CN113024639B - 一类环肽类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一类环肽类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113024639B
CN113024639B CN202110382333.5A CN202110382333A CN113024639B CN 113024639 B CN113024639 B CN 113024639B CN 202110382333 A CN202110382333 A CN 202110382333A CN 113024639 B CN113024639 B CN 113024639B
Authority
CN
China
Prior art keywords
aspergillus
cyclic peptide
preparation
compound
formula
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110382333.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113024639A (zh
Inventor
杨斌
龙洁怡
刘永宏
周雪峰
林秀萍
廖升荣
王俊锋
庞小艳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Southern Marine Science and Engineering Guangdong Laboratory Guangzhou
Original Assignee
South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Southern Marine Science and Engineering Guangdong Laboratory Guangzhou
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by South China Sea Institute of Oceanology of CAS, Southern Marine Science and Engineering Guangdong Laboratory Guangzhou filed Critical South China Sea Institute of Oceanology of CAS
Priority to CN202110382333.5A priority Critical patent/CN113024639B/zh
Publication of CN113024639A publication Critical patent/CN113024639A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113024639B publication Critical patent/CN113024639B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/20—Partition-, reverse-phase or hydrophobic interaction chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
    • C12Y301/01007—Acetylcholinesterase (3.1.1.7)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一类环肽类化合物及其制备方法和应用。本发明从曲霉菌Aspergillus sp.H6‑7的发酵培养物中分离纯化得到4个新的环肽类化合物(化合物1‑4)，其结构式分别如式(I)、式(II)、式(III)和式(IV)所示。其中，化合物4为缩酚酸肽类化合物，具有显著的抗鼻咽癌活性以及具有抑制乙酰胆碱酯酶活性，可用于开发抗鼻咽癌药物以及乙酰胆碱酯酶抑制剂先导化合物，因此，本发明为抗癌药物和乙酰胆碱酯酶抑制剂的创新开发提供了备选化合物，对开发中国海洋药物资源具有重要意义。
Figure DDA0003013497950000011

Description

一类环肽类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属微生物及其天然产物的应用技术领域，更具体地说，本发明涉及一类新的环肽类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
癌症是威胁人类生命的三大致死性疾病之一。鼻咽癌发病具有明显的地域特点，超过70％发生于东亚以及东南亚，而我国南方地区尤为多见：如广东、广西、江西、福建等地。其中约75％患者诊断时即为晚期。对于恶性肿瘤的治疗，天然产物及其衍生物药物发挥着重要作用。
海洋真菌是产生新的活性物质、生产新药的巨大宝库。从海洋真菌的应用意义上来说，对海洋真菌的活性代谢产物的研究对寻找新的药物有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一类新的环肽类化合物及其制备方法和应用。
本发明的第一个目的是提供如式(I)-式(IV)任一项所示的环肽类化合物，或其药用盐：
Figure BDA0003013497930000021
其中，如式(I)、(II)、(III)所示的环肽类化合物为一类结构新颖的环六肽类化合物，如式(IV)所示的环肽类化合物为一个新的缩酚酸肽类化合物。
