CN112704074B - 一种天然植物内源成分的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：S1、将含有黄酮和莽草酸的天然植物干燥后粉碎得到植物粉，向植物粉中加入水和酶进行酶解，灭活得到酶解产物；S2、向酶解产物中加入聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇，超声处理20‑40min，然后加入乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液；S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，当流出液pH为4‑5时，用乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为9‑10含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，收集流出液；S4、将流出液进行纯化、浓缩、干燥处理即得植物内源成分。本发明提供了一种天然植物内源成分的提取方法，有效提高了天然植物中莽草酸和黄酮的提取率，所得植物内源成分可广泛地应用于农业生产中，具有很好的经济效益。

Description

一种天然植物内源成分的提取方法
技术领域
本发明属于植物提取技术领域，涉及一种天然植物内源成分的提取方法。
背景技术
黄酮类化合物泛指基本母核，为苯基色原酮具有粉轻基的苯环(与环)通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物，有甲氧基、般经基、甲基、异戊烯基等官能团。依据中央三碳链的氧化度、2或3位的环连接位置以及三碳链的环状结构等特点，可将主要的天然黄酮类化合物分类：黄酮类、黄酮醇、花色素类、二氛黄酮类、二氢黄酮醇类等十五种。黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，其阻止氧化的能力是维生素的十倍以上，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。黄酮也可以改善血液循环，降低胆固醇、增强免疫力、保护中枢神经***和心脑血管***等显著的生理活性。黄酮类在农业领域同样具有广泛的应用，有研究发现，黄酮类物质能够促进植物的光合作用，有助于植物的根、茎、叶的生长发育，对茶叶、辣椒、水稻、烟叶、茄子、蔬菜、葡萄、柑桔等作物在促进生长、产量、品质形成方面具有重要作用。喷施黄酮类的农作物长势好，株高有明显的增加，耐寒性也得到一定程度的提高。此外，黄酮类物质具有很好的杀菌、杀虫、抗病毒效果，可用作植物源农药成分，具有很好的环境和生物安全性。
莽草酸及其衍生物因表现出多种药理活性，如抗菌、抗炎、抗病毒、抗血栓等等作用，在医药领域作用也逐渐被认识。它也是禽流感病毒患者治疗药物“达菲”的基本原料。曾有报道马尾松松针中莽草酸的含量在2-3％，且嫩叶松针的含量是最高的，雪松松针及嫩枝中莽草酸的含量分别为3.93％、1.66％。我国松树资源极为丰富，因此松针中莽草酸将成为新的主要植物资源。当前，对其研究的大体方向主要是对提取工艺的优化，例如有机溶剂提取法、水蒸汽蒸馆法等等；成分鉴定及含量测定：气质联用色谱法、高效液相法；药理功效方面。
因此，提高天然植物中黄酮类和莽草酸等有效成分的提取率一直是农业领域研究的热点之一，有利于提高天然植物的经济价值，对它们在农业以及相关领域的应用也具有重要的意义，并将具有广阔的前景。
发明内容
基于背景技术所述，本发明提供了一种天然植物内源成分的提取方法，采用聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇作为促溶剂，配合壳聚糖吸附柱，提高了天然植物中莽草酸和黄酮的提取率和壳聚糖吸附柱的利用率，所得植物内源物质可用于农业领域，具有很好的生物安全性和环境友好性，且提取工艺简单易操作，利于产业化。
本发明提出的一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将含有黄酮和莽草酸的天然植物干燥后粉碎得到植物粉，向植物粉中加入水和酶进行酶解，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇，超声20-40min，然后加入体积浓
度为50-80％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液，其中乙醇水溶液与酶解产物的体积比为1-2：1-2；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，当流出液pH为4-5时，用体积浓度为20-30％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为9-10含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，收集流出液；
S4、将流出液进行纯化、浓缩、干燥处理即得植物内源成分。
优选地，步骤S1中，酶为纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、果胶酶中的一种或两种以上混合物。
优选地，酶解温度为20-40℃，酶解时间为10-20min。
此处的酶解处理是为了有效破坏天然植物的细胞壁，利于有效成分的溶出和被提取。
优选地，步骤S1中，植物粉与水的重量比为1：2-5。
优选地，步骤S1中，含有黄酮和莽草酸的天然植物为银杏叶、松针、八角茴香中的一种。
优选地，步骤S2中，聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇的总量与酶解产物的重量体积比g：mL为0.2-0.5：1。
优选地，聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇的重量比为1-2：1-2。
优选地，聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇的重量比为1：1。
优选地，步骤S3中，上样流速为5-6BV/h，洗脱流速为3-4BV/h。
优选地，步骤S3中，壳聚糖吸附柱的制备方法为：将壳聚糖用水润湿，装柱得到壳聚糖吸附柱。
优选地，壳聚糖为蚕丝蛋白改性壳聚糖，具体改性方法为：将壳聚糖溶解于醋酸水溶液中，加入有浓硝酸和浓磷酸组成的混合酸，然后加入亚硝酸钠在20-30℃下反应得到羧基化壳聚糖；向羧基化壳聚糖中加入蚕丝蛋白，在30-40℃下反应得到改性壳聚糖。
本发明中，浓硝酸的浓度为86％及以上硝酸，浓磷酸的浓度为83％及以上的磷。
优选地，壳聚糖与混合酸的重量体积比为g：mL为1：4-5。
优选地，混合酸中浓硝酸和浓磷酸的体积比2：1。
优选地，亚硝酸钠的添加量为混合酸总质量的0.5-1％。
优选地，羧基化壳聚糖与蚕丝蛋白的重量比为1-3：0.2-0.5。
优选地，步骤S4中，采用阳离子树脂柱进行纯化。
本发明对天然植物进行酶解处理，有利于且加快了天然植物中有效成分的溶出，且在提取前采用聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇对植物粉进行超声处理，聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇两者配合增加了植物粉中有效成分的溶解性，尤其提高了莽草酸和黄酮类的溶出度，大大提高了提取率；提高了后续提取步骤的提取效率。在分离阶段采用的壳聚糖吸附柱，将壳聚糖进行选择性羧基化，然后与蚕丝蛋白反应得到改性壳聚糖，壳聚糖中含有的氨基以及蚕丝支链上的氨基基团都有效促进了吸附柱对植物内源成分黄酮、莽草酸等有效成分的吸附，同时蚕丝蛋白的纤维结构有效降低了壳聚糖的溶胀性，便于后期有效成分的洗脱和分离。
本发明中丁二醇含有羟基配合聚乙烯吡咯烷酮的空间结构对壳聚糖的溶胀性能也带来了一定的影响，具有一定缓解壳聚糖溶胀倾向的作用，进一步降低了壳聚糖溶胀性，避免壳聚糖与植物中的酸性成分形成的胶状化合物，从而提高收率和吸附柱的重复利用率。
本发明提高了对天然植物中内源成分尤其是黄酮类物质的提取效果，所得内源成分中黄酮类含量高，可作为培养液、抗菌杀虫新型肥料及饲料添加剂，广泛地应用于农业生产中，具有很好的经济效益。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明做出详细说明，应当了解，实施例只用于说明本发明，而不是用于对本发明进行限定，任何在本发明基础上所做的修改、等同替换等均在本发明的保护范围内。
实施例1
一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜银杏叶干燥后粉碎得到银杏叶粉，向银杏叶粉中加入水、维素酶、蛋白酶在温度为30℃下进行酶解，灭活得到酶解产物，其中银杏叶粉与水的重量比为1：2；
S2、向酶解产物中加入聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇，超声处理20min，然后加入体积浓度为50％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液，其中乙醇水溶液与酶解产物的体积比为0.5：1，聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇的总量与酶解产物的重量体积比g：mL为0.2：1，聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇的重量比为1：2；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，当流出液pH为4时，用体积浓度为20％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为9含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，收集流出液；
S4、将流出液采用阳离子交换树脂极***换得到纯化液，经浓缩、干燥处理即得银杏叶提取物。
实施例2
一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜银杏叶干燥后粉碎得到银杏叶粉，取10g银杏叶粉中加入20ml水和果胶酶、纤维素酶在20℃下进行酶解20min，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入5g聚乙烯吡咯烷酮和5g丁二醇，超声处理40min，然后加入30mL体积浓度为80％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，上样流速为5BV/h，当流出液pH为4时，用体积浓度为20％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为9含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为3BV/h，收集流出液；
S4、将流出液采用阳离子交换树脂极***换得到纯化液，经浓缩、干燥处理即得银杏叶提取物；
其中，壳聚糖吸附柱中壳聚糖为蚕丝蛋白改性壳聚糖，具体改性方法为：将壳聚糖溶解于醋酸水溶液中，加入有浓度为90％的浓硝酸和浓度为85％浓磷酸组成的混合酸，然后加入亚硝酸钠在20℃下反应得到羧基化壳聚糖；向羧基化壳聚糖中加入蚕丝蛋白，在30℃下反应得到改性壳聚糖；壳聚糖与混合酸的重量体积比为g：mL为1：4，合酸中浓硝酸和浓
磷酸的体积比2：1，亚硝酸钠的添加量为混合酸总质量的0.5％，羧基化壳聚糖与蚕丝蛋白
的重量比为1：0.2。实施例3
一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜松针干燥后粉碎得到松针粉，取10g松针粉中加入50ml水和蛋白酶、纤维素酶在30℃下进行酶解10min，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入8g聚乙烯吡咯烷酮和4g丁二醇，超声处理20min，然后加入60mL体积浓度为80％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，上样流速为6BV/h，当流出液pH为5时，用体积浓度为30％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为10含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为4BV/h，收集流出液；
S4、将流出液采用阳离子交换树脂极***换得到纯化液，经浓缩、干燥处理即得松针提取物；
其中，壳聚糖吸附柱中壳聚糖为蚕丝蛋白改性壳聚糖，具体改性方法为：将壳聚糖溶解于醋酸水溶液中，加入有浓度为90％的浓硝酸和浓度为85％浓磷酸组成的混合酸，然后加入亚硝酸钠在20℃下反应得到羧基化壳聚糖；向羧基化壳聚糖中加入蚕丝蛋白，在30℃下反应得到改性壳聚糖；壳聚糖与混合酸的重量体积比为g：mL为1：5，合酸中浓硝酸和浓磷酸的体积比2：1，亚硝酸钠的添加量为混合酸总质量的1％，羧基化壳聚糖与蚕丝蛋白的重量比为1：0.5。
实施例4
一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将八角茴香(已干燥)粉碎得到茴香粉，取10g茴香粉中加入30ml水和半纤维素酶、纤维素酶在30℃下进行酶解10min，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入5g聚乙烯吡咯烷酮和10g丁二醇，超声处理20min，然后加入60mL体积浓度为80％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，上样流速为5BV/h，当流出液pH为5时，用体积浓度为30％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为10含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为3BV/h，收集流出液；
S4、将流出液采用阳离子交换树脂极***换得到纯化液，经浓缩、干燥处理即得八角茴香提取物；
其中，壳聚糖吸附柱中壳聚糖为蚕丝蛋白改性壳聚糖，具体改性方法为：将壳聚糖溶解于醋酸水溶液中，加入有浓度为90％的浓硝酸和浓度为85％浓磷酸组成的混合酸，然后加入亚硝酸钠在20℃下反应得到羧基化壳聚糖；向羧基化壳聚糖中加入蚕丝蛋白，在30℃下反应得到改性壳聚糖；壳聚糖与混合酸的重量体积比为g：mL为1：4.5，合酸中浓硝酸和浓磷酸的体积比2：1，亚硝酸钠的添加量为混合酸总质量的0.7％，羧基化壳聚糖与蚕丝蛋白的重量比为3：0.5。
实施例5
一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜松针干燥后粉碎得到松针粉，取10g松针粉中加入30ml水和果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶、纤维素酶在30℃下进行酶解10min，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入7.5g聚乙烯吡咯烷酮和7.5g丁二醇，超声处理20min，然后加入60mL体积浓度为80％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，上样流速为5BV/h，当流出液pH为5时，用体积浓度为30％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为10含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为3BV/h，收集流出液；
S4、将流出液采用阳离子交换树脂极***换得到纯化液，经浓缩、干燥处理即得松针提取物；
其中，壳聚糖吸附柱中壳聚糖为蚕丝蛋白改性壳聚糖，具体改性方法为：将壳聚糖溶解于醋酸水溶液中，加入有浓度为90％的浓硝酸和浓度为85％浓磷酸组成的混合酸，然后加入亚硝酸钠在20℃下反应得到羧基化壳聚糖；向羧基化壳聚糖中加入蚕丝蛋白，在30℃下反应得到改性壳聚糖；壳聚糖与混合酸的重量体积比为g：mL为1：4.5，合酸中浓硝酸和浓磷酸的体积比2：1，亚硝酸钠的添加量为混合酸总质量的0.7％，羧基化壳聚糖与蚕丝蛋白的重量比为3：0.5。
对照例1
一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜松针干燥后粉碎得到松针粉，取10g松针粉中加入30ml水和果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶、纤维素酶在30℃下进行酶解10min，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入60mL体积浓度为80％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，上样流速为5BV/h，当流出液pH为5时，用体积浓度为30％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为10含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为3BV/h，收集流出液；
S4、将流出液采用阳离子交换树脂极***换得到纯化液，经浓缩、干燥处理即得松针提取物；
其中，壳聚糖吸附柱中壳聚糖为蚕丝蛋白改性壳聚糖，具体改性方法为：将壳聚糖溶解于醋酸水溶液中，加入有浓度为90％的浓硝酸和浓度为85％浓磷酸组成的混合酸，然后加入亚硝酸钠在20℃下反应得到羧基化壳聚糖；向羧基化壳聚糖中加入蚕丝蛋白，在30℃下反应得到改性壳聚糖；壳聚糖与混合酸的重量体积比为g：mL为1：4.5，合酸中浓硝酸和浓磷酸的体积比2：1，亚硝酸钠的添加量为混合酸总质量的0.7％，羧基化壳聚糖与蚕丝蛋白的重量比为3：0.5。
对照例2
一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜松针干燥后粉碎得到松针粉，取10g松针粉中加入30ml水和果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶、纤维素酶在30℃下进行酶解10min，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入15g聚乙烯吡咯烷酮，超声处理20min，然后加入60mL体积浓度为80％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，上样流速为5BV/h，当流出液pH为5时，用体积浓度为30％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为10含氢氧化钠的
乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为3BV/h，收集流出液；
S4、将流出液采用阳离子交换树脂极***换得到纯化液，经浓缩、干燥处理即得松针提取物；
其中，壳聚糖吸附柱中壳聚糖为蚕丝蛋白改性壳聚糖，具体改性方法为：将壳聚糖溶解于醋酸水溶液中，加入有浓度为90％的浓硝酸和浓度为85％浓磷酸组成的混合酸，然后加入亚硝酸钠在20℃下反应得到羧基化壳聚糖；向羧基化壳聚糖中加入蚕丝蛋白，在30℃下反应得到改性壳聚糖；壳聚糖与混合酸的重量体积比为g：mL为1：4.5，合酸中浓硝酸和浓磷酸的体积比2：1，亚硝酸钠的添加量为混合酸总质量的0.7％，羧基化壳聚糖与蚕丝蛋白的重量比为3：0.5。
对照例3
一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜松针干燥后粉碎得到松针粉，取10g松针粉中加入30ml水和果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶、纤维素酶在30℃下进行酶解10min，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入15g丁二醇，超声处理20min，然后加入60mL体积浓度为80％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液；
S3、上样流速为5BV/h，当流出液pH为5时，用体积浓度为30％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为10含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为3BV/h，收集流出液；
S4、将流出液采用阳离子交换树脂极***换得到纯化液，经浓缩、干燥处理即得松针提取物。
其中，壳聚糖吸附柱中壳聚糖为蚕丝蛋白改性壳聚糖，具体改性方法为：将壳聚糖溶解于醋酸水溶液中，加入有浓度为90％的浓硝酸和浓度为85％浓磷酸组成的混合酸，然后加入亚硝酸钠在20℃下反应得到羧基化壳聚糖；向羧基化壳聚糖中加入蚕丝蛋白，在30℃下反应得到改性壳聚糖；壳聚糖与混合酸的重量体积比为g：mL为1：4.5，合酸中浓硝酸和浓磷酸的体积比2：1，亚硝酸钠的添加量为混合酸总质量的0.7％，羧基化壳聚糖与蚕丝蛋白的重量比为3：0.5。
对照例4
一种天然植物内源成分的提取方法，包括如下步骤：
S1、将新鲜松针干燥后粉碎得到松针粉，取10g松针粉中加入30ml水和果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶、纤维素酶在30℃下进行酶解10min，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入7.5g聚乙烯吡咯烷酮和7.5g丁二醇，超声处理20min，然后加入60mL体积浓度为80％的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，上样流速为5BV/h，当流出液pH为5时，用体积浓度为30％的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为10含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，洗脱流速为3BV/h，收集流出液；
S4、将流出液采用阳离子交换树脂极***换得到纯化液，经浓缩、干燥处理即得松针提取物。
实施例2-5以及对照例1-4提取所得植物内源成分中黄酮类和莽草酸的含量进行测定结果如下表所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
*收率是指最终产物植物内源成分中某一有效成分含量与滤液中该有效成分含量的比值；提取率是指每100克植物粉中提取出来的某一有效成分的克数，其中，对照例4中的收率是以滤液中有效成分的含量计算得到，其他实施例和对照例均是以最终所得植物内源成分中有效成分计算得到。
实施例5和对照例1-4中壳聚糖吸附柱的溶胀性能如下表所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的构思下，利用本发明说明书内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (9)

1.一种天然植物内源成分的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将含有黄酮和莽草酸的天然植物干燥后粉碎得到植物粉，向植物粉中加入水和酶进行酶解，灭活得到酶解产物；
S2、向酶解产物中加入聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇，超声处理20-40min，然后加入体积浓度为50-80%的乙醇水溶液加热回流提取，过滤得到滤液，其中乙醇水溶液与酶解产物的体积比为1-2：1-2；
S3、将滤液上壳聚糖吸附柱，当流出液pH为4-5时，用体积浓度为20-30%的乙醇水溶液进行淋洗壳聚糖吸附柱直至流出液为中性，接着用pH为9-10含氢氧化钠的乙醇水溶液进行洗脱，收集流出液；
S4、将流出液进行纯化、浓缩、干燥处理即得植物内源成分；
步骤S2中，聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇的总量与酶解产物的重量体积比g：mL为0.2-0.5：1；聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇的重量比为1-2：1-2；
壳聚糖为蚕丝蛋白改性壳聚糖，具体改性方法为：将壳聚糖溶解于醋酸水溶液中，加入由浓硝酸和浓磷酸组成的混合酸，然后加入亚硝酸钠在20-30℃下反应得到羧基化壳聚糖；向羧基化壳聚糖中加入蚕丝蛋白，在30-40℃下反应得到改性壳聚糖；
壳聚糖与混合酸的重量体积比为g：mL为1：4-5；
混合酸中浓硝酸和浓磷酸的体积比2：1；浓硝酸的浓度为86%及以上，浓磷酸的浓度为83%及以上；
亚硝酸钠的添加量为混合酸总质量的0.5-1%；
羧基化壳聚糖与蚕丝蛋白的重量比为1-3：0.2-0.5。
2.根据权利要求1所述的天然植物内源成分的提取方法，其特征在，步骤S1中，酶为纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、果胶酶中的一种或两种以上混合物。
3.根据权利要求1所述的天然植物内源成分的提取方法，其特征在，步骤S1中，酶解温度为20-40℃，酶解时间为10-20min。
4.根据权利要求1或2所述的天然植物内源成分的提取方法，其特征在于，步骤S1中，植物粉与水的重量比为1：2-5。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的天然植物内源成分的提取方法，其特征在于，步骤S1中，含有黄酮和莽草酸的天然植物为银杏叶、松针、八角茴香中的一种。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的天然植物内源成分的提取方法，其特征在于，聚乙烯吡咯烷酮和丁二醇的重量比为1：1。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的天然植物内源成分的提取方法，其特征在于，步骤S3中，上样流速为5-6BV/h，洗脱流速为3-4BV/h。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的天然植物内源成分的提取方法，其特征在于，步骤S3中，壳聚糖吸附柱的制备方法为：将壳聚糖用水润湿，装柱得到壳聚糖吸附柱。
9.根据权利要求1-3中任一项所述的天然植物内源成分的提取方法，其特征在于，步骤S4中，采用阳离子树脂柱进行纯化。
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CN101129513B (zh) * 2007-07-19 2010-06-09 浙江工业大学 一种利用分离-制剂耦合技术制备益心酮缓释制剂的方法
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