CN110680847A - 一种提取及纯化***黄酮的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提取及纯化***黄酮的方法。其包括以下步骤：花叶处理后投入到提取罐中用甲醇水提取2次，得到的提取液浓缩至一定量体积；冷却后加入一定比例的甲醇，放置沉降、过滤；得到的滤液用正己烷萃取数次，再用正丁醇萃取；水相加入铅盐和碳酸氢钠搅匀沉降；过滤，得到的滤液加酸调节PH值，再加入正丁醇萃取三次；得到的萃取液浓缩后用凝胶吸附过滤，待吸附完全后用不同PH的水洗涤；收集黄酮段，浓缩，上样，柱层析；收集黄酮段浓缩结晶；过滤得到***黄酮晶体。本发明工艺简单，制备得的***黄酮不含四氢***酚，适合工业化大规模生产。

Description

一种提取及纯化***黄酮的方法
技术领域
本发明属于中药提取工艺技术领域，具体涉及一种提取及纯化***黄酮的方法。
背景技术
工业***(Stevia rebaudiana Bertoni)为***科***属一年生雌雄异株的草本植物，广泛分布于世界各地。世界上***属植物主要有野生***(CannabisruderalisJanisch)、印度***(Cannabis indica Lam)和栽培***(Cannabis sativaL)3个种，在长期的生物进化过程中又产生了许多***变种和亚种。由于***中含有一种致幻成瘾的次生代谢产物—四氢***酚tetrahydrocannabinol，THC)，因而成为公众熟知的毒品原植物之一。为了方便监管和合理使用，国际上将***中THC含量<0 .3％的***品种定义不具备毒品利用价值的工业***。目前世界上种植工业***的国家已达27个，培育出的符合THC含量<0 .3％的工业***品种26个。
工业***又称汉麻，汉麻全身都是宝主要有纺织、食用和药用三大功能。汉麻皮富含纤维，可用于服装及各种饰品加工; 汉麻杆芯是极佳的木材替代品，还可用来生产超微粉; 汉麻籽富含优质蛋白以及人体必需脂肪酸，可应用于食品、保健品等领域。 汉麻叶中富含多种活性物质，如***酚类、胆碱、齐墩果酸、齐墩果烯和黄酮类等。其中含的黄酮和多酚类物质属于非***酚类化合物具有免疫激活、抗氧化、抗肿瘤、抑菌、抗病毒、抗心脑血管疾病、降血压等作用，具有较高的药用价值。目前总黄酮提取主要以银杏叶为原料，前期初步分析表明，从***的叶、花及花粉中分离得到的已知黄酮类化合物有20多种，它们可以被糖基化、异戊烯基化或甲基化。2002年，McPartland等分离得到了共轭O-糖苷化合物：芹菜素(apigenin)、木犀草素(luteolin)、槲皮素(quercetin)和山奈酚(kaempferol)；同年，Vanhoenacker等分离得到了C-糖苷化合物：荭草苷(orientin)、紫杉醇(vitexin)、木犀草素-7-O-葡萄糖苷(luteolin-7-O-glucoside)和芹菜素-7-O-葡糖苷(apigenin-7-O-glucoside)。此外，***中特有的化合物***黄素A、***黄素B、***黄素C。从汉麻叶中提取总黄酮既可拓展植物黄酮的来源，也可提升汉麻加工品的附加值，完善汉麻产业链并有利于汉麻资源的综合利用。目前，黄酮类化合物的提取方法主要有溶剂提取法、微波辅助提取法、超声辅助提取法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取分离法等。超临界流体萃取等方法虽然具有提取效率高、无溶剂残留、无毒等优点，但存在设备要求高，成本高等问题。微波辅助提取法要考虑微波穿透物质内部时衰减的问题; 溶剂萃取法选择性高，产品收率高，但其提取时间较长，提取效率不高。目前从汉麻叶和汉麻果胶中提取总黄酮工艺已见报道，但实现工业化提取的并不多见。本发明采用甲醇水溶液提取配合柱层析分离纯化，对汉麻叶总黄酮的提取工艺进行优化，以探寻汉麻叶总黄酮的最适提取条件，目的在于研发一个适合工业化大规模生产的工艺，旨在为充分利用汉麻叶中的生物活性成分，实现汉麻资源的综合利用和效益最大化提供指导。
发明内容
为了使***花叶中有效成分被完全提取出来并得到充分利用，本发明采用了常规提取技术。本提取工艺具有溶剂消耗小、提取简单、提取量大和提取收率高等特点，经过纯化后的***黄酮含量高，有效成分齐全，且不含有四氢***酚。
为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：
1、前处理：花叶晾晒至含水量15-20%，用脱叶机脱去叶柄，脱去叶柄的碎叶用40目筛网粉碎。
2、提取：取一定量的花叶颗粒加入5-7倍量甲醇水溶液，升温至70-85℃，提取2-3h，提取2-3次。
3、浓缩：合并提取液，减压浓缩至1/5体积。
4、醇沉：得到的浓缩液加入3-5倍量的乙醇溶液，放置6-18h沉淀。
5、过滤：待沉淀完全后，取上清液用200目滤网过滤。
6、萃取：分离得到的滤液用正己烷萃取，萃取2-3次，合并萃取液浓缩抽干；萃取后的水相再用正丁醇萃取1-2次，合并正丁醇萃取液浓缩抽干。
7、沉降：萃取后的水相按体积量加入3-5%的醋酸铅，搅拌0.5-1h，再按水相体积量加入2-4%的碳酸氢钠，搅拌0.5-1h，静置1-2h，搅拌1-2min，用200目滤网过滤。
8、萃取：得到的滤液加入盐酸调节PH值至5-6，用正丁醇萃取2-3次，合并萃取液浓缩至1/4体积。
9、吸附：得到的正丁醇浓缩液，缓慢通过硅胶吸附柱，流速控制在每小时0.2-0.5个柱体积，吸附比控制在1:20（***酮有效量：硅胶）。
10、水洗：吸附完全后，用PH值5-6的水溶液洗涤，再用PH值6.5-7.5的水溶液洗涤，最后用PH值7-8的水溶液洗涤，收集PH值7-8的水溶液浓缩至体积的1/6，加入一定量的碳酸氢钠，搅拌均匀。
11、柱层析：得到的浓缩液通过柱层析分离，收集浓缩***黄酮段。