通过对化合物4(如式(IV)所示的环肽类化合物)的抗肿瘤活性评价，发现化合物4对人鼻咽癌(HONE1)、人鼻咽癌病毒系(HONE-EBV)IC50均<15μM，可以作为抗鼻咽癌药物开发的先导化合物。
通过对化合物4的抑制乙酰胆碱酶活性评价，发现化合物4对乙酰胆碱酶活性具有一定抑制作用，IC50<15μM。
本发明的第二个目的是提供曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7在制备所述的如式(I)-式(IV)任一项所示的环肽类化合物中的应用，所述的曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的保藏编号为GDMCC No：61220。
其中，所述曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7，于2020年9月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，其保藏编号为GDMCCNo：61220。
本发明的第三个目的是提供所述的如式(I)-式(IV)所示的环肽类化合物的制备方法，所述的如式(I)-式(IV)所示的环肽类化合物是从曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的发酵培养物中分离纯化得到，所述的曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的保藏编号为GDMCC No：61220。
具体步骤如下：制备曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的发酵培养物，用乙酸乙酯浸泡，乙酸乙酯浸提液经减压蒸馏浓缩得到浸膏，浸膏经正相硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂从体积比100:0～0:100梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇体积比9：1洗脱的馏分Fr.g，收集二氯甲烷-甲醇体积比85：15洗脱的馏分Frs.h，收集二氯甲烷-甲醇体积比80：20洗脱的馏分Frs.i；馏分Fr.g经反相硅胶柱层析，以水-甲醇为洗脱剂从体积比9:1～0:1梯度洗脱，收集水-甲醇体积比40：60洗脱的馏分Frs.g3，馏分Frs.g3经HPLC纯化得到如式(I)和式(III)所示的环肽类化合物；馏分Frs.h经HPLC纯化得到如式(IV)所示的环肽类化合物；馏分Frs.i经反相硅胶柱层析，以水-甲醇为洗脱剂从体积比9:1～0:1梯度洗脱，收集水-甲醇体积比55：45洗脱的馏分Frs.i3，馏分Frs.i3经HPLC纯化得到如式(II)所示的环肽类化合物。
优选，所述的曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的发酵培养物是通过以下方法制备得到：将曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7接入到种子培养基，27℃，200rpm，培养48小时，获得种子液，将种子液接种到发酵培养基中，27℃，静置培养30天，获得发酵培养物；所述的种子培养基的配方为：每升培养基中含有麦芽浸膏15g和海盐10g，余量为水，pH为7.4～7.8；所述的大米培养基是通过以下方法配制的：按每200g大米加海盐7.5g和蒸馏水250ml混合灭菌制得。
优选，所述的馏分Frs.g3经HPLC纯化得到如式(I)和式(III)所示的环肽类化合物具体为：将馏分Frs.g3用HPLC制备纯化，选用YMC-Pack ODS-A色谱柱，流动相为体积比59:41的甲醇/水，流速为2.0ml/min，波长为220nm，收集出峰时间tR＝26min的馏分，得到如式(I)所示的环肽类化合物，收集出峰时间tR＝28min的馏分，得到如式(III)所示的环肽类化合物。
优选，所述的馏分Frs.h经HPLC纯化得到如式(IV)所示的环肽类化合物具体为：将馏分Frs.h用HPLC制备纯化，选用YMC-Pack ODS-A色谱柱，流动相为体积比90:10的甲醇/水，流速为2.0ml/min，波长为220nm，收集出峰时间tR＝13.5min的馏分，得到如式(IV)所示的环肽类化合物；所述的馏分Frs.i3经HPLC纯化得到如式(II)所示的环肽类化合物具体为：将馏分Frs.i3用HPLC制备纯化，选用YMC-Pack ODS-A色谱柱，流动相为体积比40:60的乙腈/水，流速为2.0ml/min，波长为220nm，收集出峰时间tR＝19min的馏分，得到如式(II)所示的环肽类化合物。
本发明的第四个目的是提供所述的如式(IV)所示的环肽类化合物在制备抗肿瘤药物和/或乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。
所述的抗肿瘤药物优选为抗鼻咽癌药物。
本发明的第五个目的是提供一种抗肿瘤药物，包括有效剂量的作为活性成分的所述的如式(IV)所示的环肽类化合物，及药学上可接受的载体。
相对于现有技术，本发明具有如下优点：
