CN112957475B - 一种预防和或***的组合物及应用 - Google Patents

一种预防和或***的组合物及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112957475B
CN112957475B CN202110155443.8A CN202110155443A CN112957475B CN 112957475 B CN112957475 B CN 112957475B CN 202110155443 A CN202110155443 A CN 202110155443A CN 112957475 B CN112957475 B CN 112957475B
Authority
CN
China
Prior art keywords
tumor
agonist
cpg
cgamp
treatment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110155443.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112957475A (zh
Inventor
李文峰
苏小平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN202110155443.8A priority Critical patent/CN112957475B/zh
Publication of CN112957475A publication Critical patent/CN112957475A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112957475B publication Critical patent/CN112957475B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种预防和/或***的组合物及应用。其中预防和/或***的组合物，其包含一种或多种TLR激动剂、一种或多种TNFRSF激动剂以及一种或多种STING激动剂。本发明创新地将TLR激动剂、TNFRSF激动剂以及STING激动剂三者联用，同时在局部肿瘤内施用，发现其可诱导强力的抗肿瘤免疫应答，引起注射处肿瘤和非注射处肿瘤的消退，由于三者联用是在局部肿瘤内施用，避免了全身免疫不良反应。

Description

一种预防和或***的组合物及应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种预防和/或***的组合物及应用。
背景技术
根据世界卫生组织公布的数据，癌症在世界范围内造成了最大的负担。恶性肿瘤可以被认为是首要的公共卫生保健问题，它给临床带来巨大负担，扰乱社会标准，侵蚀大量的经济资源。尽管恶性肿瘤的发病率、死亡率逐年增加，但大部分恶性肿瘤缺乏有效的治疗方案，传统的治疗方式仍然局限在放疗、化疗和手术切除。实际上，肿瘤患者中只有不足30％的患者可以获得手术治疗的机会，同时许多患者在接受全身或局部放化疗后即刻或长期内会出现严重的不良反应，在某些情况下，与治疗相关的不良反应超过治疗益处，甚至使患者病情恶化。放疗、化疗和手术在***中有明显的局限性，且很难治愈恶性肿瘤，尤其是转移性恶性肿瘤。
近年来，免疫治疗成为肿瘤治疗的研究热点。针对免疫检查点细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)的单克隆抗体已经显示出显著的疗效，并已被FDA批准用于癌症治疗。此外，嵌合抗原受体-T(CAR-T)细胞疗法已被批准用于某些血液***恶性肿瘤的治疗。肿瘤免疫治疗取得越来越多的突破性进展。目前，肿瘤免疫治疗的手段主要有针对免疫检查点的激动或阻断疗法、过继细胞疗法、基因工程细胞疗法、肿瘤疫苗等。这些方法虽然都各自取得较好地进展，但由于肿瘤微环境的复杂性和转移性肿瘤的难治性，肿瘤免疫治疗仍然面对诸多障碍。
目前，肿瘤免疫疗法仍然面对三大难题：
难题1.在大部分实体瘤中，肿瘤免疫原性低。树突状细胞(DC)作为功能最强的抗原提呈细胞(APC)，能诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的形成。然而在肿瘤微环境中，DC多为不成熟表型，活性差，不能向效应T细胞呈递肿瘤抗原，不能启动抗肿瘤免疫反应。这种“启动失能”导致肿瘤免疫疗效受限。
难题2.单一的免疫疗法或者免疫治疗药物并不能达到预期的效果。全基因组分析表明，荷瘤个体间的异质性非常明显，这导致不同患者对同一种单一疗法的反应性差异大，无法取得满意的效果。例如，针对胰腺癌而言，虽然免疫检查点抑制剂可以阻断细胞接触依赖蛋白途径对效应性T细胞的抑制作用，但在胰腺癌的肿瘤微环境中有许多可溶性的免疫抑制因子抑制效应性T细胞的功能。胰腺癌作为一种典型的“冷”肿瘤，含有大量致密的***和极少的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)，导致一些免疫检查点抑制剂失效。这迫使肿瘤免疫疗法从针对单个靶点或单条通路的单一疗法向联合多靶点多通路的方式转变。
