CN112904021A - 一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条 - Google Patents

一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条 Download PDF

Info

Publication number
CN112904021A
CN112904021A CN202110179408.XA CN202110179408A CN112904021A CN 112904021 A CN112904021 A CN 112904021A CN 202110179408 A CN202110179408 A CN 202110179408A CN 112904021 A CN112904021 A CN 112904021A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pad
detection
vaccination
test strip
reaction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110179408.XA
Other languages
English (en)
Inventor
王志增
张海龙
胡航展
马晶晶
吴梦丽
郑植
陈春霞
张利杰
王耀辉
魏寅祥
马远方
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan University
Original Assignee
Henan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan University filed Critical Henan University
Priority to CN202110179408.XA priority Critical patent/CN112904021A/zh
Publication of CN112904021A publication Critical patent/CN112904021A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
    • G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了用于检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，包括底板、样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫，所述的样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫依次搭接在底板上，反应垫上设有控制带和两条检测带和，检测带中一条用于检测新冠疫苗接种后机体是否产生免疫反应，产生相应抗体；另一条检测带检测机体产生中和抗体是否能够达到一定效价，形成保护效力。所述的试纸条灵敏度好，检测性能良好，成本低，使用方法简单，可以在医院、诊所甚至在家中等多场景情况下，无需专业技术人员，无需专业设备，即可快速、简便的对新冠疫苗接种后的效果进行检测；样本需求量少；可以提高疫苗的有效接种率，防止因疫苗接种效果不好而导致的感染，具有良好的临床应用前景。

Description

一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条
技术领域
本发明涉及快速免疫层析检测技术领域，具体涉及一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条。
背景技术
新型冠状病毒即严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(serve acute respiratorysyndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)和2003年的SARS冠状病毒以及2012年的MERS冠状病毒同属于冠状病毒科β属，同时该病毒也被世界卫生组织列为感染人的第七个冠状病毒。该病毒感染后，潜伏期7-14天，发病后均伴有肺炎情况，常见症状为发热、咳嗽和肌痛或疲劳；较不常见的症状有痰、头痛、咯血、腹泻、呼吸困难等。该症状与普通感冒相似，如不及时诊治会有呼吸困难并最终死亡的情况。SARS-CoV-2通过飞沫、空气传播，同时具有粪口和母婴传播的可能。该病毒感染不存在年龄偏好性，无论是老人(98岁)还是婴儿(30小时)均有确诊病例；同时存在家庭聚集性爆发和无症状传染者等情况，严重危害人类的身体健康和生活。
现阶段，对新型冠状病毒的成功控制需要依赖于疫苗免疫。疫苗接种能够在人群中逐步建立起群体免疫力，阻断疫情流行，在当前疫情防控中显得尤为重要。评价群体免疫力的获得的关键指标是中和抗体的量，通过检测中和抗体的效价是否达到标准来判断是否形成免疫力。可制备的新冠疫苗有如下类型：减毒疫苗、灭活疫苗、蛋白亚单位疫苗、病毒载体疫苗(复制/非复制/抗原提呈细胞参与)、核酸疫苗(mRNA、DNA)、病毒样颗粒疫苗等。目前，国产疫苗使用的是新冠病毒灭活疫苗，该疫苗是将体外培养的新冠病毒进行灭活和纯化从而得到的疫苗。其主要原理是：新冠病毒S蛋白的RBD区域通过与人细胞表面的ACE2结合，进而在体内扩增，造成人体感染，而灭活病毒能够促使人体产生抗RBD抗体，该抗体可以与RBD结合，阻断RBD与ACE2的结合，最终达到抑制病毒在体内扩增的目的。
根据新冠疫苗Ⅲ期临床试验期中数据，新冠疫苗的保护效力为79.34％，中和抗体阳转率为99.52％。即就是说，接种疫苗的人群中，有99.52％的人能够产生中和抗体，而79.34％的人因接种疫苗产生的中和抗体达到一定效价，能够对机体产生保护效力。但是，并不是所有人接种了疫苗都会产生保护效力，有一部分人会因为接种疫苗产生的保护效力不够而无法避免新冠病毒感染，也就是并没有达到预防的目的。因此，在接种疫苗后，判断机体是否产生了中和抗体，产生中和抗体的效力是否能够达到保护效力是一个亟待解决的问题。
化学发光法、胶体金/胶体硒法和酶联免疫法均可用于中和抗体检测，但是发明人首次发现采用胶体金检测中和抗体时，采用传统控制带包被策略会导致试纸条检测结果无效的问题；同时单一检测带不能同时说明机体对疫苗反应及形成保护两个层面的问题，即检测机体是否产生中和抗体和中和抗体是否达到能够提供保护效力的问题。
针对上述技术问题，发明人研制了一种能够检测新冠疫苗接种后，接种者体内是否含有抗RBD抗体，判断疫苗是否产生了保护效力，进而检测新冠疫苗接种后抗体的试纸条，所述的试纸条可以在医院、诊所甚至在家中等多场景情况下，无需专业技术人员，无需专业设备，即可快速、简便的对新冠疫苗接种后的效果进行检测。
发明内容
针对上述技术问题，本发明提供了一种双线检测新冠疫苗接种后抗体的试纸条，包括底板1、样品垫2、结合垫3、反应垫4和吸水垫5，所述的样品垫2、结合垫3、反应垫4和吸水垫5依次搭接在底板1上，所述的反应垫4上设有检测带和控制带，所述的检测带设置于靠近结合垫3的一端，所述的控制带设置于靠近吸水垫5的一端，所述的检测带包括接种疫苗反应检测带6和/或免疫效力检测带7，所述的接种疫苗反应检测带6包被有新型冠状病毒表面刺突糖蛋白受体结合区(RBD)蛋白，所述的免疫效力检测带7上包被有胶体金标记新型冠状病毒受体ACE2蛋白和鼠IgG，所述的控制带包括第一控制带8和/或第二控制带9，均包被有山羊抗鼠IgG抗体。
优选地，所述的ACE2蛋白标记量为每1ml 4/万的胶体金溶液对应ACE2蛋白的量为6-8μg，山羊抗鼠抗体的标记量为0.5mg/ml，RBD蛋白的标记量为0.1mg/ml。
优选地，所述的检测带包括接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7，所述的控制带包括第一控制带8，所述的接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7，第一控制带8依次设置在反应垫4上，接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7能够分别与抗RBD抗体结合，进而显示不同的检测结果。
优选地，所述的试纸条包括两条设有不同检测带和控制带的试纸条，第一个试纸条的反应垫4上设置有接种疫苗反应检测带6和第一控制带8；第二个试纸条的反应垫上设置有免疫效力检测带7和第二控制带9，所述的两条试纸条还可设置为共用同一个样品垫2和吸水垫5，结合垫3和反应垫4被聚乙烯材料隔开，以便于检测不同的指标。
优选地，所述的试纸条为双向检测试纸条，所述的样品垫2设置于底板1的中间位置，结合垫3、反应垫4和吸水垫5在样品垫2的两侧均有设置，结合垫3、反应垫4和吸水垫5分别朝左右两个不同的方向依次搭接在样品垫2上，所述的试纸条左端的反应垫4上设置有免疫效力检测带7和第二控制带9，所述的试纸条右端的反应垫4上设置有接种疫苗反应检测带6和第一控制带8，样品滴加在样品垫2上后，能够向两端移动，以便于检测不同的指标。
优选地，所述的反应垫4上设置有硝酸纤维素膜，接种疫苗反应检测带6、免疫效力检测带7、第一控制带8和第二控制带9包被于硝酸纤维素膜上。
优选地，所述的接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7、免疫效力检测带7和第一控制带8、接种疫苗反应检测带6和第一控制带8以及免疫效力检测带7和第二控制带9之间的间隔均为2-4mm。
优选地，所述的样品垫2与结合垫3衔接长度为1-2mm，结合垫3与反应垫4衔接长度为1-2mm，反应垫4与吸水垫5衔接长度为1-2mm。
所述的接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7分别为检测注射新冠疫苗后机体是否产生中和抗体以及注射新冠疫苗后机体是否产生保护效力，两者位置可以交换。本技术方案通过在检测带位置包被RBD蛋白，胶体金标记ACE2，结合制备抗RBD抗体检测试纸条；同时也可以将ACE2包被在检测带的位置，胶体金标记RBD；为了实现不同检测目的，可以在检测带位置包被不同浓度的ACE2或RBD，同时也可以包被新冠病毒的S蛋白或核蛋白，以达到检测机体对该疫苗是否有响应的检测目的。
本发明的有益效果是：所述的试纸条灵敏度好，检测性能良好，成本低，使用方法简单，可以在医院、诊所甚至在家中等多场景情况下，无需专业技术人员，无需专业设备，即可快速、简便的对新冠疫苗接种后的效果进行检测；样本需求量少，仅需少量血样便可同时检测机体对疫苗反应和机体是否产生保护力，及时得到反馈；另外，目前新冠疫苗种类繁多，有灭活疫苗、mRNA疫苗、腺病毒载体新冠疫苗、基因工程重组疫苗及病毒样颗粒疫苗等，不同人群对不同种类的疫苗反应与否及强度有所差异；该试纸条可以评判被检测人员对注射的新冠疫苗有没有反应或保护；如果有保护说明已具备针对新冠病毒的免疫力；如果有反应而无保护，则可以加强免疫已注射种类的疫苗以达到保护；如果无保护无反应，则提示需要更换其他种类的疫苗进行免疫。以接种灭活新冠疫苗为例；如果接种后在一定时间点检测发现控制带和检测带6显色，检测带7不显色，提示需要加强免疫该灭活疫苗；如果检测带和控制带都显色说明已经形成保护；如果只有控制带显色，那么说明机体对该灭活疫苗没有反应，如需要获得保护力需要更换mRNA疫苗等其他种类的疫苗进行接种；总之，该发明涉及的试剂盒可以提高疫苗的有效接种率，防止因疫苗接种效果不好而导致的感染，具有良好的临床应用前景。该试纸条可使接种疫苗的人群足不出户就能对接种疫苗后的效果进行初步评估，对自己下一步的新冠防护策略是否调整提供依据。
附图说明
图1双线检测新冠疫苗接种后抗体试纸条的立体图
1.底板 2.样品垫 3.结合垫 4.反应垫 5.吸水垫 6.接种疫苗反应检测带 7.免疫效力检测带 8.第一控制带
图2双试纸条单检测线检测疫苗接种后抗体试纸条的立体图
1.底板 2.样品垫 3.结合垫 4.反应垫 5.吸水垫 6.接种疫苗反应检测带 7.免疫效力检测带 8.第一控制带 9.第二控制带
图3为双向检测疫苗接种后抗体试纸条的俯视图
2.样品垫 3.结合垫 4.反应垫 5.吸水垫 6.接种疫苗反应检测带 7.免疫效力检测带 8.第一控制带 9.第二控制带
图4控制带包被抗His抗体试纸条检测效果图
图5双抗体***控制带包被山羊抗鼠IgG试纸条检测效果图
图6不同标记量的试纸条灵敏度分析
1.标记量6μg时试纸条灵敏度 2.标记量8μg时试纸条灵敏度
图7临床阴性样本检测1
图8临床阴性样本检测2
图9阴性标本6，13，38用样本稀释液处理后检测结果图
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明作进一步的说明，但所做的说明仅用于解释本发明并不限制本发明的保护范围。
实施例一、一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条及判读方法
一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，如图1所示，所述的试纸条包括底板1、样品垫2、结合垫3、反应垫4和吸水垫5，所述的样品垫2、结合垫3、反应垫4和吸水垫5依次搭接在底板1上，所述的反应垫4上设有接种疫苗反应检测带6、免疫效力检测带7和第一控制带8，所述的接种疫苗反应检测带6设置于靠近结合垫3的一端，所述的第一控制带8设置于靠近吸水垫5的一端，所述的免疫效力检测带7设置于接种疫苗反应检测带6与第一控制带8之间；所述的样品垫2与结合垫3衔接长度为2mm，结合垫3与反应垫4衔接长度为2mm，反应垫4与吸水垫5衔接长度为2mm；所述的反应垫4上设置有硝酸纤维素膜，接种疫苗反应检测带6、免疫效力检测带7和第一控制带8包被于硝酸纤维素膜上，所述的接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7、免疫效力检测带7和控制带8之间的间隔均为4mm。
所述的接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7分别为检测注射新冠疫苗后机体是否产生中和抗体以及注射新冠疫苗后机体是否产生保护效力，两检测线位置可以交换。接种疫苗反应检测带6用来检测机体是否对接种疫苗产生反应，免疫效力检测带7用来检测机体接种疫苗后是否产生了保护效力。
①当接种疫苗反应检测带6、免疫效力检测带7和第一控制带8均显色时，则受检者即为新冠疫苗接种后机体既产生了反应，体内中和抗体的效价又达到了一定浓度，产生了保护效力；②当接种疫苗反应检测带6和第一控制带8显色，而免疫效力检测带7不显色时，是指受检者在接种新冠疫苗后机体产生了一定反应，但产生中和抗体没有达到一定效价，没有对机体产生保护效力；③当第一控制带8显色，而接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7均不显色时，说明受检者在接种新冠疫苗后机体并没有产生反应，也没有产生保护效力；④当控制带8不显色时，无论接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7显色与否，检测结果均无效。当免疫效力检测带7不显线即受检者在接种新冠疫苗后没有产生保护效力，无论接种疫苗反应检测带6是否显线，机体是否产生反应，都应注意更换疫苗的类型，重新进行接种。
实施例二、一种双试纸条单检测线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条及判读方法
一种双试纸条单检测线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，如图2所示，分为两个试纸条，分别包括底板1、样品垫2、结合垫3、反应垫4和吸水垫5，所述的样品垫2、结合垫3、反应垫4和吸水垫5依次搭接在底板1上，其中一个试纸条的反应垫4上设有接种疫苗反应检测带6和第一控制带8，另一个试纸条的反应垫4上设有免疫效力检测带7和第二控制带9。所述的样品垫2与结合垫3衔接长度为2mm，结合垫3与反应垫4衔接长度为2mm，反应垫4与吸水垫5衔接长度为2mm。所述的反应垫4为硝酸纤维素膜，接种疫苗反应检测带6、第一控制带8、免疫效力检测带7和第二控制带9分别包被于两试纸条的硝酸纤维素膜上，所述的接种疫苗反应检测带6和第一控制带8、免疫效力检测带7和第二控制带9之间的间隔均为4mm。所述的反应垫4为硝酸纤维素膜，接种疫苗反应检测带6、第一控制带8、免疫效力检测带7和第二控制带9分别包被于两试纸条的硝酸纤维素膜上，所述的接种疫苗反应检测带6和第一控制带8、免疫效力检测带7和第二控制带9之间的间隔均为4mm。所述的接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7分别为检测注射新冠疫苗后机体是否产生中和抗体以及注射新冠疫苗后机体是否产生保护效力，两检测线位置可以交换。
接种疫苗反应检测带6用来检测机体是否对接种疫苗产生反应，免疫效力检测带7用来检测机体接种疫苗后是否产生了保护效力。①当接种疫苗反应检测带6、第一控制带8、免疫效力检测带7和第二控制带9均显色时，则受检者即为新冠疫苗接种后机体既产生了反应，体内中和抗体的效价又达到了一定浓度，产生了保护效力；②当接种疫苗反应检测带6、第一控制带8和第二控制带9显色，而免疫效力检测带7不显色时，是指受检者在接种新冠疫苗后机体产生了一定反应，但产生中和抗体没有达到一定效价，没有对机体产生保护效力；③当第一控制带8和第二控制带9显色，而接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7均不显色时，说明受检者在接种新冠疫苗后机体并没有产生反应，也没有产生保护效力；④当第一控制带8和第二控制带9不显色时，无论接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7显色与否，检测结果均无效；⑤当免疫效力检测带7不显色即受检者在接种新冠疫苗后没有产生保护效力，无论接种疫苗反应检测带6是否显线，机体是否产生反应，都应注意更换疫苗的类型，重新进行接种。
实施例三、双向检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条及判读方法
一种双向检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，如图3所示，所述的试纸条包括样品垫2、结合垫3、反应垫4和吸水垫5，所述的样品垫2设置于底板的中间位置，结合垫3、反应垫4和吸水垫5依次搭接在底板上，所述的两边反应垫4上一边设有接种疫苗反应检测带6和第一控制带8，另一边上设有免疫效力检测带7和第二控制带9。所述的样品垫2为共用样品垫，其与结合垫3衔接长度为2mm，结合垫3与反应垫4衔接长度为2mm，反应垫4与吸水垫5衔接长度为2mm。所述的反应垫4为硝酸纤维素膜，接种疫苗反应检测带6、第一控制带8、免疫效力检测带7和第二控制带9分别包被于两侧的硝酸纤维素膜上，所述的接种疫苗反应检测带6和第一控制带8、免疫效力检测带7和第二控制带9之间的间隔均为4mm。所述的接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7分别为检测注射新冠疫苗后机体是否产生中和抗体以及注射新冠疫苗后机体是否产生保护效力，两检测线位置可以交换。
接种疫苗反应检测带6用来检测机体是否对接种疫苗产生反应，免疫效力检测带8用来检测机体接种疫苗后是否产生了保护效力。①当接种疫苗反应检测带6、第一控制带8、免疫效力检测带7和第二控制带9均显色时，则受检者即为新冠疫苗接种后机体既产生了反应，体内中和抗体的效价又达到了一定浓度，产生了保护效力；②当接种疫苗反应检测带6、第一控制带8和第二控制带9显色，而免疫效力检测带7不显色时，是指受检者在接种新冠疫苗后机体产生了一定反应，但产生中和抗体没有达到一定效价，没有对机体产生保护效力；③当第一控制带8和第二控制带9显色，而接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7均不显色时，说明受检者在接种新冠疫苗后机体并没有产生反应，也没有产生保护效力；④当第一控制带8和第二控制带9不显色时，无论接种疫苗反应检测带6和免疫效力检测带7显色与否，检测结果均无效；⑤当免疫效力检测带7不显线即受检者在接种新冠疫苗后没有产生保护效力，无论接种疫苗反应检测带6是否显线，机体是否产生反应，都应注意更换疫苗的类型，重新进行接种。
实施例四、一种检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条的使用方法
使用时，将覆膜的检测试纸条水平放置，样品滴加在样品垫2上，则样品基于毛细作用和吸水垫5的吸力作用逐渐层析至结合垫3，与结合垫3上面标记的粒子结合反应，并与标记粒子一起层析至反应垫4后，分别与包被在接种疫苗反应检测带6、免疫效力检测带7和第一控制带8上设置的物质反应显色，多余的样品和标记粒子层析至吸水垫5。
实施例五、抗体标记对检测效果的影响
本实施例的检测新冠疫苗接种后效果的试纸条，包括样品垫、结合垫、反应垫和吸水垫，结合垫上固定有胶体金标记的新型冠状病毒ACE2蛋白(菲鹏生物，货号：ACE2-PS-Ag1，生产日期：20201130)，反应垫上包被有两条检测带和一条控制带，如实施例一制备的试纸条。
在前期研究中，发明人在控制带上包被抗His抗体，检测带上包被RBD蛋白(菲鹏生物，货号：ncov-PS-Ag28，生产日期：20201210)时，阴性可以正常显色，但随着样品中中和抗体浓度的上升，控制带随检测线变浅而变浅(如图4)，使得无法正常判断试纸条的结果。
发明人在控制带上包被山羊抗鼠抗体，检测带上包被RBD抗体，而在胶体金标记ACE2蛋白的同时，加入鼠IgG，使其同时被胶体金标记。检测时，标记了ACE2蛋白和鼠IgG(洛阳伯奥通实验材料中心，货号：20201227)的胶体金颗粒在控制带上被捕获，使控制带显色，同时不会影响检测带的正常显色(如图5)。
实施例六、蛋白标记量对检测结果的影响
本实施例的新冠疫苗接种后效果检测试剂，包括分散介质和分散介质中的胶体金标记的新型冠状病毒ACE2蛋白。胶体金标记的新型冠状病毒ACE2蛋白由胶体金和重组蛋白结合得到。重组蛋白由新型冠状病毒ACE2蛋白和标签蛋白构成，标签蛋白为His标签。
当制备检测机体是否对疫苗产生反应的试纸条时，每1ml 4/万的胶体金溶液对应重组ACE2蛋白的量为6μg，分散介质由磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和吐温组成，余量为水，其中磷酸盐缓冲液浓度为0.01mol/L，pH为7.2；牛血清白蛋白质量终浓度为1.5％，蔗糖质量终浓度为3％，海藻糖质量终浓度为3％，吐温的质量终浓度为2％；磷酸盐缓冲液中，Na2HPO4·12H2O质量含量为0.26％，NaH2PO4·2H2O质量含量为0.044％，反应垫上质控线包被为山羊抗鼠IgG抗体0.5mg/ml，检测线上包被为RBD蛋白0.1mg/ml。检测效果如图6①所示，检测中和抗体灵敏度可达到5μg/ml。
当制备检测机体接种疫苗后是否对机体产生保护力的试纸条时，每1ml 4/万的胶体金溶液对应重组ACE2蛋白的量为8μg，分散介质相同，反应垫上质控线包被为山羊抗鼠抗体0.5mg/ml，检测线上包被为RBD蛋白0.1mg/ml。检测效果如图6②所示，检测中和抗体灵敏度可达到20μg/ml。
同样，若将两项检测在一个试纸条上实现，只需将胶体金溶液与固定量的重组ACE2蛋白结合，在反应垫两条检测线上包被不同浓度的RBD蛋白即可。标记的ACE2蛋白，与检测线包被的RBD蛋白可以互换，达到同样的检测效果。
实施例七、检测中和抗体试纸条临床样本的验证
在临床上收集了131份阴性血清样本，将全血清样本滴加到样本垫，样本依次流经结合垫、硝酸纤维素膜上检测线、控制线、多余的血清由吸水纸吸收。检测结果如图7和8所示，其中6号、13号、38号显色较差，使用样本稀释液(10mMPB加20％FBS)按1:1比例稀释后，显色效果如图9所示。131份阴性血清样本进行全血清检测中，128份显色良好，直接判定为阴性，通过稀释液调整3份显色较浅样本，最终显色良好，判定为阴性，即阴性符合率为100％。
因本试纸条为竞争法，故质控线和检测线同时显线即判定为阴性。全部阴性样本检测结果均为阴性，其中个别样本显色较差，使用样本稀释液后显色效果提升。阴性样本检测结果证明试纸条对临床阴性样本检测性能良好。
综上所述，本发明所述的试纸条灵敏度好，检测性能良好，成本低，使用方法简单，可以在医院、诊所甚至在家中等多场景情况下，无需专业技术人员，无需专业设备，即可快速、简便的对新冠疫苗接种后的效果进行检测；样本需求量少，仅需少量血样便可同时检测机体对疫苗反应和机体是否产生保护力，及时得到反馈；另外，目前新冠疫苗种类繁多，有灭活疫苗、mRNA疫苗、腺病毒载体新冠疫苗、基因工程重组疫苗及病毒样颗粒疫苗等，不同人群对不同种类的疫苗反应与否及强度有所差异；该试纸条可以评判被检测人员对注射的新冠疫苗有没有反应或保护；如果有保护说明已具备针对新冠病毒的免疫力；如果有反应而无保护，则可以加强免疫已注射种类的疫苗以达到保护；如果无保护无反应，则提示需要更换其他种类的疫苗进行免疫。可以提高疫苗的有效接种率，防止因疫苗接种效果不好而导致的感染，具有良好的临床应用前景。

Claims (8)

1.一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，包括底板(1)、样品垫(2)、结合垫(3)、反应垫(4)和吸水垫(5)，所述的样品垫(2)、结合垫(3)、反应垫(4)和吸水垫(5)依次搭接在底板(1)上，所述的反应垫(4)上设有检测带和控制带，所述的检测带设置于靠近结合垫(3)的一端，所述的控制带设置于靠近吸水垫(5)的一端，其特征在于，所述的检测带包括接种疫苗反应检测带(6)和/或免疫效力检测带(7)，所述的接种疫苗反应检测带(6)上包被有新型冠状病毒表面刺突糖蛋白受体结合区(RBD)蛋白，所述的免疫效力检测带上包被有胶体金标记新型冠状病毒受体ACE2蛋白和鼠IgG，所述的控制带包括第一控制带(8)和/或第二控制带(9)，均包被有山羊抗鼠IgG抗体。
2.如权利要求5所述的双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，其特征在于，所述的ACE2蛋白标记量为每1ml 4/万的胶体金溶液对应ACE2蛋白的量为6-8μg，山羊抗鼠抗体的标记量为0.5mg/ml，RBD蛋白的标记量为0.1mg/ml。
3.如权利要求2所述的检测新冠病毒疫苗接种后中和抗体的试纸条，其特征在于，所述的检测带包括接种疫苗反应检测带(6)和免疫效力检测带(7)，所述的控制带包括第一控制带(8)，所述的接种疫苗反应检测带(6)和免疫效力检测带(7)，第一控制带(8)依次设置在反应垫(4)上。
4.如权利要求2所述的双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，其特征在于，所述的试纸条包括两条设有不同检测带和控制带的试纸条，第一个试纸条的反应垫(4)上设置有接种疫苗反应检测带(6)和第一控制带(8)；第二个试纸条的反应垫上设置有免疫效力检测带(7)和第二控制带(9)。
5.如权利要求2所述的双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，其特征在于，所述的试纸条为双向检测试纸条，所述的样品垫(2)设置于底板(1)的中间位置，结合垫(3)、反应垫(4)和吸水垫(5)在样品垫(2)的两侧均有设置，所述的试纸条左端的反应垫(4)上设置有免疫效力检测带(7)和第二控制带(9)，所述的试纸条右端的反应垫(4)上设置有接种疫苗反应检测带(6)和第一控制带(8)。
6.如权利要求1-5任一项所述的双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，其特征在于，如权利要求1所述的样品垫(2)与结合垫(3)衔接长度为1-2mm，结合垫(3)与反应垫(4)衔接长度为1-2mm，反应垫(4)与吸水垫(5)衔接长度为1-2mm。
7.如权利要求1-5任一项所述的双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条，所述的反应垫(4)上设置有硝酸纤维素膜，接种疫苗反应检测带(6)、免疫效力检测带(7)、第一控制带(8)和第二控制带(9)包被于硝酸纤维素膜上。
8.如权利要求7所述的双线检测新冠病毒疫苗接种后中和抗体的试纸条，其特征在于，所述的接种疫苗反应检测带(6)和免疫效力检测带(7)、免疫效力检测带(7)和第一控制带(8)、接种疫苗反应检测带(6)和第一控制带(8)以及免疫效力检测带(7)和第二控制带(9)之间的间隔均为2-4mm。
CN202110179408.XA 2021-02-09 2021-02-09 一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条 Pending CN112904021A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110179408.XA CN112904021A (zh) 2021-02-09 2021-02-09 一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110179408.XA CN112904021A (zh) 2021-02-09 2021-02-09 一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112904021A true CN112904021A (zh) 2021-06-04

Family

ID=76123189

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110179408.XA Pending CN112904021A (zh) 2021-02-09 2021-02-09 一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112904021A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113267634A (zh) * 2021-07-20 2021-08-17 南京申基医药科技有限公司 一种联合检测IgG、IgM和中和抗体的试纸条及其制备方法、试剂盒
CN113281523A (zh) * 2021-07-21 2021-08-20 南京申基医药科技有限公司 一种SARS-CoV-2中和抗体试纸条及其制备方法、试剂盒

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201053964Y (zh) * 2007-05-21 2008-04-30 四川省迈克科技有限责任公司 疫苗保护性抗体快速检测试剂盒
CN111562369A (zh) * 2020-06-18 2020-08-21 威海威高生物科技有限公司 SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒
CN111781354A (zh) * 2020-09-04 2020-10-16 北京百普赛斯生物科技股份有限公司 新型冠状病毒中和性抗体滴度检测elisa试剂盒
CN211905393U (zh) * 2020-09-22 2020-11-10 正元盛邦(天津)生物科技有限公司 新型冠状病毒特异性抗体和中和抗体联合检测试纸及装置

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201053964Y (zh) * 2007-05-21 2008-04-30 四川省迈克科技有限责任公司 疫苗保护性抗体快速检测试剂盒
CN111562369A (zh) * 2020-06-18 2020-08-21 威海威高生物科技有限公司 SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒
CN111781354A (zh) * 2020-09-04 2020-10-16 北京百普赛斯生物科技股份有限公司 新型冠状病毒中和性抗体滴度检测elisa试剂盒
CN211905393U (zh) * 2020-09-22 2020-11-10 正元盛邦(天津)生物科技有限公司 新型冠状病毒特异性抗体和中和抗体联合检测试纸及装置

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113267634A (zh) * 2021-07-20 2021-08-17 南京申基医药科技有限公司 一种联合检测IgG、IgM和中和抗体的试纸条及其制备方法、试剂盒
CN113281523A (zh) * 2021-07-21 2021-08-20 南京申基医药科技有限公司 一种SARS-CoV-2中和抗体试纸条及其制备方法、试剂盒
CN113281523B (zh) * 2021-07-21 2021-10-08 南京申基医药科技有限公司 一种SARS-CoV-2中和抗体试纸条及其制备方法、试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20130309656A1 (en) Antibody detection method and device for a saliva sample from a non-human animal
Gonzalez et al. Evaluation of the live attenuated cpts 248/404 RSV vaccine in combination with a subunit RSV vaccine (PFP-2) in healthy young and older adults
CN211148669U (zh) 一种基于S抗原的新型冠状病毒2019-nCoV抗体快速检测试剂盒
US8114408B2 (en) Peptide fragments reacting specifically with antibodies against highly pathogenic newcastle disease virus and uses thereof
US20040197769A1 (en) Diagnostic test for West Nile virus
EP3896447A1 (en) A lateral flow detection device for detecting a coronavirus by immunoassay
CN112904021A (zh) 一种双线检测新冠病毒疫苗接种后抗体的试纸条
CN104316703B (zh) 一种牛支原体检测试纸条及其制备方法
Watson et al. A multiplexed immunoassay for detection of antibodies against avian influenza virus
CN112305218A (zh) 一种新型冠状病毒抗体胶体金免疫侧向层析检测方法及其应用
CN102731615A (zh) Prrsv的检测试剂和检测方法
Brüning et al. A rapid chromatographic strip test for the pen-side diagnosis of rinderpest virus
Sutmoller et al. Viral etiology of acute respiratory diseases in Rio de Janeiro: first two years of a longitudinal study
O'Donnell et al. Detection of antibodies against foot-and-mouth disease virus using a liquid-phase blocking sandwich ELISA (LPBE) with a bioengineered 3D protein
Mohan et al. Recombinant haemagglutinin neuraminidase antigen-based single serum dilution ELISA for rapid serological profiling of Newcastle disease virus
Janke Diagnosis of swine influenza
Kılıc et al. The duration of maternal measles antibodies in children
CN204028084U (zh) 人肺炎衣原体量子点免疫层析检测卡
Tian et al. Development and Head-to-Head Comparison of Two Colloidal Gold Based Serologic Lateral Flow Assays for SARS-CoV-2 Antibody Tests
CN112334478A (zh) 用于快速甲型流感诊断测试的抗体对
Hayes et al. Measles-specific antibodies in sera and cerebrospinal fluids of patients with multiple sclerosis
CN105277694B (zh) 人a群链球菌量子点免疫层析检测卡及其制备方法和应用
ES2257095T3 (es) Especificidad mejorada en la deteccion de anticuerpos igm de anti-rubeola.
TWI490229B (zh) 豬瘟病毒封套醣蛋白Ｅｒｎｓ之特異性單株抗體ＣＷ８１３及其於間接三明治ＥＬＩＳＡ抗體檢測之應用
CN113848319B (zh) 免疫法检测冠状病毒的横向流动检测装置

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination