添加吐温80 1g/L、β胡萝卜素0.5g/L和褪黑素0.5g/L后培养的鼠李糖乳杆菌制备得到的鼠李糖乳杆菌冻干粉中的鼠李糖乳杆菌的冻干存活率最高，高达87.72±2.16％，并且37℃储藏3个月后存活率最高为49.75±3.77％。
表4鼠李糖乳杆菌冻干粉1-12中干酪乳杆菌的冻干存活率及储藏存活率
Figure GDA0004141854000000061
/>
实施例4.控制不同培养基成分制备罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)冻干粉
1.制备罗伊氏乳杆菌冻干粉：在实施例1的基础上，将植物乳杆菌CGMCC No.6077替换为罗伊氏乳杆菌GDMCC No.60735，得到罗伊氏乳杆菌冻干粉1-12。
2.检测罗伊氏乳杆菌冻干粉1-12中罗伊氏乳杆菌的活菌数，并且计算罗伊氏乳杆菌冻干粉1-12中罗伊氏乳杆菌的冻干存活率及罗伊氏乳杆菌冻干粉储藏3个月后对比冻干前的冻干存活率(检测结果见表5)。
结果：由表3可知在MRS培养基中添加吐温80 1g/L、β胡萝卜素0.5g/L和褪黑素0.5g/L后培养的罗伊氏乳杆菌制备得到的罗伊氏乳杆菌冻干粉中的罗伊氏乳杆菌的冻干存活率最高，高达99.26±3.61％，并且37℃储藏3个月后存活率最高为67.84±1.67％。
表5罗伊氏乳杆菌冻干粉1-12中干酪乳杆菌的冻干存活率及储藏存活率
Figure GDA0004141854000000062
Figure GDA0004141854000000071
实施例5.控制不同培养基成分制备乳杆菌菌粉
1.乳杆菌菌粉的制备：
在实施例1的基础上，MRS培养基中添加吐温80 0.1g/L、β胡萝卜素0.1g/L和褪黑素0.1g/L后培养；MRS培养基中添加吐温80 2g/L、β胡萝卜素2g/L和褪黑素2g/L后培养；MRS培养基中添加吐温80 1g/L、β胡萝卜素1g/L和褪黑素1g/L后培养；将植物乳杆菌替换为干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和罗伊氏乳杆菌分别在上述培养基中培养后获得菌粉。
2.检测活菌数和存活率，结果如表6所示。
表6乳杆菌的冻干存活率及储藏存活率
Figure GDA0004141854000000072
Figure GDA0004141854000000081
/>
3.结果显示：同时添加吐温80、β胡萝卜素、褪黑素这三种物质，添加范围在0.1-2g/L时，植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌以及罗伊氏乳杆菌的冻干存活率以及储藏存活率均发生了不同程度的提高，但是添加吐温80 1g/L、β胡萝卜素0.5g/L和褪黑素0.5g/L的效果更好。在MRS培养基中添加吐温80 1g/L、β胡萝卜素0.5g/L和褪黑素0.5g/L后培养的各种乳杆菌冻干存活率及储藏存活率最高。
实施例6.控制不同培养基成分制备乳杆菌菌粉
1.乳杆菌菌粉的制备：
在实施例1的基础上，MRS培养基中添加吐温80 0.1g/L和β胡萝卜素0.1g/L后培养；MRS培养基中添加β胡萝卜素2g/L和褪黑素2g/L后培养；MRS培养基中添加吐温80 1g/L和褪黑素1g/L后培养；将植物乳杆菌替换为干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌和罗伊氏乳杆菌分别在上述培养基中培养后获得菌粉。
2.检测活菌数和存活率，结果如表7所示。
表7乳杆菌的冻干存活率及储藏存活率
Figure GDA0004141854000000091