难题3.全身免疫激活引起的免疫毒性反应。由于免疫疗法的全身性给药，受试者的全身免疫***快速激活，这一方面引起了针对肿瘤的客观应答，另一方面也带来了难以识别的自身免疫不良反应。例如，胃肠道***是最常受到自身免疫性炎症影响的器官***之一。在接受肿瘤免疫治疗的患者中，自身免疫性小肠结肠炎的发病率从1%到25%不等，这取决于患者所接受的药物的类型。全身性给药无法避免的过度激活全身免疫，导致正常组织受累。这迫使肿瘤免疫疗法向局部性、精确性给药转变。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种预防和/或***的组合物及应用。
本发明所采取的技术方案如下：一种预防和/或***的组合物，其包含一种或多种TLR激动剂、一种或多种TNFRSF激动剂以及一种或多种STING激动剂。
所述TLR激动剂为TLR9激动剂。
所述TLR9激动剂为寡核苷酸和/或疟原虫色素；所述寡核苷酸为A类、B类或C类含有非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤的胞嘧啶-硫代磷酸酯-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸。
所述TNFRSF激动剂为OX-40激动剂。
所述OX-40激动剂为OX-40 激动剂抗体、OX40L激动剂片段、OX-40寡聚受体和OX-40免疫粘附素中的一种或多种。
所述OX-40激动剂是三聚体OX40L-Fc蛋白，所述三聚体OX40L-Fc蛋白包含OX40L的一个或多个胞外域的片段。
所述STING激动剂为环状二核苷酸或其衍生物。
所述环状二核苷酸为环状二腺苷酸单磷酸酯、环状二鸟苷酸单磷酸酯、环状二肌苷单磷酸酯、环状鸟苷单磷酸腺苷单磷酸酯或环状腺苷单磷酸酯-肌苷一磷酸和环状鸟苷一磷酸一肌苷一磷酸中的一种或多种。
如上所述的预防和/或***的组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的应用。
一种药物或者试剂盒，其特征在于，在所述药物或试剂盒中包含如上所述的预防和/或***的组合物。
本发明的有益效果如下：本发明创新地将TLR激动剂、TNFRSF激动剂以及STING激动剂三者联用，同时在局部肿瘤内施用，发现其可诱导强力的抗肿瘤免疫应答，引起注射处肿瘤和非注射处肿瘤的消退，由于三者联用是在局部肿瘤内施用，避免了全身免疫不良反应。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，根据这些附图获得其他的附图仍属于本发明的范畴。
图1中，（A）为对A-E组***荷瘤小鼠不同处理后的注射处肿瘤体积图，证实CPG+OX40+cGAMP抗瘤能力；（B）为对A-E组***荷瘤小鼠不同处理后的未注射处肿瘤体积图，结果显示只有CPG+OX40+cGAMP处理能够产生远隔杀瘤能力，证实CPG+OX40+cGAMP疗法对转移性肿瘤的优越性。
图2为对A-E组***荷瘤小鼠不同处理后的小鼠生存图，显示CPG+OX40+cGAMP显著延长荷瘤小鼠模型的生存期。
图3为对A-E组***荷瘤小鼠不同处理后的小鼠体重变化曲线，证实CPG+OX40+cGAMP处理小鼠体重与空白处理无差异，即本发明涉及的疗法在针对肿瘤时无明显毒副作用。
图4中，对A-E组***荷瘤小鼠不同处理后小鼠未注射处的肿瘤CD3、CD4、CD8细胞浸润情况。证实CPG+OX40+cGAMP处理后，引起了未注射处肿瘤浸润淋巴细胞数量大量增多，其中以增加CD4阳性淋巴细胞最显著，故而三联组抗肿瘤效果最佳。
图5中，(A)为A-E组黑色素瘤荷瘤小鼠不同处理后的注射处肿瘤体积图，再次证实CPG+OX40+cGAMP抗瘤能力。（B）为A-E组黑色素瘤荷瘤小鼠不同处理后的未注射处肿瘤体积图，结果与***荷瘤小鼠实验结果类似：只有CPG+OX40+cGAMP处理能够产生远隔杀瘤能力，证实CPG+OX40+cGAMP疗法对转移性肿瘤的优越性。
图6中，为A-E组黑色素瘤荷瘤小鼠不同处理后的小鼠生存图，结果与***荷瘤小鼠实验结果类似：只有CPG+OX40+cGAMP处理显著延长荷瘤小鼠模型的生存期。
图7中，（A）为CpG+cGAMP和不同免疫检测点抑制剂组合对黑色素瘤荷瘤小鼠注射处理后的肿瘤体积，证实CpG+cGAMP联合不同免疫检测点抑制剂在肿瘤原位都有抗肿瘤效果。（B）为 CpG+cGAMP和不同免疫检测点抑制剂组合对黑色素瘤荷瘤小鼠注射处理后检测未处理处的肿瘤体积，证实只有CPG+OX40+cGAMP处理能够产生远隔杀瘤能力，证实CPG+OX40+cGAMP疗法对转移性肿瘤的优越性。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步地详细描述。
一种预防和/或***的组合物，其包含一种或多种TLR激动剂、一种或多种TNFRSF激动剂以及一种或多种STING激动剂。
本发明采用TLR激动剂，其在局部肿瘤内施用后，被树突状细胞特异性识别，活化并介导树突状细胞成熟。树突状细胞表面共刺激分子上调，抗原提呈能力增强，同时，树突状细胞产生更多干扰素-α促进骨髓树突状细胞成熟，进而间接激活T细胞。采用STING激动剂，其施用后导致肿瘤微环境中树突状细胞的STING通路激活，促进抗原交叉性呈递、增加树突状细胞上CCR7的表达、提高多种Th1细胞因子促进抗原呈递细胞的归巢效应T细胞的运输。由此，树突状细胞作为功能最强的抗原提呈细胞在肿瘤微环境中被活化增殖，抗原呈递能力大大增强，从而解决肿瘤免疫原性低的问题。
本发明同时联合三种免疫靶点或通路，从单一疗法向联合多靶点多通路的方式转变。首先，Toll样受体（TLR）存在于免疫***的许多细胞上，并已显示参与先天免疫应答，它是脊椎动物识别和建立针对外来分子的免疫反应的关键手段，可识别细菌，真菌，寄生虫和病毒的病原体相关分子模式，并且它提供了一种将先天和适应性免疫反应联系起来的手段。本发明使用TLR激动剂，其可以活化NF-kB信号、刺激分泌IFN-a；本发明使用TNFRSF激动剂，其可以延长T细胞存活时间、促进T细胞杀伤能力，改善肿瘤微环境中的免疫抑制作用；本发明实用的STING激动剂通过STING通路刺激INF-ß的诱导，介导NF-κB和IRF-3的激活，然后开始INF-ß基因的转录，产生ß干扰素。综上所述，三类靶点或通路的激动剂联合，可以有效解决肿瘤异质性的难题。
本发明可以在局部肿瘤内施用，避免了全身性用药，通过改造局部肿瘤微环境达到治疗注射处肿瘤的目的，同时通过改善肿瘤免疫原性、改造肿瘤浸润细胞类型以及细胞因子等因素，引起未注射处肿瘤减退，避免全身自身免疫毒副作用的出现。
在本发明的一些具体实施例中，TLR激动剂选用TLR9激动剂，常见的TLR9激动剂包括寡核苷酸和疟原虫色素，所述的寡核苷酸为含有非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤的胞嘧啶-硫代磷酸酯-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸，包括A类（也称D类）、B类（也称K类）和C类。A类以含有CpG回文序列为中心的PO骨架和PS修饰的3’端poly-G链构成。CpG-A ODNs刺激类浆树突细胞（pDC）可以较强的产生IFN-a，但是会较弱的激活TLR9依赖的NF-kB信号通路，产生较少的促炎性细胞因子（如白细胞介素6）。B类是包含一个或多个CpG二核苷酸的完整PS骨架结构序列。CpG-B ODNs可以较强的活化B细胞和TLR9介导的NF-kB信号，但刺激分泌IFN-a的效果较弱。C类结构是Class A和B的混合体。它包含了完整的PS骨架和CpG回文序列。CpG-C ODNs可以较强的引起pDC分泌IFN-a，在刺激B细胞时也可以得到较好的效果。在本发明的一些具体实施例，具体选择C类TLR9激动剂CpG ODN 2395，所述CpG ODN 2395的序列为5’-TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG-3’。
在本发明的一些具体实施例中，TNFRSF激动剂具体选用OX-40激动剂，OX-40激动剂可以为OX-40 激动剂抗体、OX40L激动剂片段、OX-40寡聚受体和OX-40免疫粘附素。在本发明的一些具体实施例中，具体选用OX-40激动型抗体，OX-40激动型抗体属于肿瘤坏死因子超家族的一员，是表达在活化的CD4阳性T细胞和CD8阳性T细胞细胞表面的激动型受体，其信号可以激活下游的NF-κB、PI3K和PKB通路，这些通路的持续激活最终能够延长T细胞存活时间，并拓展T细胞记忆，促进T细胞杀伤能力，另外，OX-40激动型抗体还能通过抑制调节性T细胞（Treg）的分化和活性，改善肿瘤微环境中的免疫抑制作用，进一步增强效应T细胞的功能。本发明的一些具体实施例中， OX-40激动型抗体具体选择三聚体OX40L-Fc蛋白或全长人IgG1抗体，三聚体OX40L-Fc蛋白包含OX40L的一个或多个胞外域的片段。
在本发明的一些具体实施例中，STING激动剂具体选用环状二核苷酸或其衍生物，其中所述环状二核苷酸是环状二腺苷酸单磷酸酯（CDA），环状二鸟苷酸单磷酸酯（CDG），环状二肌苷单磷酸酯（CDI），环状鸟苷单磷酸腺苷单磷酸酯（cGAMP），环状腺苷单磷酸酯-肌苷一磷酸或环状鸟苷一磷酸一肌苷一磷酸，在本发明的一些具体实施例中，选择环状鸟苷单磷酸腺苷单磷酸酯（cGAMP）。STING激动剂cGAMP是是细胞质DNA传感器，用作第二信使，以通过STING通路刺激INF-ß的诱导，介导NF-κB和IRF-3的激活，然后开始INF-ß基因的转录，产生ß干扰素。
上述的预防和/或***的组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的应用。本发明所提供的预防和/或***的组合物可以作为活性成分与药学上可接受的载体组合制备为复合生物制剂，作为预防和/或***的药物制剂。
