CN112716855B - 一种具有屏障修护、抗衰老功效的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种具有屏障修护、抗衰老功效的组合物及其制备方法和应用。所述组合物由以下质量比的组分组成:洋蔷薇花水:洋蔷薇花提取物:水解红藻提取物=(10‑90):(0.5‑3):(1‑6)。这些组合物按一定比例混合后的效果均好于相同浓度下单一组分的效果。本发明提供的具有屏障修护、抗衰老功效的组合物以“内维稳、外修复”为出发点,从保湿、抗氧化、提亮、紧致等维度,预防和改善皮肤的衰老症状。本发明提供的组合物不仅保留洋蔷薇的独特香气,同时实现了洋蔷薇花渣的再利用,符合绿色、天然、可持续概念。
Description
技术领域
本发明属于化妆品领域,具体涉及一种具有屏障修护、抗衰老功效的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
现代人们面临着多重压力,例如生活节奏快、作息不规律、环境污染等,诱使20-25岁的年轻人“未老先衰”,开始出现衰老的征兆,如细纹、干纹、暗沉、黑眼圈、轮廓线轻微松弛等等。年轻人的皮肤护理不当,也会提前衰老。
目前市场上抗衰老的组合物原料多集中于受损后的肌肤修复,治标不治本。作为人体最外面的一层结构,皮肤是人体抵御外界伤害的第一道屏障,重要性不言而喻。表皮上层的角质层是由角质细胞分化而来,组成不同的表皮细胞层,因此皮肤屏障的生理功能取决于细胞成熟的过程,也就是角质细胞的增殖分化过程,而Ca2+在表皮分化中起着关键作用。正常的皮肤屏障,Ca2+在皮肤表层的分布呈特殊的“T”字形,越接近皮肤表层,Ca2+浓度越高。研究发现,人类在13-19岁时,面部肌肤表皮层Ca2+(钙离子)子含量最多,到了20岁以后,面部肌肤所含的Ca2+便开始减少,当Ca2+浓度降低时,角质细胞的成熟速度减慢,无法持续更新角质层,表皮层会变得细薄脆弱、敏感与松垮,导致皮肤出现各种问题。
从生物学来看,衰老是时间应势而生,是一种自然发生的生命过程,是很多因素共同作用的结果,是一种不可逆的生命现象,单纯的提升皮肤屏障是远远不够的。越来越多的研究表明抗氧化是预防肌肤衰老的关键一步,因为自由基、氧化剂会破坏细胞组织,损坏肌肤正常的代谢作用,因此有效控制自由基的数量,对预防肌肤衰老显得尤为重要。因此亟需开发一种既能修复屏障兼具抗氧化的组合物。
洋蔷薇(拉丁学名:Rosa centifolia L.)为蔷薇科蔷薇属小灌木,又称普罗旺斯玫瑰、千叶玫瑰、格拉斯玫瑰、百叶蔷薇等,因其独特香味,是奢侈香水的首选原料,同时在皮肤护理上也有卓越的功效:强效保湿、促进黑色素分解、抵抗自由基、延缓衰老等。洋蔷薇花渣含有非常丰富的营养成分,如有机酸、多糖、酚类、维生素等,其中总黄酮含量高达3.34%,具有显著的抗氧化效果。目前洋蔷薇花最主要的用途是作为精油的提取原料,会产生大量副产物-花渣,一部分花渣经自然风干做燃料使用,其余大多作为垃圾处理,造成资源浪费和环境污染。因此如何将珍贵的洋蔷薇高效、合理的利用显得尤为重要。
钙藻,又称石灰藻,是具有分泌或沉积钙质功能的藻类的通称,以红藻门的珊瑚藻科(Corallinaceae)最为常见。珊瑚藻(Coralline algae)是一类在海洋中广泛分布的大型钙化藻类,根据外部形态的差异,将其称之为有节珊瑚藻(articulated/geniculatecoralline algae)、无节珊瑚藻(non-articulated/non-geniculate coralline algae)、壳状珊瑚藻(crustose coralline algae,CCA)、薄壳状珊瑚藻(encrusting corallinealgae)、红藻石/球(rhodolith)等。钙藻大多是在海洋中形成,富含海洋钙、镁和微量元素等,其中的钙、镁元素在海藻的保护屏障中起到重要作用。
