CN112899292B - 陆地棉株高调控基因GhGA20ox6及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种陆地棉株高调控基因GhGA20ox6及其用途，该基因具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。通过调控GhGA20ox6，能够从分子水平上调控陆地棉株高，从而对陆地棉进行改良，矮化植株，使得陆地棉有较强的抗倒伏能力，提高作物的群体光能利用率，从而提高作物的产量。

Description

陆地棉株高调控基因GhGA20ox6及其用途
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种陆地棉株高调控基因GhGA20ox6及其用途。
背景技术
赤霉素(Gibberellin,GA)，作为植物六大激素之一，是一类四环双萜类植物激素，在植物的各个生长发育阶段都发挥着重要的作用，在种子萌发、根冠的伸长、开花结果、茎的伸长、叶片生长展开等都有重要的作用。高等植物中，多种酶参与了赤霉素多步骤酶促反应的生物合成和代谢过程，这些酶基因的表达能有效地调节赤霉素的合成代谢速率。参与赤霉素合成代谢的酶有很多，GA2-氧化酶(GA2-oxidase)是植物中GA降解过程中的关键酶，GA2ox可以将植物体内具有活性的GAs以及它的前体和其中间产物分解失活，从而维持植物体内的活性GAs之间的动态平衡。GA3-氧化酶(GA3-oxidase)和GA20-氧化酶(GA20-oxidase)作为植物赤霉素合成代谢途径中的最后一步关键酶，催化GA12和GA53转变为具有活性的GA1和GA4，另外，GA3ox和GA20ox又受体内活性GAs的负反馈调节。植物赤霉素氧化酶基因家族属于2OG-Fe(Ⅱ)oxygenase亚家族，能被多基因家族编码。到目前为止，模式植物拟南芥的赤霉素合成与代谢通路研究深入透彻，其赤霉素相关基因也已被克隆鉴定。研究表明目前主要农作物的“绿色革命”都与赤霉素有着密切的关系。在植物中，赤霉素参与调解植物生长发育的优势是促进茎的伸长和植株增高，如在水稻中，通过对GA20ox相关基因的克隆与基因沉默，发现这些基因影响水稻的茎秆长度，进而导致水稻出现矮化表型，Mauriat等人研究发现，GA20ox相关基因影响山杨的茎伸长，对山杨幼苗进行GA20ox相关基因表达的增强，显示其促进幼苗体内的活性赤霉素的合成。
棉花，作为世界上最重要的天然纤维来源，是世界上栽培最广泛的棉种之一，在许多国家仍然是一种重要的经济作物。株高是作物育种中一个重要的优良农艺性状，植株过高会产生倒伏现象，从而使作物的产量降低，植株的矮化可以有较强的抗倒伏能力，可提高作物的群体光能利用率，从而提高作物的产量。陆地棉(G.hirsutum L.,AADD)具有A、D两个亚基因组，目前，农业上基本上都是使用去势打顶来控制株高，一方面会增加劳动力，增加劳作时长。从分子水平上对陆地棉进行改良具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种陆地棉株高调控基因GhGA20ox6及其用途，通过调控GhGA20ox6，能够从分子水平上调控陆地棉株高，从而对陆地棉进行改良，矮化植株，使得陆地棉有较强的抗倒伏能力，提高作物的群体光能利用率，从而提高作物的产量。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种陆地棉株高调控基因GhGA20ox6，该基因具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。
发明人通过探索研究，在对陆地棉全基因组进行第一次筛选获得13个候选基因，然后再进一步探索分析，发现并确定对陆地棉株高调控的关键基因GhGA20ox6，并对其功能进行了验证。并利用发现的该功能基因从分子水平上调控陆地棉株高，从而对陆地棉种质资源进行改良。
一种包含权利要求1所述陆地棉株高调控基因GhGA20ox6的质粒。
一种包含权利要求1所述陆地棉株高调控基因GhGA20ox6的植物表达载体。
一种宿主细胞，该宿主细胞包含权利要求1所述陆地棉株高调控基因GhGA20ox6。
一种陆地棉株高调控基因GhGA20ox6编码的蛋白质，该蛋白质具有SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。
一种陆地棉株高调控基因GhGA20ox6的用途，用于调控陆地棉株高。
一种陆地棉的矮化方法，通过对陆地棉株高调控基因GhGA20ox6进行基因沉默，从而降低陆地棉株高，实现矮化。
本发明的有益效果是：通过调控GhGA20ox6，能够从分子水平上调控陆地棉株高，从而对陆地棉进行改良，矮化植株，使得陆地棉有较强的抗倒伏能力，提高作物的群体光能利用率，从而提高作物的产量。
附图说明
图1是GhGA20ox6基因在陆地棉不同组织中的表达水平。
图2是GhGA20ox6在本氏烟中的亚细胞定位；35S::GhGA20ox6::GFP(A～C)、35S::GFP(D～F)在本氏烟草叶细胞中的亚细胞定位。A、D：488nm激光下的表皮细胞；B、E：明场下的表皮细胞；C、F：激光和明场合并下的表皮细胞，20μm标尺。
图3是阳性对照(CLCrVA::PDS)、VIGS植株(Line1、Line2和Line3)和空载体对照(CLCrVA)表型。
图4是VIGS阳性株与对照组的株高和节间长度；*P<0.05，**P<0.01。
图5是VIGS阳性株与对照组不同节间中GhGA20ox6的相对表达量；*P<0.05，**P<0.01。
图6是野生型拟南芥和GhGA20ox6转基因拟南芥的表型。注：A为Col-0和阳性株莲座叶表型；B、C为Col-0和阳性株株高表型。
图7是转基因拟南芥中GhGA20ox6的表达水平，**P<0.01；内参基因为AtUBQ10。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例：
1材料与方法
1.1实验材料与处理方式
选用陆地棉(G.hirsutum L.,AADD)TM-1材料进行组织表达量的分析，种植于浙江农林大学平山基地温室(浙江省杭州市临安区)，采用常规大田模式管理。
选用本氏烟草进行基因的瞬时转化，种植于浙江农林大学学16气候室，环境条件：光照16h，黑暗8h；温度23℃；相对湿度70％～75％。
选用陆地棉TM-1材料进行VIGS表型统计以及基因表达量的分析，种植于浙江农林大学学16气候室，温度条件：光照16h，黑暗8h；温度24℃；相对湿度65％～70％。
利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)col野生型材料进行转基因过表达实验，种植于浙江农林大学学16气候室，温度条件：温度25℃；光照16h，黑暗8h；相对湿度65％～70％。
以上所用材料均来自于浙江农林大学棉花育种实验室。
1.2载体与所用试剂
转基因表达载体pBI121、pBINGFP4以及棉花皱叶病毒载体pCLCrVA(空载体)、pCLCrVB(辅助载体)、pCLCrVA-PDS(阳性对照载体)保存于本实验室。从上海唯地生物有限公司购入大肠杆菌DH5α感受态和农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株GV3101感受态。限制性内切酶XbaI、SpeI、SacI购于TaKaRa公司(中国，大连)，AscI购于NEB公司。RNA提取试剂盒、质粒提取试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司。基因克隆载体pMD18-T、MightyAmp高保真酶、PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser反转录试剂盒、DNA片段纯化试剂盒以及荧光试剂TB
Figure BDA0002935958890000031
Premix Ex TaqTMII购于TaKaRa公司(中国，大连)。从源叶生物公司购入2-吗啉乙磺酸、乙酰丁香酮和1/2MS固体培养基，引物的合成及基因测序由杭州有康生物科技有限公司完成。本实验所用引物序列见表1。
表1所用引物序列
Figure BDA0002935958890000032
Figure BDA0002935958890000041
注：下划线为酶切位点。
1.3 RNA的提取及cDNA的合成
根据RNAprep Pure多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(DP441)说明书，提取TM-1的15DPA纤维、胚珠、花、萼片、顶芽、茎、叶、雌蕊、雄蕊这9个组织RNA，使用反转录试剂盒将这些组织RNA反转录，合成单链cDNA。
1.4 GhGA20ox6基因克隆
利用已公布的拟南芥赤霉素20氧化酶的蛋白序列作为参照，华中农业大学发布的陆地棉全基因组数据库下载自(https://cottonfgd.org/)，构建本地Blast数据库，筛选获得13个候选基因，13个候选基因分别为：GhGA20ox1(SEQ ID NO：2)，GhGA20ox3(SEQ ID NO：3)，GhGA20ox4(SEQ ID NO：4)，GhGA20ox5(SEQ ID NO：5)，GhGA20ox6(SEQ ID NO：1)，GhGA20ox7(SEQ ID NO：7)，GhGA20ox8(SEQ ID NO：8)，GhGA20ox9(SEQ ID NO：9)，GhGA20ox10(SEQ ID NO：10)，GhGA20ox11(SEQ ID NO：11)，GhGA20ox12(SEQ ID NO：12)，GhGA20ox13(SEQ ID NO：13)。
通过进一步探索试验，最终得到在茎中表达量较高的GhGA20ox6基因，设计特异性引物GhGA20ox6-F和GhGA20ox6-R，以TM-1材料茎组织的cDNA为模板进行GhGA20ox6的扩增，将得到的片段连接到pMD18-T载体，重组质粒转化到大肠杆菌DH5α，保存测序正确的单克隆菌液以供后续实验室用。
1.5GhGA20ox6的生物信息学分析
将得到的GhGA20ox6蛋白质序列利用ExPASy(https://web.expasy.org/ protparam/)在线分析网站预测其理化性质，包括蛋白质的长度、等电点以及分子质量。将目的基因的氨基酸序列利用DNAMAN进行保守性的分析。利用SMART在线网站得到GhGA20ox6的保守结构域。
1.6 GhGA20ox6空间模式表达
按照TB
Figure BDA0002935958890000051
Premix Ex TaqTMII试剂盒的反应体系和对应程序进行实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR，RT-PCR)，仪器型号为Roche LightCycler 96，操作方法依据仪器说明书进行。所使用的定量引物为GhGA20ox6-qF和GhGA20ox6-qR，选用Actin7基因作为棉花的内参基因。利用2-△△Ct方法分析基因的相对表达量，保证3次生物学和技术性重复，得到的数据利用Excel以及Graphpad软件，分析并绘制基因相对表达图。
1.7 GhGA20ox6亚细胞定位
利用GhGA20ox6-SF和GhGA20ox6-SR这对引物将目的基因片段连接到GFP荧光蛋白载体上，将构建好的过表达载体35S::GhGA20ox6::GFP利用农杆菌转化法转化农杆菌菌株GV3101。根据本氏烟草瞬时转化法，将农杆菌菌液注射到培养20天的烟草叶片中。对侵染的烟草叶片进行10小时的暗处理，培养28h后利用LSM880共聚焦显微镜下观察烟草叶片中的GFP细胞位置信号。
1.8病毒诱导基因沉默载体(VIGS)的构建和侵染
在育苗块上放入饱满的TM-1材料的种子，待到两片子叶完全张开。通过GhGA20ox6-VF和GhGA20ox6-VR这对酶切引物将GhGA20ox6部分基因片段与pCLCrVA病毒载体进行重组，将构建好的载体pCLCrVA-GhGA20ox6、pCLCrVA-pCLCrVB、PDS-pCLCrVB转入到农杆菌CV3101，将农杆菌菌液注射到长势一致的子叶中，进行24小时暗处理，之后放入气候室正常培养。观察记录六叶期节间之间以及总长度的变化，并取茎组织进行基因表达量的检测，验证沉默效果。
1.9转基因拟南芥过表达
将测序正确的pBI121-GhGA20ox6过表达载体转入到GV3101农杆菌菌株中进行扩增，利用农杆菌蘸花法转化法转化已经剪去结荚角果的col拟南芥，在气候室进行20h暗处理，收获的种子为T0代种子。将T0代种子进行继代培养，直至纯和世代。观察并记录纯合代转基因拟南芥的开花周期以及高度差异，检测转基因拟南芥中GhGA20ox6的基因表达量。
2结果与分析
2.1 GhGA20ox6基因的序列分析
GhGA20ox6位于D亚组第9号染色体上，开放阅读框为1155bp，氨基酸序列长度为384个(SEQ ID NO：14)，有2个内含子和3个外显子。利用ExPASy在线软件预测GhGA20ox6蛋白序列的相对分子质量为42.32kDa，等电点为6.37。DIOX_N结构域位于第63-172个氨基酸序列，2OG-Fe(Ⅱ)oxygenase结构域位于228-323个氨基酸序列。对13个候选基因对应的蛋白质进行氨基酸序列分析，结果显示GhGA20ox6在内的13个候选基因相应的蛋白都具有共同的保守蛋白质序列：与底物结合的高度保守基序LPWKET,与结合2-酮戊二酸有关的保守序列NYYPXCQKP，都具有Fe2+结合位点。
2.2 GhGA20ox6基因的空间表达模式分析
为研究GhGA20ox6的组织表达特性，利用qRT-PCR方法分析了其在TM-1陆地棉材料15DPA纤维、胚珠、花、萼片、顶芽、茎、叶、雌蕊、雄蕊这9个组织的表达量水平。结果显示：在这9个组织中，GhGA20ox6在茎中优势表达，而在胚珠与花这两个组织中的表达量较低(图1)。进一步推测GhGA20ox6在茎的生长发育过程中发挥着功能。
2.3GhGA20ox6蛋白亚细胞定位分析
将GhGA20ox6的蛋白序列在WoLF PSORT(https://wolfpsort.hgc.jp/)在线软件上进行亚细胞定位预测，结果显示定位在细胞膜。为了验证GhGA20ox6蛋白是否定位在细胞膜上，对本氏烟草的叶片细胞进行瞬时表达GhGA20ox6(图2)。结果显示，细胞膜中有明亮的绿色分布，表明细胞膜中有大量的绿色荧光信号，与预测结果相一致，说明GhGA20ox6蛋白是一个膜定位蛋白。
2.4沉默后GhGA20ox6基因的表型观察及表达水平分析
阳性对照pCLCrVA-PDS的棉花植株出现白化表型，pCLCrVA-GhGA20ox6的棉花植株相对于对照组，茎的节间与对照相比出现不同程度的缩短(图3)，将株高数据绘制成柱状图(图4)。结果显示经病毒诱导基因沉默的阳性株株高明显降低，第一节间长度、第三节间长度轻微的缩短，而第二节间长度、第四节间长度和第六节节间长度呈现显著的缩短，说明GhGA20ox6沉默能导致株型的矮化。测定这六节节间GhGA20ox6的表达量水平，实时荧光定量结果显示，第一节间、第三节间GhGA20ox6表达量与接种空载对照组相比无明显差异，第二节间、第四节节间、第五节间和第六节间GhGA20ox6表达量与对照组相比，有着极显著的差异(图5)。推测GhGA20ox6基因的沉默导致茎不同节间的缩短。
2.5 GhGA20ox6基因在拟南芥中的功能验证
在长日照条件下，同时种植野生型和转基因拟南芥，观察生长情况(图6)。结果显示，野生型拟南芥在移苗后22天开始抽薹，平均抽薹时间为25天，转基因拟南芥在移苗18天开始抽薹，平均抽薹时间为20天，显著早于对照野生型。转基因拟南芥株系的平均株高约为31cm，显著高于对照组拟南芥的24cm，并且转基因拟南芥的莲座叶数目也显著增加(表2)。对转基因拟南芥茎进行取样，提取RNA，检测拟南芥中GhGA20ox6基因在茎中的表达情况(图7)，转基因拟南芥中GhGA20ox6高调表达，符合35S启动子驱动外源基因转入的情况，说明GhGA20ox6被整合到拟南芥染色体上，说明GhGA20ox6基因促进茎的生长。
表2野生型和转基因拟南芥抽薹时间、株高及莲座叶数目统计
材料 株高 莲座叶数 抽薹时间
Materials Plant height(cm) Number of rosette leaves Bolting time(d)
WT 24.00+0.26 9.90+0.26 25.44+0.71
Line1 31.46+0.47** 11.80+0.21** 20.22+0.70**
Line2 30.21+0.29** 11.55+0.17** 20.56+0.56**
Line3 29.67+0.35** 11.40+0.18** 20.67+0.60**
。
3.讨论
赤霉素20氧化酶家族对植物的生长发育和环境适应方面起着重要的作用，是植物体内活性赤霉素合成的重要关键酶。
本发明通过从TM-1陆地棉材料中克隆得到1个赤霉素氧化酶基因GhGA20ox6，经过氨基酸多重序列比对，发现GhGA20ox6蛋白序列具有与底物结合的高度保守基序LPWKET,与结合2-酮戊二酸有关的保守序列NYYPXCQKP，并且GhGA20ox6基因在TM-1不同组织中的表达量差异较显著，在茎组织中的表达量较高。认为GhGA20ox6基因参与棉花茎的生长发育，影响株高性状。
目前，农业上基本上都是使用去势打顶来控制株高，一方面会增加劳动力，增加劳作时长。利用VIGS实验以及转基因过表达实验，在分子水平上通过对GhGA20ox6基因在植物体内表达量水平的研究，说明GhGA20ox6基因对植物株高性状方面起着调控的作用。
4.结论
本发明通过T-A克隆方法，从陆地棉材料TM-1的茎中克隆得到GhGA20ox6基因，氨基酸序列分析GhGA20ox6基因具有2OG-Fe(Ⅱ)oxygenase以及DIOX_N结构域。GhGA20ox6基因的cDNA为1155bp，编码384个氨基酸。亚细胞定位预测以及实验结果显示都定位于细胞膜。TM-1表达水平显示，GhGA20ox6基因具有明显的组织特异性，且在茎中的表达量最高。VIGS实验结果显示，棉花中GhGA20ox6基因的沉默使棉花不同茎节相对于对照组而言，出现了不同程度的矮化表型，且GhGA20ox6基因在不同节间的表达量呈现不同程度的降低。异源过表达转基因拟南芥结果显示，转基因拟南芥跟野生型相比，莲座叶数增多，抽薹时间提前，植株高度增加明显，表明GhGA20ox6基因对株高形状具有重要作用。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
序列表
<110> 浙江农林大学
<120> 陆地棉株高调控基因GhGA20ox6及其用途
<130> 2021.02
<160> 28
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1155
<212> DNA
<213> 陆地棉(G.hirsutum L.)
<400> 1
atgtctctct ctgtcttaat ggattcaggt tctccaacca ttcttttaca tccatccata 60
gaaccaagag atgagacggg tggtgtcctt tttgacccat ccaagttgca aaaccaatca 120
agtttaccct cagagttcat atggccatgt ggggacttgg ttcacaccca agaagagctt 180
aacgaaccat tgatagactt gggcgggttc atcaaaggag acgaagaagc tactgcacat 240
gcagtgggcc ttgttaagac tgcctgttct aaacatggtt tcttccaagt tacaaaccat 300
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ctcacccttg gcactggccc tcactctgat cctacttcct taacaattct tcaccaagat 780
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gggccaagag tgtatcctga tttcacatgg tctgatttgt tggacttcac tcaaaatcac 1080
tatagagctg acgttgctac actccaaagc ttctttcctt ggctcctttc ttctaaccct 1140
acttccaact tctag 1155
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ttcctatgtc ccaagggtga taaagtggta gccccaccaa cagagttggt cgacgcctat 960
aatcccagag tatatccaga ttttacttgg cctatgctgc ttgaattcac acaaaagcat 1020
tatagagctg atatgaacac acttgaagtc ttctcaaact gggttcaaca gagaaacagc 1080
tga 1083
<210> 13
<211> 1140
<212> DNA
<213> 陆地棉(G.hirsutum L.)
<400> 13
atggccatcg actgcatctc caacatagcc tccatgactc accatccgaa agatgaaaaa 60
aaagatgagc agaaaaagct ggtttttgat gcctcggtgc tcaagttcga atcccagata 120
ccaaaagaat ttatatggcc tgatgacgaa aagccttccg ctaatgcacc agaactccaa 180
gtaccactca ttgacctagg aggcttcctt tctggtgacc ctgttgctac aatggaagct 240
tcaaggttta tcagcgaggc atgtcagcag catggtttct tccttgtagt taatcatgga 300
gtcgatgcaa aactcttggc tgatgcccac aagtacatgg ataacttctt tctattgcca 360
cttagacaaa agcaaagggc tcaaagaaaa cttggtgagc actgtggata tgccagtagc 420
ttcactggca ggttctcgac caagctccca tggaaggaaa cactttcttt tcgctattca 480
gccgagaaca actcatccaa gatggtggaa gactaccttg ttaataaaat gggaaatgaa 540
ttgaggcaac tcgggagggt ttaccaggac tactgcgagg cgatgagcaa gctttctctg 600
gggataatgg agcttttagc cattagtctg ggcgtaggca gagcacattt ccgggagttt 660
tttgataaaa atgattcaat aatgagacta aactactatc ccccttgtca aaaaccagac 720
ctcactttag gaacagggcc tcattgcgat ccaacgtctt taaccatcct tcaccaagac 780
agagttggtg gccttcaagt gtttgtagac aacgaatggc attcaattag cccaaatttc 840
gaagcatttg tcgttaacat tggcgacacc tttatggcac tgtcaaatgg gagatataaa 900
agttgcttgc accaagcagt ggtgaacagc cataagccaa gaaaatctct ggctttcttt 960
ttgtgtccag agggggataa agtggtaacc ccaccagcag agttggtgag ccagaacagt 1020
cccagagtat atccagattt tacatggcct atgctgcttg aattcacaca aaagcattac 1080
agagctgaca tgaacactct tcaagaattc tcaaactggg ttcaacagag aaacagctga 1140
<210> 14
<211> 384
<212> PRT
<213> 陆地棉(G.hirsutum L.)
<400> 14
Met Ser Leu Ser Val Leu Met Asp Ser Gly Ser Pro Thr Ile Leu Leu
1 5 10 15
His Pro Ser Ile Glu Pro Arg Asp Glu Thr Gly Gly Val Leu Phe Asp
20 25 30
Pro Ser Lys Leu Gln Asn Gln Ser Ser Leu Pro Ser Glu Phe Ile Trp
35 40 45
Pro Cys Gly Asp Leu Val His Thr Gln Glu Glu Leu Asn Glu Pro Leu
50 55 60
Ile Asp Leu Gly Gly Phe Ile Lys Gly Asp Glu Glu Ala Thr Ala His
65 70 75 80
Ala Val Gly Leu Val Lys Thr Ala Cys Ser Lys His Gly Phe Phe Gln
85 90 95
Val Thr Asn His Gly Val Asp Ser Asn Leu Ile Gln Ala Ala Tyr Gln
100 105 110
Glu Ile Asp Ala Val Phe Lys Leu Pro Leu Asn Lys Lys Leu Ser Phe
115 120 125
Gln Arg Lys Pro Gly Gly Phe Ser Gly Tyr Ser Ala Ala His Ala Asp
130 135 140
Arg Phe Ser Ala Lys Leu Pro Trp Lys Glu Thr Phe Ser Phe Gly Tyr
145 150 155 160
Gln Gly Leu Asn Ser Asp Pro Ser Val Val His Tyr Phe Ser Ser Ala
165 170 175
Leu Gly Glu Asp Phe Glu Gln Thr Gly Trp Ile Tyr Gln Lys Tyr Cys
180 185 190
Glu Lys Met Arg Glu Leu Ser Leu Leu Ile Phe Glu Leu Leu Ala Ile
195 200 205
Ser Leu Gly Ile Asp Arg Leu His Tyr Arg Lys Phe Phe Glu Asp Gly
210 215 220
Asn Ser Ile Met Arg Cys Asn Tyr Tyr Pro Pro Cys Asn Asn Ser Gly
225 230 235 240
Leu Thr Leu Gly Thr Gly Pro His Ser Asp Pro Thr Ser Leu Thr Ile
245 250 255
Leu His Gln Asp Gln Val Gly Gly Leu Glu Val Phe Asn Asn Asn Lys
260 265 270
Trp Tyr Ala Val Arg Pro Arg Gln Asp Ala Phe Val Ile Asn Ile Gly
275 280 285
Asp Thr Phe Met Ala Leu Cys Asn Gly Arg Tyr Lys Ser Cys Leu His
290 295 300
Arg Ala Val Val Asn Lys Glu Arg Glu Arg Arg Ser Leu Val Tyr Phe
305 310 315 320
Val Cys Pro Lys Glu Asp Lys Ile Val Arg Pro Pro Gln Asp Leu Met
325 330 335
Cys Arg Ser Gly Gly Pro Arg Val Tyr Pro Asp Phe Thr Trp Ser Asp
340 345 350
Leu Leu Glu Phe Thr Gln Asn His Tyr Arg Ala Asp Val Ala Thr Leu
355 360 365
Gln Ser Phe Phe Pro Trp Leu Leu Ser Ser Asn Pro Thr Ser Asn Phe
370 375 380
<210> 15
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 15
atgtctctct ctgtcttaat g 21
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 16
ctagaagttg gaagtagggt 20
<210> 17
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 17
tgctctagag caatgtctct ctctgtc 27
<210> 18
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 18
cgagctcgct agaagttgga agt 23
<210> 19
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 19
cgagctcgat gtctctctct gtcttaatgg 30
<210> 20
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 20
ggactagtga agttggaagt agg 23
<210> 21
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 21
ggactagtgt gaacaaggag agagaga 27
<210> 22
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 22
ttggcgcgcc aagtagggtt agaagaaa 28
<210> 23
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 23
tgcacatgca gtcgaccttg tt 22
<210> 24
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 24
ggtcagcatg ggcagcagaa ta 22
<210> 25
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 25
atcctccgtc ttgaccttg 19
<210> 26
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 26
tgtccgtcag gcaactcat 19
<210> 27
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 27
agatccagga caaggaaggt attc 24
<210> 28
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 28
cgcaggacca agtgaagagt ag 22

Claims (1)

1.一种陆地棉的矮化方法，其特征在于，通过对陆地棉株高调控基因GhGA20ox6进行基因沉默，从而降低陆地棉株高，实现矮化；GhGA20ox6具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。
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