一种用于预防和/或***的试剂盒，包括如上所述的预防和/或***的组合物，其中一种或多种TLR激动剂、一种或多种TNFRSF激动剂以及一种或多种STING激动剂为混合为单个试剂或分开单独设置为多个试剂。三种靶点或通路的激动剂可以混合成复合生物制剂在局部肿瘤上施用，也可以分开单独施用、同时施用，以提供增强的疾病治疗或者预防作用。试剂盒中还可以包含其它化学和/或生物治疗剂，例如抗血管生成剂、生长抑制剂、目前已知的其它抗肿瘤药物或组合药物。
以下为本发明的一些具体实施例所使用的样本的制备过程。
一、TC-1***细胞系的培养
TC-1鼠源***细胞培养于RPMI 1640完全培养基，含10％热灭活胎牛血清，青霉素100 U／mL，链霉素100 U／mL，在 37℃、5％CO2 培养箱中培养，每日更换培养液，每 3天以0．1％胰蛋白酶溶液消化传代。细胞处于对数生长期时，将细胞消化、1000 r／min离心，计数活细胞数量后重悬于平衡盐溶液PBS中，配制成每1 mL含4×10^6个***细胞的悬液。
二、建立TC-1***C57BL/6荷瘤小鼠模型
健康纯种C57BL/6 鼠 30 只,雌性,SPF级,6-8周,体重(20±2) g。饲养环境温度为 22 ~ 25 ℃ ,湿度为(45% ~ 50% ), 光照周期为 12h 光照/ 12 h 黑暗,自由饮水/取食。小鼠每 3 天进行一次饲料、饮用水及垫料的更换,其中,饲养小鼠所需的饲料、饮用水以及垫料均须经高压灭菌处理。小鼠适应性饲养一周后进行实验处理。将培养好的TC-1肿瘤细胞通过皮下接种至正常小鼠左侧腹股沟（每只小鼠接种2*10^5个细胞），两天后对小鼠右侧腹股沟进行相同操作，构建***双侧成瘤动物模型，待左侧腹股沟肿瘤生长至20-30mm2时，造模成功。
三、B16鼠源黑色素瘤细胞系的培养
B16鼠源黑色素瘤细胞系培养于DMEM完全培养基，含10％热灭活胎牛血清，青霉素100 U／mL，链霉素100 U／mL，在 37℃、5％CO2 培养箱中培养，每日更换培养液，每 3天以0．1％胰蛋白酶溶液消化传代。细胞处于对数生长期时，将细胞消化、1000 r／min离心，计数活细胞数量后重悬于平衡盐溶液PBS中，配制成每1 mL含4×10^6个黑色素瘤细胞的悬液。
四、建立B16黑色素瘤C57BL/6荷瘤小鼠模型
健康纯种C57BL/6 鼠 30 只,雌性,SPF级,6-8周,体重(20±2) g。饲养环境温度为 22 ~ 25 ℃ ,湿度为(45% ~ 50% ), 光照周期为 12h 光照/ 12 h 黑暗,自由饮水/取食。小鼠每 3 天进行一次饲料、饮用水及垫料的更换,其中,饲养小鼠所需的饲料、饮用水以及垫料均须经高压灭菌处理。小鼠适应性饲养一周后进行实验处理。将培养好的B16黑色素瘤细胞通过皮下接种至正常小鼠左侧腹股沟（每只小鼠接种2*10^5个细胞），两天后对小鼠右侧腹股沟进行相同操作，构建黑色素瘤双侧成瘤动物模型，待左侧腹股沟肿瘤生长至20-30mm2时，造模成功。
以下为本发明的一些具体实施例。
实施例1、对TC-1***C57BL/6荷瘤小鼠模型分组并进行不同给药处理
将小鼠随机分为5组，每组5-6只，共27只小鼠入组。A组：空白对照组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射PBS 50ul；B组：CpG 2395处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395 (1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))； C组：CPG+OX40处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、OX40 (1-1000ug (优选5-200ug, 如本试验中的30ug))；D组：cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射cGAMP (1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的20ug))；E组：三联（CPG+OX40+cGAMP）处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395 (1-1000ug(优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、OX40(1-1000ug (优选5-200ug, 如本试验中的30ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的20ug))。给药后，每2天进行肿瘤大小的测量及小鼠状态观察，肿瘤体积=（长径*短径*短径）/2，持续观察。
以下为上述不同试验组的观察结果：
一、观察***各组注射处与非注射处的肿瘤体积差异
对A-E组荷瘤小鼠左腹股沟肿瘤内分别给予：PBS处理、 CPG处理、CPG+OX40处理、cGAMP处理、CPG+OX40+cGAMP处理后，观察并记录A-E组注射处（左腹股沟处）和非注射处（右腹股沟处）肿瘤体积大小。结果如图1（A）：对于注射处肿瘤而言，CPG组及CPG+OX40+cGAMP处理组效果最佳，且两者之间无明显统计学差异。A-E组荷瘤小鼠非注射处肿瘤体积如图1（B），结果显示：只有在CPG+OX40+cGAMP处理后，非注射处肿瘤出现了生长抑制，其余各组均未出现。这证实了本发明对转移性肿瘤的卓越疗效。
二、观察***各组荷瘤小鼠不同给药处理后的生存期差异
对A-E组荷瘤小鼠左腹股沟肿瘤内分别给予：PBS处理、 CPG处理、CPG+OX40处理、cGAMP处理、CPG+OX40+cGAMP处理后，观察并记录A-E组荷瘤小鼠生存期。结果如图2：CPG+OX40+cGAMP处理组显著延长荷瘤小鼠模型的生存期，CPG+cGAMP处理有略微延长生存期的效果，其余各组处理对荷瘤小鼠生存期无明显益处。
三、通过对***各组荷瘤小鼠体重监测，观察不同处理的毒副作用和各组小鼠 的异常表现
对A-E组荷瘤小鼠左腹股沟肿瘤内分别给予：PBS处理、 CPG处理、CPG+OX40处理、cGAMP处理、CPG+OX40+cGAMP处理后，观察并记录A-E组荷瘤小鼠体重。结果如图3：各组小鼠均未出现异常表现，且B-E组小鼠体重与空白对照A组小鼠体重未出现统计学差异，即：小鼠在肿瘤内给药CPG+OX40+cGAMP后未出现明显毒副作用，一般状况良好，没有出现异常表现。
四、***各组荷瘤小鼠的未注射处肿瘤所浸润的CD3、CD4、CD8细胞情况
对A-E组荷瘤小鼠左腹股沟肿瘤内分别给予：PBS处理、 CPG处理、CPG+OX40处理、cGAMP处理、CPG+OX40+cGAMP处理后，通过流式细胞术检测A-E组荷瘤小鼠未注射处肿瘤所浸润的CD3、CD4、CD8细胞情况。结果如图4所示：CPG处理、CPG+OX40处理、CPG+OX40+cGAMP处理注射处肿瘤后，均引起了非注射处的肿瘤浸润淋巴细胞数量增多，但各组中增加的CD4阳性T淋巴细胞的数量以CPG+OX40+cGAMP处理组最显著，故而其治疗效果最佳。
实施例2、对B16黑色素瘤C57BL/6荷瘤小鼠模型分组并进行不同给药处理
将小鼠随机分为5组，每组5-6只，共27只小鼠入组。A组：空白对照组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射PBS 50ul；B组：CpG 2395处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))； C组：CPG+OX40处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、OX40(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的30ug))；D组：cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的20ug))；E组：三联（CPG+OX40+cGAMP）处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、OX40(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的30ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的20ug))。给药后，每2天进行肿瘤大小的测量及小鼠状态观察，肿瘤体积=（长径*短径*短径）/2，持续观察。
以下为上述不同试验组的观察结果：
一、观察黑色素瘤各组注射处与非注射处的肿瘤体积差异
对A-E组荷瘤小鼠左腹股沟肿瘤内分别给予：PBS处理、 CPG处理、CPG+OX40处理、cGAMP处理、CPG+OX40+cGAMP处理后，观察并记录A-E组注射处（左腹股沟处）和非注射处（右腹股沟处）肿瘤体积大小。结果如图5所示，黑色素瘤动物实验的结果与***类似：对于注射处肿瘤而言，CPG组及CPG+OX40+cGAMP处理组效果最佳，且两者之间无明显统计学差异。同样的，A-E组荷瘤小鼠非注射处肿瘤体积如图6，结果显示：只有在CPG+OX40+cGAMP处理后，非注射处肿瘤出现了生长抑制，其余各组均未出现。这证实了本发明对转移性肿瘤的卓越疗效，且不区分癌种。
二、观察黑色素瘤各组荷瘤小鼠不同给药处理后的生存期差异
对A-E组荷瘤小鼠左腹股沟肿瘤内分别给予：PBS处理、 CPG处理、CPG+OX40处理、cGAMP处理、CPG+OX40+cGAMP处理后，观察并记录A-E组荷瘤小鼠生存期。结果如图7所示，与***动物实验的结果类似：只有CPG+OX40+cGAMP处理组显著延长荷瘤小鼠模型的生存期，CPG+cGAMP处理有略微延长生存期的效果，其余各组处理对荷瘤小鼠生存期无明显益处。
综上所述，本发明所述的包含TLR激动剂、TNFRSF激动剂及STING激动剂的抗肿瘤组合物或方法不仅对肿瘤有强烈的免疫治疗作用，而且改造了肿瘤微环境，产生抗肿瘤的远隔疫苗效应，对转移性肿瘤疗效卓越，更重要的是这种抗肿瘤效应在不同的癌种中得到了类似的效果印证，证实本发明可应用于不区分癌种的抗肿瘤治疗中。同时本发明避免了全身给药引起的免疫治疗毒副作用，克服了目前肿瘤免疫疗法的一揽子难题。
实施例3、对B16黑色素瘤C57BL/6荷瘤小鼠模型分组并进行不同给药处理
为了证实是否其他药物组合的也具有这样的全身抗肿瘤效果，我们还进行了多种药物组合实验。将小鼠随机分为9组，每组6只，共54只小鼠入组。A组：PBS处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射PBS 50ul；B组：CPG+cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395 (1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的10ug))； C组：CPG+OX40+cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395 (1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、OX40(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的30ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的10ug))；D组：CPG+LAG-3+cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395 (1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、LAG-3(1-1000ug (优选5-200ug, 如本试验中的30ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的10ug))；E组：CPG+TIM-3+cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395 (1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、TIM-3(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的30ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的10ug))；F组：CPG+BTLA+cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395 (1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、BTLA(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的30ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的10ug))；G组：CPG+NKG2A+cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、NKG2A(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的30ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的10ug))；H组：CPG+CD28+cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395 (1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、CD28(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的30ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的10ug))；I组：CPG+41BB+cGAMP处理组，每只小鼠左侧腹股沟的肿瘤内注射CpG 2395(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的50ug))、41BB(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的30ug))、cGAMP(1-1000ug (优选1-200ug, 如本试验中的10ug))。给药后，每2天进行肿瘤大小的测量及小鼠状态观察，肿瘤体积=（长径*短径*短径）/2，持续观察。
以下为上述不同试验组的观察结果：
一、观察黑色素瘤各组注射处与非注射处的肿瘤体积差异
对A-I组荷瘤小鼠左腹股沟肿瘤内分别给予：PBS处理、CPG+cGAMP处理、CPG+OX40+cGAMP处理、CPG+LAG-3+cGAMP处理、CPG+TIM-3+cGAMP处理、CPG+BTLA+cGAMP处理、CPG+NKG2A+cGAMP处理、CPG+CD28+cGAMP处理、CPG+41BB+cGAMP处理后，观察并记录A-I组注射处（左腹股沟处）和非注射处（右腹股沟处）肿瘤体积大小。结果如图7（A ）：对于注射处肿瘤而言，相对于PBS组，所有处理组效果显著。A-I组荷瘤小鼠非注射处肿瘤体积如图7（B ），结果显示：只有在CPG+OX40+cGAMP处理后，非注射处肿瘤出现了生长抑制，其余各组均未出现。这证实了本发明对转移性肿瘤的卓越疗效。
以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。

Claims (3)

1.一种预防和/或***的组合物，其特征在于：其包含TLR激动剂、TNFRSF激动剂以及STING激动剂；
所述TLR激动剂为C类TLR9激动剂CpG ODN 2395；
所述TNFRSF激动剂为OX-40激动剂，所述OX-40激动剂为OX-40 激动剂抗体；
所述STING激动剂为cGAMP。
2.如权利要求1所述的***的组合物在制备用于***的药物或试剂盒中的应用，所述肿瘤为***或黑色素瘤。
3.一种药物或者试剂盒，其特征在于，在所述药物或试剂盒中包含如权利要求1所述的***的组合物，所述肿瘤为***或黑色素瘤。
CN202110155443.8A 2021-02-04 2021-02-04 一种预防和或***的组合物及应用 Active CN112957475B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110155443.8A CN112957475B (zh) 2021-02-04 2021-02-04 一种预防和或***的组合物及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110155443.8A CN112957475B (zh) 2021-02-04 2021-02-04 一种预防和或***的组合物及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112957475A CN112957475A (zh) 2021-06-15
CN112957475B true CN112957475B (zh) 2022-07-22

Family

ID=76273766

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110155443.8A Active CN112957475B (zh) 2021-02-04 2021-02-04 一种预防和或***的组合物及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112957475B (zh)

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103221427B (zh) * 2010-08-23 2016-08-24 德克萨斯州立大学董事会 抗ox40抗体和使用其的方法
JP6684215B2 (ja) * 2013-08-28 2020-04-22 ピーシーアイ バイオテック エイエス 予防接種用化合物および免疫化用化合物、ならびに予防接種方法および免疫化方法
PE20180926A1 (es) * 2015-05-29 2018-06-08 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra el miembro 4 de la superfamilia del receptor del factor de necrosis tumoral (ox40) y sus usos
CN106539757A (zh) * 2016-03-20 2017-03-29 聊城市奥润生物医药科技有限公司 环二核苷酸cGAMP-脂质体在抗肿瘤中的应用
WO2018017888A1 (en) * 2016-07-20 2018-01-25 Igm Biosciences, Inc. Multimeric ox40 binding molecules and uses thereof
CN110003338B (zh) * 2019-04-16 2021-04-23 北京免疫方舟医药科技有限公司 抗ox40抗体及其应用
CN114040776B (zh) * 2019-06-28 2024-05-14 江苏恒瑞医药股份有限公司 Tlr激动剂与抗ox40抗体或其抗原结合片段联合在制备***的药物中的用途