目前的产品不具有通过调节表皮中矿物质元素增强表皮屏障的功能,因此亟需开发一种标本兼治的具有屏障修护、抗衰老功效的组合物,即同时具有调节表皮中矿物质元素增强表皮屏障功能、修复外界刺激造成的肌肤损伤、兼具预防和修复效果的组合物。
发明内容
为了解决现有技术中抗衰老组合物只能用于衰老后的皮肤修复,而不能调节表皮中矿物质元素增强表皮屏障功能的缺陷,本发明提供了一种兼具“内维稳,外修复”效果的组合物,即调节表皮中矿物质元素增强表皮屏障功能、修复外界刺激造成的肌肤损伤,兼具预防和修复的效果。
本申请通过以下技术方案得以实现:
本发明提供了一种具有屏障修护、抗衰老功效的组合物,所述组合物由以下质量比的组分组成:洋蔷薇花水:洋蔷薇花提取物:水解红藻提取物的质量比为(10-90):(0.5-3):(1-6)。
作为优选,所述洋蔷薇花水:洋蔷薇花提取物:水解红藻提取物的质量比为(30-60):(0.5-1):(1-3)。
进一步优选,所述洋蔷薇花水:洋蔷薇花提取物:水解红藻提取物的质量比为60:0.5:3。
进一步优选,所述洋蔷薇花水:洋蔷薇花提取物:水解红藻提取物的质量比为60:1:1。
本发明还提供了一种所述的组合物的制备方法,包括以下步骤:
1)选用新鲜洋蔷薇花朵,分拣并清洗干净,低温干燥,收集冷凝水,即得洋蔷薇花水;
2)取步骤1)中的干燥后的花朵,加入去离子水,进行湿法超微粉粹,离心,取上清液进行减压浓缩,将沉淀物干燥,即得洋蔷薇花提取物;
3)取红藻,加入去离子水,升温至90℃,加入乳酸,煮沸保温2-4h;然后过滤,滤液经真空干燥后,即得水解红藻提取物;
4)按比例将所得洋蔷薇花提取物、水解红藻提取物加入到洋蔷薇花水中,混匀得到溶液;
5)将步骤4)得到的溶液依次用微滤膜、超滤膜进行过滤,收集滤液,即得所述组合物。
作为优选,所述步骤1)中的低温干燥的条件为低于50℃的干燥,包括但不限于烘箱干燥、冷冻干燥、真空干燥中的一种或两种联用。
作为优选,所述步骤2)中去离子水的用量为干燥花朵的5-10倍;
所述步骤2)中所述湿法超微粉粹采用胶体磨或均质机进行。
作为优选,所述步骤3)中去离子水的用量为红藻的5-15倍;
所述步骤3)中乳酸的加入量为红藻的1-3倍;
所述步骤5)中微滤膜孔径为0.1-1.0μm,超滤膜孔径为0.01-0.05μm。
作为优选,所述步骤5)中混匀采用的方法为搅拌或超声混匀。
本发明还提供了一种化妆品,含有所述组合物;所述化妆品包括但不限于水剂、乳剂、喷雾、膏霜、面膜、粉底液。
与现有技术相比,本申请可以获得包括以下技术效果:
在总浓度相同时,本发明所提供的组合物的DPPH清除率高于单一组分的DPPH清除率,说明3种单一原料通过组合方式可获得更好的DPPH清除效果。此外本发明提供了一种以洋蔷薇花水替代溶剂水的组合物,减少溶剂水使用,使用花渣不仅保留洋蔷薇的独特香气,同时实现了洋蔷薇花渣的再利用,符合绿色、天然、可持续概念。本发明采用微滤-超滤逐级过滤,联合实现分离、纯化、精制的目的,相比传统方法,操作简便,能耗低、提取时间短,效果更好,提取液更稳定。
附图说明
图1为实验例3中丝聚蛋白FLG基因表达分析图;
图2为实验例3中丝聚蛋白降解相关基因CASP14表达分析图;
图3为实验例5中使用不同组合物后角质层水分增长率(%)图;
图4为实验例5中使用不同组合物后经表皮水分流失Tewl值减少率(%)图;
图5为实验例5中使用不同组合物后黑色素含量减少率图;
图6为实验例5中使用不同组合物后眼角细纹的对比图。
具体实施方式
以下将通过实施例来详细说明本申请的实施方式,借此对本申请如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。
本申请中所用原料、设备,若无特别说明,均为本领域的常用原料、设备,均来自市售产品。本申请中所用方法,若无特别说明,均为本领域的常规方法。
本申请还存在其它多种可实施的技术方案,在此不做一一列举,本申请权利要求中要求保护的技术方案都是可以实施的。