本发明从曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的发酵培养物中分离纯化得到一类结构新颖的环六肽类化合物(化合物1-3)，该类化合物具有新颖结构骨架，对中国海洋来源小分子化合物具有重要意义；从曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的发酵培养物中分离纯化得到的一个新的缩酚酸肽类化合物(化合物4)具有显著的鼻咽癌细胞抑制活性以及具有抑制乙酰胆碱酯酶活性，可用于开发抗鼻咽癌药物以及乙酰胆碱酯酶抑制剂先导化合物，因此，本发明为抗癌药物和乙酰胆碱酯酶抑制剂的创新开发提供了备选化合物，对中国海洋药物资源开发也具有重要意义。
附图说明
图1是本发明化合物1～4核磁共振1H-1H COSY，HMBC和TOSEY相关图谱。
图2是化合物1-3的CD图谱。
图3是化合物4的CD图谱。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式，对本发明化合物1～4及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用、有益效果进行详细说明。
为了使本发明的目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明，实施例的参数、比例等可因地制宜做出选择而对结果并无实质性影响。
实施例1
化合物1～4的制备及结构鉴定：
1.制备曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的发酵培养物
MB种子培养基配置：麦芽浸膏15g，精海盐10g，用蒸馏水1000mL溶解，加入15颗玻璃珠，调节pH为7.5。装100mL三角瓶，每瓶装10mL，115℃，保温30分钟灭菌。挑取活化的曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7菌块接入装有10mL MB种子培养基的100mL三角瓶中，27℃，200rpm，培养48小时，获得种子液。
大米培养基配置：称取精海盐7.5g加蒸馏水250ml溶解，然后与200g大米混合后装入1000mL三角瓶。115℃，保温25分钟灭菌。
发酵培养：在上述配置的装有大米培养基的1000mL三角瓶中加入种子液(1瓶种子液接种1瓶大米培养基)，27℃，静置培养30天，获得发酵培养物。
2.化合物1、2、3和4的分离纯化
30瓶大米发酵培养物用15L乙酸乙酯浸泡24小时，乙酸乙酯浸提液经减压蒸馏浓缩得到浸膏，浸膏经正相硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂从体积比100:0～0:100梯度洗脱，得到9个馏分Frs.a～i。
将Fr.g(二氯甲烷-甲醇体积比9：1洗脱的馏分)经反相硅胶柱层析，以水-甲醇为洗脱剂从体积比9:1～0:1梯度洗脱，得到4个馏分Frs.g1～g4。
Frs.g3(水-甲醇体积比40：60洗脱的馏分)用HPLC制备纯化，选用YMC-Pack ODS-A色谱柱(250×10mm,12nm,S-50μm)，流动相为体积比59:41的甲醇/水洗脱，流速为2.0ml/min，波长为220nm，分别收集出峰时间为tR＝26min和28min的馏分，得到纯品即化合物1(3.4mg，tR＝26min)和3(3.0mg，tR＝28min)。
Frs.h(二氯甲烷-甲醇体积比85：15洗脱的馏分)用HPLC制备纯化，选用YMC-PackODS-A色谱柱(250×10mm,12nm,S-50μm)，流动相为体积比90:10的甲醇/水洗脱，流速为2.0ml/min，波长为220nm，收集出峰时间tR＝13.5min的馏分，即得到纯品即化合物4(300mg，tR＝13.5min)。
Frs.i(二氯甲烷-甲醇体积比80：20洗脱的馏分)经反相硅胶柱层析，以水-甲醇为洗脱剂从体积比9:1～0:1梯度洗脱，得到3个馏分Frs.i1～i3，将其中的Frs.i3(水-甲醇体积比55：45洗脱的馏分)用HPLC制备纯化，选用YMC-Pack ODS-A色谱柱(250×10mm,12nm,S-50μm)，流动相为体积比40:60的乙腈/水洗脱，流速为2.0ml/min，波长为220nm，收集出峰时间tR＝19min的馏分，得到纯品即化合物2(2.9mg，tR＝19min)。
3.化合物1、2、3和4的结构鉴定
对化合物1、2、3和4进行质谱(MS)、核磁共振(NMR)、圆二色谱(CD)和Marfey水解反应等数据测试，从而确定其化学结构。
4.化合物1结构鉴定：
高分辨质谱m/z 810.3062[M+H]+(calcd for 810.3093)建议其分子式为C41H43N7O11，含有24个不饱和度，1H和13C NMR数据(见表1)具有明显的肽类化合物的特征，1HNMR谱图中存在六个酰胺NH质子信号(δH 7.33,8.43,8.74,8.79,8.98,10.89)，四个α-氨基质子(δH4.32,4.22,4.63,4.51)；在13C NMR谱中，观察到六个相关的酰胺羰基信号(δC163.5,168.8,169.3,170.3,171.5,172.1,172.6)。
解析2D NMR数据(表1)可知结构中存在一个丙氨酸(Ala)，一个苯丙氨酸(Phe)，一个苏氨酸(Thr)，一个茴氨酸(AA)，一个去氢色氨酸(Δ-Trp)和一个丝氨酸衍生物。化合物1的波谱数据与已知化合物sclerotide A十分相似(Org.Lett.2009,11(22),5262–5265.)，它们具有相同的氨基酸片段，主要的区别是化合物1多了两个羰基碳C-39(δC 172.1),C-42(δC 173.3)和两个相同位移的亚甲基碳C-40，C41(δC 28.6)，HMBC谱(图1)中，丝氨酸上的H-19与C-39有相关，H-40/H-41与C-39相关，推测丝氨酸与丁二酸基团成酯(butanedioicacid serine ester,BASE)。
