CN112739360A - 基于溶瘤性牛痘病毒与免疫检查点抑制剂的联用的癌症疗法以及其中使用的药物组合物和组合药物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于处置癌症的、基因重组牛痘病毒(特别是溶瘤性牛痘病毒)与其它癌症疗法的联用疗法、以及其中使用的药物组合物和组合试剂盒。更具体而言，提供基于包含编码白细胞介素‑7(IL‑7)的多核苷酸和编码白细胞介素‑12(IL‑12)的多核苷酸的牛痘病毒与免疫检查点抑制剂的联用的疗法、以及其中使用的药物组合物和组合试剂盒。

Description

基于溶瘤性牛痘病毒与免疫检查点抑制剂的联用的癌症疗法 以及其中使用的药物组合物和组合药物
技术领域
本发明涉及基于溶瘤性牛痘病毒与免疫检查点抑制剂的联用的癌症疗法、以及其中使用的药物组合物和组合药物。
背景技术
近年来，开发了将病毒用于癌症治疗的各种技术，作为癌症治疗中使用的病毒之一，有牛痘病毒。牛痘病毒已作为在癌细胞中增殖并破坏癌细胞的溶瘤性病毒、另外作为用于将治疗用基因递送至癌细胞的载体、或作为表达癌抗原或免疫调节分子的癌疫苗，以开发癌症治疗方法为目标进行了研究(Expert Opinion on Biological Therapy,2011,Vol.11,p.595-608)。
据报道，包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸和编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸这两种多核苷酸的基因重组牛痘病毒、以及包含编码IL-7的多核苷酸的基因重组牛痘病毒与包含编码IL-12的多核苷酸的基因重组牛痘病毒这两种基因重组牛痘病毒的混合物对各种人癌细胞显示出细胞溶解作用，在荷瘤人源化小鼠模型中显示出肿瘤萎缩作用，在同系荷瘤小鼠模型中显示出完全缓解，而且诱导获得性免疫、使抗肿瘤效果持续(专利文献1)。
另一方面，近年来，正在进行以癌症微环境中的抗肿瘤免疫调控为机制的癌症免疫疗法的临床研究。出于抑制PD-1(programmed cell death-1，程序性细胞死亡受体-1)和PD-L1(programmed cell death-1 ligand-1，程序性细胞死亡受体-1配体-1)的结合、激活生物体的免疫机制、将癌细胞识别为非自体并排除的目的，作为抗PD-1抗体的纳武单抗和派姆单抗、以及作为抗PD-L1抗体的阿特珠单抗、阿维鲁单抗和度伐鲁单抗已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准作为癌症治疗药(非专利文献1)。另外，同样出于活化使生物体的免疫***将癌细胞视为非自体而排除的机制的目的，作为抗CTLA-4(cytotoxic T-lymphocyte associated antigen 4，细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4)抗体的伊匹单抗已被批准作为癌症治疗药(非专利文献1)。包含这些免疫检查点抑制剂的癌症免疫治疗药不仅以单剂来使用，而且与现有的抗癌剂或其它癌症免疫治疗药联用(非专利文献2)。据报道，表达免疫刺激分子的溶瘤性牛痘病毒有可能由于由免疫检查点抑制剂引起的强烈免疫应答而在早期被清除。强烈免疫应答对于牛痘病毒介导的癌症治疗方法而言可能有利有弊(非专利文献3)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：国际公开第2017/209053号小册子
非专利文献1：Michael A.Postow et al.,The New England Journal ofMedicine,2018,Vol.378,p.158-168
非专利文献2：Daniel S.Chen and Ira Mellman,Nature,2017,Vol.541,p.321-330
非专利文献3：Yuqiao Shen and John Nemunaitis,Molecular Therapy,2005,Vol.11,No.2,p.180-195
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的课题在于，提供基于溶瘤性牛痘病毒与免疫检查点抑制剂的联用的癌症疗法、以及其中使用的药物组合物和组合药物。
用于解决问题的方法
本发明人在开发基因重组牛痘病毒与其它癌症疗法的联用用途时，惊讶地发现，将包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸这两种多核苷酸的牛痘病毒与免疫检查点抑制剂(例如抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体)联用时，显示优良的抗肿瘤效果，对未给药牛痘病毒的远端肿瘤也显示出优良的完全缓解诱导效果(实施例1)，从而完成了本发明。
根据本发明，例如可提供以下发明。
[1]
一种药物组合物，其为包含牛痘病毒作为有效成分的、用于处置癌症的药物组合物，其中，牛痘病毒为：
(1)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒；或
(2)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸和编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒，
并且与免疫检查点抑制剂联用。
[2]
根据[1]所述的药物组合物，其中，牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒。
[3]
根据[1]或[2]所述的药物组合物，其中，牛痘病毒的牛痘病毒生长因子(VGF)和O1L的功能发生了缺损。
[4]
根据[3]所述的药物组合物，其中，牛痘病毒的B5R胞外域的SCR(short consensusrepeat，短共有重复序列)结构域发生了缺失。
[5]
根据[1]～[4]中任一项所述的药物组合物，其中，牛痘病毒为LC16mO株牛痘病毒。
[6]
根据[1]～[5]中任一项所述的药物组合物，其中，免疫检查点抑制剂为选自由抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗CTLA-4抗体组成的组中的抗体或其抗原结合片段。
[7]
根据[1]～[6]中任一项所述的药物组合物，其中，癌症为实体癌。
[8]
根据[1]～[7]中任一项所述的药物组合物，其中，癌症为转移癌。
[9]
一种组合药物，其为用于处置癌症的组合药物，其包含：含有包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物和含有包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物，并且与免疫检查点抑制剂联用。
[10]
一种组合药物，其为用于处置癌症的组合药物，其含有：[1]～[8]中任一项所述的药物组合物或[9]所述的组合药物、以及包含免疫检查点抑制剂的药物组合物。
[11]
一种药物组合物，其为包含免疫检查点抑制剂的、用于处置癌症的药物组合物，其与[1]～[8]中任一项所述的药物组合物或[9]所述的组合药物联用。
[12]
一种处置癌症的方法，该方法包括：给药免疫检查点抑制剂和牛痘病毒，该牛痘病毒为：
(1)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒；或
(2)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸和编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒。
[13]
一种牛痘病毒，其为用于处置癌症的牛痘病毒，该牛痘病毒为：
(1)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒；或
(2)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸和编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒，
并且与免疫检查点抑制剂联用。
[14]
牛痘病毒在制造用于处置癌症的药物组合物中的应用，该牛痘病毒为：
(1)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒；或
(2)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸和编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒，
并且该药物组合物与免疫检查点抑制剂联用。
用于处置癌症的溶瘤性牛痘病毒(特别是包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸这两种多核苷酸的溶瘤性牛痘病毒)通过与免疫检查点抑制剂(例如，抑制PD-1与PD-L1的结合的抗体、或抗CTLA-4抗体)联用而使其抗肿瘤效果能够进一步提高。
附图说明