在本发明下述的实施例及对比例中,具有屏障修护、抗衰老功效的组合物采用以下工艺制备:
(1)洋蔷薇花水制备:选用新鲜洋蔷薇花朵适量,分拣并清洗干净,低温干燥,并将干燥时蒸发的水汽冷凝收集,即得洋蔷薇花水;
(2)洋蔷薇花提取物制备:取步骤(1)中干燥后的花朵适量,加入8倍质量的去离子水,用胶体磨进行湿法超微粉粹,离心,取上清液进行减压浓缩,将沉淀物干燥,即得洋蔷薇花提取物;
(3)水解红藻提取物制备:取适量红藻适量,加入5倍质量的去离子水,升温至90℃,加入2倍质量的乳酸,煮沸保温3h,过滤,滤液经真空干燥后,即得水解红藻提取物;
(4)按比例将步骤(2)、(3)中得到的洋蔷薇花提取物与水解红藻提取物加入到步骤(1)中的洋蔷薇花水中,搅拌混匀;
(5)将步骤(4)得到的溶液依次用孔径0.45μm的微滤膜和0.05μm的超滤膜进行过滤,收集滤液,即得具有屏障修护、抗衰老功效的组合物。
表1所示为实施例1-10及对比例1-3中各组合物的组成比例(洋蔷薇花水:洋蔷薇花提取物:水解红藻提取物的组成比例以质量计)。根据表1并采用上述方法制备各实施例及对比例的组合物,并对所得组合物进行功效测试。
表1
实验例1
细胞毒性测评试验:
MTT assay是通过对活细胞数进行测定,在检测细胞毒性或细胞增殖时广泛使用的实验方法,其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使水溶性的黄色盐MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)还原为水不溶性的蓝色的甲臜,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。生成的结晶甲臜一般加入DMSO(二甲亚砜),溶解后测定吸光度。具体的实验方法是在96多孔板中按照1X104个/孔的密度接种含有10%牛血清的DMEM培养基和角质形成细胞(HaCaT)各100μl,培养24小时后换成无血清培养基。在无血清培养基中分别加入不同浓度的组合物进行处理后培养24小时。之后去除培养基,用20μl的MTT溶液进行处理,在37℃下使其反应2小时。在去除MTT溶液的细胞中加入200μl异丙醇,轻轻地震荡30min,完全溶解结晶甲臜,在570nm处测定吸光度,根据如下公式计算细胞存活率。
空白组不加入组合物进行试验。表2所示即为实施例1-10和对比例1-3所得的组合物的细胞毒性结果。
表2
实验例2
抗氧化测评试验:
DPPH又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼,是一种很稳定的氮中心的自由基,它的无水乙醇溶液呈紫色,加入自由基清除剂时,自由基数量减少,吸光度变小,溶液颜色变浅,可评价清除自由基的能力。
用移液器分别量取40μl各组合物,再加入160μl的DPPH乙醇溶液(200μg/ml)进行稀释并混合均匀,混匀后于室温避光条件下反应30min,再于517nm处测吸光度A,每组设置3组平行实验计算平均值,计算方法如下:
清除率%=[1-(A1-A2)/A0×100
式中:A0为未加入各组合物的DPPH溶液的吸光度;
A1为DPPH溶液中加入各组合物且反应后的吸光度;
A2为DPPH溶液中加入各组合物,混匀后反应前的吸光度。
表3所示即为实施例1-10与对比例1-3中各组合物的抗氧化测评试验结果。
表3
由上表可知:
1)实施例1-10所得组合物的DPPH清除率均高于对比例1-3,说明3种单一原料通过一定比例组合后可获得更好的DPPH清除效果;
2)DPPH清除率和3个原料均具有一定量效关系,质量份数增加到一定范围后,上升趋势减缓:对比实施例1-4发现,实施例3与4所得组合物的DPPH清除率差别不大,说明洋蔷薇花水质量份数大于60以后,其效果增加不明显;实施例3、5、6对比发现水解红藻提取物质量份数为3和6的组合物的DPPH清除率差别不大;实施例7-10对比发现,洋蔷薇花提取物质量份数为1和3的组合物的DPPH清除率差别不大。因此,结合DPPH清除能力和经济效益考虑,优选实施例5(60:0.5:3)和实施例7(60:1:1)。
综上所述,3种原料不同比例组合对应的抗氧化能力不同,优选为洋蔷薇花水:洋蔷薇花提取物:水解红藻提取物的质量百分比为(30-60):(0.5-1):(1-3),更优选地,洋蔷薇花水:洋蔷薇花提取物:水解红藻提取物的质量百分比为60:0.5:3和60:1:1。
实验例3
角质细胞基因表达试验:
丝聚蛋白Filaggrin(FLG)是角质细胞终末分化的重要条件,对表皮的分化形成有重要作用,Caspase14(CASP14,天冬胺酶蛋白水解酶)催化FLG的合成,二者的结合是构成皮肤表面屏障的重要条件。因此这两者也可作为评价皮肤屏障功能状态的指标。
采用实时荧光定量PCR法检测组合物对靶标基因表达量的调节。
在6孔板上分别设置6组其他组分一样,所含组合物不同的培养基,其中:阴性对照(不含组合物NT);阳性对照(含0.01%质量浓度的透明质HA);两组含有实施例5所得组合物的培养基中,组合物的质量浓度分别为0.1%和0.3%;两组含有实施例7所得组合物的培养基中,组合物的质量浓度分别为0.1%和0.3%。
HaCaT细胞以3*105/孔接种至6孔板上,培养24h,细胞贴壁生长。将组合物配制成1X、共2个浓度的梯度稀释剂量点,每孔2ml加入细胞板,于37℃5%CO2恒温培养箱继续孵育24h之后,收集细胞,应用PureLink mini RNA抽提试剂盒对细胞总RNA进行提取,核酸浓度定量,每管200-800ng RNA作为模板,Taqman一步法反应(逆转录+Real Time-PCR)进行实时定量荧光PCR检测各个基因的相对表达量(20μl体系)。
计算公式:
Fold change=2-ΔΔCT;
-ΔΔCT=[(CT靶标基因–CT内参基因)待测组-(CT靶标基因–CT内参基因)对照组]。
此试验中,靶标基因2个,分别为FLG﹑CASP14,内参基因1个,为GAPDH。
结果分别如图1-2所示。
其中:
1)FLG基因表达如图1所示,0.3%实施例5可显著诱导其表达,且作用比透明质酸强,与NT相比增加了约1倍,0.3%实施例7也显著上调其表达,但效果比透明质酸弱,上调表达的顺序依次为0.3%实施例5>0.01%透明质酸>0.3%实施例7>0.1%实施例5>0.1%实施例7>阴性对照;
2)丝聚蛋白降解如图2所示,0.3%实施例5显著提高CASP14基因的表达,且作用比透明质酸强,与NT相比增加了约4倍,0.3%实施例7也显著上调其表达,但效果比透明质酸弱,上调表达的顺序依次为0.3%实施例5>0.01%透明质酸>0.3%实施例7>0.1%实施例5>0.1%实施例7>阴性对照。
实验例4
安全性斑贴测试:
滴加20μl的含有组合物的待测液于斑试器中,对照孔为空白对照(纯水);将加有受试物的斑试器贴到受试人员前臂屈侧,用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上,持续24小时;分别于去除受试物斑试器后30min、24小时、48小时后按表4观察皮肤刺激性和致敏性,并记录观察结果。皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准如表4所示。
表4
实验结果:对比例5和7所得的组合物进行人体皮肤斑贴测试,结果见表5。人体皮肤斑贴试验结果显示,20人中无皮肤不良反应。
表5
实验例5
筛选健康志愿者30名,男性15名,女性15名,年龄在22-35岁。使用含1%(质量计)实施例5、实施例7和对比例1-3所的组合物的乳液,设置空白组(使用水),每天2次,连续使用28天。同时,在测试中,不断使用仪器记录使用不同组合物后角质层水分增长、经表皮水分流失Tewl值减少、黑色素含量减少以及眼部细纹,结果分别如图3-6所示。
其中:
1)图3为使用不同组合物后角质层水分增长率(%)图;图4为使用不同组合物后经表皮水分流失Tewl值减少率(%)图。由图3和图4可知,实施例和对比例的组合物均能改善皮肤含水量和经皮水分流失量实施例5>实施例7>对比例3>对比例1>对比例2,说明水解红藻提取物对皮肤保湿有正向作用。
2)图5为使用不同组合物后黑色素含量减少率图。由图5可知,实施例和对比例均能减少皮肤黑色素含量,减少趋势的顺序依次为实施例7>实施例5>对比例2>对比例1>对比例2,说明洋蔷薇花提取物对皮肤提亮有正向作用。
3)图6为使用不同组合物后眼角细纹的对比图。由图6可知,实施例5和实施例7对眼部细纹有明显的改善作用。
本申请说明书中未作详细描述的内容属于本领域技术人员的公知常识。
如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”为一开放式用语,故应解释成“包含但不限定于”。“大致”是指在可接收的误差范围内,本领域技术人员能够在一定误差范围内解决所述技术问题,基本达到所述技术效果。
还需要说明的是,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的商品或者***不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种商品或者***所固有的要素。在没有更多限制的情况下,由语句“包括一个……”限定的要素,并不排除在包括所述要素的商品或者***中还存在另外的相同要素。
上述说明示出并描述了本申请的若干优选实施例,但如前所述,应当理解本申请并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述发明构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本申请的精神和范围,则都应在本申请所附权利要求的保护范围内。
Claims (5)
1.一种具有屏障修护、抗衰老功效的组合物,其特征在于,所述组合物由以下质量比的组分组成:洋蔷薇花水:洋蔷薇花提取物:水解红藻提取物的质量比为60:0.5:3或60:1:1;所述组合物通过以下步骤制备:
1)选用新鲜洋蔷薇花朵,分拣并清洗干净,低温干燥,并将干燥时蒸发的水汽冷凝收集,即得洋蔷薇花水;
2)取步骤1)中干燥后的花朵,加入去离子水,进行湿法超微粉粹,离心,取上清液进行减压浓缩,将沉淀物干燥,即得洋蔷薇花提取物;
3)取红藻,加入去离子水,升温至90℃,加入乳酸,煮沸保温2-4h;然后过滤,滤液经真空干燥后,即得水解红藻提取物;
4)按比例将所得洋蔷薇花提取物、水解红藻提取物加入到洋蔷薇花水中,混匀得到溶液;
5)将步骤4)得到的溶液依次用微滤膜、超滤膜进行过滤,收集滤液,即得所述组合物。
2.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,
所述步骤1)中的低温干燥的条件为低于50℃的干燥;所述的干燥方法选自烘箱干燥、冷冻干燥、真空干燥中的一种或两种联用。
3.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,
所述步骤2)中去离子水的用量为干燥花朵的5-10倍;
所述步骤2)中所述湿法超微粉粹采用胶体磨或均质机进行。
4.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,
所述步骤3)中去离子水的用量为红藻的5-15倍;
所述步骤3)中乳酸的加入量为红藻的1-3倍;
所述步骤5)中微滤膜孔径为0.1-1.0μm,超滤膜孔径为0.01-0.05μm。
5.一种化妆品,其特征在于,含有如权利要求1所述组合物;所述化妆品包括水剂、乳剂、喷雾、膏霜、面膜、粉底液。
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