HMBC谱中(图1)，2-NH与C-5相关，6-NH与C-8相关，9-NH与C-17相关，18-NH与C-20相关，H-29与C-27相关，28-NH与C-38相关，推测氨基酸的连接次序为Thr-Ala-Phe-BASE-AA-Δ-Trp。通过X-ray单晶衍射实验确定了所有手性中心的绝对构型，从而确定化合物1的氨基酸片段构型为L-Thr，L-Ala，D-Phe为D-BASE。化合物1的鉴定结果如式I所示。
Figure BDA0003013497930000081
5.化合物2结构解析：
高分辨质谱m/z 696.2772[M+H]+(calcd for 696.2776)建议其分子式为C36H38N7O8含有22个不饱和度，NMR数据(见表1)与文献中sclerotide A很相近(Org.Lett.2009,11(22),5262–5265.)，区别是sclerotide A中的苏氨酸被丝氨酸取代，1H-1H COSY(图1)确认了C-2与C-3相连，通过H-2与C-1，27-NH与C-1的HMBC相关进一步验证了该结构。通过Marfey反应，确定结构中的氨基酸分别为L-Ser,L-Ala,D-Phe,and D-Ser。并且通过对比sclerotide A的C-16/C-17/C-18(δC 170.9,59.2,60.8)与化合物2中的C-17/C-18/C-19(δC 170.6,58.1,60.9)，两者核磁数据相近，结合对比化合物2与化合物1的圆二色谱(图2)，两者圆二色谱趋势一致，最终确定化合物2的最终结构的立体构型为L-Ser-L-Ala-D-Phe-D-Ser-AA-Z-Δ-Trp。化合物2的鉴定结果如式II所示。
Figure BDA0003013497930000091
6.化合物3结构解析：
高分辨质谱m/z 874.3395[M+H]+(calcd for 874.3406)建议其分子式为C46H47N7O11含有27个不饱和度，NMR数据(见表1)显示骨架与sclerotide A相同。不同在于多了一个甲基，一个亚甲基，六个炔烃碳和一个羰基碳。1H NMR中缺少在δH 8.03的化学位移，显示一个特殊的基团通过C-38与Δ-Trp相连。1H-1H COSY(图1)确认了C-43与C-44相连，通过H-43与C-45和C-46，H-44与C-40和C-42，C-39与C-38，C-40和C-41的HMBC相关，显示一个三取代的乙酰苯连接在去氢色氨酸上，由此推断出化合物3的平面结构。通过Marfey反应，确定结构中的氨基酸分别为L-Thr,L-Ala,D-Phe,and D-Ser。化合物3的CD图谱见图2。化合物3的鉴定结果如式III所示。
Figure BDA0003013497930000092
7.化合物4结构解析：
高分辨质谱m/z 652.4669[M+H]+(calcd for 652.4644)建议其分子式为C34H61N5O7。解析2D NMR数据(表1)可知结构中存在两个缬氨酸(Val)，一个丙氨酸(Ala)，一个亮氨酸(Leu)，一个甘氨酸(Gly)和一个包含十三个碳的脂肪酸片段。NMR数据(表1)与化合物scopularide D(Mar.Drugs 2019,17(475).)相似。它们具有相同的氨基酸片段，主要的区别是化合物4缺少了一个烷基长链上的甲基信号，多了一个亚甲基碳C-27(δC 26.7)。1H-1H COSY(图1)中显示出H-21-H-27之间的连续相关，推测化合物1缺少了C-27上连接的甲基，通过与scopularide D的脂肪酸片段对比核磁数据，并结合HMBC相关信号，确定结构中存在一个3-羟基-4-甲基十二碳酸(HMLA)的结构片段。通过X-ray单晶衍射实验确定了所有手性中心的相对构型，从而确定氨基酸构型为L-Val，L-Ala，D-Leu，L-Val，3-羟基-4-甲基十二碳酸片段的C-3/C-4分别为R、S构型。化合物4的CD图谱见图3。化合物4的鉴定结果如式IV所示。
Figure BDA0003013497930000101
表1：化合物1-4的1H和13C NMR数据
Figure BDA0003013497930000102
Figure BDA0003013497930000111
Figure BDA0003013497930000121
实施例2化合物4的抗肿瘤细胞的实验数据
采用国际通用的肿瘤细胞株，即：人鼻咽癌(HONE1)、人鼻咽癌病毒系(HONE-EBV)。试验方法为国际通用的MTT法。化合物4对HONE1和HONE-EBV的抑制活性(IC50)分别为13.0、10.1μM。以抗肿瘤药物顺铂(Cisplatin,CDDP)为阳性对照，IC50为9.0μM。
实施例3化合物4抑制乙酰胆碱酯酶的实验数据
采用国际通用Ellman法对化合物4的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行评价。测试结果显示：化合物4抑制乙酰胆碱酯酶的IC50为15.0μM，阳性对照他可林IC50值为0.04μM。
上述实验结果表明，化合物4对鼻咽癌细胞的抑制作用与抗肿瘤药物CDDP相当，可以认为有较强的抗肿瘤活性，可以做为抗肿瘤药物开发的先导化合物。并且具有微弱的抑制乙酰胆碱酯酶活性。
根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行适当的变更和修改。因此，本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式，对本发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。此外，尽管本说明书中使用了一些特定的术语，但这些术语只是为了方便说明，并不对本发明构成任何限制。

Claims (8)

1.如下式所示的环肽类化合物或其药用盐：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
。
2.曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7在制备权利要求1所述的环肽类化合物中的应用，所述的曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的保藏编号为GDMCC No：61220。
3. 权利要求1所述的环肽类化合物的制备方法，其特征在于，所述的环肽类化合物是从曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的发酵培养物中分离纯化得到，所述的曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的保藏编号为GDMCC No：61220。
4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：制备曲霉菌Aspergillus sp. BH6-7的发酵培养物，用乙酸乙酯浸泡，乙酸乙酯浸提液经减压蒸馏浓缩得到浸膏，浸膏经正相硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇作为洗脱剂从体积比100:0~0:100梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇体积比85：15洗脱的馏分Frs. h；馏分Frs. h经HPLC纯化得到环肽类化合物。
5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的曲霉菌Aspergillus sp.BH6-7的发酵培养物是通过以下方法制备得到：将曲霉菌Aspergillus sp. BH6-7接入到种子培养基，27℃，200rpm，培养48小时，获得种子液，将种子液接种到发酵培养基中，27℃，静置培养30天，获得发酵培养物；所述的种子培养基的配方为：每升培养基中含有麦芽浸膏15g和海盐10g，余量为水，pH为7.4~7.8；所述的发酵培养基是通过以下方法配制的：按每200g大米加海盐7.5g和蒸馏水250ml混合灭菌制得。
6. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的馏分Frs. h经HPLC纯化得到环肽类化合物具体为：将馏分Frs. h用HPLC制备纯化，选用YMC-Pack ODS-A色谱柱，流动相为体积比90:10的甲醇/水，流速为2.0 ml/min，波长为220 nm，收集出峰时间tR=13.5 min的馏分，得到环肽类化合物。
7.权利要求1所述的环肽类化合物在制备抗肿瘤药物和/或乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用；所述的抗肿瘤药物为抗鼻咽癌药物。
8.一种抗鼻咽癌药物，其特征在于，包括有效剂量的作为活性成分的权利要求1所述的环肽类化合物，及药学上可接受的载体。
CN202110382333.5A 2021-04-09 2021-04-09 一类环肽类化合物及其制备方法和应用 Active CN113024639B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110382333.5A CN113024639B (zh) 2021-04-09 2021-04-09 一类环肽类化合物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110382333.5A CN113024639B (zh) 2021-04-09 2021-04-09 一类环肽类化合物及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113024639A CN113024639A (zh) 2021-06-25
CN113024639B true CN113024639B (zh) 2022-10-14

Family

ID=76456070

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110382333.5A Active CN113024639B (zh) 2021-04-09 2021-04-09 一类环肽类化合物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113024639B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522813A (en) * 1983-10-27 1985-06-11 Merck & Co., Inc. Cyclic hexapeptide somatostatin analogs
CN102993269A (zh) * 2012-11-01 2013-03-27 中国科学院南海海洋研究所 一类环四肽化合物及其制备方法和在制备抗污损剂中的应用
CN110330549A (zh) * 2019-06-28 2019-10-15 中国科学院南海海洋研究所 环肽emericellamide G及其制备方法和在制备酶抑制剂中的应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4522813A (en) * 1983-10-27 1985-06-11 Merck & Co., Inc. Cyclic hexapeptide somatostatin analogs
CN102993269A (zh) * 2012-11-01 2013-03-27 中国科学院南海海洋研究所 一类环四肽化合物及其制备方法和在制备抗污损剂中的应用
CN110330549A (zh) * 2019-06-28 2019-10-15 中国科学院南海海洋研究所 环肽emericellamide G及其制备方法和在制备酶抑制剂中的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Microbial metabolomics in open microscale platforms;Layla J. Barkal et al.;《Nature》;20160204;第7卷;第1-11页 *
Scopularides Revisited: Molecular Networking Guided Exploration of Lipodepsipeptides in Australian Marine Fish Gastrointestinal Tract-Derived Fungi;Ahmed H. Elbanna et al.;《Mar Drugs.》;20190816;第17卷(第8期);第1-17页 *
Transcriptomic, Protein-DNA Interaction, and Metabolomic Studies of VosA, VelB, and WetA in Aspergillus nidulans Asexual Spores;Ming-Yueh Wu et al.;《mBio.》;20210209;第12卷(第1期);第1-17页 *
海洋真菌来源的抗菌活性物质研究:方法与进展;尚卓等;《生命科学》;20120915;第27卷(第09期);第241-245页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN113024639A (zh) 2021-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111303247B (zh) 海洋环肽化合物及其在制备抗结核分枝杆菌药物中的应用
CN111943828B (zh) 一种壳二孢氯素类化合物及其在制备抗肿瘤药物或二氢乳清酸脱氢酶抑制剂药物中的应用
CA2718394C (en) Microorganism producing cyclic compound
CN103601707B (zh) 倍半萜硝基苯酯类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
CN113024639B (zh) 一类环肽类化合物及其制备方法和应用
CN111606975B (zh) 从棕色扁海绵中提取的环肽类化合物及其制备方法与用途
CN111499649B (zh) 一种具有抗肿瘤活性的苯并二呋喃酮类化合物、制备方法及其用途
AU2009224302B2 (en) Cyclic compound and salt thereof
CN115304661B (zh) 一种环肽类化合物和用途
CN104945468B (zh) Mmaf手性异构体的制备方法及其应用
CN107141335B (zh) 一种环肽化合物及其制备方法和应用
CN113603594B (zh) 倍半萜类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用
KR20120010175A (ko) 신규한 푸사리세틴 화합물 및 이의 용도
CN111909021B (zh) Sorbicillinoids化合物及其制备方法与应用
CN110330549B (zh) 环肽emericellamide G及其制备方法和在制备酶抑制剂中的应用
CN115850379B (zh) 一种海绵共附生真菌来源线性肽类化合物及其制备方法与应用
CN116333054A (zh) 从海绵中提取的环肽类化合物及其制备方法与应用
CN116874417B (zh) 一种吡啶类生物碱及其在抗肿瘤药物制备中的应用
CN114805496B (zh) 一组非核糖体多肽(NRPs)类化合物、其制备方法及应用
JP3687929B2 (ja) 新規化合物ａ−７６２０２及びその製造法
WO2012129914A1 (zh) 3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸及其制备方法和应用
CN118027063A (zh) 一种海洋红树林真菌来源新的内酰胺类化合物Didylactam A及其制备方法与应用
CN116621931A (zh) 一种放线菌环脂肽类化合物及其提取方法与应用
CN103524600A (zh) 新环脂肽抗生素罗克霉素（locillomycin）A、B、C及其制造方法
WO2020139453A2 (en) A method for increasing romidepsin production from fermentation broth

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant