CN115919709A - 一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油 - Google Patents

一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油 Download PDF

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罗彪玉
高宏旗
陈丹丹
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Shanghai Linqingxuan Biotechnology Co ltd
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Abstract

本发明涉及护肤品技术领域,公开了一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油。本发明原料包括山茶花组合物、其它植物油、基础油脂、活性添加剂、抗氧化剂、着色剂、芳香剂。本发明通过多种成分的配合设计,做成透明油状液体剂型,可以很快被皮肤吸收,滋润不油腻,适用于任何肤质使用,还可用于修护皮肤屏障、修护敏感肌、修护肌肤暗沉、抗氧化、抗糖化、滋养肌肤、提亮肤色、减少皱纹、增加皮肤弹性等维度来达到对抗衰老的目的。精华油所采用原材料可全都来源于天然或非天然,也可以天然和非天然的原材料混合配伍。该精华油稳定性良好,零度环境下不结冻、不析出。

Description

一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域,具体涉及一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油
背景技术
山茶籽油蕴含有丰富的油酸、VE、角鲨烯、植物甾醇等成分;山茶花提取物含有花色苷、儿茶素、槲皮素、熊果酸、氨基酸等成分;山茶叶提取物含有包括茶多酚、茶氨酸、茶多糖、维生素、微量元素等。这些成分对人体皮肤具有滋润、保湿、抗氧化的功效,同时还具有淡化细纹、紧致肌肤、提亮肤色、修护皮肤屏障等效果。
此外,随着年龄的增长和各种各样的原因,人体逐渐衰老,我们的肌肤很容易变得僵硬、暗沉,抵御外界压力的能力下降。一般化妆品水剂、精华、霜类等产品有效成分很难被肌肤充分吸收,而纯油类产品中含多种亲肤的功效成分与人体皮肤表面油脂及皮脂等成分结构相似,功能相似,能够迅速深入肌肤,有效修护皮肤屏障,同时提高肌肤抵御能力,长期使用山茶花精华油可以有效延缓肌肤衰老。
由于油类产品封闭性强,肤感会比较厚重,使用时油腻,吸收起来也比较慢,加上年轻肌肤的油脂分泌旺盛,油性皮肤及气温高(夏天)环境下,纯油类产品就会容易浮在脸部上,难以被吸收又容易堵塞毛孔,不透气,最后就导致肌肤起痘,使用时反而会加重皮肤负担。
精华油中含有大量的植物油,而植物油中含有大量的不饱和键,很容易被空气中的氧气氧化,导致分子式变化,即植物油酸败,所以植物油长期放置会容易变质,变质后的精华油被人使用,反而会刺激人体皮肤,增加皮肤的致敏性。同时植物油中含有饱和脂肪酸,环境温度在零度以下,植物油会变成固体,严重影响其使用时的体验感。
衰老是生物随着时间的推移,自发的必然过程。皮肤老化是衰老过程中的外在表现,皮肤不能适应内外环境的变化,出现颜色、色泽、形态、质感等外观整体状况的改变,表现为皱纹、弹性下降、皮肤松弛、粗糙、肤色暗沉、色斑形成等。
综上所述,纯油类产品虽然有很好的护肤效果,同时也有许多缺点:肤感厚重油腻,不透气,易闷痘,油脂容易酸败,功效成分不持久,产品配伍不当,成分对皮肤不友好,不但达不到护肤的目的,反而加重皮肤的负担。
因此,有必要制备出一种活性成分持续、护肤功效持续的精华油,成分对人体肌肤友好,能被肌肤充分吸收、不油腻、透气、不闷痘、肌肤能自由呼吸,同时能修护屏障,有效延缓肌肤衰老。
发明内容
针对现有技术中的缺陷,提供了一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油,本发明含山茶花组合物,具有修护和抗衰老功效。修护功效是经人体功效测试和体外检测结果,来验证其修护功效;抗衰老是经人体功效测试(抗皱、紧致)和体外检测结果(胶原蛋白-1基因表达量实验检测、弹性蛋白基因表达量实验检测、DPPH清除率检测、AGEs抑制率测试),来验证其抗衰老功效;纯油类产品肤感油腻厚重、封闭性强、不透气是通过透气率对比实验测试来验证;精华油是否易酸败,通过130℃条件下诱导实验测试来验证;精华油成分对人体是否友好、安全,通过鸡胚绒毛***测试和人体封闭型斑贴实验来验证。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
本发明提供了一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油,包括以下重量百分含量的各组分:
山茶花组合物:10~40%;
Figure BDA0003988375830000021
所采用原材料可全都来源于天然或非天然,也可以天然和非天然混合配伍。
优选地,所述山茶花组合物包括山茶籽油、山茶花提取物和山茶叶提取物,质量比为70-99.8:0.1-15:0.1-15。
优选地,所述其它植物油包括白池花籽油、霍霍巴籽油、小麦胚芽油、甜扁桃油、葡萄籽油、油橄榄果油、燕麦仁油、亚麻荠籽油、向日葵籽油、野大豆油、全缘叶澳洲坚果籽油、锈红蔷薇籽油、欧洲榛籽油、玻璃苣籽油、牡丹籽油、狗牙蔷薇果油、沙棘油、鳄梨油、辣木籽油、深海两节荠籽油、猴面包树籽油、欧洲越桔籽油中的至少一种。
优选地,所述基础油脂包括碳氢化合物、合成油脂类、硅油类、合成醚类中的至少一种;优选为碳氢化合物、合成油脂类和合成醚类的组合,选择合成油脂类和合成醚类这些成分有更好的使用肤感及稳定性。基础油脂的分子量为100~900Da,且20℃条件下,运动粘度1~20mm2/s。
更优选地,所述碳氢化合物包括角鲨烷、矿油、氢化二聚癸烯、氢化聚异丁烯、氢化聚癸烯、异构烷烃类中的一种或多种。碳氢化合物在20℃条件下,运动粘度1~20mm2/s,优选为,矿油在20℃条件下,运动粘度为4~16mm2/s;氢化聚异丁烯20℃条件下,运动粘度为1~20mm2/s;异构烷烃类的C链为8~30,优选为C15-19烷。碳氢化合物优选为角鲨烷和C15-19烷的组合,这些成分比单独使用角鲨烷,使用肤感更清爽透气。
更优选地,所述合成油脂类包括辛酸/癸酸甘油三酯、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、异壬酸异壬酯、棕榈酸乙基己酯、碳酸二辛酯、新戊二醇二(乙基己酸)酯、新戊二醇二庚酸酯、甘油十一碳烯酸酯、新戊酸异癸酯中的一种或多种。
更优选地,所述硅油类包括环五聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、苯基聚三甲基硅氧烷中的一种或多种。
更优选地,所述合成醚类包括二辛基醚。
优选地,所述活性添加剂包括红没药醇、光甘草定、抗坏血酸四异棕榈酸酯、神经酰胺NS/、神经酰胺NG、神经酰胺NP、神经酰胺AS、神经酰胺AP、植物甾醇类、桃柁酚、硬脂醇甘草亭酸酯、邻伞花烃-5-醇、富勒烯、海茴香提取物、光甘草定、光果甘草根提取物、视黄醇、视黄醇衍生物、多元醇中的至少一种;优选为海茴香提取物,它含有丰富的含茴香醚、α-茴香酮、茴香醛、维生素C、矿物质、微量元素、生育酚等。可以有效保护皮肤屏障、促进神经酰胺III和VI的合成、促进胶原的合成,提亮肤色。所述多元醇包括1,2-戊二醇、1,2-己二醇、辛甘醇、丁二醇、1,3-丙二醇、甲基丙二醇、1,2-丙二醇、甘油、双丙甘醇、异戊二醇中的一种或多种。
优选地,所述抗氧化剂包括生育酚(维生素E)、生育酚乙酸酯、迷迭香叶提取物、生育酚琥珀酸酯、苯并***基十二烷基对甲酚、季戊四醇四(双-叔丁基羟基氢化肉桂酸)酯、二甲基甲氧基苯并二氢吡喃醇中的至少一种。
优选地,所述着色剂包括虾青素、毛瑞榈果油、β-胡萝卜素及合成色素中的至少一种。
优选地,所述芳香剂包括香精、精油类中的至少一种。
山茶籽油:是世界四大著名木本植物油之一,山茶籽油在我国历属皇家贡品。其油茶果采自常绿幽深、生态环境极佳的山林之间,无任何农药、化肥污染,尽吸天然养分,日月精华。油茶果从开花、授粉到果子成熟需整整一年,历经秋、冬、春、夏、秋之雨露,民间有"抱子怀胎"之佳称,堪称“人间奇果”。山茶籽油含脂肪酸、茶多酚、角鲨烯与黄酮类等物质。可以有效锁水皮肤水分,滋润肌肤、同时具有修护皮肤屏障的功效。
山茶花提取物:山茶花提取物含有花色苷、儿茶素、槲皮素、熊果酸、氨基酸等成分。可以有效促进胶原蛋白合成、修护皮肤屏障、抗氧化、抗糖化、提亮肤色的功效。
山茶叶提取物:含有包括茶多酚、茶氨酸、茶多糖、茶皂素、维生素、微量元素等。可以有效提高肌肤水分含量、改善肌肤现有刺激状态、促进胶原蛋白合成、修护皮肤屏障、抗氧化等功效。
海茴香提取物:海茴香别名海马齿、圣彼得草。海茴香生长在海边礁石上,再生能力特别强。被法国纳入《法国药典》,海茴香十分珍贵,故海茴香也被法国人列为限制开采的国宝级植物,它含有丰富的含茴香醚、α-茴香酮、茴香醛、维生素C、矿物质、微量元素、生育酚等。可以有效保护皮肤屏障、促进神经酰胺III和VI的合成、促进胶原的合成,提亮肤色。
神经酰胺NS/神经酰胺NG:神经酰胺具有很强缔合水分子能力,它通过在角质层中形成网状结构维持皮肤水分。具有帮助受损表皮屏障功能的恢复及皮肤锁水能力的恢复功效、同时有效锁住皮肤水分、提升皮肤弹性等护肤功效、修护皮肤屏障等功效。
燕麦仁油:从燕麦仁中精炼而成的油脂,天然润肤,可对抗外界环境的刺激,适用于敏感性的肌肤。燕麦仁油内含有丰富的不饱和脂肪酸,如亚油酸、油酸,还含有饱和脂肪酸(硬脂酸、棕榈酸等)、生育酚、维生素C、神经酰胺、磷脂等,稳定性良好,易被皮肤吸收,可渗入皮肤内部,达到深层保湿。同时具有抗氧化、修护皮肤屏障、滋润皮肤的功效,令肌肤日渐丰盈饱满、有弹性、提升肌肤平滑度。
红没药醇:来源于天然植物,在化妆品中有非常广泛的用途,可以用于抗刺激以及消炎,作为活性成分以保护和护理过敏性皮肤。
光果甘草根提取物:甘草为药之国老,被称为百草之王,有“十方九草”之美誉。甘草属多年生草本,根茎粗壮,是一种补益中草药。甘草主要分为乌拉尔甘草、胀果甘草和光果甘草三种,我国药学专著《神农本草经》、《本草纲目》都有记载。独特且稀有的甘草黄酮,只存在于光果甘草根部和茎部(根部提取为主),生长5~8年才有提取价值。具有显著的清除自由基、抗氧化、淡化皱纹、提亮肤色和光泽度、同时改善皮肤刺激状态。
C15-19烷:植物来源,独特的高纯度烷烃、可生物降解、惰性、非极性油脂、肤感不粘腻、顺滑、铺展性极佳,带来清新爽滑的涂抹感和极其舒适的肤感。可用作于油类产品的基础油。
氢化二聚癸烯:无色、无味、无挥发的高纯度烃类油、高度的氧化稳定性、高度安全性、非常清爽不油腻、丰盈的天鹅绒般的肤感,可用作于油类产品的理想基础油。
角鲨烷:天然植物来源,高纯度、非极性、不易氧化、冷热稳定,优异的保湿性能和渗透皮肤的能力,没有油腻、黏腻、厚重的感觉,极易被肌肤吸收,是化妆品常用油脂。
生育酚(维生素E):生育酚又称维生素E,是一种脂溶性维生素,也是最重要的抗氧化剂之一。维生素E的抗氧化作用是与脂氧自由基或脂过氧自由基反应,向它们提供氢离子,使脂质过氧化链式反应中断,是最重要的脂溶性断链型抗氧化剂。另外,维生素E不但有中断氧化游离基的作用,而且能够猝灭单线态氧,从而提高油的抗氧化能力。
迷迭香叶提取物:是一种高效天然抗氧化活性成分,具有长效的保护功效。迷迭香提取物为安全、高效的自由基清除剂,能有效地阻止油脂的氧化酸败,防止因氧化引起的褪色或变色。其结构稳定,不易分解,是举世公认的具有高效抗氧化效能的植物。迷迭香抗氧化剂提取物主要成分有:鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酸、迷迭香酚、表迷迭香酚、异迷迭香酚、迷迭香二酚。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
(1)产品使用时清爽透气、肌肤能自由呼吸、不闷痘。
由于植物油使用感普遍比较厚重油腻、难吸收、易酸败,如果产品配方设计不合理,采用对人体肌肤不友好成分等,会导致使用产品时带来不好的效果:油腻、不好吸收、不透气、易闷痘、有油酸败味等,使用时有可能会导致痘痘肌的现象。针对此现象,本发明山茶花精华油通过科学成分配伍,采用了与皮肤天然皮脂和脂质结构相同或相似的成分和构成比例的产品配方设计原理,从而更具安全性和亲肤性。
本发明油脂的分子量为500道尔顿左右,符合人体透皮吸收中的相似相溶原理(在透皮吸收中,当外界物质和皮肤成分、结构和性质相似时就易透过皮肤),而护肤品透皮条件,在大多数情况下,是分子量低于1000Da。在配方设计时,本发明选用对人体肌肤友好成分,添加符合要求的基础油脂,产品采用山茶花组合物中的山茶籽油、角鲨烷、辛酸/癸酸甘油三酯等油脂,这些油脂与人体皮肤表面油脂及皮脂成分结构相似,分子量在100~900Da之间,能与肌肤有很好的亲肤性,具有很好的吸收性及渗透性。
本发明的基础油脂为碳氢化合物类(矿油、氢化聚异丁烯)、合成醚(如二辛基醚)原料,要求20℃条件下运动粘度1~20mm2/s,其有高纯度、高度安全性、高度的氧化稳定性,可使得整个精华油体系的铺展性大大提升。添加的碳氢化合物类(异构烷烃类),硅油类原料,且要求C链在8~30,该类原料为惰性、非极性油脂,高纯度、高度安全性、高度的氧化稳定性,可以带来清爽的涂抹感。经实验检测山茶花精华油为水感轻盈质地,使用清爽,同时具有很好透气性。
(2)产品稳定,功效成分持久
由于植物油容易酸败,从而会导致整个产品品质下降。配方添加了高纯度、高度安全性、高度氧化稳定性的基础油脂,同时添加了抗氧化剂,包括生育酚(维生素E)、生育酚乙酸酯、迷迭香叶提取物、生育酚琥珀酸酯、苯并***基十二烷基对甲酚、季戊四醇四(双-叔丁基羟基氢化肉桂酸)酯、二甲基甲氧基苯并二氢吡喃醇中的至少二种,可以有效协同提升产品的抗氧化能力,稳定产品品质,让活性功效成分保持持续、护肤功效持久。经实验检测山茶花精华油抗氧化能力,耐热稳定性等方面能确保该产品在有效使用期间一直保持品质稳定。
(3)具有修护和抗衰老功效
本发明通过多种成分的配合设计,可以修护皮肤屏障、抗氧化、抗糖化、滋养肌肤、提亮肤色、减少皱纹、增加皮肤弹性等维度来达到对抗衰老的目的。结合产品本身的同时配方添加了活性添加剂,包括红没药醇、光甘草定、抗坏血酸四异棕榈酸酯、神经酰胺NS/神经酰胺NG、神经酰胺NP、神经酰胺AS、神经酰胺AP、植物甾醇类、桃柁酚、硬脂醇甘草亭酸酯、邻伞花烃-5-醇、富勒烯、海茴香提取物、光果甘草根提取物、视黄醇及视黄醇衍生物中的至少一种,经实验检测山茶花精华油可以有效修护皮肤屏障和抗衰老功效。
具体功效原理如下,
修护:皮肤屏障功能是皮肤的基本生理功能,包括渗透屏障,抗氧化屏障,抗菌屏障等,起保护机体内各组织器官免受外界有害侵袭以及保持机体内环境稳定的作用。内外源压力条件,如衰老、炎症、UV等都会导致角质层的角质细胞以及各种脂质的组分、结构发生变化,导致皮肤屏障功能的降低,进而导致皮肤的修护功能下降。真皮成纤维细胞是构成真皮层的重要细胞,当皮肤发生内部损伤时,成纤维细胞会受到刺激而迁移,对受损部分进行修复。当体外细胞生长到单层状态时,在单层细胞上人为制造一个空白区域,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使划痕愈合,一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。具体原理为:通过测定样品处理后细胞迁移率,评价受试物是否具有修护功效。经实验检测山茶花精华油具有促进细胞迁移作用。
抗氧化:自由基的过量产生是导致肌肤衰老的主要原因之一,是否具有清除自由基能力是评价抗皱功效的重要指标,抗氧化剂通过消除自由基起抗皱作用,其消除自由基能力越强,抗皱效果越好。DPPH有单电子,在517nm处有强吸收,其乙醇溶液呈深紫色。DPPH自由基清除能力越强,其抗氧化作用越强。当有自由基清除剂存在时,由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失,其褪色程度与其接受的电子数成定量关系,因而可进行快速的定量分析,用来评价被测样品清除自由基能力。经实验检测山茶花精华油具有DPPH自由基清除能力。
抗糖化:由于糖化反应形成AGEs的关键是还原糖的羰基与蛋白质的游离氨基缩合,所以我们可在体外利用葡萄糖与牛血清蛋白发生糖化反应生成AGEs后加入抗糖化产品来评价其抗糖化功效。而大部分AGEs具有荧光特性,因此可以用酶标仪测定其荧光值来反映AGEs的含量。具体原理为:通过测定样品给药后AGEs含量的变化,检验样品是否具有抑制AGEs合成的作用。从而判定样品是否具有抗糖化功效。经实验检测山茶花精华油对AGEs有很好的抑制率。
紧致:弹性蛋白是真皮细胞外基质的主要成分之一,由真皮成纤维细胞在胞内合成。具体原理为:通过测定样品给药后,弹性蛋白含量的上***况,评价样品在促进弹性蛋白合成是否有具有紧致功效。经实验检测山茶花精华油对成纤维细胞弹性蛋白含量有促进作用。
抗皱:Ⅰ型胶原蛋白是真皮细胞外基质的主要成分之一,由真皮成纤维细胞在胞内合成Ⅰ型前胶原,分泌至胞外,在末端前胶原肽酶的作用下,端肽分离后,聚合形成胶原纤维。人真皮成纤维细胞可以作为研究化妆品提升Ⅰ型胶原含量的细胞模型,通过测定受试物给药后,空白对照与受试物给药后,Ⅰ型胶原蛋白含量的上调率,评价受试物在促进胶原蛋白合成方面是否具有功效。Ⅰ型胶原蛋白含量的测定采用酶联免疫方法(ELISA),具体原理为:Ⅰ型胶原与包被在酶标板上的胶原蛋白抗体特异性结合后,与带有底物标记的抗Ⅰ型胶原抗体结合,底物被酶催化后,生成有色产物,Ⅰ型胶原蛋白含量与有色产物颜色的深浅呈正相关。用酶标仪450nm波长下测定光密度(OD值),计算Ⅰ型胶原蛋白含量。经实验检测山茶花精华油对胶原蛋白含量有促进作用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明,但不以任何形式限制本发明。应当指出的是,对本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变化和改进。这些都属于本发明的保护范围。
本发明实施例中,C15-19烷的粘度(20℃):5~15mm2/s;二辛基醚的粘度(20℃):1~5mm2/s;角鲨烷分子量为:422.81Da;辛酸/癸酸甘油三酯分子量为:372.54Da;山茶花组合物为质量比为90:5:5的山茶籽油、山茶花提取物和山茶叶提取物组合物。
实施例1
一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油,按质量百分比计算,其原料组成及含量如下:
Figure BDA0003988375830000081
其中,山茶花组合物为质量比为90:5:5的山茶籽油、山茶花提取物和山茶叶提取物组合物。
实施例2
一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油,按质量百分比计算,其原料组成及含量如下:
Figure BDA0003988375830000082
Figure BDA0003988375830000093
其中,山茶花组合物为质量比为90:5:5的山茶籽油、山茶花提取物和山茶叶提取物组合物。
实施例3
一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油,按质量百分比计算,其原料组成及含量如下:
Figure BDA0003988375830000092
其中,山茶花组合物为质量比为90:5:5的山茶籽油、山茶花提取物和山茶叶提取物组合物。
实施例4
一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油,按质量百分比计算,其原料组成及含量与实施例1基本相同,不同之处仅在于:将C15-19烷替换为等量的角鲨烷,即角鲨烷含量为30%。
实施例5
一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油,按质量百分比计算,其原料组成及含量与实施例1基本相同,不同之处仅在于:将辛酸/癸酸甘油三酯替换为等量的角鲨烷,即角鲨烷含量为30%。
实施例6
一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油,按质量百分比计算,其原料组成及含量与实施例1基本相同,不同之处仅在于:将二辛基醚替换为等量的角鲨烷,即角鲨烷含量为30%。
对比例1
按质量百分比计算,其原料组成及含量如下:
矿油:15.3%;
Figure BDA0003988375830000101
效果验证1:安全性测试(人体斑贴测试)
将上述所有的实施例与对比例制备的精华油进行人体皮肤封闭型斑贴测试,测试方法参照《化妆品安全技术规范》(2015年版)中的人体皮肤斑贴试验。皮肤封闭型斑贴试验的方法为:选择年龄为18-60周岁的受试者30名,选用面积不超过50mm2、深度约1mm的合格斑试器材,分别取用20μL上述实施例和对比例制备的精华油放入斑试器小室内,阴性对照孔为空白对照(不置任何物质),将加有精华油的斑试器贴敷于受试者的前臂曲侧,用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上,持续24h。分别于去除斑试器后30min(待压痕消失后)、24h和48h按表1标准观察皮肤反应,并记录观察结果。斑贴测试结果见表2。
实验结果表明,30例受试者,实施例和对比例均无不良反应。
表1皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准
Figure BDA0003988375830000111
表2人体安全性测试结果
Figure BDA0003988375830000112
Figure BDA0003988375830000121
效果验证2:安全性测试(鸡胚试验)
将上述所有的实施例和对比例制备的精华油进行鸡胚绒毛***试验,测试方法参照《SN/T 2329-2009化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛***试验》;本试验利用孵化的鸡胚中期绒毛***血管***完整、清晰和透明的特点,将一定量受试物直接与鸡胚***接触,作用一段时间之后观察绒毛***毒性效应指标(如:出血、凝血和血管融解)的变化,这些指标反映血管及血管网的形态结构、颜色和通透性的变化,以及反映绒毛***蛋白质变性等现象及其受损程度,然后组合得到一个评分,用于评估受试物的眼刺激性。
试验方法为:应选用新鲜、干净、完好,质量50g-60g的受精鸡胚(鹊山野鸡蛋,浙江省台州市)。孵化(温度37.5℃±0.5℃,湿度55%-70%)至9日龄时,应照蛋检查,在蛋壳表面标记气室位置,用镊子剥去带标记的蛋壳部分,暴露白色蛋膜。用吸管滴加0.9%氯化钠(NaCl)溶液使蛋膜湿润,之后将0.9%氯化钠溶液吸出。小心用镊子去除内膜,保证血管膜不受损。取精华油0.3mL直接滴加于CAM表面,观察CAM反应情况,并记录作用5min内每种毒性效应出现的时间。此时应再次观察血管***的结构,并对其完整性和是否适宜用于试验做出判断。
评价方法
刺激评分法(irritation score,IS):采用反应时间法进行的试验,按如下式计算刺激评分(IS),结果保留小数点后两位:
Figure BDA0003988375830000131
Figure BDA0003988375830000132
t(H):血管出血时间(秒)time(vascular hemorrhage)
t(L):血管溶解时间(秒)time(vascular lysis)
t(C):血管凝血时间(秒)time(vascular coagulation)
根据计算的IS数值按表3对受试物眼刺激性进行分类。
表3.刺激评分法结果评价
Figure BDA0003988375830000133
表4.受试物的刺激性评分及分类
Figure BDA0003988375830000134
效果验证3:屏障修护测试(细胞划痕实验检测)
将上述所有的实施例和对比例制备的精华油进行修护功效测试(细胞划痕),测试方法参照《Research Techniques Made SimpLe:AnaLysis of CoLLective CeLLMigration Using the Wound HeaLing Assay》进行试验设计,通过空白对照组验证样品的修护功效。
试验方法为:将冷冻保存的HSF细胞以合适的密度接种到细胞培养瓶中,加入DMEM培养基(10% FBS),在37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。将处于对数生长期的HSF细胞用PBS清洗两次后,加入胰酶消化,加入DMEM培养基(10% FBS)终止消化离心,弃去上清液,加入DMEM培养基(10% FBS)配成细胞悬液。在6孔板中每孔加入2mL细胞悬液,置于细胞培养箱中培养24h。用200μL的枪头划痕,PBS清洗两次后,每孔分别加入2mL含不同浓度样品的DMEM培养基(0.5%FBS)。样品浓度为0.05%。24h后对样品组同一视野进行拍照记录,同时设置DMEM培养基(0.5%FBS)空白对照。测量每个时间点三处位置的划痕间距(d),计算细胞迁移率。
Figure BDA0003988375830000141
试验数据均用mean±SEM数据表示。
采用GraphPad Prism 8.0软件统计处理数据,试验数据均用mean±SEM表示,用t检验分析或方差分析等统计方法对数据进行统计。
表5.判定依据
Figure BDA0003988375830000142
表6.样品对细胞迁移率的影响
Figure BDA0003988375830000144
Figure BDA0003988375830000151
结论:实施例样品对人皮肤成纤维细胞细胞迁移的影响表6所示。空白对照组的细胞在处理24h后,细胞的迁移率为42.16±0.93%、0.05%实施例1迁移率为52.94±2.48、0.05%实施例1迁移率为52.94±2.48、经过实施例样品处理24h后,0.05%实施例2样品细胞迁移率为51.93±0.45、0.05%实施例3样品细胞迁移率为50.68±1.17、0.05%实施例4样品细胞迁移率为49.90±2.52、0.05%实施例5样品细胞迁移率为48.93±0.35、0.05%实施例6样品细胞迁移率为47.79±1.52都具有显著性差异,有促进细胞迁移作用。0.05%对比例样品细胞迁移率为45.48±0.027,无显著性差异,没有促进细胞迁移作用。
效果验证4:屏障修护测试(人体功效测试)
将上述所有实施例和对比例制备的精华油进行修护屏障的功效测试,基于33位中国健康女性受试者后背皮肤经1%十二烷基硫酸钠封闭型斑贴刺激24h,分别在修护前(斑贴撕下后1小时)、使用7天通过VapoMeter SWL5(芬兰delfin公司)手持式探头采集经表皮水流失(TEWL值),采用与空白对照(刺激后不做任何处理)的方法,评价产品修护皮肤屏障的功效。结果见表7.
试验结果表明:经1%的十二烷基硫酸钠损伤皮肤屏障,可以发现实施例1、实施例2、实施例3、实施例4、实施例5、实施例6、对比例、空白对照共5个区域的TEWL值无显著性差异,说明修护之前各区域的损伤程度一致;使用7天,与空白对照及对比例相比,3个实施例均显著性低于空白对照组及对比例组,说明使用实施例后,均能显著性降低经表皮水分流失,具有显著修护皮肤屏障的效果,而对比例与空白对照相比无显著性的差异,未见明显的修护皮肤屏障效果。
表7.TEWL值测试结果及显著性分析结果
Figure BDA0003988375830000152
Figure BDA0003988375830000161
注:TEWL值越小,皮肤屏障越好。显著性分析:“*”表示0.01≤p<0.05;“**”表示0.001≤p<0.01,“***”表示p<0.001,“****”表示p<0.0001.
效果验证5:抗皱测试(人体功效测试)
测试上述所有实施例和对比例制备的精华油紧致的功效,人体功效试验是基于34位中国健康女性受试者左右脸分别使用实施例3及对比例的精华油,分别在使用前、使用28天通过Visioscan VC20仪器采集眼角部位皱纹及面部纹理,得到皱纹参数SEw及面部皮肤平滑度SEsm,分别采用左右对照及前后对照的方法,评价产品抗皱的功效。应用GraphPad软件对各个测量值进行描述性统计,包括均值及标准差。用Shapiro-Wilk Test进行数据正态分布的显著性检验,Sig.(双侧)>0.05,则呈正态分布,进行配对样本t检验,显著性差异水平α取0.05。若Sig.(双侧)<0.05,则呈非正态布,进行Wilcoxon检验,显著性差异水平α取0.05。分析结果见表8.
试验结果表明:34位女性受试者左右脸颊随机使用实施例3及对比例的精华油,在使用前,两区域的皱纹SEw值及平滑度SEsm值均无显著性差异;使用28天后,实施例3的SEw值及SEsm值均显著性低于使用前及对比例,说明实施例精华油能显著性改善皱纹及皮肤平滑度。
表8.皱纹参数SEw测试结果及显著性分析结果
Figure BDA0003988375830000162
Figure BDA0003988375830000171
注:SEw值越小,皱纹越不明显。
表9.平滑度SEsm测试结果及显著性分析结果
Figure BDA0003988375830000172
注:SEsm值越小,皮肤越平滑。
效果验证6:抗皱测试(型胶原蛋白-1基因表达量实验测试)。
将上述所有的实施例和对比例制备的精华油进行型胶原蛋白-1基因表达量实验测试,测试方法参照《T/SHRH 031-2020,化妆品紧致、抗皱功效测试-体外成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白含量测定》。选用人真皮成纤维细胞,通过测定受试物给药后,空白对照与受试物给药后,Ⅰ型胶原蛋白含量的上调率,评价受试物在促进胶原蛋白合成方面是否具有功效。用酶标仪450nm波长下测定光密度(OD值),计算Ⅰ型胶原蛋白含量。
表10.型胶原蛋白-1基因表达量测试结果
Figure BDA0003988375830000173
Figure BDA0003988375830000183
备注:用t-test方法进行统计分析时,与BC组相比,显著性以#表示,P-value<0.05表示为#,P-value<0.01表示为##;与NC组相比,显著性以*表示,P-value<0.05表示为*,P-value<0.01表示为**。
效果验证7:紧致测试(人体功效测试)
测试上述所有实施例和对比例制备的精华油紧致的功效,人体功效试验是基于34位中国健康女性受试者左右脸分别使用实施例3及对比例的精华油,分别在使用前及使用28天通过皮肤弹性测试探头(Cutometer MPA 580)测试皮肤弹性参数R5,分别采用左右对照及前后对照的方法,评价产品的紧致功效,用Shapiro-Wilk Test进行数据正态分布的显著性检验,Sig.(双侧)>0.05,则呈正态分布,进行配对样本t检验,显著性差异水平α取0.05。若Sig.(双侧)<0.05,则呈非正态布,进行Wilcoxon检验,显著性差异水平α取0.05。分析结果见表10.
试验结果表明:34位女性受试者左右脸颊随机使用实施例3及对比例的精华油,在使用前,两区域的弹性R5值无显著性差异;使用28天后,实施例3显著性高于使用前及对比例,说明实施例精华油具有显著性提升皮肤弹性的效果即具有紧致的功效。
表10.弹性参数R5测试结果及显著性分析结果
Figure BDA0003988375830000182
注:R5值越高,皮肤越有弹性。
效果验证7:紧致测试(弹性蛋白基因表达量实验检测)
将上述所有的实施例和对比例制备的精华油进行弹性蛋白基因表达量实验测试,测试方法参照《实验室标准(LAB13-202201)》进行试验设计,通过检测产品对成纤维细胞弹性蛋白含量的变化,采用空白对照组验证样品的紧致功效。
实验方法:取对数生长期的成纤维细胞HSF接种于6孔板中,待细胞融合度达到45%~60%,弃去培养基,样品孔中加入含有样品的培养基,空白对照组中加入正常的细胞培养基,阳性对照组中加入肝细胞生长因子的细胞培养基,每孔2mL。给药完毕后将6孔板放置于CO2培养箱中培养72±2h。孵育培养结束后,每孔收集1mL细胞培养上清液于1.5mL无菌离心管,按照***性蛋白酶联免疫试剂盒的使用说明书进行检测。采用GraphPad Prism8.0软件统计处理数据,实验数据均用mean±SEM表示,用t检验分析或方差分析等统计方法对数据进行统计。
表11各样品对弹性蛋白相对含量的影响
Figure BDA0003988375830000191
效果验证7:抗氧化测试(DPPH清除率检测)
将上述所有的实施例和对比例制备的精华油进行DPPH清除率检测,测试方法参照《T/SHRH 006-2018,化妆品-自由基(DPPH)清除实验方法》.上海日用化妆品行业协会,2018.
检测方法:在透明96孔板,各孔加入150μL,不同浓度的样品,再加入50μL,0.4mMDPPH溶液。充分混匀后,室温暗处再次反应30min后,检测其在520nm下的OD值。根据OD520nm值计算出样品的DPPH的清除率。
清除率(%)=[1-(OD520nm样品-OD520nm空白)/(OD520nm阳性-OD520nm空白)]*100
表12.实施例的DPPH自由基清除率
样品名称 DPPH,IC50(%)
实施例1 0.32
实施例2 0.29
实施例3 0.26
实施例4 0.28
实施例5 0.30
实施例6 0.21
对比例 0.20
效果验证8:抗糖化测试(AGEs抑制率测试)
将上述所有的实施例和对比例制备的精华油进行AGEs抑制率测试,测试方法参照《基于UVA和甲基乙二醛(MGO)联合刺激离体皮肤的抗糖化作用检测方法》开展检测。本次测试所用Ex vivo离体皮肤组织,通过空白对照(BC),阴性对对照(NC),阳性对照(PC)3mm氨基胍硫酸盐,在45℃培养箱反应,每隔2天换一次液,持续21天。前三次换液进行10J/cm2的UVA辐射,培养液加入0.5mm甲基乙二醛。应用GraphPad Prism作图,结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析均为双尾。P<0.05认为具有显著差异,P<0.01认为具有极显著差异。
表13.表皮层AGES测试报告结果
Figure BDA0003988375830000201