图1为示出荷瘤小鼠中的、搭载有IL-12和IL-7的牛痘病毒与抗PD-1抗体或抗CTLA-4抗体的联用效果(肿瘤体积和完全缓解的个体数)的图。各图中，纵轴表示肿瘤体积，横轴表示基于所移植的癌细胞的尺寸分组后的经过天数(天)。图中的符号“CR”表示完全缓解，该符号上所标注的数字以分数来表示每10只中的完全缓解数。另外，符号“IL-7/IL-12-VV”表示搭载有IL-7和IL-12的牛痘病毒。各图中的线表示各小鼠中的肿瘤体积的经时变化。
具体实施方式
本说明书中，“对象”表示哺乳动物、特别是人。对象可以是患有癌症的对象，可以是患有癌症的人，例如，可以是患有转移癌的人。对象可以是例如患有实体癌、例如转移性实体癌的对象。
本说明书中，“联用”是指：对于同一对象，为了治疗而同时或分别给药两种以上药物有效成分。联用时，所述两种以上药物有效成分可以包含在同一组合物中，也可以分别包含在不同的组合物中。
本说明书中，“药物组合物”是指：在1个组合物中包含一种或两种以上药物有效成分的组合物。“组合药物”是指：在不同的组合物中分别包含两种以上药物有效成分的各药物组合物的组合。
本说明书中，“处置”以包含预防和治疗的意思来使用。
本说明书中，“免疫检查点抑制剂”是指解除由免疫检查点分子引起的免疫细胞活化抑制的药剂。作为免疫检查点分子，可列举PD-1、CTLA-4、TIM-3(T-cell immunoglobulindomain and mucin domain-3，T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子3)、LAG-3(lymphocyteactivation gene 3，淋巴细胞激活基因3)、TIGIT(T cell immunoreceptor with Ig andITIM domains，Ig和ITIM域蛋白T-细胞免疫受体(TIGIT))、BTLA(B and Tlymphocyteassociated，B和T细胞衰减蛋白)和VISTA(V-type immunoglobulin domain-containingsuppressor of T-cell activation，T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域)等。免疫检查点抑制剂例如通过与免疫检查点分子或其配体结合来抑制免疫抑制信号，从而能够抑制免疫检查点的功能。例如，通过抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的结合而能够抑制PD-1信号。另外，通过抑制CTLA-4与CD80或CD86的结合而能够抑制CTLA-4信号(Matthieu Collin,Expert Opinion on Therapeutic Patents,2016,Vol.26,p.555-564)。
本说明书中，“抗体”表示免疫球蛋白，是指通过二硫键而稳定化的包含2条重链(H链)和2条轻链(L链)的生物分子。重链包含重链可变区(VH)、重链恒定区(CH1、CH2、CH3)、和位于CH1与CH2之间的铰链区，轻链包含轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)。其中，由VH和VL构成的可变区片段(Fv)是直接参与抗原结合、对抗体赋予多样性的区域。另外，将由铰链区、CH2、CH3构成的区域称为Fc区域。
可变区中，直接与抗原接触的区域变化特别大，被称为互补决定区(complementarity-determining region：CDR)。将CDR以外的突变较少的部分称为框架区(framework region：FR)。轻链和重链的可变区中分别存在3个CDR，从N末端侧起分别依次称为重链CDR1～3和轻链CDR1～3。
抗体可以是单克隆抗体也可以是多克隆抗体，本发明中优选使用单克隆抗体。抗体可以为IgG、IgM、IgA、IgD、或IgE中的任一同种型。抗体可以是通过对小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、兔、鸡等非人动物进行免疫而制作的抗体，也可以为重组抗体，可以为嵌合抗体、人源化抗体、人抗体等。在此，嵌合抗体是指将来源于不同种的抗体的片段连接而成的抗体，人源化抗体是指利用非人动物(例如非人哺乳动物)的抗体的CDR分别置换对应的人抗体的各CDR而成的抗体。人源化抗体是指CDR来源于非人动物、除此以外的抗体部分可来源于人。人抗体也被称为全人抗体，是抗体的各部分全部由人抗体基因编码的氨基酸序列所构成的抗体。本发明中，作为一个实施方式，可以使用嵌合抗体，作为另一实施方式，可使用人源化抗体，作为又一实施方式，可以使用人抗体(全人抗体)。
本说明书中，“抗原结合片段”是指作为抗体的片段的、能够与抗原结合的片段。作为抗原结合片段，具体而言，可列举：由VL、VH、CL和CH1区构成的Fab；2个Fab在铰链区通过二硫键连接而成的F(ab’)2；由VL和VH构成的Fv；将VL和VH用人工多肽接头连接而成的作为单链抗体的scFv；双价抗体；单链双价抗体(scDb)型；串联scFv型；和亮氨酸拉链型等双特异性抗体；以及VHH抗体等重链抗体(MAbs,2017,Vol.9,No.2,p.182-212)等。
根据本发明，通过在一种或两种以上牛痘病毒中以能表达的方式搭载IL-7和IL-12、并且联用免疫检查点抑制剂，可以期待处置癌症。
以下对上述发明的各构成要素进行说明。
＜本发明中能使用的牛痘病毒＞
本发明中能使用的一种或两种以上牛痘病毒可包含以下的(1)和(2)：
(1)编码IL-7的多核苷酸；和
(2)编码IL-12的多核苷酸。
(本说明书中，以下也将该牛痘病毒称为“本发明中使用的牛痘病毒”。)
本发明中，上述(1)和(2)中记载的多核苷酸可以包含在一种牛痘病毒中，也可以分别包含在两种以上牛痘病毒中。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒。
编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸分别包含在两种以上牛痘病毒中的情况下，该两种以上牛痘病毒可以包含在一种药物组合物中，也可以为分别包含在不同的药物组合物中的组合药物的形态。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒，并且与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用。另外，一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒，并且与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒联用。
本发明中使用的牛痘病毒是属于痘病毒科正痘病毒属的病毒。本发明中使用的牛痘病毒株没有限定，可列举例如Lister株、纽约市卫生委员会(New York City Board ofHealth)(NYBH)株、Wyeth株、哥本哈根株、Western Reserve(WR)株、EM63株、池田株、大连株、Tian Tan株等，Lister株可由美国典型培养物保藏中心获得(ATCC VR-1549)。此外，作为本发明中使用的牛痘病毒，也可以使用以这些株作为来源而建立的牛痘病毒株。例如，作为本发明中使用的牛痘病毒，也可以使用由Lister株建立的LC16株、LC16m8株和LC16mO株。LC16mO株是将Lister株作为亲本株进行低温传代、经由LC16株而制作出的株。LC16m8株是将LC16mO株进一步低温传代而制作出的株，该株在作为编码病毒膜蛋白的基因的B5R基因中确认到移码突变，该蛋白质不再表达和发挥功能，由此进行了减毒化(蛋白质核酸酶,2003,Vol.48,p.1693-1700)。作为Lister株、LC16m8株和LC16mO株的全基因组序列，例如分别已知有登录号AY678276.1、登录号AY678275.1和登录号AY678277.1。因此，可以由Lister株利用公知的同源重组或定点诱变法制作LC16m8株和LC16mO株。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为LC16mO株牛痘病毒。
作为本发明中使用的牛痘病毒，可以使用减毒化和/或肿瘤选择性牛痘病毒。在本说明书中，“减毒化”是指对正常细胞(例如非肿瘤细胞)的毒性(例如细胞溶解性)低。在本说明书中，“肿瘤选择性”是指与正常细胞(例如非肿瘤细胞)相比对肿瘤细胞的毒性(例如溶瘤性)高。作为本发明中使用的牛痘病毒，可以使用施加了使特定蛋白的功能缺损、或抑制特定基因或蛋白的表达这样的基因改变的牛痘病毒(Expert Opinion on BiologicalTherapy,2011,Vol.11,p.595-608)。例如，为了提高牛痘病毒的肿瘤选择性，可以使用使胸苷激酶(TK)的功能缺损的牛痘病毒(Cancer Gene Therapy,1999,Vol.6,p.409-422)、使牛痘病毒生长因子(VGF)的功能缺损的牛痘病毒(Cancer Research,2001,Vol.61,p.8751-8757)、包含修饰TK基因和修饰血凝素(HA)基因以及修饰F3基因或中断的F3基因座的牛痘病毒(国际公开第2005/047458号)、使VGF和O1L的功能缺损的牛痘病毒(国际公开第2015/076422号)、在B5R基因的3’非翻译区内***有在癌细胞中表达降低的小分子RNA的靶序列的牛痘病毒(国际公开第2011/125469号)、使VGF和TK的功能缺损的牛痘病毒(CancerResearch,2001,Vol.61,p.8751-8757)、使TK和HA以及F14.5L的功能缺损的牛痘病毒(Cancer Research,2007,Vol.67,p.10038-10046)、使TK和B18R的功能缺损的牛痘病毒(PLoS Medicine,2007,Vol.4,p.e353)、使TK和核糖核苷酸还原酶的功能缺损的牛痘病毒(PLoS Pathogens,2010,Vol.6,p.e1000984)、使SPI-1和SPI-2的功能缺损的牛痘病毒(Cancer Research,2005,Vol.65,p.9991-9998)、使SPI-1、SPI-2和TK的功能缺损的牛痘病毒(Gene Therapy,2007,Vol.14,p.638-647)、或在E3L和K3L区域具有突变的牛痘病毒(国际公开第2005/007824号)。另外，可以使用使O1L的功能缺损的牛痘病毒(Journal ofVirology,2012,Vol.86,p.2323-2336)。另外，期待在生物体内减弱因抗牛痘病毒抗体的中和效果所致的病毒的排除，可以使用使B5R的胞外域缺损的牛痘病毒(Virology,2004,Vol.325,p.425-431)或使A34R区域缺损的牛痘病毒(Molecular Therapy,2013,Vol.21,p.1024-1033)。另外，期待由牛痘病毒产生的免疫细胞活化作用，可以使用使白细胞介素-1b(IL-1b)受体缺损的牛痘病毒(国际公开第2005/030971号)。这些外源基因的***或基因的缺失、突变可以利用例如公知的同源重组或定点诱变法来进行。另外，在本发明中，作为牛痘病毒，可以使用具有这些基因改变的组合的牛痘病毒。在本说明书中，“缺损”是指：由该术语特别限定的基因区域不具有功能，以包括由该术语特别限定的基因区域发生了缺失的含义使用。例如，“缺损”可以是在由特别限定的基因区域构成的区域中发生了缺失，也可以是在包含特别限定的基因区域的周围的基因区域中发生了缺失。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒的VGF的功能发生了缺损。一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒的O1L的功能发生了缺损。一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒的VGF和O1L的功能发生了缺损。可以基于国际公开第2015/076422号中记载的方法使牛痘病毒的VGF和/或O1L的功能缺损。
VGF是与表皮生长因子(EGF)具有高度的氨基酸序列同源性的蛋白质，与EGF同样地与表皮生长因子受体结合，引起Ras、Raf、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activatedprotein kinase、MAPK)/细胞外信号调节激酶(the extracellular signal-regulatedkinase、ERK)激酶(MAPK/ERK激酶、MEK)、以及与ERK相连的信号级联的活化，促进细胞***。
O1L维持ERK的活化，与VGF一同有助于细胞的***。
牛痘病毒的VGF和/或O1L的功能的缺损是指：不表达编码VGF的基因和/或编码O1L的基因；或即使表达，其表达蛋白质也不保持VGF和/或O1L的正常功能。为了使牛痘病毒的VGF和/或O1L的功能缺损，使编码VGF的基因和/或编码O1L的基因全部或部分缺失即可。另外，也可以通过碱基的置换、缺失、***或添加使基因发生突变，以使其无法表达正常的VGF和/或O1L。另外，也可以在编码VGF的基因和/或编码O1L的基因中***外源基因。本发明中，在因基因的置换、缺失、***或添加等突变而不表达正常的基因产物的情况下，称为基因发生了缺损。
本发明中使用的牛痘病毒的VGF和/或O1L的功能是否发生了缺损这一点可以使用公知的方法来判断。例如可以通过下述方法来判断：进行VGF和/或O1L的功能评价；利用使用抗VGF的抗体或抗O1L的抗体的免疫化学方法来确认VGF或O1L的存在；利用聚合酶链式反应(PCR)来确定编码VGF的基因或编码O1L的基因的存在(Cancer Research,2001,Vol.61,p.8751-8757)。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为VGF和O1L的功能发生了缺损的LC16mO株牛痘病毒。
B5R(登录号AAA48316.1)是存在于牛痘病毒的包膜上的I型膜蛋白，当病毒感染和传播到相邻的细胞或宿主体内的其他部位时，其发挥提高感染效率的作用。在B5R的胞外域存在4个称为SCR(short consensus repeat)结构域的结构(Journal of Virology,1998,Vol.72,p.294-302)。一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒的B5R的胞外域的SCR结构域发生了缺失。
牛痘病毒的B5R胞外域的SCR结构域的缺失包括B5R胞外域的4个SCR结构域的一部分或全部的缺失，是指编码B5R胞外域内的4个SCR结构域的一部分或全部的基因区域不进行表达，或所表达的B5R蛋白未保持胞外域的4个SCR结构域中的一部分或全部。一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒缺失了B5R的全部4个SCR结构域。一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒缺失的4个SCR结构域为与上述登录号AAA48316.1的氨基酸序列中第22位的氨基酸至第237位的氨基酸对应的B5R胞外域内的区域。
本发明中使用的牛痘病毒是否缺失了B5R胞外域的SCR结构域这一点可以使用公知的方法来判断。例如可以通过下述方法来判断：利用使用针对SCR结构域的抗体的免疫化学方法来确认SCR结构域的存在；利用PCR来确定编码SCR结构域的基因的存在或大小。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为VGF和O1L的功能发生了缺损且B5R胞外域的SCR结构域发生了缺失的牛痘病毒。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为VGF和O1L的功能发生了缺损且B5R胞外域的SCR结构域发生了缺失的LC16mO株牛痘病毒。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损的牛痘病毒。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损的LC16mO株牛痘病毒。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损、且B5R胞外域的SCR结构域发生了缺失的牛痘病毒。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损、且B5R胞外域的SCR结构域发生了缺失的LC16mO株牛痘病毒。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损的牛痘病毒，并且与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用。一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-12的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损的牛痘病毒，并且与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒联用。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损的LC16mO株牛痘病毒，并且与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用。一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-12的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损的LC16mO株牛痘病毒，并且与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒联用。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损、且B5R胞外域的SCR结构域发生了缺失的牛痘病毒，并且与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用。一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-12的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损、且B5R胞外域的SCR结构域发生了缺失的牛痘病毒，并且与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒联用。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损、且B5R胞外域的SCR结构域发生了缺失的LC16mO株牛痘病毒，并且与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用。一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒为包含编码IL-12的多核苷酸、VGF和O1L的功能发生了缺损、且B5R胞外域的SCR结构域发生了缺失的LC16mO株牛痘病毒，并且与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒联用。
IL-7是作为激动剂对IL-7受体发挥功能的分泌性蛋白。据报道，IL-7有助于T细胞、B细胞等的存活、增殖和分化(Current Drug Targets,2006,Vol.7,p.1571-1582)。本发明中，IL-7包含天然存在的IL-7和具有其功能的变体。一个实施方式中，IL-7为人IL-7。本发明中，人IL-7包含天然存在的人IL-7和具有其功能的变体。一个实施方式中，人IL-7选自由下述(1)～(3)组成的组：
(1)包含登录号NP_000871.1所示的氨基酸序列、并且具有人IL-7的功能的多肽；
(2)由在登录号NP_000871.1所示的氨基酸序列中缺失、置换、***和/或添加1～10个氨基酸而得到的氨基酸序列构成、并且具有人IL-7的功能的多肽；以及
(3)包含与登录号NP_000871.1所示的氨基酸序列的一致性为90％以上的氨基酸序列、并且具有人IL-7的功能的多肽。
在此，人IL-7的功能是指对各种人免疫细胞的存活、增殖和分化作用。
一个实施方式中，本发明中使用的人IL-7为由登录号NP_000871.1所示的氨基酸序列构成的多肽。
IL-12为IL-12亚基p40与IL-12亚基α的杂二聚体。据报道，IL-12具有活化T细胞和NK细胞并对其进行分化诱导的功能(Cancer Immunology Immunotherapy,2014,Vol.63,p.419-435)。本发明中，IL-12包含天然存在的IL-12和具有其功能的变体。一个实施方式中，IL-12为人IL-12。本发明中，人IL-12包含天然存在的人IL-12和具有其功能的变体。一个实施方式中，人IL-12选自由作为人IL-12亚基p40与人IL-12亚基α的组合的下述(1)～(3)组成的组：
(1)包含(i-1)包含登录号NP_002178.2所示的氨基酸序列的多肽、(i-2)由在登录号NP_002178.2所示的氨基酸序列中缺失、置换、***和/或添加1～10个氨基酸而得到的氨基酸序列构成的多肽、或(i-3)包含与登录号NP_002178.2所示的氨基酸序列的一致性为90％以上的氨基酸序列的多肽、以及
(ii-1)包含登录号NP_000873.2所示的氨基酸序列的多肽、(ii-2)由在登录号NP_000873.2所示的氨基酸序列中缺失、置换、***和/或添加1～10个氨基酸而得到的氨基酸序列构成的多肽、或(ii-3)包含与登录号NP_000873.2所示的氨基酸序列的一致性为90％以上的氨基酸序列的多肽、
并且具有人IL-12的功能的多肽；
(2)包含(i-1)由登录号NP_002178.2所示的氨基酸序列构成的多肽、以及
(ii-1)包含登录号NP_000873.2所示的氨基酸序列的多肽、(ii-2)由在登录号NP_000873.2所示的氨基酸序列中缺失、置换、***和/或添加1～10个氨基酸而得到的氨基酸序列构成的多肽、或(ii-3)包含与登录号NP_000873.2所示的氨基酸序列的一致性为90％以上的氨基酸序列的多肽、
并且具有人IL-12的功能的多肽；以及
(3)包含(i-1)包含登录号NP_002178.2所示的氨基酸序列的多肽、(i-2)由在登录号NP_002178.2所示的氨基酸序列中缺失、置换、***和/或添加1～10个氨基酸而得到的氨基酸序列构成的多肽、或(i-3)包含与登录号NP_002178.2所示的氨基酸序列的一致性为90％以上的氨基酸序列的多肽、以及
(ii-1)由登录号NP_000873.2所示的氨基酸序列构成的多肽、并且具有人IL-12的功能的多肽。
在此，人IL-12的功能是指T细胞、NK细胞的活化作用和/或分化诱导作用。IL-12亚基p40和IL-12亚基α可以通过直接结合而形成IL-12。另外，可以借助接头使IL-12亚基p40和IL-12亚基α结合。
一个实施方式中，本发明中使用的人IL-12为包含由登录号NP_002178.2所示的氨基酸序列构成的多肽和由登录号NP_000873.2所示的氨基酸序列构成的多肽的多肽。
本说明书中的“一致性”是指使用EMBOSS Needle(Nucleic Acids Res.,2015,Vol.43,p.W580-W584)通过以默认形式准备的参数而得到的值Identity。上述参数如下所示。
Gap Open Penalty(空位罚分)＝10
Gap Extend Penalty(延伸罚分)＝0.5
Matrix(矩阵)＝EBLOSUM62
End Gap Penalty(末端缺口罚分)＝false
本发明中使用的牛痘病毒具有溶瘤活性。作为评价被测病毒是否具有溶瘤活性的方法，可列举对病毒添加所致的癌细胞的存活率降低进行评价的方法。作为评价中使用的癌细胞，可列举例如恶性黑色素瘤细胞RPMI-7951(例如ATCC HTB-66)、肺腺癌细胞HCC4006(例如ATCC CRL-2871)、肺癌细胞A549(例如ATCC CCL-185)、小细胞肺癌细胞DMS 53(例如ATCC CRL-2062)、肺鳞癌细胞NCI-H226(例如ATCC CRL-5826)、肾癌细胞Caki-1(例如ATCCHTB-46)、膀胱癌细胞647-V(例如DSMZ ACC 414)、头颈癌细胞Detroit 562(例如ATCC CCL-138)、乳腺癌细胞JIMT-1(例如DSMZ ACC 589)、乳腺癌细胞MDA-MB-231(例如ATCC HTB-26)、食道癌细胞OE33(例如ECACC96070808)、胶质母细胞瘤U-87MG(例如ECACC 89081402)、神经母细胞瘤GOTO(例如JCRB JCRB0612)、骨髓瘤RPMI 8226(例如ATCC CCL-155)、卵巢癌细胞SK-OV-3(例如ATCC HTB-77)、卵巢癌细胞OVMANA(例如JCRB JCRB1045)、大肠癌细胞RKO(例如ATCC CRL-2577)、大肠癌细胞HCT 116(例如ATCC CCL-247)、胰腺癌细胞BxPC-3(例如ATCC CRL-1687)、***癌细胞LNCaP clone FGC(例如ATCC CRL-1740)、肝癌细胞JHH-4(例如JCRB JCRB0435)、间皮瘤NCI-H28(例如ATCC CRL-5820)、***细胞SiHa(例如ATCC HTB-35)和胃癌细胞Kato III(例如RIKEN BRC RCB2088)。
本发明中使用的牛痘病毒会在所感染的细胞中产生IL-7和/或IL-12多肽。使用本发明中使用的牛痘病毒时，通过产生IL-7和IL-12多肽，抗肿瘤效果显著提高。IL-7和IL-12的产生可以使用该领域中公知的方法来确认。例如，可以通过下述方法确认：将导入有编码IL-7和IL-12各多肽的多核苷酸的牛痘病毒与癌细胞进行培养后，测定培养上清中的IL-7和IL-12浓度；进行细胞的免疫染色或细胞溶解物的蛋白免疫印迹分析或测定细胞溶解物中的IL-7和IL-12的浓度。IL-7和IL-12的各浓度例如可以分别使用人IL-7ELISA试剂盒(RayBiotech公司)、人IL-12p70 DuoSet ELISA(R&D Systems公司)来测定。细胞的免疫染色或细胞溶解物的蛋白免疫印迹分析可以分别使用市售的抗IL-7抗体、抗IL-12抗体来进行。
分别编码IL-7和IL-12的多核苷酸可以基于公众可利用的序列信息，利用该领域中公知的多核苷酸合成方法进行合成。另外，若先获得了各多核苷酸，也可以通过使用定点诱变法(Current Protocols in Molecular Biology edition,1987,John Wiley&SonsSection 8.1-8.5)等本领域技术人员公知的方法在规定的位点导入突变来制作具有各多肽的功能的变体。
分别编码IL-7和IL-12的多核苷酸可以利用公知的同源重组或定点诱变法导入到牛痘病毒中。例如，可以制作在要导入的位点的碱基序列中导入有该多核苷酸的质粒(也称为转移载体质粒DNA)，并导入到感染了牛痘病毒的细胞中。一个实施方式中，作为外源基因的分别编码IL-7和IL-12的多核苷酸的导入区域为牛痘病毒的生命周期中并非必需的基因区域。例如，在某一方式中，关于IL-7和/或IL-12的导入区域，在VGF功能缺损牛痘病毒中可以设定为该VGF基因的内部，在O1L功能缺损牛痘病毒中可以设定为该O1L基因的内部，在具有VGF功能缺损和O1L功能缺损这两种缺损的牛痘病毒中可以设定为该VGF基因和该O1L基因中的任一者或两者的内部。上述中，外源基因可以按照与VGF和O1L基因的转录方向同向或反向地进行转录的方式导入。
转移载体质粒DNA向细胞中导入的方法没有特别限定，可以使用例如磷酸钙法、电穿孔法等。
在导入作为外源基因的分别编码IL-7和IL-12的多核苷酸时，可以在外源基因的上游以能够工作的方式连接适当的启动子。由此，本发明中使用的牛痘病毒中，外源基因可与能够在肿瘤细胞中表达的启动子连接。作为这些启动子，可列举例如PSFJ1-10、PSFJ2-16、p7.5K启动子、p11K启动子、T7.10启动子、CPX启动子、HF启动子、H6启动子和T7杂合启动子等。
一个实施方式中，本发明中使用的牛痘病毒不具有药剂选择标记基因。
本发明中使用的牛痘病毒的表达和/或增殖可以通过使牛痘病毒感染宿主细胞、并对感染的宿主细胞进行培养来进行。牛痘病毒的表达和/或增殖可以利用该领域中公知的方法进行。作为用于使本发明中使用的牛痘病毒进行表达或增殖的宿主细胞，只要是表达本发明中使用的牛痘病毒并能够增殖的宿主细胞，则没有特别限制。作为这样的宿主细胞，可列举例如BS-C-1、A549、RK13、HTK-143、Hep-2、MDCK、Vero、HeLa、CV-1、COS、BHK-21和原代兔肾细胞等动物细胞，作为一个实施方式，可以使用BS-C-1(ATCC CCL-26)、A549(ATCCCCL-185)、CV-1(ATCC CCL-70)或RK13(ATCC CCL-37)。关于宿主细胞的培养条件，例如适当选择温度、培养基的pH和培养时间等。
生产本发明中使用的牛痘病毒的方法中，除了包括使本发明中使用的牛痘病毒感染宿主细胞，对感染的宿主细胞进行培养，使其表达本发明中使用的牛痘病毒的步骤以外，还可以进一步包括对本发明中使用的牛痘病毒进行回收、优选纯化的步骤。作为纯化方法，可以采用使用Benzonase核酸酶的DNA消化、蔗糖梯度离心分离法、碘克沙醇密度梯度离心分离法、超滤法和透滤法等。
＜本发明中可使用的免疫检查点抑制剂＞
本发明中，作为免疫检查点抑制剂，可使用例如切断经由PD-1的信号的检查点抑制剂或切断经由CTLA-4的信号的检查点抑制剂。作为免疫检查点抑制剂，可列举：能够中和PD-1与PD-L1或PD-L2的结合的抗体；以及能够中和CTLA-4与CD80或CD86的结合的抗体。作为能够中和PD-1与PD-L1的结合的抗体，可列举能够中和PD-1与PD-L1的结合的抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。作为能够中和PD-1与PD-L2的结合的抗体，可列举能够中和PD-1与PD-L2的结合的抗PD-1抗体和抗PD-L2抗体。作为能够中和CTLA-4与CD80或CD86的结合的抗体，可列举能够中和CTLA-4与CD80或CD86的结合的抗CTLA-4抗体。
作为本发明中可使用的免疫检查点抑制剂，没有特别限定，可列举例如：纳武单抗、派姆单抗、和匹地利珠单抗等抗PD-1抗体；阿特珠单抗、度伐鲁单抗、和阿维鲁单抗等抗PD-L1抗体；伊匹单抗等抗CTLA-4抗体；TSR-022(国际公开第2016/161270号)、和MBG453(国际公开第2015/117002号)等抗TIM-3抗体；LAG525(美国公开第2015/0259420号)等抗LAG-3抗体；MAB10(国际公开第2017/059095号)等抗TIGIT抗体；BTLA-8.2(The Journal ofClinical Investigation,2010,Vol.120,No.1,p.157-167)等抗BTLA抗体；JNJ-61610588(国际公开第2016/207717号)等抗VISTA抗体等。另外，作为本发明中可使用的免疫检查点抑制剂，可以使用包含产生与免疫检查点分子或其配体结合而抑制免疫抑制信号的抗原结合片段的细胞、在生物体内表达抗原结合片段的载体、和低分子化合物的免疫检查点抑制剂。
本发明中，可以将上述免疫检查点抑制剂与本发明中使用的牛痘病毒组合使用。本发明中，还可以将上述免疫检查点抑制剂与本发明中使用的牛痘病毒的组合药物组合使用。
一个实施方式中，本发明中使用的免疫检查点抑制剂为选自由抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗CTLA-4抗体组成的组中的抗体或这些的抗原结合片段。
能够中和两种蛋白质的结合的抗体可如下得到：得到与这两种蛋白质中的任一者结合的抗体，然后通过中和这两种蛋白质的结合的能力对得到的抗体进行筛选，由此而得到。例如，关于能够中和PD-1与PD-L1的结合的抗体，可以得到与PD-1和PD-L1中的任一者结合的抗体、然后通过中和PD-1与PD-L1的结合的能力，对得到的抗体进行筛选。另外，例如，关于能够中和PD-1与PD-L2的结合的抗体，可以得到与PD-1和PD-L2中的任一者结合的抗体、然后通过中和PD-1与PD-L2的结合的能力对得到的抗体进行筛选。另外，例如，关于能够中和CTLA-4与CD80或CD86的结合的抗体，可以得到与CTLA-4结合的抗体、然后通过中和CTLA-4与CD80或CD86的结合的能力对得到的抗体进行筛选。与某一蛋白质结合的抗体例如可以使用本领域技术人员公知的方法得到。另外，中和两种蛋白质的结合的抗体的能力可以如下调查：将其中一者固相化，由液相添加另一者，通过抗体是否使其结合量下降来进行调查。例如，对由液相进行添加的蛋白质进行标记，如果其标记量因添加抗体而下降，则可以确定该抗体能够中和这两种蛋白质的结合。
PD-1为被命名为程序性细胞死亡受体-1的蛋白质，有时也被称为PDCD1或CD279。PD-1为免疫球蛋白超家族的膜蛋白，承担通过与PD-L1或PD-L2结合而抑制T细胞活化的作用，认为有助于防止自身免疫疾病。癌细胞通过使细胞表面表达PD-L1而对T细胞进行负向控制，逃避来自T细胞的攻击。作为PD-1，可列举例如人PD-1(例如，具有在Genbank中以登录号NP_005009.1登录的氨基酸序列的PD-1)。作为PD-1，可列举例如具有与在Genbank中以登录号NP_005009.1登录的氨基酸序列对应的氨基酸序列的PD-1。本说明书中，“与…对应的氨基酸序列”这一表述以包括直系同源物、与可天然产生的氨基酸序列不完全相同的功能性PD-1的含义来使用。
PD-L1为针对PD-1的配体，有时也被称为B7-H1或CD274。作为PD-L1，可列举例如人PD-L1(例如具有在Genbank中以登录号NP_054862.1登录的氨基酸序列的PD-L1)。作为PD-L1，可列举例如具有与在Genbank中以登录号NP_054862.1登录的氨基酸序列对应的氨基酸序列的PD-L1。
PD-L2为针对PD-1的配体，有时也被称为B7-DC或CD273。作为PD-L2，可列举例如人PD-L2(例如，具有在Genbank中以登录号AAI13681.1登录的氨基酸序列的PD-L2)。作为PD-L2，可列举例如具有与在Genbank中以登录号AAI13681.1登录的氨基酸序列对应的氨基酸序列的PD-L2。
CTLA-4为免疫球蛋白超家族的膜蛋白，在活化T细胞中表达。CTLA-4与CD28类似，与CD80和CD86在抗原呈递细胞上结合。已知CD28向T细胞传送共刺激性信号，而CTLA-4向T细胞传送抑制性信号。作为CTLA-4，可列举例如人CTLA-4(例如，具有在Genbank中以登录号AAH74893.1登录的氨基酸序列的CTLA-4)。作为CTLA-4，可列举例如具有与在Genbank中以登录号AAH74893.1登录的氨基酸序列对应的氨基酸序列的CTLA-4。
CD80和CD86为免疫球蛋白超家族的膜蛋白，在各种造血细胞中表达，如上所述，与T细胞表面上的CD28、CTLA-4发生相互作用。作为CD80，可列举例如人CD80(例如，具有在Genbank中以登录号NP_005182.1登录的氨基酸序列的CD80)。作为CD80，可列举例如具有与在Genbank中以登录号NP_005182.1登录的氨基酸序列对应的氨基酸序列的CD80。另外，作为CD86，可列举例如人CD86(例如，具有在Genbank中以登录号NP_787058.4登录的氨基酸序列的CD86)。作为CD86，可列举例如人CD86(例如，具有与在Genbank中以登录号NP_787058.4登录的氨基酸序列对应的氨基酸序列的CD86。
＜本发明的药物组合物和组合药物＞
根据本发明，可提供以下的药物组合物和组合药物(以下有时称为“本发明的药物组合物和组合药物”)中的任一者：
(a-1)一种用于处置癌症的药物组合物，其含有：包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒、包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒、和免疫检查点抑制剂；
(a-2)一种用于处置癌症的药物组合物，其含有：包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒、和免疫检查点抑制剂；
(b-1)一种药物组合物，其为含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒的、用于处置癌症的药物组合物，其与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂联用{在此，包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂可以包含在同一药物组合物中，也可以分别包含在不同的药物组合物中}；
(b-2)一种药物组合物，其为含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的、用于处置癌症的药物组合物，其与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂联用{在此，包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂可以包含在同一药物组合物中，也可以分别包含在不同的药物组合物中}；
(b-3)一种药物组合物，其为含有包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的、用于处置癌症的药物组合物，其与免疫检查点抑制剂联用；
(b-4)一种药物组合物，其为含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的、用于处置癌症的药物组合物，其与免疫检查点抑制剂联用；
(b-5)一种药物组合物，其为含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂的、用于处置癌症的药物组合物，其与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用；
(b-6)一种药物组合物，其为含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂的、用于处置癌症的药物组合物，其与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒联用；
(b-7)一种药物组合物，其为包含免疫检查点抑制剂的用于处置癌症的药物组合物，其与包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用；
(b-8)一种药物组合物，其为包含免疫检查点抑制剂的用于处置癌症的药物组合物，其与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用{在此，包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒可以包含在同一药物组合物中，也可以分别包含在不同的药物组合物中}；
(c-1)一种用于处置癌症的组合药物，其包含：含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、和含有免疫检查点抑制剂的药物组合物；
(c-2)一种用于处置癌症的组合药物，其包含：含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、和含有免疫检查点抑制剂的药物组合物；
(c-3)一种用于处置癌症的组合药物，其包含：含有包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、和含有免疫检查点抑制剂的药物组合物；
(c-4)一种用于处置癌症的组合药物，其包含：含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂的药物组合物、和含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物；
(c-5)一种用于处置癌症的组合药物，其包含：含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂的药物组合物、和含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物；
(d-1)一种组合药物，其为包含含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、和含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物的用于处置癌症的组合药物，其与免疫检查点抑制剂联用。
(d-2)一种组合药物，其为包含含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、和包含免疫检查点抑制剂的药物组合物的用于处置癌症的组合药物，其与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用；以及
(d-3)一种组合药物，其为包含含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、和包含免疫检查点抑制剂的药物组合物的用于处置癌症的组合药物，其与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒联用。
一个实施方式中，本发明的药物组合物为包含牛痘病毒作为有效成分的用于处置癌症的药物组合物，其中，牛痘病毒为：
(1)包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒；或
(2)包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒，
并且与免疫检查点抑制剂联用。
一个实施方式中，本发明的组合药物为用于处置癌症的组合药物，其包含：含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、和含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物，并且与免疫检查点抑制剂联用。
一个实施方式中，本发明的组合药物为用于处置癌症的组合药物，其包含：含有本发明中使用的牛痘病毒的本发明的药物组合物或本发明的组合药物、和包含免疫检查点抑制剂的药物组合物。
一个实施方式中，本发明的药物组合物为包含免疫检查点抑制剂的用于处置癌症的药物组合物，其与包含本发明中使用的牛痘病毒的本发明的药物组合物或本发明的组合药物联用。
对于本发明的药物组合物和组合药物而言，在对象为人时，可以将IL-7和IL-12分别设为人IL-7和人IL-12。另外，在对象为人、使用抗体作为免疫检查点抑制剂时，抗体优选为针对人蛋白质的抗体，另外，可以为人嵌合抗体、人源化抗体、或人抗体。另外，本发明的组合药物可以为构成该组合药物的各药物组合物被包含在1个包装中的试剂盒(也称为“组合试剂盒”)的形态。
本发明的药物组合物或组合药物中，可以还包含药学上可接受的赋形剂。
本发明的药物组合物可以使用该领域中通常使用的赋形剂、即药学上可接受的赋形剂、药学上可接受的载体等并且利用通常使用的方法进行制备。作为这些药物组合物的剂型的例子，可列举例如注射剂和点滴用剂等非口服剂，可以通过静脉内给药、皮下给药或肿瘤内给药等来给药。制剂化时，可以在药学上可接受的范围内使用与这些剂型相应的赋形剂、载体或添加剂等。本发明的药物组合物、组合试剂盒分别可以以冷冻干燥制剂形式来提供。冷冻干燥制剂可以与注射用水一起提供。
本发明中使用的牛痘病毒的有效给药量根据患者的症状的程度、年龄、所使用的制剂的剂型或病毒的效价等而有所不同，例如，以病毒单独的有效给药量计、以组合试剂盒中的两种病毒的总有效给药量计、或以联用给药时两种病毒的合计有效给药量计，可以使用约102～约1010噬菌斑形成单位(PFU)。作为组合试剂盒中的两种病毒给药量的比率，例如可以以约1:10～约10:1、约1:5～约5:1、约1:3～约3:1、约1:2～约2:1或约1:1来使用。
＜癌症的预防或治疗用途＞
本发明的药物组合物和组合药物可以用于处置癌症、例如实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组。
另外，本发明提供一种在有必要的某些对象(例如患者)中处置癌症的方法，所述方法包括：向该对象给药包含本发明中使用的牛痘病毒的药物组合物和免疫检查点抑制剂，癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组。
一个实施方式中，本发明提供一种在有必要的某些对象(例如患者)中处置癌症的方法，所述方法包括：向该对象给药以下的(1)、(2)和(3)，癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组：
(1)包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒；
(2)包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒；和
(3)免疫检查点抑制剂。
该(1)和(2)的牛痘病毒以及(3)的免疫检查点抑制剂可以一起给药于对象，也可以分别给药于对象。在分别给药该(1)和(2)的牛痘病毒以及(3)的免疫检查点抑制剂时，可以同时给药，也可以逐次给药。在逐次给药该(1)和(2)的牛痘病毒以及(3)的免疫检查点抑制剂时，可以连续给药，也可以空出给药间隔地给药。一个实施方式中，可以在给药牛痘病毒后给药免疫检查点抑制剂。牛痘病毒例如可以通过肿瘤内给药、静脉内给药、腹腔内给药等给药途径来给药。免疫检查点抑制剂例如可以通过肿瘤内给药、静脉内给药、腹腔内给药等给药途径来给药。
一个实施方式中，本发明提供一种在有必要的某些对象(例如患者)中处置癌症的方法，所述方法包括：向该对象给药以下的(1)和(2)，癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组：
(1)包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒；以及
(2)免疫检查点抑制剂。