3.结果显示：添加两种物质组合的调节效果不如添加三种调节物质的调节效果，添加吐温80 0.1g/L和β胡萝卜素0.1g/L、β胡萝卜素2g/L和褪黑素2g/L及吐温80 1g/L和褪黑素1g/L的调节后，植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌以及罗伊氏乳杆菌的冻干存活率以及储藏存活率均低于添加吐温80 1g/L、β胡萝卜素0.5g/L和褪黑素0.5g/L的效果。在MRS培养基中添加吐温80 1g/L、β胡萝卜素0.5g/L和褪黑素0.5g/L后培养的各种乳杆菌冻干存活率及储藏存活率最高。
对比例1：控制胁迫处理的条件制备乳菌冻干粉
1.在实施例1-4的基础上，将调节抗逆性的方法改变为4℃冷胁迫处理2h并按相同的方法进行冻干，得到植物乳杆菌菌粉A1、干酪乳杆菌菌粉A1、鼠李糖乳杆菌菌粉A1、罗伊氏乳杆菌菌粉A1。
2.检测植物乳杆菌菌粉A1、干酪乳杆菌菌粉A1、鼠李糖乳杆菌菌粉A1、罗伊氏乳杆菌菌粉A1中乳杆菌的活菌数，并且计算各乳杆菌冻干存活率及乳杆菌冻干粉储藏3个月后对比冻干前的冻干存活率(检测结果见表8)。
结果：由表8可知，通过冷胁迫处理可以略微提高冻干存活率和储藏稳定性，但是效果有限，远不如添加吐温80、β胡萝卜素和褪黑素的效果显著。因此，使用实施例1中的调节配方效果最佳。
表8不同乳杆菌通过冷应激调节后的冻干存活率及储藏稳定性
Figure GDA0004141854000000101
对比例2：控制胁迫处理的条件制备乳菌冻干粉
1.在实施例1-4的基础上，将调节抗逆性的方法改变为40℃热应激处理2h并按相同的方法进行冻干，得到植物乳杆菌菌粉B1、干酪乳杆菌菌粉B1、鼠李糖乳杆菌菌粉B1、罗伊氏乳杆菌菌粉B1。
2.检测植物乳杆菌菌粉B1、干酪乳杆菌菌粉B1、鼠李糖乳杆菌菌粉B1、罗伊氏乳杆菌菌粉B1中乳杆菌的活菌数，并且计算各乳杆菌冻干存活率及乳杆菌冻干粉储藏3个月后对比冻干前的冻干存活率(检测结果见表9)。
结果：由表9可知，通过热应激可以略微提高冻干存活率和储藏稳定性，但是效果有限，远不如添加吐温80、β胡萝卜素和褪黑素的效果显著。因此，使用实施例1中的调节配方效果最佳。
表9不同乳杆菌通过热应激调节后的冻干存活率及储藏稳定性
Figure GDA0004141854000000102
Figure GDA0004141854000000111
对比例3：控制培养基成分制备乳杆菌冻干粉
1.在实施例1-4的基础上，将调节抗逆性的方法改变为pH4.5酸应激处理2h并按相同的方法进行冻干，得到植物乳杆菌菌粉C1、干酪乳杆菌菌粉C1、鼠李糖乳杆菌菌粉C1、罗伊氏乳杆菌菌粉C1。
2.检测植物乳杆菌菌粉C1、干酪乳杆菌菌粉C1、鼠李糖乳杆菌菌粉C1、罗伊氏乳杆菌菌粉C1中乳杆菌的活菌数，并且计算各乳杆菌冻干存活率及乳杆菌冻干粉储藏3个月后对比冻干前的冻干存活率(检测结果见表10)。
结果：由表10可知，通过酸应激可以略微提高冻干存活率和储藏稳定性，但是效果有限，不如添加吐温80、β胡萝卜素和褪黑素的效果显著。因此，使用实施例1中的调节配方效果最佳。
表10不同乳杆菌通过酸应激调节后的冻干存活率及储藏稳定性
Figure GDA0004141854000000112
对比例4：控制培养基中不同成分的浓度制备乳杆菌冻干粉
1.在实施例1-4的基础上，将调节抗逆性的方法改变为使用NaCl调节培养基渗透压至850mOsm/kg培养并按相同的方法进行冻干，得到植物乳杆菌菌粉D1、干酪乳杆菌菌粉D1、鼠李糖乳杆菌菌粉D1、罗伊氏乳杆菌菌粉D1。
2.检测植物乳杆菌菌粉D1、干酪乳杆菌菌粉D1、鼠李糖乳杆菌菌粉D1、罗伊氏乳杆菌菌粉D1中乳杆菌的活菌数，并且计算各乳杆菌冻干存活率及乳杆菌冻干粉储藏3个月后对比冻干前的冻干存活率(检测结果见表11)。
结果：由表11可知，通过高渗处理可以略微提高冻干存活率和储藏稳定性，但是效果有限，不如添加吐温80、β胡萝卜素和褪黑素的效果显著。因此，使用实施例1中的调节配方效果最佳。
表11不同乳杆菌通过高渗培养基培养后的冻干存活率及储藏稳定性
Figure GDA0004141854000000121
对比例5：不同浓度对乳杆菌冻干存活率的影响
在实施例1的基础上，改变培养基中的调节物质，得到乳杆菌冻干粉，检测得到不同乳杆菌中乳杆菌的活菌数，并且计算各乳杆菌冻干存活率。对照组是只加实施例1中的冻干保护剂。
结果如表12所示，对比表2、表6和表7的培养基，表明加入β胡萝卜素、褪黑素和吐温80其中的任意一个单个成分作为调节剂的效果是不如他们中任意两种或多种的效果好。
表12不同浓度的物质对不同乳杆菌冻干存活率的提高效果
Figure GDA0004141854000000122
Figure GDA0004141854000000131
虽然本发明己以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (6)

1.一种提高乳杆菌冻干存活率的方法，其特征在于，所述方法是利用含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素的发酵培养基培养乳杆菌；所述吐温80的浓度为1.0 g/L；所述胡萝卜素的浓度为0.5 g/L ；所述褪黑素的浓度为0.5 g/L；所述乳杆菌为植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌或罗伊氏乳杆菌；所述发酵培养基为MRS培养基。
2.一种提高乳杆菌冻干存活率的方法，其特征在于，所述方法是利用含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素的发酵培养基培养乳杆菌；所述吐温80的浓度为1.0 g/L；所述胡萝卜素的浓度为1.0 g/L ；所述褪黑素的浓度为1.0 g/L；所述乳杆菌为植物乳杆菌、干酪乳杆菌或罗伊氏乳杆菌；所述发酵培养基为MRS培养基。
3.一种制备乳杆菌冻干粉的方法，其特征在于，所述乳杆菌为植物乳杆菌、干酪乳杆菌或鼠李糖乳杆菌；所述方法的步骤如下：
（1）利用含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素的的发酵培养基培养乳杆菌；所述吐温80的浓度为1.0 g/L，所述胡萝卜素的浓度为0.5 g/L，所述褪黑素的浓度为0.5 g/L；所述发酵培养基为MRS培养基；
（2）收集步骤（1）得到的乳杆菌与冻干保护剂按照质量比为1:1混合，再进行冻干处理后获得乳杆菌冻干粉；所述冻干保护剂的成分为：低聚异麦芽糖21.49g，胶原蛋白7.16g，硫酸镁0.6g，谷胱甘肽0.45g，硫酸锰0.3g。
4.一种制备乳杆菌冻干粉的方法，其特征在于，所述乳杆菌为植物乳杆菌、干酪乳杆菌或罗伊氏乳杆菌；所述方法的步骤如下：
（1）利用含有吐温80、胡萝卜素和褪黑素的的发酵培养基培养乳杆菌；所述吐温80的浓度为1.0 g/L，所述胡萝卜素的浓度为1.0 g/L，所述褪黑素的浓度为1.0 g/L；所述发酵培养基为MRS培养基；
（2）收集步骤（1）得到的乳杆菌与冻干保护剂按照质量比为1:1混合，再进行冻干处理后获得乳杆菌冻干粉；所述冻干保护剂的成分为：低聚异麦芽糖21.49g，胶原蛋白7.16g，硫酸镁0.6g，谷胱甘肽0.45g，硫酸锰0.3g。
5.一种乳杆菌冻干粉，其特征在于，所述乳杆菌冻干粉是由权利要求3或4所述的方法得到的。
6.权利要求1或2所述的方法在制备乳杆菌冻干粉和提高乳杆菌的冻干存活率及储藏稳定性中的应用。
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