本发明的优点：本发明不仅保护了***黄酮中的活性成分，同时还具有提取完全、产物易分离、投料量大、运行成本低等特点；制备得的***黄酮成分齐全，且制备工艺简单易控制。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
本具体实施方式采用以下技术方案：
1、前处理：取一定量的***花叶晾晒至含水量15-20%，用脱叶机脱去叶柄，脱去叶柄的碎叶用40目筛网粉碎。
2、提取：取2kg的花叶颗粒加入5倍量40%的甲醇水溶液，升温至85℃，提取3h，提取2次。
3、浓缩：合并提取液，减压浓缩至3L。
4、醇沉：得到的浓缩液加入15L的工业乙醇，放置8h沉淀。
5、过滤：待沉淀完全后，取上清液用200目滤网过滤。
6、萃取：分离得到的滤液浓缩至3L左右，加入2倍量的正己烷萃取，萃取3次，合并萃取液浓缩抽干；萃取后的水相再加入2倍量正丁醇萃取1次，合并正丁醇萃取液浓缩抽干。
7、沉降：萃取后的水相加入100g醋酸铅，搅拌0.5-1h，再加入80g的碳酸氢钠，搅拌0.5-1h，静置2h；搅拌1min，用200目滤网过滤。
8、萃取：得到的滤液加入5%的盐酸调节PH值至5-6，加入2倍量的正丁醇萃取2次，合并萃取液浓缩至500ml。
9、吸附：得到的正丁醇浓缩液，缓慢通过2L柱体积的硅胶吸附柱，流速控制在每小时400ml。
10、水洗：吸附完全后，用5LPH值5-6的水溶液洗涤，再用4L PH值6.5-7.5的水溶液洗涤，最后用6LPH值7-8的水溶液洗涤，收集PH值7-8的水溶液浓缩至1L，加入50g碳酸氢钠，搅拌均匀。
11、柱层析：得到的浓缩液通过柱层析分离，收集浓缩***黄酮段。
所制得的***黄酮含量表：
***黄酮成分 含量(mg/g)
***黄素A 90
***黄素B 40
***黄素C 30
木犀草素 120
荭草苷 140
芹菜素 100
槲皮素 100
牡荆素、异牡荆素 80
芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷酸 50
木犀草素-7-O-β- 的 D-葡糖苷酸 70
山柰酚 3-O-槐糖苷 30
6-异戊烯基芹菜素 25
实验中得到的***黄酮组分全面，杂质含量极低，提取纯化工艺具有提取完全、提取量大、分离完全、低毒、低残留等优点，该工艺方法非常适合大批量生产。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1, 前处理：花叶晒干，脱去叶柄，粉碎；
步骤2，提取：用甲醇水溶液提取；
步骤3，浓缩：收集提取液浓缩至1/5体积；
步骤4，醇沉：得到的浓缩液加入一定量的乙醇溶液，放置一定时间沉淀；
步骤5，过滤：待沉淀完全后，过滤；
步骤6，萃取：分离得到的滤液用正己烷萃取，萃取后的水相再用正丁醇萃取；
步骤7，沉降：萃取后的水相加入铅盐，搅拌一段时间后，再加入一定量的碳酸氢钠，搅拌一定时间后放置，过滤；
步骤8，萃取：得到的滤液加入盐酸调节PH值，用正丁醇萃取；
步骤9，吸附：得到的正丁醇相用凝胶吸附过滤；
步骤10，水洗：吸附完全后用不同PH的水溶液洗涤；
步骤11，柱层析：得到的洗涤液加入一定量碳酸氢钠，浓缩至1/6体积；得到的浓缩液上柱层析进行分离。
2.根据权利要求1所述的一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤1中的***花叶晾晒后含水量应控制15%左右，粗碎后颗粒控制在30目左右。
3.根据权利要求1所述的一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤2中用于提取的甲醇水溶液为20-50%，提取次数为2-5次。
4.根据权利要求1所述的一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤4中加入的乙醇溶液酒精度不低于80%，加入量为浓缩液体积的3-5倍，放置沉降时间为6-18h。
5.根据权利要求1所述的一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤6中分离得到滤液用正己烷萃取3-5次，正己烷萃取后的水相用正丁醇萃取1-2次。
6.根据权利要求1所述的一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤7中萃取后的水相按体积量加入3-5%的醋酸铅，搅拌0.5-1h，再按水相体积量加入2-4%的碳酸氢钠。
7.根据权利要求1所述的一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤8中得到的滤液加入盐酸调节PH值至5-6，用正丁醇萃取2-3次。
8.根据权利要求1所述的一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤9中所用的吸附凝胶为硅胶。
9.根据权利要求1所述的一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤10中洗涤所用的水溶液PH值分别为5-6、7、8-9。
10.根据权利要求1所述的一种提取及纯化***黄酮的方法，其特征在于，所述的步骤11中所用的分离树脂型号为LSA－33。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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EP4147705A1 (en) * 2021-09-14 2023-03-15 Marcel De Wit Method for obtaining bioactive components from a cannabinoid-poor and/or terpene-poor waste stream comprising cannabis flower and/or cannabis leaf material

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