Figure BDA0003988375830000211
备注:t-test方法进行统计分析时,阴性对照组与空白对照组相比,显著性以#表示,P-value<0.05表示为#,P-value<0.01为##;阳性对照组、实施例样品组与阴性对照组相比,显著性以*表示,P-value<0.05表示为*,P-value<0.01表示为**,P-value<0.001表示为***。
效果验证9:透气性实验测试
将上述所有的实施例和对比例制备的精华油进行透气性实验测试。透气率测试方案:1、取新鲜同部位猪皮四块,厚度状态一致,用生理盐水清洗备用;2、用实施例,水,山茶籽油,凡士林恒温到室温备用;3、取相同量的涂抹试剂,分别均匀涂抹到新鲜猪皮,涂抹面积一致,样品涂抹均匀;4、涂抹后的猪皮常温放置3min后测试透气率;5、主要技术参数为,测试范围:0.007-190000cm3/m2·24h·0.1MPa;控温范围:5℃-95℃;分辨率:0.001cm3/m2·24h·0.1MPa;压强范围:0-4MPa;试验气体:氧气、二氧化碳、氮气等;真空分辨率:0.1Pa;样品厚度:≤4mm;样品规格:60mm×60mm;6、分别计算涂抹不同涂抹试剂后的透气率,以m3/(m2.kPa.h)表示。
表14.透气性测试结果:
样品名称 测试项目 测试结果 单位
纯水 透气率 2.0×10-6 m3/(m2.kPa.h)
山茶籽油 透气率 1.3×10-6 m3/(m2.kPa.h)
凡士林 透气率 1.09×10-6 m3/(m2.kPa.h)
实施例1 透气率 1.76×10-6 m3/(m2.kPa.h)
实施例2 透气率 1.84×10-6 m3/(m2.kPa.h)
实施例3 透气率 1.90×10-6 m3/(m2.kPa.h)
实施例4 透气率 1.50×10-6 m3/(m2.kPa.h)
实施例5 透气率 1.62×10-6 m3/(m2.kPa.h)
实施例6 透气率 1.94×10-6 m3/(m2.kPa.h)
对比例 透气率 1.93×10-6 m3/(m2.kPa.h)
效果验证10:氧化稳定性测试
将上述所有的实施例和对比例制备的精华油进行氧化稳定性实验测试,测试方法参照GB/T 21121《动植物油脂氧化稳定性的测定(加速氧化测试)》,采用130℃条件下测定样品的诱导时间。
表15.氧化稳定性测试结果
样品名称 诱导时间/h
实施例1 20.5
实施例2 22.6
实施例3 25.9
实施例4 19.9
实施例5 20.5
实施例6 27.5
对比例 26.6
山茶籽油 2.07
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是,本发明并不局限于上述特定实施方式,本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改,这并不影响本发明的实质内容。

Claims (10)

1.一种具有修护和抗衰老功效的山茶花精华油,其特征在于,所述山茶花精华油包括以下重量百分含量的各组分:
Figure FDA0003988375820000011
2.根据权利要求1所述的山茶花精华油,其特征在于,所述山茶花组合物包括山茶籽油、山茶花提取物和山茶叶提取物,质量比为70-99.8:0.1-15:0.1-15。
3.根据权利要求1所述的山茶花精华油,其特征在于,所述其它植物油包括白池花籽油、霍霍巴籽油、小麦胚芽油、甜扁桃油、葡萄籽油、油橄榄果油、燕麦仁油、亚麻荠籽油、向日葵籽油、野大豆油、全缘叶澳洲坚果籽油、锈红蔷薇籽油、欧洲榛籽油、玻璃苣籽油、牡丹籽油、狗牙蔷薇果油、沙棘油、鳄梨油、辣木籽油、深海两节荠籽油、猴面包树籽油、欧洲越桔籽油中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的山茶花精华油,其特征在于,所述基础油脂包括碳氢化合物、合成油脂类、硅油类、合成醚类中的至少一种。
5.根据权利要求4所述的山茶花精华油,其特征在于,所述碳氢化合物包括角鲨烷、矿油、氢化二聚癸烯、氢化聚异丁烯、氢化聚癸烯、异构烷烃类中的一种或多种;所述碳氢化合物在20℃条件下,运动粘度1~20mm2/s;异构烷烃类的C链为8~30。
6.根据权利要求4所述的山茶花精华油,其特征在于,所述合成油脂类包括辛酸/癸酸甘油三酯、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、异壬酸异壬酯、棕榈酸乙基己酯、碳酸二辛酯、新戊二醇二(乙基己酸)酯、新戊二醇二庚酸酯、甘油十一碳烯酸酯、新戊酸异癸酯中的一种或多种。
7.根据权利要求4所述的山茶花精华油,其特征在于,所述硅油类包括环五聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷醇、苯基聚三甲基硅氧烷中的一种或多种。
8.根据权利要求4所述的山茶花精华油,其特征在于,所述合成醚类包括二辛基醚。
9.根据权利要求1所述的山茶花精华油,其特征在于,所述活性添加剂包括红没药醇、光甘草定、抗坏血酸四异棕榈酸酯、神经酰胺NS、神经酰胺NG、神经酰胺NP、神经酰胺AS、神经酰胺AP、植物甾醇类、桃柁酚、硬脂醇甘草亭酸酯、邻伞花烃-5-醇、富勒烯、海茴香提取物、光甘草定、光果甘草根提取物、视黄醇、视黄醇衍生物、多元醇中的至少一种。
10.根据权利要求1所述的山茶花精华油,其特征在于,所述抗氧化剂包括生育酚(维生素E)、生育酚乙酸酯、迷迭香叶提取物、生育酚琥珀酸酯、苯并***基十二烷基对甲酚、季戊四醇四(双-叔丁基羟基氢化肉桂酸)酯、二甲基甲氧基苯并二氢吡喃醇中的至少一种。
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