该(1)的牛痘病毒和(2)的免疫检查点抑制剂可以一起给药于对象，也可以分别给药于对象。在分别给药该(1)的牛痘病毒和(2)的免疫检查点抑制剂时，可以同时给药，也可以逐次给药。在逐次给药该(1)的牛痘病毒和(2)的免疫检查点抑制剂时，可以连续给药，也可以空出给药间隔地给药。一个实施方式中，在给药牛痘病毒后给药免疫检查点抑制剂。
另外，本发明提供一种本发明中使用的牛痘病毒和/或免疫检查点抑制剂，其用于处置癌症、例如实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组。
一个实施方式中，本发明提供一种牛痘病毒，其用于处置癌症且选自以下的(1)～(4)，所述癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组：
(1)与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂联用的、包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒；
(2)与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂联用的、包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒；
(3)与免疫检查点抑制剂联用的、包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒；以及
(4)与免疫检查点抑制剂联用的、包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的组合。
一个实施方式中，本发明提供一种免疫检查点抑制剂，
(1)与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用；或
(2)与包含编码IL-7的多核苷酸和包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用，
所述免疫检查点抑制剂用于处置癌症，所述癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组。
进一步地，本发明提供选自以下的(1)～(4)的牛痘病毒在制造用于处置癌症的本发明的药物组合物或组合药物中的应用，所述癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组：
(1)与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂联用的、包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒；
(2)与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂联用的、包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒；
(3)与免疫检查点抑制剂联用的、包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒；以及
(4)与免疫检查点抑制剂联用的、包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的组合。
进一步地，本发明还提供免疫检查点抑制剂在制造用于处置癌症的本发明的药物组合物或组合药物中的应用，所述癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组，
该药物组合物或组合药物：
(1)与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用；
(2)与包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用；
(3)含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒，并且与包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒联用；或
(4)含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒，并且与包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒联用。
进一步地，本发明提供选自由包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒以及免疫检查点抑制剂组成的组中的至少一种或全部在制造组合药物中的应用，所述组合药物包含：含有包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、和包含免疫检查点抑制剂的药物组合物，所述组合药物用于处置癌症，所述癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组。
进一步地，本发明提供选自由包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒、包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒和免疫检查点抑制剂组成的组中的至少一种或全部在制造组合药物中的应用，所述组合药物包含：含有包含编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、含有包含编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物、和包含免疫检查点抑制剂的药物组合物，所述组合药物用于处置癌症，所述癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组。
本说明书中，“预防用”与“用于预防”以相同的含义来使用，“治疗用”与“用于治疗”以相同的含义来使用。
本发明的药物组合物或组合药物可以与对下述癌症显示有效性的各种进一步的治疗剂联用，所述癌症例如为实体癌，虽然没有特别限定但所述实体癌例如选自由恶性黑色素瘤、肺癌、肺腺癌、小细胞肺癌、肺鳞癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨髓瘤、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、***癌、肝细胞癌、间皮瘤、***和胃癌等组成的组。在此，各种进一步的治疗剂可以为非免疫疗法药。该联用可以同时给药、或分别连续地给药、或隔着期望的时间间隔给药。对于本发明的药物组合物而言，在同时给药时，可以为配合剂，也可以分别制剂化。
本发明中所处置的癌症也包括转移到原发灶以外的器官、例如***、肝脏等的转移癌等。因此，本发明中，对象包括患有转移癌的对象。
＜牛痘病毒和免疫检查点抑制剂的给药顺序＞
本发明中，牛痘病毒和免疫检查点抑制剂可同时、连续或逐次进行给药。
一个方式中，开始对患有癌症的对象给药牛痘病毒，然后开始给药免疫检查点抑制剂。一个方式中，开始对患有癌症的对象给药免疫检查点抑制剂，然后开始给药牛痘病毒。
一个方式中，完成对患有癌症的对象给药牛痘病毒，然后开始给药免疫检查点抑制剂。一个方式中，完成对患有癌症的对象给药免疫检查点抑制剂，然后开始给药牛痘病毒。
一个方式中，可以对患有癌症的对象按照包含给药周期的给药计划进行牛痘病毒的给药和免疫检查点抑制剂的给药。一个方式中，可以在至少1个给药周期或全部给药周期中开始对患有癌症的对象给药牛痘病毒、然后开始给药免疫检查点抑制剂。一个方式中，可以在至少1个给药周期或全部给药周期中完成对患有癌症的对象给药牛痘病毒、然后开始给药免疫检查点抑制剂。一个方式中，可以在至少1个给药周期或全部给药周期中开始对患有癌症的对象给药免疫检查点抑制剂、然后开始给药牛痘病毒。一个方式中，可以在至少1个给药周期或全部给药周期中完成对患有癌症的对象给药免疫检查点抑制剂、然后开始给药牛痘病毒。
本发明中，在具有编码IL-7的多核苷酸的牛痘病毒和具有编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒独立的情况下，该牛痘病毒可以同时给药，也可以连续或逐次进行给药。该方式中，可以按照上述那样的给药顺序来确定牛痘病毒和免疫检查点抑制剂的给药顺序。
虽然已完整地记载了本发明，但是为了进一步帮助理解，在此提供参考的特定实施例，这些是以例示为目的的，不对本发明进行限定。
实施例
(实施例1：由基因重组牛痘病毒与其它癌症疗法的联用带来的、荷瘤小鼠中的抗肿瘤效果)
作为基因重组牛痘病毒，选择并使用WO2017/209053号的实施例2中记载的以能够表达的方式包含编码IL-12(IL12)和IL-7(IL7)的多核苷酸的牛痘病毒(LC16mOΔSCRVGF―SP-IL12/O1L-SP-IL7)(以下，在后述实施例中称为“搭载有IL12和IL7的牛痘病毒”。)。另外，作为癌症疗法，选择癌症免疫疗法、特别是利用免疫检查点抑制剂的癌症免疫疗法，与上述牛痘病毒联用。作为免疫检查点抑制剂，使用抗小鼠PD-1抗体和抗小鼠CTLA-4抗体。
关于由与抗PD-1抗体或抗CTLA-4抗体联用带来的完全缓解诱导效果，使用对同系的小鼠癌细胞株在左右侧腹分别进行了皮下移植的小鼠(荷瘤小鼠)进行评价。
具体而言，首先分别在BALB/c小鼠(雄、5-6周龄、Charles River LaboratoriesJapan,Inc.)的右侧腹和左侧腹皮下移植用PBS调整为1×107个/mL的小鼠大肠癌细胞CT26.WT(ATCC CRL-2638)50μL。在皮下移植癌细胞7天后，用游标卡尺测定肿瘤直径，按照肿瘤体积(短径mm×短径mm×长径mm×0.52)的平均值在病毒给药侧(右侧腹)为24～29mm3、在病毒非给药侧(左侧腹；远端肿瘤)为24～26mm3的方式分为以下的6组。
给药组：
1)溶剂给药组
2)抗PD-1抗体单独给药组
3)抗CTLA-4抗体单独给药组
4)搭载有IL12和IL7的牛痘病毒单独给药组
5)搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗PD-1抗体的联用组
6)搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗CTLA-4抗体的联用组
对于溶剂给药组，在分组1天后、3天后、6天后，将30μL溶剂(30mM Tris-HCl 10％蔗糖)注射到小鼠右侧腹的肿瘤内。对于搭载有IL12和IL7的牛痘病毒单独给药组、搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗PD-1抗体的联用组、搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗CTLA-4抗体的联用组，在分组1天后、3天后、6天后，将30μL(2×107PFU)的用溶剂稀释为6.7×108PFU/mL的浓度的搭载有IL12和IL7的牛痘病毒注射到小鼠右侧腹的肿瘤内。对于抗PD-1抗体单独给药组、抗CTLA-4抗体单独给药组、搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗PD-1抗体的联用组、搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗CTLA-4抗体的联用组，在分组6天后以后，每周2次地向小鼠腹腔内注射100μL的用PBS稀释为1mg/mL的浓度的抗PD-1抗体(RMP1-14)(Bio XCell公司、BE0146)、或用PBS稀释为2mg/mL的浓度的抗CTLA-4抗体(9D9)(Bio X Cell公司、BE0164)。抗PD-1抗体(RMP1-14)为能够中和PD-1与PD-L1和PD-L2的结合的抗PD-1抗体，能够切断经由PD-1的信号。另外，抗CTLA-4抗体(9D9)能够切断经由CTLA-4的信号。对于溶剂给药组和搭载有IL12和IL7的牛痘病毒单独给药组，在分组6天后以后，每周2次地向小鼠腹腔内注射100μL的PBS。每周2次用游标卡尺测定左右侧腹的肿瘤直径，计算肿瘤体积，将最终在分组37天后的观察中通过触诊确认不到肿瘤的情况定义为完全缓解(CR)，测定显示出完全缓解的个体数。
其结果是，如图1上段所示，关于右侧腹(病毒给药侧)的肿瘤，在搭载有IL12和IL7的牛痘病毒单独给药组中，10例中有9例实现了完全缓解，在搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗PD-1抗体的联用组中，10例中有10例实现了完全缓解，在搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗CTLA-4抗体的联用组中，在10例中有9例实现了完全缓解。在抗PD-1抗体单独给药组和抗CTLA-4抗体单独给药组中，与溶剂给药组相比未见明确的抗肿瘤作用。
另一方面，如图1下段所示，关于左侧腹(病毒非给药侧)的肿瘤，在搭载有IL12和IL7的牛痘病毒单独给药组中，10例中仅1例实现了完全缓解，与此相对地，在搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗PD-1抗体的联用组中，10例中有6例实现了完全缓解，在搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗CTLA-4抗体的联用组中，10例中有4例实现了完全缓解。
由以上结果可知，在荷瘤小鼠模型中，对于搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗PD-1抗体的联用、以及搭载有IL12和IL7的牛痘病毒与抗CTLA-4抗体的联用而言，与抗PD-1抗体单独给药、以及抗CTLA-4抗体单独给药相比，在牛痘病毒的给药部位具有优良的抗肿瘤效果，对于远离牛痘病毒的给药部位的部位的肿瘤(远端肿瘤)而言，与抗PD-1抗体单独给药、抗CTLA-4抗体单独给药、以及搭载有IL12和IL7的牛痘病毒单独给药相比具有高的完全缓解诱导效果。
产业上的可利用性
可以期待基于本发明中使用的牛痘病毒与免疫检查点抑制剂的联用的癌症疗法、以及其中使用的药物组合物和组合药物在各种癌症的预防或治疗中有用。

Claims (14)

1.一种药物组合物，其为包含牛痘病毒作为有效成分的、用于处置癌症的药物组合物，其中，牛痘病毒为：
(1)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒；或
(2)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸和编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒，
并且与免疫检查点抑制剂联用。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，牛痘病毒为包含编码IL-7的多核苷酸和编码IL-12的多核苷酸的牛痘病毒。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其中，牛痘病毒的牛痘病毒生长因子(VGF)和O1L的功能发生了缺损。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中，牛痘病毒的B5R胞外域的SCR(短共有重复序列)结构域发生了缺失。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的药物组合物，其中，牛痘病毒为LC16mO株牛痘病毒。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的药物组合物，其中，免疫检查点抑制剂为选自由抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗CTLA-4抗体组成的组中的抗体或其抗原结合片段。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的药物组合物，其中，癌症为实体癌。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的药物组合物，其中，癌症为转移癌。
9.一种组合药物，其为用于处置癌症的组合药物，其包含：含有包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物和含有包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒的药物组合物，并且与免疫检查点抑制剂联用。
10.一种组合药物，其为用于处置癌症的组合药物，其含有：权利要求1～8中任一项所述的药物组合物或权利要求9所述的组合药物、以及包含免疫检查点抑制剂的药物组合物。
11.一种药物组合物，其为包含免疫检查点抑制剂的、用于处置癌症的药物组合物，其与权利要求1～8中任一项所述的药物组合物或权利要求9所述的组合药物联用。
12.一种处置癌症的方法，该方法包括：给药免疫检查点抑制剂和牛痘病毒，该牛痘病毒为：
(1)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒；或
(2)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸和编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒。
13.一种牛痘病毒，其为用于处置癌症的牛痘病毒，该牛痘病毒为：
(1)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒；或
(2)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸和编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒，
并且与免疫检查点抑制剂联用。
14.牛痘病毒在制造用于处置癌症的药物组合物中的应用，其中，该牛痘病毒为：
(1)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸的牛痘病毒和包含编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒；或
(2)包含编码白细胞介素-7(IL-7)的多核苷酸和编码白细胞介素-12(IL-12)的多核苷酸的牛痘病毒，
并且该药物组合物与免疫检查点抑制剂联用。
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