CN111704671B (zh) * 2020-08-19 2020-11-24 广东赛尔生物科技有限公司 Ox40抗体及其在治疗癌症中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112957475A (zh) 2021-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6954648B2 (ja) 併用療法による固形腫瘍又はリンパ系腫瘍の治療方法
Murad et al. CpG oligodeoxynucleotides as TLR9 agonists: therapeutic applications in cancer
AU2019255370B2 (en) Synthetic RIG-I-like receptor agonists
EP0659209A1 (en) Cancer therapy utilizing malignant cells
CN107488636A (zh) 一种携带分子开关的抗her2嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其应用
CN107557337A (zh) 一种抗ror1安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其应用
EP0941317B1 (en) Insulin-like growth factor 1 receptor (igf-1r) antisense oligonucleotide-treated breast cancer cells composition
CN101161288B (zh) 寡核苷酸增强的肿瘤细胞裂解物及其在制备***的药物中的应用
Rayburn et al. Experimental therapy for colon cancer: anti-cancer effects of TLR9 agonism, combination with other therapeutic modalities, and dependence upon p53
Fujii et al. Cancer immunotherapy using artificial adjuvant vector cells to deliver NY‐ESO‐1 antigen to dendritic cells in situ
US20030119776A1 (en) Modulation of Fas and FasL expression
CN109937051A (zh) 治疗tim-3升高的方法
CN112957475B (zh) 一种预防和或***的组合物及应用
JP5079962B2 (ja) ＴＧＦβ阻害剤を発現する遺伝的に改変された細胞であって、肺癌細胞である細胞
KR102584276B1 (ko) Her2 백신, 및 면역관문 억제제의 조합 요법
CN113789347B (zh) Fgl1/caix双靶点疫苗在治疗肾癌和肾癌肺转移中的应用
CN116585315A (zh) 用于调节pd-1信号转导的组合物
US20230346901A1 (en) Methods and vaccine compositions to treat cancers
KR101976782B1 (ko) 수용성 공통 감마 수용체 저해제를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
Tarhini et al. Early development of the toll-like receptor 9 agonist, PF-3512676, for the treatment of patients with advanced cancers
Cavanagh et al. Chemotherapy followed by syngeneic dendritic cell injection in the mouse: findings and implications for human treatment
KR20160026034A (ko) Foxp3 유전자가 넉 다운된 수지상 세포를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
CN116271090A (zh) 一种具有tlr9激动剂活性的dna纳米笼及其在制备抗肿瘤药物中的应用
CN117159685A (zh) 一种氨基酸序列及其在制备靶向Siglec分子治疗癌症的药物中的应用及验证方法
CN113117088A (zh) 钙激活氯离子通道的抑制剂在肿瘤免疫疗法中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant