CN113075343A - 一种羟胺及其盐的检测方法 - Google Patents

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CN113075343A CN202010007597.8A CN202010007597A CN113075343A CN 113075343 A CN113075343 A CN 113075343A CN 202010007597 A CN202010007597 A CN 202010007597A CN 113075343 A CN113075343 A CN 113075343A
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Abstract

本发明属分析化学领域，具体涉及一种羟胺及其盐的检测方法。在碱的存在下，待测样品中的羟胺或其盐在反应溶剂中与式(C)化合物发生反应生成式(D)化合物，衍生反应快速完成，通过液相色谱‑质谱联用仪对式(D)化合物进行检测，从而计算出羟胺或其盐的含量。本发明的检测方法高效、便捷、灵敏度高、专属性好、准确度高，特别适用于羟胺或其盐的限度低的样品的检测。

Description

一种羟胺及其盐的检测方法
技术领域
本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种羟胺及其盐的检测方法。
背景技术
盐酸羟胺主要用作还原剂和显像剂，有机合成中用于制备肟，也用作合成抗癌药(羟基脲)、磺胺药(新诺明)和农药(灭多威)的原料。近年来用于合成抗生素如：阿奇霉素，克拉霉素，罗红霉素等药物。
羟胺及其盐具有很强的遗传毒性和致基因突变作用，检测其在药物中的残留、控制其限度是确保用药安全、有效，保证药物质量的一个重要方面。关于羟胺的检测，目前的方法有：共振光散射法、气相色谱法、液相色谱法、离子色谱法等。
共振光散射法为常量光谱分析方法，对于微量物质无法达到检测的要求。衷明华发表的《共振光散射法测定盐酸羟胺》中公开了使用共振光散射法检测盐酸羟胺的方法，其检测限为0.04μg/ml，对于限度很低的样品，灵敏度无法达到要求，只适用于限度较高的样品的分析。
丁宏伟发表的《利培酮中盐酸羟胺的柱前衍生化-GC法测定》公开了一种用气相色谱法检测盐酸羟胺的方法，但该方法检测限为1.85μg/ml，定量限为3.70μg/ml，对于限度很低的样品，灵敏度无法达到要求，只适用于限度较高的样品的分析。
赵坦，毛亚南等人发表的《高效液相色谱法测定硝酸羟胺溶液含量》中公开了一种用液相色谱法检测硝酸羟胺的方法，该方法的检出限为82.78ng/g(即约为0.08μg/ml)，对于限度很低的样品，灵敏度无法达到要求，只适用于限度较高的样品的分析。
潘思、施超欧等人发表的《离子色谱柱后补液-脉冲安培法检测米卡芬净钠中残留盐酸羟胺》中公开了一种用离子色谱法检测盐酸羟胺的方法，该方法检测限为0.012μg/ml，离子色谱(安培检测器)对样品基质及有机物的承受力较脆弱，对进样的溶液要求较高，样品前处理繁杂，适用于溶液中仅含少量有机物的体系，对于样品的检测要求较高。
由于羟胺及其盐具有很强的遗传毒性和致基因突变作用，需要在药物中严格控制其含量在限度水平以下。对于日剂量大的药物，羟胺及其盐的控制限度低，当现有技术难以对羟胺及其盐限度低的样品进行定量检测时，需要一种方便简捷、灵敏度高的羟胺及其盐、羟胺衍生物的检测方法。
发明内容
本发明提供了一种羟胺及其盐的检测方法：
在碱的存在下，待测样品中的羟胺或其盐在反应溶剂中与式(C)化合物发生反应生成式(D)化合物；再采用以十八烷基硅烷键合相作为固定相的色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，其中以含可挥发性酸的水溶液为流动相A，以有机溶剂作为流动相B；在液相色谱-质谱联用仪***中进行梯度洗脱，并记录谱图；
Figure BDA0002355883050000021
其中R选自取代的或未取代的C1-C30烷基、取代的或未取代的C1-C30氧烷基、取代的或未取代的C3-C10的环烷基、取代的或未取代的C6-C14芳基、取代的或未取代的C1-C9的杂芳基。
在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-苯基-4-哌啶酮。
在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-苄基-4-哌啶酮。
在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-乙基-4-哌啶酮。
在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-丙基-4-哌啶酮。
在一些实施例中，所述式(C)化合物为N-丁基-4-哌啶酮。
在一些实施例中，所述碱为氨水溶液。
在一些实施例中，所述反应溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、丙酮、异丙醇中至少一种。
在一些实施例中，所述色谱柱为2.1*150mm，3.5μm。
在一些实施例中，所述色谱柱为Waters XBridgeTM C18，2.1*150mm，3.5μm。
在一些实施例中，所述可挥发性酸为甲酸。
在一些实施例中，所述可挥发性酸为三氟乙酸。
在一些实施例中，所述可挥发性酸为甲酸和三氟乙酸。
在一些实施例中，所述可挥发性酸的体积含量为0.05％-0.2％。
在一些实施例中，所述可挥发性酸的体积含量为0.1％。
在一些实施例中，所述流动相的流速为0.1ml/min-0.5ml/min。
在一些实施例中，所述流动相的流速为0.2ml/min-0.4ml/min。
在一些实施例中，所述流动相的流速为0.3ml/min。
在一些实施例中，所述梯度洗脱的洗脱程序见下表：
Figure BDA0002355883050000022
Figure BDA0002355883050000031
在一些实施例中，所述式(D)化合物的检测条件为：
色谱柱：Waters XBridgeTM C18，2.1*150mm，3.5μm；
流动相A：0.1％甲酸水溶液；
流动相B：乙腈；
洗脱方式：梯度洗脱；
流动相比例：
Figure BDA0002355883050000032
流速：0.3mL/min；
柱温：不控制；
样品盘温度：不控制；
进样量：1μL-10μL；
检测器：质谱检测器；
质谱条件：电喷雾离子源，正离子检测，SIM模式，提取离子数为衍生产物[M+H]+峰，m/z＝205.0，运行时间为5.00min-11.00min；干燥气温度为300℃-400℃；干燥气流速为10L/min-15L/min；雾化气压力为1500Torr-2320Torr；毛细管电压为2500V-3500V；峰宽为0.1min；增益因子1.0；碰撞诱导解离70V。
在一些实施例中，所述进样量为2μL-8μL。
在一些实施例中，所述进样量为3μL-5μL。
在一些实施例中，所述进样量为4μL。
在一些实施例中，所述干燥气温度为350℃。
在一些实施例中，所述干燥气流速为12.0L/min。
在一些实施例中，所述雾化气压力为1811Torr。
在一些实施例中，所述毛细管电压为3000V。
相比现有技术，本发明的优点为：灵敏度高、专属性好、准确度高，特别适用于羟胺或其盐的限度低的样品的检测。
术语说明：
本发明中，mg表示毫克，g表示克，％表示百分比，mm表示毫米，pH表示酸碱度，min表示分钟，h表示小时，℃表示摄氏度，HPLC表示高效液相色谱，MS表示质谱，Torr表示压强单位“托”，V表示电压单位“伏”，μL表示微升，μg表示微克，ppm表示百万分比，S/N表示信噪比，EP管为微量离心管，RSD表示相对标准偏差，N/A表示无数据，MΩ表示兆欧；APSTB03表示1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺酰基)乙胺，其CAS号为：253168-94-4。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。在本说明书的描述中，参考术语“一些实施方式”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
具体实施方式
本发明实施例公开了一种分离检测羟胺及其盐的方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进方法参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1.仪器、试剂、对照品、衍生剂及衍生反应
仪器：液相色谱-质谱联用仪，十万分之一分析天平。
试剂：甲醇。
对照品：盐酸羟胺，结构式如式E化合物所示。
衍生剂：N-苄基-4-哌啶酮，结构式如式F化合物所示。
衍生反应：
Figure BDA0002355883050000051
实施例2.方法参数
色谱条件：
色谱柱：Waters XBridgeTM C18，2.1*150mm，3.5μm；
流动相A：0.1％甲酸水溶液(将1mL的甲酸加入1000mL的超纯水中，摇匀、超声10min脱气即得)；
流动相B：乙腈；
洗脱方式：梯度洗脱；
流动相比例：
Figure BDA0002355883050000052
流速：0.3mL/min；柱温：不控制；样品盘温度：不控制；进样量：1μL；检测器：质谱检测器；
质谱条件：电喷雾离子源(ESI源)，正离子检测，SIM模式，提取离子数为衍生产物[M+H]+峰，m/z＝205.0，运行时间为5.00min-11.00min，干燥气温度350℃、干燥气流速12.0L/min、雾化气压力1811Torr、毛细管电压3000V(+)、峰宽0.1min、增益因子1.0、碰撞诱导解离70V。
实施例3.阿奇霉素中羟胺残留方法验证
1.1仪器、试剂、对照品及供试品
仪器：十万分之一分析天平，高效液相色谱-质谱连用仪；
试剂：乙腈(HPLC级别)、甲醇(HPLC级别)、甲酸(HPLC级别)、氨水溶液(HPLC级别)、N-苄基-4-哌啶酮(AR级别)、超纯水(电阻率≥18.2MΩ)；
对照品：盐酸羟胺；
供试品：阿奇霉素。
1.2溶液配制
空白溶液：取N-苄基-4-哌啶酮约100mg，精密称定，至100mL容量瓶中，移取20mL氨水溶液于上述容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀；
对照品储备液1：取盐酸羟胺约26mg，精密称定，至50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀；移取1.0mL上述溶液至100mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀；
对照品溶液：取N-苄基-4-哌啶酮约100mg，精密称定，至100mL容量瓶中，移取20mL氨水溶液至上述容量瓶中，再移取1.0mL对照品储备液1于上述容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀；
灵敏度溶液：移取3.0mL对照品溶液至10mL容量瓶中，用空白溶液定容，摇匀；
供试品溶液：取供试品约25mg，精密称定，至5mL容量瓶中，用空白溶液稀释定容，摇匀；平行配制2份。
1.3***适用性
1.3.1溶液配制：
空白溶液：配制方法同实施例3中1.2项，配制1份；
对照品溶液：配制方法同实施例3中1.2项，配制1份；
灵敏度溶液：配制方法同实施例3中1.2项，配制1份；
1.3.2操作
待***平衡后，取上述各溶液按方法描述的色谱条件，空白溶液进1针，灵敏度溶液进2针，对照品溶液进3针，记录色谱图。报告灵敏度溶液中羟胺衍生产物的信噪比(S/N)；对照品溶液第一针中羟胺衍生产物峰与最近相邻峰的分离度，连续进样3针的羟胺衍生产物的峰面积、峰面积均值及其RSD值。
1.3.3结果
表1.***适用性结果
Figure BDA0002355883050000071
1.4专属性
1.4.1溶液配制：
空白溶液：配制方法同实施例3中1.2项，配制1份；
对照品溶液：配制方法同实施例3中1.2项，配制1份；
供试品溶液：配制方法同实施例3中1.2项，配制1份；
供试品加标溶液：取供试品约25mg，精密称定至5mL容量瓶中，用对照品溶液溶解并定容；平行配制3份；
1.4.2操作
在***适用性合格的前提下，取上述各溶液按方法描述的色谱条件，每份各进1针，记录色谱图。报告空白溶液、对照品溶液、供试品溶液、供试品加标溶液中羟胺衍生产物的保留时间、峰面积及与邻近峰的分离度；按照以下公式计算供试品加标溶液的单个回收率，并计算回收率均值及其RSD值。
Figure BDA0002355883050000072
Figure BDA0002355883050000073
Figure BDA0002355883050000074
Figure BDA0002355883050000081
式中：
CS为供试品加标溶液中加入的盐酸羟胺对照品溶液的浓度，μg/mL；
V为供试品加标溶液中加入的盐酸羟胺对照品溶液的体积，mL；
CS+T为供试品加标溶液中测得的盐酸羟胺残留量；
Ci为供试品溶液中测得的盐酸羟胺残留量；
Figure BDA0002355883050000084
为供试品溶液中测得的盐酸羟胺残留量的平均值；
Ai为供试品溶液中羟胺衍生产物峰面积；
AS为3针对照品溶液中羟胺衍生产物峰面积的平均值；
AS+T为供试品加标溶液中羟胺衍生产物的峰面积；
WT为供试品溶液中供试品的称样量，mg；
WS为对照品溶液中盐酸羟胺的称样量，mg；
WS+T为供试品加标溶液中供试品的称样量，mg；
DT为供试品溶液的稀释倍数；
DS为对照品溶液的稀释倍数；
DS+T为供试品加标溶液中供试品的稀释倍数。
1.4.3结果
表2.专属性结果
Figure BDA0002355883050000082
表3.回收率结果
Figure BDA0002355883050000083
Figure BDA0002355883050000091
1.5检测限
1.5.1溶液配制
空白溶液：配制方法同实施例3中1.2项，配制1份；
检测限溶液：移取1.0mL对照品溶液至250mL容量瓶中，用空白溶液定容，摇匀；配制1份；
定量限溶液：移取1.0mL对照品溶液至200mL容量瓶中，用空白溶液定容，摇匀；配制1份。
1.5.2操作
在***适用性合格的前提下，取空白溶液进样1针，检测限、定量限溶液连续进样3针，记录色谱图。报告羟胺衍生产物的峰面积、信噪比(S/N)。
1.5.3结果
表4.检测限结果
Figure BDA0002355883050000092
表5.定量限结果
Figure BDA0002355883050000093
Figure BDA0002355883050000101
1.6耐用性-溶液稳定性
1.6.1溶液配制：
对照品溶液：配制方法同实施例3中1.2项，配制1份；
灵敏度溶液：配制方法同实施例3中1.2项，配制1份；
供试品加标溶液：配制方法同实施例3中1.4.1项，配制1份。
1.6.2操作
取配制好的对照品溶液、灵敏度溶液和100％供试品加标溶液置于样品盘中，在室温条件下放置。按方法描述的色谱条件，对照品溶液于0h、4h、11h各进样1针；灵敏度溶液于0h、5h、11h各进样1针；供试品加标溶液于0h、3h、9h各进样1针。计算各时间点羟胺衍生产物峰面积与0h峰面积比值。
1.6.3结果
表6.溶液稳定性结果
Figure BDA0002355883050000102
实施例4.非布司他中羟胺残留方法验证
1.1仪器、试剂、对照品及供试品
仪器：十万分之一分析天平，高效液相色谱色谱-质谱连用仪；
试剂：乙腈(HPLC级别)、甲醇(HPLC级别)、甲酸(HPLC级别)、氨水溶液(HPLC级别，纯度25％-28％)、N-苄基-4-哌啶酮(AR级别)、超纯水(自制)；
对照品：盐酸羟胺；
供试品：非布司他。
1.2溶液配制
衍生试剂：取N-苄基-4-哌啶酮约189mg，精密称定，至100mL容量瓶中，移取4.0mL氨水溶液于上述容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀；
空白溶液：移取1.0mL甲醇至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，压盖，摇匀，静置10min；
对照品储备液1：取盐酸羟胺约65mg，精密称定，至50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀；移取1.0mL上述溶液至50mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀；
对照品储备液2：移取1.0mL对照品储备液1至100mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀；
对照品溶液：移取1.0mL对照品储备液2至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，压盖，摇匀，静置10min；
灵敏度溶液：移取3.0mL对照品储备液2至10mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀；移取1.0mL上述溶液至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，压盖，摇匀，静置10min；
供试品溶液：取供试品约25mg，精密称定，至5mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀；移取1.0mL上述溶液至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，压盖，摇匀，静置10min；平行配制2份。
流动相A：移取1.0mL甲酸至1.0L超纯水中，盖紧，摇匀，超声10min，即得；
流动相B：乙腈。
1.3***适用性
1.3.1溶液配制：
空白溶液：配制方法同实施例4中1.2项，配制1份；
对照品溶液：配制方法同实施例4中1.2项，配制1份；
检测限溶液：配制方法同实施例4中1.2项，配制1份。
1.3.2操作
待***平衡后，取上述各溶液按方法描述的色谱条件，空白溶液进1针，检测限溶液进2针，对照品溶液进3针，记录色谱图。报告检测限溶液中羟胺衍生产物的信噪比(S/N)；对照品溶液第一针中羟胺衍生产物峰与最近相邻峰的分离度，连续进样3针的羟胺衍生产物的峰面积、峰面积均值及其RSD值。
1.3.3结果
表7.***适用性结果
Figure BDA0002355883050000121
1.4专属性
1.4.1溶液配制：
空白溶液：配制方法同实施例4中1.2项，配制1份；
对照品溶液：配制方法同实施例4中1.2项，配制1份；
供试品溶液：配制方法同实施例4中1.2项，配制1份；
供试品加标溶液：取供试品约25mg，精密称定至5mL容量瓶中，用对照品储备液2溶解并定容；移取1.0mL上述溶液至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，摇匀，压盖，静置10min，即得；平行配制3份；
1.4.2操作
同实施例3中1.4.2项。
1.4.3结果
表8.专属性结果
Figure BDA0002355883050000122
Figure BDA0002355883050000131
表9.回收率结果
Figure BDA0002355883050000132
1.5检测限
1.5.1溶液配制：
空白溶液：配制方法同实施例4中1.2项，配制1份；
检测限溶液：移取0.4mL对照品储备液2至250mL容量瓶中，用空白溶液定容，摇匀；配制1份；
1.5.2操作
在***适用性合格的前提下，取空白溶液进样1针，检测限溶液连续进样3针，记录色谱图。报告检测限溶液中羟胺衍生产物的峰面积、信噪比(S/N)。
1.5.3结果
表10.检测限结果
Figure BDA0002355883050000133
Figure BDA0002355883050000141
1.5耐用性-溶液稳定性
1.6.1溶液配制：
对照品溶液：配制方法同实施例4中1.2项，配制1份；
供试品加标溶液：配制方法同实施例4中1.4.1项，配制1份。
1.6.2操作
取配制好的对照品溶液和100％供试品加标溶液置于样品盘中，在室温条件下放置。按方法描述的色谱条件，对照品溶液于0h、4h、12h各进样1针；供试品加标溶液于0h、2h、10h各进样1针。计算各时间点羟胺衍生产物峰面积与0h峰面积比值。
1.6.3结果
表11.溶液稳定性结果
Figure BDA0002355883050000142
实施例5.阿普斯特中间体APSTB03(CAS号为：253168-94-4)中羟胺残留检测
1.1仪器、试剂、对照品及供试品
仪器：十万分之一分析天平，高效液相色谱色谱-质谱连用仪；
试剂：乙腈(HPLC级别)、甲醇(HPLC级别)、甲酸(HPLC级别)、氨水溶液(HPLC级别，纯度25％-28％)、N-苄基-4-哌啶酮(AR级别)、超纯水(自制)；
对照品：盐酸羟胺；
供试品：阿普斯特中间体APSTB03。
1.2溶液配制
衍生试剂：取N-苄基-4-哌啶酮约189mg，精密称定，至100mL容量瓶中，移取4.0mL氨水溶液于上述容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀；
空白溶液：移取1.0mL甲醇至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，压盖，摇匀，静置10min；
对照品储备液1：取盐酸羟胺约65mg，精密称定，至50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀；移取1.0mL上述溶液至50mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀；
对照品储备液2：移取1.0mL对照品储备液1至100mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀；
对照品溶液：移取1.0mL对照品储备液2至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，压盖，摇匀，静置10min；
检测限溶液：移取3.0mL对照品储备液2至10mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀；移取1.0mL上述溶液至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，压盖，摇匀，静置10min；
供试品溶液：取供试品约25mg，精密称定，至5mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀；移取1.0mL上述溶液至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，压盖，摇匀，静置10min；平行配制2份。
流动相：水相(移取1.0mL甲酸至1.0L超纯水中，盖紧，摇匀，超声10min，即得)；有机相(乙腈)。
1.3***适用性
1.3.1溶液配制：
空白溶液：配制方法同实施例5中1.2项，配制1份；
对照品溶液：配制方法同实施例5中1.2项，配制1份；
检测限溶液：配制方法同实施例5中1.2项，配制1份。
1.3.2操作
同实施例3中1.4.2项。
1.3.3结果
表12.***适用性结果
Figure BDA0002355883050000151
Figure BDA0002355883050000161
1.4专属性
1.4.1溶液配制：
空白溶液：配制方法同实施例5中1.2项，配制1份；
对照品溶液：配制方法同实施例5中1.2项，配制1份；
供试品溶液：配制方法同实施例5中1.2项，配制1份；
供试品加标溶液：取供试品约25mg，精密称定至5mL容量瓶中，用对照品储备液2溶解并定容；移取1.0mL上述溶液至EP管中，再移取1.0mL衍生试剂于上述EP管，摇匀，压盖，静置10min，即得；平行配制3份。
1.4.2操作
在***适用性合格的前提下，取上述各溶液按方法描述的色谱条件，每份各进1针，记录色谱图。报告空白溶液、对照品溶液、供试品溶液、供试品加标溶液中羟胺衍生产物的保留时间、峰面积及与邻近峰的分离度。
1.4.3结果
表13.专属性结果
Figure BDA0002355883050000162
Figure BDA0002355883050000171
1.4.4回收率计算
由上述单针供试品加标计算出回收率为94.4％(在70.0％-130.0％之间)。
1.5检测限
1.5.1溶液配制：
空白溶液：配制方法同实施例5中1.2项，配制1份；
检测限溶液：移取0.4mL对照品储备液2至250mL容量瓶中，用空白溶液定容，摇匀；配制1份。
1.5.2操作
在***适用性合格的前提下，取空白溶液进样1针，检测限溶液连续进样3针，记录色谱图。报告检测限溶液中羟胺衍生产物的峰面积、信噪比(S/N)。
1.5.3结果
表14.检测限结果
Figure BDA0002355883050000172

Claims (10)

1.一种羟胺及其盐的检测方法，其特征在于，在碱的存在下，待测样品中的羟胺或其盐在反应溶剂中与式(C)化合物发生反应生成式(D)化合物；采用以十八烷基硅烷键合相作为固定相的色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，其中以含可挥发性酸的水溶液为流动相A，以有机溶剂作为流动相B；在液相色谱-质谱联用仪***中进行梯度洗脱；
Figure FDA0002355883040000011
其中R选自取代的或未取代的C1-C30烷基、取代的或未取代的C1-C30氧烷基、取代的或未取代的C3-C10的环烷基、取代的或未取代的C6-C14芳基、取代的或未取代的C1-C9的杂芳基。
2.根据权利要求1所述的方法，所述式(C)化合物为N-苯基-4-哌啶酮、N-苄基-4-哌啶酮、N-乙基-4-哌啶酮、N-丙基-4-哌啶酮或N-丁基-4-哌啶酮。
3.根据权利要求1所述的方法，所述碱为氨水溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，所述反应溶剂为甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、丙酮、异丙醇中至少一种。
5.根据权利要求1所述的方法，所述色谱柱为2.1*150mm，3.5μm，或者所述色谱柱为Waters XBridgeTMC18，2.1*150mm，3.5μm。
6.根据权利要求1所述的方法，所述可挥发性酸选自甲酸和三氟乙酸中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的方法，所述可挥发性酸在流动相A中的体积含量为0.05％-0.2％，或者所述可挥发性酸在流动相A中的体积含量为0.1％。
8.根据权利要求1所述的方法，所述流动相的流速为0.1ml/min-0.5ml/min；或者所述流动相的流速为0.2ml/min-0.4ml/min；或者所述流动相的流速为0.3ml/min。
9.根据权利要求1所述的方法，所述梯度洗脱的洗脱程序见下表：
Figure FDA0002355883040000012
Figure FDA0002355883040000021
。
10.根据权利要求1-9任一所述的方法，其特征在于，所述式(D)化合物的检测条件为：
色谱柱：Waters XBridgeTMC18，2.1*150mm，3.5μm；
流动相A：0.1％甲酸水溶液；
流动相B：乙腈；
洗脱方式：梯度洗脱；
流动相比例：
Figure FDA0002355883040000022
流速：0.3mL/min；
柱温：不控制；
进样量：1μL～10μL，或者进样量：2μL～8μL，或者进样量：3μL～5μL，或进样量：4μL；
检测器：质谱检测器；
质谱条件：电喷雾离子源，正离子检测，SIM模式，提取离子数为衍生产物[M+H]+峰，m/z＝205.0，运行时间为5.00min-11.00min；干燥气温度为300℃～400℃，或者干燥气温度为350℃；干燥气流速为10L/min～15L/min，或者干燥气流速为12.0L/min；雾化气压力为1500Torr～2320Torr，或者雾化气压力为1811Torr；毛细管电压为2500～3500V，或者毛细管电压为3000V；峰宽为0.1min；增益因子1.0；碰撞诱导解离70V。
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