CN113151096B - 一种抗新型呼肠孤病毒的枯草芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域，提供了一种抗新型呼肠孤病毒的枯草芽孢杆菌及其应用。所述枯草芽孢杆菌已于2020年11月16日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2020743。所述枯草芽孢杆菌能显著抑制多种病原菌，同时具有很强的抗新型呼肠孤病毒能力，可作为饲料添加剂广泛应用于家禽常发疾病的防控。

Description

一种抗新型呼肠孤病毒的枯草芽孢杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及功能微生物筛选与应用技术领域，具体涉及一种抗新型呼肠孤病毒的枯草芽孢杆菌及其应用。

背景技术

抗生素在20世纪50年代至70年代进入了发展的黄金时期，大量新的抗生素被发现并推向市场，抗生素及抗菌类等药物作为畜禽养殖中的饲料添加剂被广泛地应用，在预防动物腹泻、促进动物生长和健康、提高饲料转化率等方面起到了良好的效果。但长期以来，大量的使用和滥用已经造成了动物自身免疫力降低、耐药性的增强和严重的药物残留等弊端。饲料作为人类的间接食物，抗生素及抗菌类等药物大量使用和滥用使得动物产品肉、蛋、奶的品质下降，严重威胁到了人类的生活健康。因此，健康、安全、环保的饲料添加剂——微生态制剂开始进入人们的视野，并得到了广泛的研究和推广。

早在1974年，蒙哈德利用仔猪实验证实了乳酸菌在日粮中的添加促进了仔猪的生长。美国最早从20世纪70年代开始将微生物应用到畜禽养殖。20世纪80年代中期开始，微生物在全世界范围内尤其是欧洲和亚洲等发达国家中得到了大力的推广和深入的研究。我国从20世纪70年代开始微生态制剂的研究。近几年也有许多的产品开始投放到市场中应用，并取得了一定的表现和效果。

微生态制剂作为一种新型的、公认的无公害绿色非营养性饲料添加剂，一般具有很强的生存能力，存活率高、稳定性强，可以适用于大规模的工业生产，一般认为对人、动物是安全的，利于促进宿主的生长发育及提高抵抗力。目前，国内外饲用微生态制剂的微生物主要包括乳酸杆菌属、双歧杆菌、酵母菌属、芽孢杆菌属和肠球菌。

研究表明，乳酸杆菌制剂在维持消化道正常菌群的稳定性方面起着决定性的作用，双歧杆菌也是早期预防幼畜腹泻的重要生物制剂，它能抑制肠内细菌产生氨等有害物质，并能中和肠内有毒物质，对维持幼龄动物消化机能正常和防治腹泻表现出明显的作用，这可能是由于双歧杆菌能产生一类抑制病原菌生长的广谱抗菌物质。Nomcova报道，在仔猪饲料中添加一定量益生乳酸杆菌和寡聚糖的合生元，可以显著提高断奶仔猪粪便中乳酸杆菌和双歧杆菌的含量，同时显著降低梭菌和肠杆菌的含量。Inooka等的研究表明，添加枯草芽孢杆菌制剂饲喂雏鸡一段时间后，脾脏中T、B淋巴细胞数量有显著升高。近年，相关研究发现含有地衣芽孢杆菌的饲料可以改善动物胃肠道微生态环境、预防肠道疾病，降低动物死亡率，且资料显示多数益生芽孢杆菌在动物胃肠道中分布广泛，能有效抑制有害微生物的繁殖，对人畜及环境也无污染。魏爱彬等将干酪乳杆菌和植物乳杆菌作为直投式发酵剂以一定比例接种到全价饲料中可以快速增值，并且在发酵过程中可产生大量酸性物质，降低饲料pH，从而有效抑制杂菌繁殖，以保证饲料的质量，同时可以有效延长饲料的保藏时间。

时至今日，绿色、安全、高效的益生菌微生态制剂是饲料添加剂领域呼声最高的抗生素替代物，筛选出更精、更准的微生物，科学合理的对其推广使用，相信定可为我国畜牧业持续健康多元化发展做出贡献。

发明内容

本发明为解决现有技术问题，提供了一种抗新型呼肠孤病毒的枯草芽孢杆菌及其应用。所述枯草芽孢杆菌能显著抑制多种病原菌，同时具有很强的抗新型呼肠孤病毒能力，可作为饲料添加剂广泛应用于家禽常发疾病的防控。

本发明一方面提供了一株枯草芽孢杆菌DB2555（Bacillus subtilis DB2555），已于2020年11月16日保藏于中国武汉 武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2020743。

本发明一方面提供了所述枯草芽孢杆菌DB2555在制备具有抗病毒功能的制品中的应用。

所述病毒为新型呼肠孤病毒。

所述的制品为饲料添加剂。

本发明还提供了一种饲料添加剂，包含上述枯草芽孢杆菌DB2555。

所述饲料添加剂还包含地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌，凝结芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、丁酸梭菌、屎肠球菌、乳酸菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌中的任意一种或多种的组合。

所述饲料添加剂为菌粉。

所述饲料添加剂中枯草芽孢杆菌DB2555的活菌量不低于10⁹CFU/g。

本发明还提供了所述饲料添加剂在家禽养殖中的应用。

本发明筛选到的枯草芽孢杆菌DB2555对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌等多种病原菌均具有显著的抑制效果，尤其是对鸭疫里默氏杆菌的抑制效果最强，抑菌圈直径达到23mm，效果非常显著。

枯草芽孢杆菌DB2555具有较强的抗新型呼肠孤病毒能力，能够显著抑制新型呼肠孤病毒的复制，降低病毒的感染滴度。与对照组相比，实验组新型呼肠孤病毒滴度从每0.1毫升10^-6.63 TCID₅₀下降到对照组的每0.1毫升10^-3.50TCID₅₀。该菌株能够显著降低新型呼肠孤病毒对鸭、鸡、鹅、鸽子等常见家禽的感染率，降低其死淘率和料肉比，改善生产性能，可作为饲料添加剂广泛应用于家禽养殖领域，有效防控家禽常见疾病的发生，提高养殖效益，取得了意料不到的效果。

说明书附图

图1为DB2555菌株的菌落形态图；

图2为DB2555菌株蛋白质谱峰图；

图3 为DB2555菌株基因指纹图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明。对于实施例中所用到的具体方法或材料，本领域技术人员可以在本发明技术思路的基础上，根据已有的技术进行常规的替换选择，而不仅限于本发明实施例的具体记载。

本发明所选用的设备和试剂可以选自市售任意一种。对于本发明所涉及的培养基配方如下：

实施例1 菌株的分离与筛选

1、样品来源：山东省青岛市平度养殖场樱桃谷鸭肠粘膜。

2、菌株分离与筛选：

用载玻片刮取鸭肠道粘膜，置于无菌离心管中，加入灭菌生理盐水，得到菌悬液，将菌悬液置于80℃水浴锅中，处理10min，取出，迅速冷却；将处理过菌悬液以10倍梯度稀释至合适浓度，取100uL于营养琼脂平板上，涂抹均匀，37℃培养16-24h；挑取营养琼脂平板上已培养好的不同单菌落，进一步划线3次，纯化获得单菌株。申请人从中选取了6株单菌，分别命名为A1、A2、A3、A4、A5、A6。

新型呼肠孤病毒在我国分布广泛，且流行区域及宿主范围在不断扩大。该病毒主要引起家禽肝脏不规则坏死、心肌和法氏囊出血，而且新型呼肠孤病毒感染能够损害家禽的免疫器官，造成免疫抑制，会继发大肠杆菌、鸭传染性浆膜炎等细菌性疾病，对我国养殖业造成巨大的经济损失。

将LMH细胞传代至96孔细胞培养板中，将6株菌的菌液上清经过滤器处理后，分别与新型呼肠孤病毒等体积混合后接种至长满单层的细胞培养板中，孵育90分钟后弃去换维持液继续培养24小时，冻融两次收毒后进行TCID₅₀的测定。具体结果见表1。

TCID₅₀（median tissue culture infective dose），半数组织培养感染剂量，又称50%组织细胞感染量。即指能在培养板孔或试管内引起半数细胞病变或死亡（cytopathiceffect，CPE）所需的病毒量，用以表征病毒的滴度。

表1新型呼肠孤病毒含量值测定结果

从表1的结果可以看出，在本发明筛选到的6株菌中，A2菌株与新型呼肠孤病毒等体积混合后接种LMH细胞，TCID₅₀测定值最低，从而说明A2菌株能有效降低细胞中新型呼肠孤病毒的含量，取得了意料不到的技术效果。

申请人将A2菌株命名为DB2555，并对其做进一步评价。

实施例2 DB2555菌株的鉴定

2.1 菌落形态鉴定

如图1所示，DB2555菌株在营养琼脂培养基上的菌落呈微黄色，表面光滑透明，有粘液。

2.2 16S rRNA分子鉴定

采用试剂盒提取DB2555菌株的基因组。然后以该基因组为模板，利用特异性引物对其16S rRNA进行扩增。将扩增得到的PCR产物进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测，并送测序公司进行测序。

测序结果显示，PCR扩增产物的序列为SEQ ID NO:1。通过将该序列在NCBI数据库中进行BLAST比对，发现其与枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的相似性最高。因此，初步确定DB2555菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。

2.3 MALDI-TOF-MS蛋白质谱鉴定

取少量DB2555单菌落以薄膜的形式涂布于靶板上；加1μL质谱样本预处理试剂盒中的裂解液，室温下自然晾干；加1μL质谱样本预处理试剂盒中的基质溶液覆盖样品，室温下自然晾干；将样品靶放入质谱仪进行鉴定。鉴定结果显示，DB2555菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），其蛋白质谱峰图如图2所示。

2.4 RiboPrinter全自动微生物基因指纹鉴定

根据全自动微生物基因指纹鉴定***操作说明对DB2555菌株进行了上机鉴定，得到其rRNA基因指纹图谱，如图3所示。通过与已知标准菌株库指纹图谱进行比对，发现DB2555菌株与枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的相似度最高，达90%以上。因此，鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。

综上，申请人利用16S rRNA测序、MALDI-TOF-MS蛋白质谱、RiboPrinter全自动微生物基因指纹鉴定***三种分子生物学手段对DB2555菌株进行鉴定，鉴定结果一致。再结合DB2555菌株的菌落形态特征，申请人确定该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），命名为枯草芽孢杆菌DB2555（Bacillus subtilis DB2555）。

申请人已于2020年11月16日将上述枯草芽孢杆菌DB2555（Bacillus subtilisDB2555）保藏于中国武汉 武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2020743。

实施例3枯草芽孢杆菌DB2555的抑菌能力

1、抑菌能力评价

将枯草芽孢杆菌DB2555先在平板上培养，将培养好的枯草芽孢杆菌DB2555取1接种环接种到营养肉汤培养基中，37 ℃，220r/min培养14h，制备成供试菌液，菌量为10⁸~10⁹CFU/ml备用。

2、病原菌的准备

将收集到的鸭疫里默氏杆菌血清1型、血清2型接种含胎牛血清的TSB培养基中，37℃，220r/min 培养 24h后备用；将大肠杆菌、沙门氏菌病原菌甘油管或斜面接种于营养肉汤培养基中，37℃，220r/min 培养 16~18h后备用；产气荚膜梭菌接种于营养肉汤培养基中，37℃厌氧培养 24h后备用。

取无菌平皿，倾注无菌营养琼脂培养基 18~20mL，使其在平皿内均匀摊布，放置水平台面上使凝固，作为底层，将平板倒置平均划分区域并标记待添加物。另取适量无菌半固体营养琼脂培养基（鸭疫里默氏杆菌用TSA培养基），放冷至 48~50 ℃，每 50~100mL 培养基加入病原菌菌悬液 1~2mL，在每个平皿中分别加入5mL半固体营养琼脂培养基，使其在底层上均匀摊布，作为菌层。放置在水平台上冷却后，在每 1 平皿中以等距离均匀安置牛津杯 4~6个。每个双层平皿中的牛津杯中分别滴装扩培好的枯草芽孢杆菌DB2555菌液0.2mL，37℃培养24h后，测量各抑菌圈直径，枯草芽孢杆菌DB2555对5种病原菌的抑菌效果如表2所示。

表2 枯草芽孢杆菌DB2555对不同病原菌的抑菌效果

病原菌	抑菌圈直径 mm
		鸭疫里默氏杆菌血清1型	23±1.0
鸭疫里默氏杆菌血清2型	23±1.0
		大肠杆菌O78	22±1.0
沙门氏菌	20±1.0
		鸡源产气荚膜梭菌	21±1.0

从表2的结果可以看出，本发明筛选到的枯草芽孢杆菌DB2555对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌等多种病原菌均具有显著的抑菌效果，尤其是对鸭疫里默氏杆菌的抑菌效果最强，抑菌圈直径达到23mm，效果非常显著。

实施例4枯草芽孢杆菌DB2555产酶能力评价

1、供试菌液的制备

将枯草芽孢杆菌DB2555先在平板上培养，将培养好的枯草芽孢杆菌DB2555取1接种环接种到LB培养基中，37 ℃，220r/min培养14h，制备成供试菌液备用。

2、枯草芽孢杆菌DB2555产蛋白酶能力评价

将培养好的枯草芽孢杆菌DB2555的菌液接种到含有脱脂奶粉的琼脂培养基上，37℃培养48h，可以看到菌株DB2555周围有透明圈产生，透明圈直径为22 mm，枯草芽孢杆菌DB2555可以产生一定的蛋白酶。

3、枯草芽孢杆菌DB2555产纤维素酶能力评价

将培养好的枯草芽孢杆菌DB2555的菌液接种到含有羧甲基纤维素的琼脂培养基上，37℃培养48h，可以看到菌株DB2555周围有透明圈产生，透明圈直径为23 mm，枯草芽孢杆菌DB2555可以产生纤维素酶。

实施例5枯草芽孢杆菌DB2555抗新型呼肠孤病毒能力评价

1、枯草芽孢杆菌DB2555菌液上清的制备

将枯草芽孢杆菌DB2555接种到LB培养基中，37 ℃，220r/min培养48h，镜检成孢率在90%以上，10000r/min离心5分钟，将上清液过0.22μm滤器备用。

2、LMH细胞96孔板的制备

将长势良好的T25瓶的LMH细胞用胰酶消化后，经含10%胎牛血清的DMEM吹散后接种到96孔细胞培养板中，37℃、5%CO2培养箱中培养24h。

3、枯草芽孢杆菌DB2555抗新型呼肠孤病毒能力的评价

将新型呼肠孤病毒种毒用PBS稀释成100 TCID₅₀/0.1 mL，与枯草芽孢杆菌DB2555菌液上清等体积混合后，取200μL加入到长满LMH细胞的96孔细胞板中，置于37℃、5%CO₂培养箱中孵育90min弃去；用PBS清洗后，换1%胎牛血清的DMEM维持液，置于37℃、5%CO₂培养箱中培养24h；反复冻融两次后，进行收毒。同时设立对照组，用无菌水代替枯草芽孢杆菌DB2555菌液上清，其他步骤与实验组相同。

将病毒进行10倍比稀释，接种到长满单层LMH细胞的96孔细胞培养板中，进行TCID₅₀的测定，每天观察统计细胞病变孔，根据Reed-Muench法计算病毒的TCID₅₀。具体结果见表3。

表3 枯草芽孢杆菌DB2555抗新型呼肠孤病毒能力的评

组别	接种样品	接种细胞	接种条件	TCID<sub>50</sub>/0.1mL
					实验组	菌液上清+新型呼肠孤病毒	LMH细胞	孵育90 min	10<sup>-3.50</sup>
对照组	无菌水+新型呼肠孤病毒	LMH细胞	孵育90 min	10<sup>-6.63</sup>

从表3可以看出，与对照组相比，实验组新型呼肠孤病毒滴度从每0.1毫升10^-6.63 TCID₅₀下降到对照组的每0.1毫升10^-3.50TCID₅₀。从而说明，本发明筛选到的枯草芽孢杆菌DB2555能够显著抑制新型呼肠孤病毒的复制，降低病毒的感染滴度。

实施例6枯草芽孢杆菌DB2555对新型呼肠孤病毒的排毒抑制实验

1、实验地点：

青岛农业大学动物医学院实验基地。

2、实验设计：

实验选择刚出生的、生长情况相似的雏鸭共40只，实验组和对照组各20只，分别饲养于隔离器内。实验组和对照组各标记出其中10只用作采集泄殖腔粪便，若有死亡则从另外10只中挑选补充。其中，实验组雏鸭按10⁸CFU/只的标准每天通过饮水摄入枯草芽孢杆菌DB2555，其他饲喂条件与对照组相同。

实验组和对照组的雏鸭同时于2日龄皮下接种1000 TCID₅₀的新型呼肠孤病毒，攻毒24小时后每天用无菌棉签采集鸭泄殖腔粪便，连续采集10天；将10天采集的实验组与对照组的粪便各自混合均匀；分别称取实验组与对照组的粪便各1.0g，加PBS缓冲液，制成10%的悬液，冻融3次后离心取上清，提取病毒RNA，用荧光定量RT-PCR进行CT值的测定。

CT值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数，病毒含量越多，荧光达到域值的循环数越少，即CT值越小；相反，CT值越大，病毒含量越低。

3、实验结果及分析

表4 枯草芽孢杆菌DB2555对新型呼肠孤病毒排毒能力的评价

组别	攻毒	应用方式	CT值
				实验组	2日龄雏鸭皮下接种1000 TCID<sub>50</sub>的新型呼肠孤病毒	饮水摄入枯草芽孢杆菌DB2555	32.05
对照组	2日龄雏鸭皮下接种1000TCID<sub>50</sub>的新型呼肠孤病毒	无	13.67

从表4的结果可以看出，实验组的CT值显著高于对照组，说明实验组鸭粪便中的新型呼肠孤病毒含量远远低于对照组。从而说明，本发明提供的枯草芽孢杆菌DB2555能够显著降低新型呼肠孤病毒对鸭的感染率，减少病毒的排出量，取得了意料不到的技术效果。

实施例7枯草芽孢杆菌DB2555对樱桃谷鸭发病率及生长性能的影响

（1）实验地点：山东济宁养殖场

（2）实验设计：实验选择生长情况相似的樱桃谷鸭1.8万只，分为实验组与对照组，其中实验组分1-5日龄、10-15日龄、20-28日龄，按250克/吨水饮水添加枯草芽孢杆菌DB2555菌粉（10亿CFU/g），对照组5-7日龄颈部皮下注射鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌病二联灭活疫苗。至28日龄出栏统计死淘率、料肉比，观察使用过程中鸭的粪便状态。

（3）实验结果

实验组和对照组樱桃谷鸭的死淘率分别为2%和6%，料肉比分别为1.63和1.87，从而说明在樱桃谷鸭养殖过程中饲喂枯草芽孢杆菌DB2555菌粉，能够显著降低鸭的死淘率和料肉比，改善生产性能，同时，实验组鸭子的粪便要明显优于对照组，粪便成型干燥。

除了鸭以外，本发明所述枯草芽孢杆菌DB2555也能显著降低新型呼肠孤病毒对鸡、鹅、鸽子等常见家禽的感染率，改善其生产性能。因此，该菌株可单独或与地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌，凝结芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、丁酸梭菌、屎肠球菌、乳酸菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌中的任意一种或多种进行组合，作为饲料添加剂广泛应用于家禽养殖领域，有效防控家禽常见疾病的发生，提高养殖效益，取得了意料不到的效果。

序列表

<110> 山东康地恩生物科技有限公司

山东蔚蓝生物科技有限公司

<120> 一种抗新型呼肠孤病毒的枯草芽孢杆菌及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1435

<212> DNA

<213> 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)

<400> 1

tcatctgtcc caccttcggc ggctggctcc taaaaggtta cctcaccgac ttcgggtgtt 60

acaaactctc gtggtgtgac gggcggtgtg tacaaggccc gggaacgtat tcaccgcggc 120

atgctgatcc gcgattacta gcgattccag cttcacgcag tcgagttgca gactgcgatc 180

cgaactgaga acagatttgt gggattggct taacctcgcg gtttcgctgc cctttgttct 240

gtccattgta gcacgtgtgt agcccaggtc ataaggggca tgatgatttg acgtcatccc 300

caccttcctc cggtttgtca ccggcagtca ccttagagtg cccaactgaa tgctggcaac 360

taagatcaag ggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac atctcacgac acgagctgac 420

gacaaccatg caccacctgt cactctgccc ccgaagggga cgtcctatct ctaggattgt 480

cagaggatgt caagacctgg taaggttctt cgcgttgctt cgaattaaac cacatgctcc 540

accgcttgtg cgggcccccg tcaattcctt tgagtttcag tcttgcgacc gtactcccca 600

ggcggagtgc ttaatgcgtt agctgcagca ctaaggggcg gaaaccccct aacacttagc 660

actcatcgtt tacggcgtgg actaccaggg tatctaatcc tgttcgctcc ccacgctttc 720

gctcctcagc gtcagttaca gaccagagag tcgccttcgc cactggtgtt cctccacatc 780

tctacgcatt tcaccgctac acgtggaatt ccactctcct cttctgcact caagttcccc 840

agtttccaat gaccctcccc ggttgagccg ggggctttca catcagactt aagaaaccgc 900

ctgcgagccc tttacgccca ataattccgg acaacgcttg ccacctacgt attaccgcgg 960

ctgctggcac gtagttagcc gtggctttct ggttaggtac cgtcaaggtg ccgccctatt 1020

tgaacggcac ttgttcttcc ctaacaacag agctttacga tccgaaaacc ttcatcactc 1080

acgcggcgtt gctccgtcag actttcgtcc attgcggaag attccctact gctgcctccc 1140

gtaggagtct gggccgtgtc tcagtcccag tgtggccgat caccctctca ggtcggctac 1200

gcatcgtcgc cttggtgagc cgttacctca ccaactagct aatgcgccgc gggtccatct 1260

gtaagtggta gccgaagcca ccttttatgt ctgaaccatg cggttcaaac aaccatccgg 1320

tattagcccc ggtttcccgg agttatccca gtcttacagg caggttaccc acgtgttact 1380

cacccgtccg ccgctaacat cagggagcaa gctcccatct gtccgctcga ctgca 1435

Claims (7)

1.一株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC NO：M2020743。

2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在制备具有抗病毒功能的制品中的应用，其特征在于，所述的病毒为新型呼肠孤病毒。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的制品为饲料添加剂。

4.一种饲料添加剂，其特征在于，所述的饲料添加剂包含权利要求1所述的枯草芽孢杆菌。

5.如权利要求4所述的饲料添加剂，其特征在于，所述的饲料添加剂还包含地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌，凝结芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、丁酸梭菌、屎肠球菌、粪肠球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌中的任意一种或多种的组合。

6.如权利要求4或5所述的饲料添加剂，其特征在于，所述的饲料添加剂为菌粉。

7.如权利要求6所述的饲料添加剂，其特征在于，所述的饲料添加剂中枯草芽孢杆菌的活菌量不低于10⁹CFU/g。

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