CN112703204A - 针对可溶性bcma的抗体 - Google Patents

针对可溶性bcma的抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN112703204A
CN112703204A CN201980056983.1A CN201980056983A CN112703204A CN 112703204 A CN112703204 A CN 112703204A CN 201980056983 A CN201980056983 A CN 201980056983A CN 112703204 A CN112703204 A CN 112703204A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
sbcma
seq
depicted
monoclonal antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201980056983.1A
Other languages
English (en)
Inventor
A·凯尔泽斯卡
B·陈
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Amgen Inc
Original Assignee
Amgen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Amgen Inc filed Critical Amgen Inc
Publication of CN112703204A publication Critical patent/CN112703204A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57426—Specifically defined cancers leukemia
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/82—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving vitamins or their receptors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Abstract

本发明涉及与可溶性BCMA(sBCMA)结合的抗体。此外，本发明涉及包含此类抗体的检测***。这些抗体或检测***可以用于检测或定量sBCMA，用于诊断与sBCMA有关的疾病，用于患者分层、监测疾病进展以及评价治疗反应。

Description

针对可溶性BCMA的抗体
技术领域
本发明涉及与可溶性BCMA(sBCMA)结合的抗体。此外，本发明涉及包含此类抗体的检测***。这些抗体或检测***可以用于检测或定量sBCMA，用于诊断与sBCMA有关的疾病，用于患者分层、监测疾病进展以及评价治疗反应。
通过引用并入以电子方式提交的材料
通过引用以其全文并入的是与本文同时提交的计算机可读核苷酸/氨基酸序列表，其鉴定如下：名称为“53500A_Seqlisting.txt”的34,276字节ASCII(文本)文件；创建于2019年9月27日。
背景技术
多发性骨髓瘤(MM)是一种赘生性浆细胞病，其特征在于骨髓微环境中的恶性浆细胞的克隆增殖、血液或尿中的单克隆蛋白和相关的器官功能障碍。多发性骨髓瘤(MM)几乎占所有癌症的2％，占血液***恶性肿瘤的20％(SEER)。尽管最近对骨髓瘤发病机制的理解的改进开发了新的治疗方法并提高了生存率，多发性骨髓瘤仍然是无法治愈的癌症。治疗方法包括被设计成对支持肿瘤细胞存活和增殖的信号传导通路进行抑制的分子靶向疗法。一种这样的靶标是B细胞成熟抗原，其在恶性浆细胞上比在正常浆细胞上以相对更高的水平大量表达，并通过其配体APRIL和BAFF的结合诱导增殖信号。
B细胞成熟抗原(BCMA、TNFRSF17、CD269)是属于TNF受体超家族的跨膜蛋白。BCMA表达在晚期浆细胞分化期间选择性诱导，并且在天然和记忆B细胞中不存在。在BCMA与其配体、B细胞激活因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)结合后，促进了骨髓浆细胞和浆母细胞的存活。BCMA不能维持正常的B细胞稳态，但它是长寿命浆细胞的存活所必需的。BCMA的mRNA表达在恶性浆细胞障碍中高度升高。相比之下，正常组织中的BCMA mRNA表达非常低并且限于正常长寿命浆细胞所在的淋巴组织。据报道，BCMA蛋白表达仅局限于浆细胞，并且仅限于浆母细胞和长寿浆细胞，在其他正常人体组织上无法检测到。与MM患者的正常浆细胞相比，BCMA在大多数恶性浆细胞中以相对更高的水平表达。T细胞和骨髓细胞或CD34+造血干细胞均不表达BCMA。BCMA在大多数恶性浆细胞中的选择性表达使其成为对于以抗体为基础和以嵌合抗原受体(CAR)为基础的疗法而言非常有吸引力的靶。有MM患者的BCMA阴性特征的报道表明，靶向疗法可能需要进行患者选择。BCMA的检测可能不限于蛋白质表达。最近的研究表明，血清BCMA的变化可能是MM患者治疗反应或疾病进展的生物标志物。
BCMA可以从细胞表面脱落，并在多发性骨髓瘤患者以及健康受试者的血清样本中找到。最近的出版物证明可溶性BCMA(sBCMA)水平与骨髓活检中浆细胞的比例、临床状态相关，并且可以通过M-蛋白水平的变化进行追踪。在这项研究中，健康供体的sBCMA血液中值浓度与完全缓解患者中观察到的中值水平相似。冒烟型多发性骨髓瘤患者的浓度较高，而活动性未治疗的多发性骨髓瘤患者的水平最高。与sBCMA水平高于中值的患者相比，sBCMA水平低于中值的患者的无进展生存期更长。sBCMA水平的变化可能是MM患者治疗功效的快速可靠指标。可溶性BCMA可用于预测或监测疾病进展，因为这种生物标志物可以在患有非分泌性疾病的低肿瘤负荷患者中检测到，并且与肾功能无关。
因此，迫切需要提供一种可靠的用于生物样本sBCMA的检测***，所述检测***具有高灵敏度、可重复性，并且在潜在干扰性治疗性sBCMA结合分子(如抗体或抗体构建体)的存在下理想地提供稳定的结果。
附图说明
图1A-1C描绘了根据实例1进行的测定的设置。图1A示出了使用BCMA检测/定量ELISA试剂盒测试治疗性抗BCMA ab的潜在干扰的测定设置。图1B示出了在单克隆治疗性抗sBCMA抗体的存在下，针对BCMA结合来筛选
Figure BDA0002950082390000021
抗BCMA杂交瘤中使用捕获和检测抗体的三种不同的Octet形式。图1C示出了针对治疗性抗BCMA ab夹心来筛选兔血清的测定设置。
图2示出了在Octet测定中针对治疗性抗BCMA Ab(Ther-Ab2)夹心的两种兔单克隆抗sBCMA Ab(sBCMA-mAb1和sBCMA-mAb2)的表征(参见实例2a)。
图3示出了Octet测定的结果，表明兔单克隆抗sBCMA-mAb3能够进行sBCMA-mAb1和治疗性抗BCMA抗体Ther-Ab2夹心(参见实例2c)。
图4示出了Octet测定的结果，证实了图3所示的结果(参见实例2c)。
图5示出了经由Biacore对兔单克隆抗sBCMA夹心mAb(sBCMA-mAb1、-mAb2和-mAb3)进行亲和力确定的结果(参见实例3)。
发明内容
为了产生用于检测sBCMA的抗体对，本发明人筛选了约400种针对BCMA产生并且在BCMA结合的ELISA测定中测试为阳性的
Figure BDA0002950082390000031
杂交瘤。但是，即使在测试抗体捕获和检测的使用的不同格式时，在与sBCMA结合的单克隆抗体的存在下对这些
Figure BDA0002950082390000032
杂交瘤的筛选也没有鉴定出任何夹心抗体(参见图1B)。接下来，进行兔免疫活动，并针对与sBCMA结合的单克隆抗体夹心对兔血清进行筛选。在当前情况下，使用兔来产生抗体的优点是：
-不同的抗体组库，不同的表位空间(无竞争)
-强烈的免疫应答
-基于基因转换的免疫***，比啮齿动物更高的体细胞超突变率，从而具有很高的亲和力
可以证明存在三种夹心抗体(在针对sBCMA的共226种兔抗体中)。显示了其中两个(sBCMA-mAb1和sBCMA-mAb2)彼此竞争结合sBCMA。它们都能够在治疗性抗BCMA抗体构建体存在下与sBCMA结合。进一步显示，在sBCMA-mAb1和治疗性抗BCMA抗体构建体同时存在的情况下，抗体sBCMA-mAb3与sBCMA结合。
因此，本发明一方面提供了与可溶性BCMA(sBCMA)结合的单克隆抗体(或抗体构建体)，其中该抗体(或抗体构建体)与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)的存在下发生。本发明还提供了在与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)的存在下与可溶性BCMA(sBCMA)结合的单克隆抗体(或抗体构建体)。
在下文中，每当使用术语“单克隆抗体”(即与sBCMA结合的单克隆抗体)时，该术语意味着还涵盖“抗体构建体”或“抗体片段”，它们将在下文中定义。此外，以下提供的本发明“单克隆抗体(或抗体构建体)”(即与sBCMA结合的单克隆抗体或抗体构建体)的定义和说明类似地适用于本发明的任何“第一单克隆抗体(或抗体构建体)”以及本发明的任何“第二单克隆抗体(或抗体构建体)”。
“抗体”(有时也称为免疫球蛋白)是与其靶标免疫特异性地结合的蛋白质。抗体通过其可变区识别被称为抗原的唯一靶标。“抗体”可以是任何免疫球蛋白同种型，包括IgG(包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亚型)、IgA(包括IgA1和IgA2亚型)、IgM和IgE。术语“抗体”可以包括例如单克隆抗体、嵌合抗体、重组抗体、去免疫抗体、亲和性成熟抗体、人源化抗体和人抗体，以及来自诸如啮齿动物、兔、小鼠、大鼠、仓鼠、山羊等其他物种的抗体。抗体可以仅衍生自单一来源，或者可以是“嵌合的”，也就是说，抗体的不同部分(如CDR、框架区、可变区、恒定区)可以衍生自两种不同的抗体。根据本发明的“抗体”的定义包括全长抗体，还包括通过生物技术或蛋白质工程方法或过程产生的骆驼抗体和其他免疫球蛋白。抗体也可以在杂交瘤中产生。
完整的IgG抗体通常包含两条全长重链和两条全长轻链。“轻链”包括具有一个结构域的可变区(“VL”)和具有一个结构域的恒定区(“CL”)。轻链的可变区位于多肽的氨基末端。轻链包括κ链和λ链。“重链”包括具有一个结构域的可变区(“VH”)和具有——在完整IgG抗体的情况下——三个结构域的恒定区(“CH”)：CH1、CH2和CH3。VH位于多肽的氨基末端处，并且CH结构域位于羧基末端处，其中CH3最接近该多肽的羧基末端。
在经典的全长抗体或免疫球蛋白中，每条轻(L)链通过一个共价二硫键与重(H)链连接，而两条H链通过一个或多个二硫键彼此连接，这取决于H链同种型。通常将最靠近VH的重链恒定(CH)结构域命名为CH1。恒定(“C”)结构域不直接参与抗原结合，但表现出各种效应子功能，如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体激活(补体依赖性细胞毒性，CDC)。抗体的Fc区是经典抗体的“尾部”区域，其与被称为Fc受体的细胞表面受体和补体***的一些蛋白质相互作用。在IgG、IgA和IgD抗体同种型中，Fc区由从抗体的两条重链的第二和第三恒定结构域(CH2和CH3)衍生的两个相同的蛋白质片段构成。IgM和IgE Fc区在每条多肽链中含有三个重链恒定结构域(CH2、CH3和CH4)。Fc区还含有通过一个或多个二硫键和非共价相互作用保持在一起的所谓“铰链”区的部分。天然存在的IgG的Fc区具有高度保守的N-糖基化位点。Fc片段的糖基化是Fc受体介导的活性所必需的。
设想本发明的单克隆抗体可以是IgG、IgD、IgE、IgM或IgA抗体。根据一个实施例，该单克隆抗体是IgG抗体，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。该抗体的同种型和亚类可以是兔的(例如，兔IgG、兔IgG1等)。
在本发明的上下文中，术语“可变”是指抗体或免疫球蛋白结构域表现出其序列可变性并且参与确定特定抗体的特异性和结合亲和力的那些部分(即“一个或多个可变区”)。通常，重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的配对在一起形成单个抗原结合位点。
可变性在整个抗体的可变区中并非均匀分布；它集中在重链可变区和轻链可变区中的每一个的子结构域中。这些子结构域称为“超变区”或“互补决定区”(CDR)。可变区的更保守的(即非超变)部分被称为“框架”(FR)区，并且为三维空间中的六个CDR提供支架以形成抗原结合表面。天然存在的抗体重链和轻链的可变区各自包含主要采用β-折叠构型的四个FR区(FR1、FR2、FR3和FR4)。它们与CDR一起在可变重链或轻链内形成以下序列：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。每条链中的超变区通过框架区紧密靠近在一起，并通常与来自另一条链的超变区一起有助于抗原结合位点的形成(参见Kabat等人,Sequences ofProteins of Immunological Interest.[具有免疫学意义的蛋白质序列]贝塞斯达,美国国立卫生研究院.1991)。
术语“CDR”及其复数“CDR”是指其中三个构成轻链可变区(CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)的结合特征并且三个构成重链可变区(CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)的结合特征的互补决定区。CDR包含大多数负责抗体(或抗体构建体或结合结构域)与抗原的特异性相互作用的残基，并且因此有助于抗体分子的功能活性：它们是抗原特异性的主要决定簇。CDR边界和长度的准确定义受制于不同的分类和编号***。因此，CDR可以通过Kabat、Chothia、contact或任何其他边界定义(包括本文所述的编号***)来引用。尽管有不同的边界，但这些***中的每一者在构成可变序列内所谓的“高变区”的方面具有一定程度的重叠。因此，根据这些***的CDR定义可以相对于相邻框架区在长度和边界区域方面不同。参见例如Kabat(一种基于种间序列变异性的方法)，Chothia(一种基于对抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法)和/或MacCallum(Kabat等人,同前文献；Chothia等人,J.Mol.Biol[分子生物学杂志],1987,196:901-917；及MacCallum等人.,J.Mol.Biol[分子生物学杂志],1996,262:732)。表征抗原结合位点的还另一标准是由牛津大学分子公司(Oxfbrd Molecular)的AbM抗体建模软件使用的AbM定义。参见例如，Protein Sequence and Structure Analysisof Antibody Variable Domains[抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析]在：AntibodyEngineering Lab Manual[抗体工程实验室手册](编辑：Duebel,S.和Kontermann,R.，施普林格出版社(Springer-Verlag)，海德尔堡)。就两种残基鉴定技术定义重叠区而非相同区而言，可以将它们组合以定义杂合CDR。然而，根据所谓的Kabat***进行编号是优选的。
典型地，CDR形成可以分类为规范结构的环结构。术语“规范结构”是指由抗原结合(CDR)环所采用的主链构象。从比较结构研究中，已经发现六个抗原结合环中的五个仅具有有限的可用构象组库。每个规范结构可以通过多肽骨架的扭转角来表征。因此，在抗体之间的相应环可以具有非常相似的三维结构，尽管在环的大部分种具有高的氨基酸序列可变性(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],1987,196:901；Chothia等人,Nature[自然],1989,342:877；Martin和Thornton,J.Mol.Biol[分子生物学杂志],1996,263:800)。此外，所采用的环结构与其周围的氨基酸序列之间存在关系。特定规范类别的构象由环的长度和位于环内以及保守框架内(即，环外)关键位置的氨基酸残基决定。因此，可以基于这些关键氨基酸残基的存在来进行对特定规范类别的分配。
术语“规范结构”还可以包括关于抗体的线性序列的考虑因素，例如，如通过Kabat(Kabat等人,上述引文)编目的。Kabat编号方案(***)是以一致方式对抗体可变区的氨基酸残基进行编号的广泛采用的标准，并且是本发明应用的优选方案，也如本文其他地方所提及。另外的结构考虑因素也可以用于确定抗体的规范结构。例如，Kabat编号未完全反映的那些差异可以通过Chothia等人的编号***来描述，和/或通过其他技术(例如结晶学和二维或三维计算建模)来揭示。因此，可以将给定抗体序列置于规范的类别中，该类别尤其允许鉴定适当的类别序列(例如，基于在文库中包括多种规范结构的期望)。文献中描述了抗体氨基酸序列的Kabat编号和如由Chothia等人，上述引文所述的结构考虑因素以及其对解释抗体结构的规范方面的意义。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型在本领域中是熟知的。有关抗体结构的综述，请参阅Antibodies:A Laboratory Manual[抗体：实验室手册],Cold Spring Harbor Laboratory[冷泉港实验室],Harlow等人编辑，1988。
轻链的CDR3以及特别是重链的CDR3可以构成轻链可变区和重链可变区内抗原结合中最重要的决定簇。在一些抗体、抗体构建体或结合结构域中，重链CDR3似乎构成抗原与抗体之间的主要接触区域。其中仅仅改变CDR3的体外选择方案可以用于改变抗体或抗体构建体/结合结构域的结合特性或确定哪些残基有助于抗原的结合。因此，CDR3典型地是抗体结合位点内分子多样性的最大来源。例如，CDR-H3可以短至两个氨基酸残基或大于26个氨基酸。
组装和体细胞突变后的抗体基因的序列高度改变，并且估计这些改变的基因编码1010种不同抗体分子(Immunoglobulin Genes[免疫球蛋白基因],第2版,Jonio等人编辑,Academic Press[学术出版社],San Diego,CA[加利福尼亚州圣地亚哥],1995)。因此，免疫***提供了免疫球蛋白组库。术语“组库”是指完全或部分衍生自至少一种编码至少一种免疫球蛋白的序列的至少一种核苷酸序列。一种或多种序列可以通过重链的V、D和J区段以及轻链的V和J区段的体内重排来产生。可替代地，一种或多种序列可以响应于发生重排，例如体外刺激而从细胞产生。可替代地，一种或多种序列的一部分或全部可以通过DNA剪接、核苷酸合成、诱变和其他方法获得，参见例如美国专利5,565,332。组库可以仅包括一种序列或可以包括多种序列，包括遗传多样性集合中的序列。
设想本发明的抗体(和抗体构建体)是单克隆的。如本文使用的，命名为“单克隆”(mAb)的抗体或抗体构建体获自基本上同质的抗体/抗体构建体的群体，即除了可以以少量存在的可能的天然发生的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)之外，在群体中包含的各个抗体/抗体构建体是相同的(具体地，关于它们的氨基酸序列)。与典型地包括针对不同决定簇(或表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，单克隆抗体/抗体构建体针对抗原内的单一表位具有高度特异性。除了它们的特异性之外，单克隆抗体还在它们通过杂交瘤培养物合成，因此不被其他免疫球蛋白污染方面是有优势的。修饰语“单克隆”指示获得自基本上均质的抗体/抗体构建体群体的抗体/抗体构建体的特征，并且不应理解为要求通过任何特定方法产生抗体。
对于单克隆抗体的制备，可以使用提供由连续细胞系培养物产生的抗体的任何技术。例如，将要使用的单克隆抗体/抗体构建体可以通过Koehler等人,Nature[自然],256:495(1975)首次描述的杂交瘤方法，或可以通过重组DNA方法(参见，例如美国专利号4,816,567)制备。用于产生人单克隆抗体的另外技术的实例包括三源杂交瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor,Immunology Today[今日免疫学]4(1983),72)和EBV-杂交瘤技术(Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy[单克隆抗体和癌症治疗],Alan R.Liss公司(1985),77-96)。
然后可以使用标准方法(如酶联免疫吸附测定(ELISA)和表面等离子体共振(BIACORETM)分析筛选杂交瘤，以鉴定一种或多种产生与指定抗原免疫特异性地结合的抗体/抗体构建体的杂交瘤。任何形式的相关抗原均可以用作免疫原，例如重组抗原、天然存在形式、嵌合抗原、该抗原的任何变体或片段以及其抗原肽。如在BIAcoreTM***中采用的表面等离子体共振可以用于增加与靶抗原的表位结合的噬菌体抗体/抗体构建体的效率(Schier,Human Antibodies Hybridomas[人抗体杂交瘤]7(1996),97-105；Malmborg,J.Immunol.Methods[免疫学方法杂志]183(1995),7-13)。
另一种制备抗体、抗体构建体或结合结构域的示例性方法包括筛选蛋白质表达文库，例如噬菌体展示或核糖体展示文库。噬菌体展示例如描述于以下中：Ladner等人,美国专利号5,223,409；Smith(1985)Science[科学]228:1315-1317；Clackson等人,Nature[自然],352:624-628(1991)和Marks等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],222:581-597(1991)。
除了使用展示文库之外，还可以使用相关抗原来免疫非人动物，例如啮齿动物(如小鼠、仓鼠、兔或大鼠)。在一个实施例中，非人动物包括人免疫球蛋白基因的至少一部分。例如，可能利用人Ig(免疫球蛋白)基因座的大片段来工程化小鼠抗体产生缺陷的小鼠品系。使用杂交瘤技术，可以产生并选择衍生自具有所希望的特异性的基因的抗原特异性单克隆抗体。参见，例如XenomouseTM；Green等人(1994)Nature Genetics[自然遗传学]7:13-21；US 2003-0070185；WO 96/34096和WO 96/33735。
单克隆抗体也可以获得自非人动物，并且然后使用本领域中已知的重组DNA技术进行修饰，例如人源化、去免疫、呈现嵌合等。经修饰的抗体构建体或结合结构域的实例包括非人抗体/抗体构建体的人源化变体、“亲和力成熟”抗体构建体或结合结构域(参见，例如Hawkins等人J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]254,889-896(1992)以及Lowman等人,Biochemistry[生物化学]30,10832-10837(1991))以及具有改变的效应子功能的抗体变体或突变体(参见，例如美国专利5,648,260；Kontermann和Dübel(2010),上述引文；以及Little(2009),上述引文)。
在免疫学中，亲和力成熟是这样的过程：通过该过程，在免疫应答的过程中B细胞产生与抗原的亲和力增加的抗体。由于反复暴露于相同的抗原，宿主会产生依次更大亲和力的抗体。如天然原型一样，体外亲和力成熟是基于突变和选择的原则。体外亲和力成熟已成功用于优化抗体、抗体片段、抗体变体、抗体构建体或结合结构域。使用辐射、化学诱变剂或易错PCR在CDR内引入随机突变。此外，遗传多样性可以通过链改组来增加。使用展示方法(如噬菌体展示)进行两轮或三轮突变和选择通常产生具有低纳摩尔范围内的亲和力的抗体、抗体片段、抗体变体、抗体构建体或结合结构域。
还考虑了本文所述的抗体(或抗体构建体)的氨基酸序列修饰。例如，可能需要改善该抗体的结合亲和力和/或其他生物特性。抗体的氨基酸序列变体通过肽合成或通过将适当的核苷酸改变引入编码该抗体的核酸分子中来制备。所有下面描述的氨基酸序列修饰都应产生保留未修饰亲本分子(与sBCMA结合)所希望的生物学活性的抗体。
术语“氨基酸”或“氨基酸残基”典型地是指具有其本领域公认的定义的氨基酸，如选自下组的氨基酸，该组由以下组成：丙氨酸(Ala或A)；精氨酸(Arg或R)；天冬酰胺(Asn或N)；天冬氨酸(Asp或D)；半胱氨酸(Cys或C)；谷氨酰胺(Gln或Q)；谷氨酸(Glu或E)；甘氨酸(Gly或G)；组氨酸(His或H)；异亮氨酸(Ile或I)；亮氨酸(Leu或L)；赖氨酸(Lys或K)；蛋氨酸(Met或M)；苯丙氨酸(Phe或F)；脯氨酸(Pro或P)；丝氨酸(Ser或S)；苏氨酸(Thr或T)；色氨酸(Trp或W)；酪氨酸(Tyr或Y)；以及缬氨酸(Val或V)，尽管可以根据需要使用修饰的、合成的或稀有的氨基酸。基本上存在由不同的侧链决定的四种不同类别的氨基酸：
(1)非极性和中性(不带电荷)：Ala、Gly、Ile、Leu、Met、Phe、Pro、Val
(2)极性和中性(不带电荷)：Asn、Cys(仅微极性)、Gln、Ser、Thr、Trp(仅微极性)、Tyr
(3)酸性和极性(带负电荷)：Asp和Glu
(4)碱性和极性(带正电荷)：Arg、His、Lys
疏水性氨基酸可以根据它们是否具有脂肪族或芳香族侧链来分开。Phe和Trp(非常大的疏水性)、Tyr和His(较小疏水性)被分类为芳香族氨基酸。严格地说，脂肪族意指侧链仅含有氢原子和碳原子。通过这种严格的定义，具有脂肪族侧链的氨基酸是丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸(也是正亮氨酸)、脯氨酸和缬氨酸。丙氨酸的侧链非常短，意味着它不是特别具有疏水性，并且脯氨酸具有不寻常的几何形状，使其在蛋白质中起特殊作用。通常方便地将甲硫氨酸考虑为与异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸在同一类别，尽管它还含有硫原子。统一的主题是这些氨基酸主要含有非反应性和柔性侧链。通常将氨基酸丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸和苏氨酸分组在一起，原因是它们的大小全部都很小。Gly和Pro可能影响链取向。
氨基酸修饰包括，例如，单克隆抗体(抗体构建体)的氨基酸序列内残基的缺失、残基的***和/或残基的取代。进行缺失、***和/或取代的任何组合以获得最终的单克隆抗体(抗体构建体)，条件是最终的抗体拥有所希望的特征，例如，未经修饰的亲本分子的生物活性(如结合sBCMA)。氨基酸变化还可以改变抗体的翻译后过程，如改变糖基化位点的数目或位置。
例如，可以在每个CDR中***、缺失和/或取代1个、2个、3个、4个、5个或6个氨基酸(当然，取决于它们各自的长度)，而可以在每个FR中***、缺失和/或取代1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或25个氨基酸。氨基酸序列***还包括N末端和/或C末端氨基酸添加，其长度范围为例如从1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个残基至含有超过10个例如一百个或更多个残基的多肽，以及单个或多个氨基酸残基的序列内***。
对于氨基酸修饰(特别是对于氨基酸取代)最感兴趣的位点包括高变区，特别是重链和/或轻链的各个CDR，但是本文也考虑重链和/或轻链中的FR变化。该取代可以是如本文所述的保守取代。优选地，可以在CDR中取代1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸，而可以在框架区(FR)中取代1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或25个氨基酸，这分别取决于CDR或FR的长度。例如，如果CDR序列涵盖6个氨基酸，则设想这些氨基酸中的1个、2个或3个被取代。类似地，如果CDR序列涵盖15个氨基酸，则设想这些氨基酸中的1个、2个、3个、4个、5个或6个被取代。
用于鉴定作为优选诱变位置的单克隆抗体(抗体构建体)内的某些残基或区域的有用方法被称为“丙氨酸扫描诱变”，并且描述于例如Cunningham B.C.和Wells J.A.(Science[科学].1989年6月2日；244(4908):1081-5)中。此处，鉴定抗体内的残基或残基组(例如带电残基，如Arg、His、Lys、Asp和Glu)，并其将其用中性或非极性氨基酸(最优选地丙氨酸或聚丙氨酸)替代，以影响各个氨基酸与靶蛋白表位的相互作用。丙氨酸扫描是用于确定特定残基对给定蛋白质的稳定性或功能的贡献的技术。丙氨酸的使用是因为其具有非巨大的、化学惰性的甲基官能团，但仍然模仿许多其他氨基酸所具有的二级结构偏好。在需要突变残基大小保守的情况下，有时可以使用巨大的氨基酸(如缬氨酸或亮氨酸)。该技术还可以用于确定特定残基的侧链是否在生物活性中起重要作用。丙氨酸扫描通常通过定点诱变或随机通过创建PCR文库完成。此外，已经开发了基于理论丙氨酸取代来估计热力学参数的计算方法。可以通过IR/NMR光谱学、数学方法、生物测定等来测试数据。
然后，可通过在取代位点处或为取代位点引入另外的或其他变体来精确对取代展示功能敏感性的那些氨基酸位置(如例如通过丙氨酸扫描确定的)。因此，虽然用于引入氨基酸序列变化的位点或区域是预定的，但突变本身的性质无需预定。例如，为了分析或优化给定位点处突变的性能，可以在靶密码子或区域处进行丙氨酸扫描或随机诱变，并且筛选所表达的单克隆抗体/抗体构建体变体以获得所希望活性的最优组合。用于在具有已知序列的DNA中的预定位点进行取代突变的技术是熟知的，例如，M13引物诱变和PCR诱变。突变体的筛选通过例如使用本文所述的抗原(例如sBCMA)结合活性测定进行。
一般来讲，如果在重链和/或轻链/可变区的一个或多个或所有CDR中氨基酸被取代，则设想当时获得的“经取代的”序列与“原始”或“亲本”CDR序列是至少60％或65％、更优选70％或75％、甚至更优选80％或85％并且特别优选90％或95％相同的/同源的。这意味着原始序列与经取代的序列之间的同一性/同源性/相似性程度取决于CDR的长度。例如，总共具有5个氨基酸并且包含一个氨基酸取代的CDR与“原始”或“亲本”CDR序列是80％相同的，而总共具有10个氨基酸并且包含一个氨基酸取代的CDR与“原始”或“亲本”CDR序列是90％相同的。因此，本发明的单克隆抗体的经取代的CDR可以与其原始序列具有不同的同一性程度，例如，CDRL1可以具有80％的同源性，而CDRL3可以具有90％的同源性。相同的考虑适用于框架区和整个VH和VL区。
“变体CDR”是与本发明的亲本CDR具有特定序列同源性、相似性或同一性的CDR，并且与亲本CDR共享生物学功能，包括但不限于至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的亲本CDR的特异性和/或活性。一般来讲，各个变体CDR之间的氨基酸同源性、相似性或同一性为本文所描述的亲本序列的至少60％，并且更典型地具有至少65％或70％、优选至少75％或80％、更优选至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、并且最优选95％、96％、97％、98％、99％、和几乎100％的渐增的同源性、相似性或同一性。这同样适用于“变体VH”和“变体VL”。根据一个实施例，“变体VH”和/或“变体VL”内的序列变化不延伸至CDR。因此，本发明涉及如本文所定义的单克隆抗体(或抗体构建体)，该抗体构建体包含与本文所定义的特定序列(“亲本”VH和VL)具有某些序列同源性/同一性/相似性(参见上文)的VH和VL序列，其中这些CDR序列与本文所定义的特定CDR序列(“亲本”CDR)是100％相同的。
优选的取代(或替代)是保守取代。然而，设想了任何取代(包括非保守取代或来自下表1中列出的“示例性取代”中的一个或多个)，只要该单克隆抗体(抗体构建体)保留其与sBCMA结合的能力，和/或只要其CDR、FR、VH和/或VL序列与原始或亲本序列具有至少60％或65％、更优选地至少70％或75％、甚至更优选地至少80％或85％、并且特别优选地至少90％或95％的同一性程度即可。
保守替代(也称为保守突变或保守取代)是将给定氨基酸改变为具有相似的生物化学特性(例如电荷、疏水性、大小)的不同氨基酸的氨基酸取代。与非保守替代相比，蛋白质中的保守替代通常对蛋白质功能具有较小的影响。在表1中显示了保守取代。示例性保守取代显示为“示例性取代”。如果此类取代导致生物活性的变化，那么可以引入如本文中参考氨基酸类别进一步描述的更多实质性变化，并筛选产物的所希望的特征。
表1：氨基酸取代(aa＝氨基酸)
原始aa 保守取代 示例性取代
Ala(A) 小aa Gly、Ser、Thr
Arg(R) 极性aa，特别是Lys Lys、Gln、Asn
Asn(N) 极性aa，特别是Asp Asp、Gln、His、Lys、Arg
Asp(D) Glu或其他极性aa，特别是Asn Glu、Asn
Cys(C) 小aa Ser、Ala
Gln(Q) 极性aa，特别是Glu Glu、Asn
Glu(E) Asp或其他极性aa，特别是Gln Asp、Gln
Gly(G) 小aa，如Ala Ala
His(H) Asn、Gln、Arg、Lys、Tyr
Ile(I) 疏水性，特别是脂肪族aa Ala、Val、Met、Leu、Phe
Leu(L) 疏水性，特别是脂肪族aa 正亮氨酸、Ile、Ala、Val、Met
Lys(K) 极性aa，特别是Arg Arg、Gln、Asn
Met(M) 疏水性，特别是脂肪族aa Leu、Ala、Ile、Val、Phe
Phe(F) 芳香族或疏水性aa，特别是Tyr Tyr、Trp、Leu、Val、Ile、Ala
Pro(P) 小aa Ala
Ser(S) 极性或小aa，特别是Thr Thr
Thr(T) 极性aa，特别是Ser Ser
Trp(W) 芳香族aa Tyr、Phe
Tyr(Y) 芳香族aa，特别是Phe Phe、Trp、Thr、Ser
Val(V) 疏水性，特别是脂肪族aa Leu、Ile、Ala、Met、Phe
本发明的单克隆抗体(抗体构建体)的生物特性的实质性修饰是通过选择在保持以下的效应方面显著不同的取代来完成：(a)取代区域中的多肽骨架的结构，例如呈折叠或螺旋构象，(b)分子在靶位点的电荷或疏水性，或(c)侧链的大部分。非保守取代通常需要将上面所定义的氨基酸类别之一(如极性、中性、酸性、碱性、脂肪族、芳香族、小……)的成员交换为另一种类别。任何不参与维持抗体的适当构象的半胱氨酸残基通常可以被丝氨酸取代以改善该抗体的氧化稳定性。
氨基酸序列的序列同一性、同源性和/或相似性通过使用本领域已知的标准技术来确定，包括但不限于，Smith和Waterman,1981,Adv.Appl.Math.[应用数学进展]2:482的局部序列同一性算法，Needleman和Wunsch(J Mol Biol.[分子生物学杂志]1970年3月；48(3):443-53)的序列同一性比对算法，Pearson和Lipman(Proc Natl Acad Sci USA.[美国国家科学院院刊]1988年4月；85(8):2444-8)的相似性搜索法，这些算法的计算机实现(威斯康星遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，遗传学计算机集团(GeneticsComputer Group)，威斯康星州麦迪逊科学路575号)，Devereux等人描述的Best Fit序列程序(Nucleic Acids Res.[核酸研究]1984年1月11日；12(1Pt 1):387-95)，优选地使用默认设置，或通过检查。设想了百分比同一性通过FastDB基于以下参数来计算：错配罚分为1；空位罚分为1；空位大小罚分为0.33；以及连接罚分为30。还参见“Current Methods inSequence Comparison and Analysis[序列比较和分析的当前方法]”,MacromoleculeSequencing and Synthesis[大分子测序与合成],Selected Methods and Applications[所选择的方法与应用],第127-149页(1988),Alan R.Liss公司。
有用的算法的实例是PILEUP。PILEUP使用渐进式成对比对从一组相关序列中创建多序列比对。它还可以绘制显示用于创建比对的聚类关系的树形图。PILEUP使用Feng和Doolittle(J Mol Evol.[分子进化杂志]1987；25(4):351-60)的渐进式比对方法的简单化；该方法类似于由Higgins和Sharp(Comput Appl Biosci.[计算机在生物科学中的应用]1989年4月；5(2):151-3)所描述的方法。有用的PILEUP参数包括默认空位权重为3.00、默认空位长度权重为0.10、和加权末端空位。
有用的算法的另一实例是BLAST算法，描述于以下中：Altschul等人(J Mol Biol.[分子生物学杂志]1990年10月5日；215(3):403-10)；Altschul等人(Nucleic Acids Res.[核酸研究]1997年9月1日；25(17):3389-402)；以及Karlin和Altschul(Proc Natl AcadSci U S A.[美国国家科学院院刊]1993年6月15日；90(12):5873-7)。特别有用的BLAST程序是从Altschul等人(Methods Enzymol.[酶学方法]1996；266:460-80)获得的WU-Blast-2程序。WU-Blast-2使用多个搜索参数，其中大部分都设定为默认值。将可调整参数设置为以下值：重叠间隔＝1，重叠分数＝0.125，字阈值(T)＝II。HSP S和HSP S2参数是动态值，并且由程序本身根据特定序列的组成和特定数据库的组成来确立，根据该特定数据库来搜索感兴趣的序列；然而，可以调整这些值以增加灵敏度。
另外的有用算法是空位BLAST，如由Altschul等人(Nucleic Acids Res.[核酸研究]1997年9月1日；25(17):3389-402)报道的。空位BLAST使用BLOSUM-62取代评分；阈值T参数设定为9；触发非空位扩展的双击方法，对k的空位长度收取10+k的成本；Xu设定为16，并且Xg设定为40(用于数据库搜索阶段)以及67(用于算法的输出阶段)。空位比对由对应于约22比特的评分触发。
与此一致，关于编码本文鉴定的单克隆抗体(抗体构建体)的核酸序列的术语“核酸序列同一性/同源性/相似性的百分比(％)”被定义为候选序列中与该抗体的编码序列中的核苷酸残基相同的核苷酸残基的百分比。比对两个序列并从而确定它们的同源性的一种方法使用WU-Blast2(设定为默认参数)的BLASTN模块，其中重叠跨度和重叠分数分别设定为1和0.125。一般来讲，编码各个变体CDR的核苷酸序列与本文所描述的核苷酸序列之间的核酸序列同源性、相似性或同一性是至少60％，并且更典型地具有至少65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％和几乎100％的渐增的同源性、相似性或同一性。再次，这同样适用于编码“变体VH”和/或“变体VL”的核酸序列。
术语“抗体构建体”是指其中结构和/或功能是基于抗体(例如全长免疫球蛋白分子)的结构和/或功能的分子。因此，抗体构建体免疫特异性地结合其靶标或抗原，和/或其包含抗体的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，或包含由其衍生的结构域。根据本发明的抗体构建体包含允许免疫特异性靶标结合的抗体最小结构要求。这种最小要求可以例如通过至少三个轻链CDR(即VL区的CDR1、CDR2和CDR3)和/或三个重链CDR(即VH区的CDR1、CDR2和CDR3)、优选全部六个CDR的存在来定义。因此，抗体构建体的特征可能在于在结合结构域中存在三个或六个CDR，并且技术人员知道那些CDR在结合结构域内位于哪里(以什么顺序)。
根据本发明的术语“抗体构建体”还可以包含全长抗体的片段，如VH、VHH、VL、(s)dAb、Fv、轻链(VL-CL)、Fd(VH-CH1)、重链、Fab、Fab’、F(ab')2或“r IgG”(由重链和轻链组成的“半抗体”)。抗体片段可以通过完整抗体的酶促或化学切割来产生。根据本发明的抗体构建体还可以包含抗体的修饰的片段，也称为抗体变体或抗体衍生物。实例包括但不限于scFv、di-scFv或bi(s)-scFv、scFv-Fc、scFv-拉链、scFab、Fab2、Fab3、双抗体、单链双抗体、串联双抗体(Tandab)、串联di-scFv、串联tri-scFv、，，微型抗体“(其由如下结构示例：(VH-VL-CH3)2、(scFv-CH3)2、((scFv)2-CH3+CH3)、((scFv)2-CH3)或(scFv-CH3-scFv)2)、多体抗体如三抗体(triabody)或四抗体(tetrabody)、和单结构域抗体(如纳米抗体或仅包含一个可变区的单可变结构域抗体，该结构域可以是VHH、VH或VL，它独立于其他可变区或结构域而特异性结合抗原或靶标)。根据本发明的抗体构建体的其他可能形式是交叉体、最大体、杂Fc构建体、单Fc构建体和scFc构建体。那些形式的实例将在下文进行描述。
此外，术语“抗体构建体”的定义包括通过不同的结合结构域特异性地结合两个、三个或更多个抗原结构的二价和多价(polyvalent/multivalent)构建体以及双特异性和多特异性(polyspecific/multispecific)构建体。抗体构建体可以具有比特异性更多的结合价，例如在其中两个结合结构域针对一个靶标并且一个结合结构域针对另一个靶标(如CD3)或反之亦然的情况下，在这种情况下，构建体是三价的和双特异性的。通常，术语“双特异性”包括抗体构建体结合(至少)两种不同抗原。
此外，术语“抗体构建体”的定义包括仅由一条多肽链组成的分子以及由两条、三条、四条、或更多条多肽链组成的分子，这些链可以是相同的(同源二聚体、同源三聚体或同源寡聚物)或不同的(异源二聚体、异源三聚体或异源寡聚物)。上述鉴定的抗体及其片段、变体、衍生物和由其衍生的抗体构建体的实例尤其描述于Harlow和Lane,Antibodies:Alaboratory manual[抗体：实验室手册],CSHL Press[冷泉港实验室出版社](1988)；Kontermann和Dübel,Antibody Engineering[抗体工程],Springer[斯普林格出版社],第2版2010；以及Little,Recombinant Antibodies for Immunotherapy[用于免疫疗法的重组抗体],Cambridge University Press[剑桥大学出版社]2009。
术语“结合结构域”或“与……结合的结构域”与本发明相关地表征抗体/抗体构建体的结构域，其免疫特异性地与在靶标或抗原(此处：sBCMA)上的表位结合/相互作用/识别该表位。结合结构域的结构和功能是基于抗体的结构和/或功能，例如全长免疫球蛋白分子的结构和/或功能。因此，“结合结构域”或“与……结合的结构域”可以包含允许免疫特异性靶结合的抗体的最小结构要求。结合结构域的这种最小结构要求可以例如通过至少三个轻链CDR(即VL区的CDR1、CDR2和CDR3)和/或三个重链CDR(即VH区的CDR1、CDR2和CDR3)、优选全部六个CDR的存在来定义。“与……结合的结构域”(或“结合结构域”)典型地可以包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)；然而，它不必须包含两者，但可以包含VH或VL中的仅一者。例如，Fd片段通常保留完整抗原结合结构域的一些抗原结合功能。
“与……结合的结构域”(或“结合结构域”)的形式或抗体构建体的实例包括但不限于全长抗体、全长抗体的片段(如VH、VHH、VL、(s)dAb、Fv、轻链(VL-CL)、Fd(VH-CH1)、重链、Fab、Fab’、F(ab')2或“r IgG”(“半抗体”))、抗体变体或衍生物(如scFv、di-scFv或bi(s)-scFv、scFv-Fc、scFv-拉链、scFab、Fab2、Fab3、双抗体、单链双抗体、串联双抗体(Tandab)、串联di-scFv、串联tri-scFv、，，微型抗体“(选自如(VH-VL-CH3)2、(scFv-CH3)2、((scFv)2-CH3+CH3))、((scFv)2-CH3)或(scFv-CH3-scFv)2的形式))、多抗体(如三抗体或四抗体)、和单结构域抗体(如纳米抗体或仅包含一个可变区的单可变结构域抗体，该可变区可以是VHH、VH或VL)。“与……结合的结构域”(或“结合结构域”)的形式的其他实例包括(1)包含VL、VH、CL和CH1的抗体片段或变体(如Fab)；(2)包含两个连接的Fab片段的抗体片段或变体(如F(ab')2)；(3)包含VH和CH1的抗体片段或变体(如Fd)；(4)包含VL和CL的抗体片段或变体(如轻链)；(5)包含VL和VH的抗体片段或变体(如Fv)；(5)具有VH结构域的dAb片段(Ward等人,(1989)Nature[自然]341:544-546)；(6)包含重链和/或轻链的至少三个分离的CDR的抗体变体；和(7)单链Fv(scFv)。根据本发明的抗体构建体或结合结构域的实施例的实例例如描述于以下中：WO 00/006605、WO 2005/040220、WO 2008/119567、WO 2010/037838、WO 2013/026837、WO 2013/026833、US 2014/0308285、US 2014/0302037、WO 2014/144722、WO 2014/151910和WO 2015/048272。
在scFv中，VH区和VL区以VH-VL或VL-VH的顺序排列(从N末端至C末端)。设想VH区和VL区通过接头(优选地肽接头)连接。根据一个实施例，VH区位于接头的N末端，并且VL区位于接头的C末端。此外可能的是，抗体构建体的两个scFv结构域通过接头(优选地肽接头)连接。抗体构建体可以例如包含以第一结构域-接头-第二结构域的顺序(从N末端至C末端)的结构域。逆序(第二结构域-接头-第一结构域)也是可能的。
接头优选地是肽接头、更优选地是短肽接头。根据本发明，“肽接头”包含将抗体构建体的一个结构域的氨基酸序列与另一个(可变和/或结合)结构域(例如可变结构域或结合结构域)连接的氨基酸序列。这种肽接头的基本技术特征在于它不包含任何聚合活性。合适的肽接头是在美国专利4,751,180和4,935,233或WO 88/09344中描述的那些。肽接头也可用于将其他结构域或模块或区(如半衰期延长结构域)附接到本发明的抗体/抗体构建体。在本发明的上下文中，“短”接头具有在2个与50个之间的氨基酸，优选地在3个与35个之间、在4个与30个之间、在5个与25个之间、在6个与20个之间或在6个与17个之间的氨基酸。一个结合结构域的两个可变区之间的接头可以具有与两个结合结构域之间的接头不同的长度(例如，可以更长)。例如，一个结合结构域的两个可变区之间的接头可以具有7与15个氨基酸之间、优选地9与13个氨基酸之间的长度，并且两个结合结构域之间的接头可以具有3与10个氨基酸之间、优选地4与8之间的长度。进一步设想，该肽接头是甘氨酸/丝氨酸接头。在甘氨酸/丝氨酸接头中的大多数氨基酸选自甘氨酸和丝氨酸。
在使用接头连接具有不同结合特异性的两个结合结构域的情况下，该接头优选地具有足以确保每个结构域均可以彼此独立地保留其差异结合特异性的长度和序列。对于连接抗体构建体中的至少两个结合结构域(或形成一个结合结构域的两个可变区)的肽接头，设想包含仅少数几个氨基酸残基(例如12个氨基酸残基或更少)的那些肽接头。因此，12、11、10、9、8、7、6或5个氨基酸残基的肽接头是优选的。设想的具有少于5个氨基酸的肽接头包含4、3、2或1个氨基酸，其中富含Gly的接头是优选的。在所述“肽接头”的上下文中的“单个氨基酸”接头是Gly。肽接头的另一个实施例的特征在于氨基酸序列Gly4Ser，或其聚合物(即(Gly4Ser)x，其中x是1或更大(例如2或3)的整数)。所述肽接头的特征在本领域中是已知的并且描述于例如Dall’Acqua等人(Biochem.[生物化学](1998)37,9266-9273)、Cheadle等人(Mol Immunol[分子免疫学](1992)29,21-30)以及Raag和Whitlow(FASEB[美国实验生物学联合会会志](1995)9(1),73-80)中。不促进任何二级结构的肽接头是优选的。所述结构域彼此的连接可以例如通过基因工程提供。用于制备融合的且可操作地连接的双特异性单链构建体并在哺乳动物细胞或细菌中表达它们的方法是本领域中熟知的(例如WO 99/54440或Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册],Cold Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社],Cold SpringHarbor,New York[纽约冷泉港],2001)。
根据本发明的一个实施例，与sBCMA结合的本发明的抗体构建体可以是“单链抗体构建体”。尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由独立的基因编码，但使用重组方法可以将这两个结构域通过人工接头接合，如上文所述，该人工接头使它们能够制成单条蛋白质链，其中VL和VH区配对以形成单价分子；参见，例如Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA[美国国家科学院院刊]85:5879-5883。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并且按照与全长抗体或IgG相同的方式评价片段的功能。因此，单链可变片段(scFv)是免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)可变区的融合蛋白，通常用短接头肽连接。为了灵活性，接头通常富含甘氨酸，以及为了溶解性通常富含丝氨酸或还有苏氨酸，并且可以连接VH的N末端和VL的C末端，或反之亦然。尽管去除了恒定区并引入了接头，但该蛋白质保留了原始免疫球蛋白的特异性。
命名为“单结构域抗体”的抗体构建体包含一个(单体)抗体可变区，该抗体可变区能够独立于其他可变区选择性地结合特定抗原。第一单结构域抗体是从骆驼中发现的重链抗体工程化而来，并且这些被称为VHH片段。软骨鱼类也具有重链抗体(IgNAR)，可以从这些重链抗体中获得称为VNAR片段的单结构域抗体。替代性方法是将来自常见免疫球蛋白的二聚体可变区***成单体，因此获得VH或VL作为单结构域Ab。尽管对单结构域抗体的大多数研究目前都是基于重链可变区，但衍生自轻链的纳米抗体也显示出与靶表位特异性地结合。单结构域抗体的实例是所谓的sdAb、纳米抗体或单一可变结构域抗体。因此，(单结构域mAb)2是由单独地选自下组的(至少)两个单结构域单克隆抗体构建体构成的单克隆抗体构建体，该组由以下组成：VH、VL、VHH和VNAR。接头优选呈肽接头的形式。类似地，“scFv-单结构域mAb”是由至少一个如上所述的单结构域抗体和一个如上所述的scFv分子构成的单克隆抗体构建体。同样，接头优选呈肽接头的形式。
根据一个实施例，与sBCMA结合的抗体或抗体构建体是处于一种或多种多肽的形式或处于蛋白质的形式。除蛋白质部分外，此类多肽或蛋白质可包括非蛋白质部分(例如化学接头或化学交联剂，如戊二醛)。
肽是通过共价肽(酰胺)键连接的氨基酸单体的短链。因此，肽属于生物寡聚物和聚合物的广泛化学类别。作为肽或多肽链的一部分的氨基酸被称为“残基”并且可以被连续编号。除环肽外的所有肽在肽的一端具有N-末端残基，并且在另一端具有C-末端残基。寡肽仅由少数氨基酸(通常在两个至二十个之间)组成。多肽是更长、连续和无支链的肽链。基于尺寸，肽与蛋白质不同；并且作为任意基准，肽可以理解为含有大约50个或更少的氨基酸。蛋白质由一种或多种多肽组成，通常以生物功能方式排列。虽然应用于肽与多肽和蛋白质的实验室技术的各方面不同(例如，电泳、色谱等的特性)，但是区分肽与多肽和蛋白质的尺寸边界不是绝对的。因此，在本发明的上下文中，术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可互换地使用，并且术语“多肽”通常是优选的。
多肽可以进一步形成多聚体(如二聚体、三聚体和更高级的寡聚物)，由多于一个多肽分子组成。形成此类二聚体、三聚体等的多肽分子可以是相同的或不相同的。因此，此类多聚体的相应高阶结构被称为同或异二聚体、同或异三聚体等。异多聚体的实例是抗体或免疫球蛋白分子，其天然存在形式由两条相同的轻多肽链和两条相同的重多肽链组成。术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”还是指天然修饰的肽/多肽/蛋白质，其中修饰例如通过翻译后修饰(如糖基化、乙酰化、磷酸化等)来实现。当在本文中提及时，“肽”、“多肽”或“蛋白质”也可以是化学修饰的，如聚乙二醇化的。此类修饰在本领域中是熟知的并且在下文描述。
术语“(特异性或免疫特异性地)结合”、“(特异性或免疫特异性地)识别”、或“与……(特异性或免疫特异性地)反应”意指根据本发明，抗体、抗体构建体或结合结构域与靶分子(抗原)(本文中分别为sBCMA)上的给定表位相互作用或(免疫-)特异性地相互作用。这种相互作用或结合在特定靶上的表位中比在可替代的物质(非靶分子)中更频繁、更快速地发生，具有更长的持续时间、具有更大的亲和力、或者具有上述的一些组合。但是，由于不同物种中同源蛋白质之间的序列相似性，免疫特异性地结合其靶标(如人靶标)的抗体、抗体构建体或结合结构域可能与来自不同物种(如，来自非人灵长类动物)的同源靶分子交叉反应。因此，术语“特异性/免疫特异性结合”可以包括抗体、抗体构建体或结合结构域与多于一种物种中的表位或结构相关表位的结合。
在本发明的上下文中，术语“表位”是指被结合结构域、抗体或抗体构建体识别/免疫特异性地识别的抗原的部分或区域。“表位”是抗原性的，并且因此术语表位有时也称为“抗原结构”或“抗原决定簇”。与表位结合的结合结构域、抗体或抗体构建体的部分称为互补位。据信特异性结合是通过结合结构域、抗体或抗体构建体和抗原的氨基酸序列中的特定基序完成的。因此，由于其一级、二级和/或三级结构以及所述结构的可能的二次修饰的结果，实现了结合。互补位与其抗原决定簇的特异性相互作用可导致所述位点与抗原的简单结合。在一些情况下，特异性相互作用可以可替代地或另外地导致信号的引发，例如由于诱导抗原构象的变化、抗原的寡聚化等。
基于蛋白抗原的结构和与互补位的相互作用，蛋白抗原的表位分为两类(构象表位和线性表位)。构象表位由抗原氨基酸序列的不持续部分组成。这些表位基于抗原的三维表面特征和形状或三级结构(折叠)与互补位相互作用。确定表位构象的方法包括但不限于x射线晶体学、二维核磁共振(2D-NMR)光谱学和定点自旋标记和电子顺磁共振(EPR)光谱学。相反，线性表位基于其一级结构与互补位相互作用。线性表位由来自抗原的持续氨基酸序列形成，并且典型地在独特的序列中包含至少3个或至少4个、且更通常地至少5个或至少6个或至少7个，例如约8个至约10个氨基酸。
以下描述了用于BCMA表位作图的方法：在人BCMA蛋白的细胞外结构域内的预定义区域(通常是连续氨基酸延伸)与另一物种(如小鼠，但也可以设想其他物种，只要该抗体对该物种没有交叉反应性即可)的BCMA的相应区域交换/替代。这些人BCMA/小鼠(或其他物种)的BCMA嵌合体可以在宿主细胞(如CHO细胞)的表面上表达。可以经由FACS分析测试抗体或抗体构建体的结合。当完全消除抗体或抗体构建体与嵌合分子的结合时，或当观察到显著的结合降低时，可以得出结论，从此嵌合分子中除去的人BCMA区与免疫特异性表位-互补位识别相关。相比于与人(野生型)BCMA的结合，结合的所述降低优选地是至少10％、20％、30％、40％、或50％，更优选地是至少60％、70％、或80％，并且最优选地90％、95％或甚至100％，由此将与人BCMA的结合设定为100％。可替代地，可通过将一个或多个点突变引入BCMA的序列来修饰上述表位作图分析。这些点突变可以例如反映人BCMA与小鼠(或其他物种)BCMA之间的差异。
确定靶抗原的特定残基对抗体、抗体构建体或结合结构域的识别的贡献的另一种方法是丙氨酸扫描(参见例如Morrison KL&Weiss GA.Curr Opin Chem Biol.[化学生物学新见]2001年6月；5(3):302-7)，其中有待分析的每个残基例如经由定点诱变被丙氨酸替代。丙氨酸的使用是因为其具有非巨大的、化学惰性的甲基官能团，但仍然模仿许多其他氨基酸所具有的二级结构参考。在需要保守突变残基的大小的情形下，有时可以使用巨大的氨基酸(如缬氨酸或亮氨酸)。
单克隆抗体(或抗体构建体)与靶抗原的表位之间的相互作用意味着该可变区对表位/靶抗原(此处：sBCMA)表现出相当可观或显著的亲和力，并且通常对除靶抗原(此处：sBCMA)以外的蛋白质或抗原不表现出显著的亲和力——尽管上面论述过与例如来自其他物种的同源靶标的交叉反应。“显著亲和力”包括以约≤10-6M的亲和力(解离常数，KD)结合。优选地，当结合亲和力为约≤10-7M、≤10-8M、≤10-9M或≤10-10M时，认为结合是特异性的。因此，设想本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)对sBCMA的亲和力(KD)为约≤10-7M、≤10-8M、≤10-9M或≤10-10M。这些值优选地在表面等离振子体共振测定测量，如Biacore测定。参见实例3。
可以容易地测试单克隆抗体(或抗体构建体)(免疫-)与靶是否特异性地反应或结合，例如通过将所述抗体与其所希望的靶蛋白或抗原的亲和力与所述抗体与非靶蛋白或抗原(此处：sBCMA以外的蛋白质)的亲和力进行比较。优选地，本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)不与sBCMA以外的蛋白质或抗原特异性地结合——除非有意将针对另一个靶标的任何其他单个或多个结合结构域引入到本发明的抗体/抗体构建体中。术语“不特异性地结合”意指本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)不与sBCMA以外的蛋白质或抗原结合。因此，抗体构建体显示出≤30％、优选≤20％、更优选≤10％、特别优选≤9％、≤8％、≤7％、≤6％、≤5％、≤4％、≤3％、≤2％或≤1％的与除sBCMA以外的蛋白质或抗原的反应性，由此，与sBCMA的结合被设定为100％。“反应性”可以例如以亲和力值表达(参见上文)。设想本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)不与人BAFF-R和/或人TACI结合或者不与之特异性地结合、相互作用、识别、免疫特异性地结合或交叉反应。
本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)可以是“体外产生的抗体/抗体构建体”和/或“重组抗体/抗体构建体”。在本发明的上下文中，术语“体外产生的”是指根据上述定义的抗体/抗体构建体，其中可变区的全部或部分(例如，至少一个CDR)在非免疫细胞选择中(例如，在体外噬菌体展示中、在蛋白质芯片上或在其中可以测试候选氨基酸序列结合抗原的能力的任何其他方法中)产生。因此，这个术语优选地排除仅由动物免疫细胞中的基因组重排产生的序列。设想抗体(或抗体构建体)是通过噬菌体展示或文库筛选方法或者通过将来自预先存在的(单克隆)抗体的CDR序列移植到支架中产生或可获得的。“重组抗体/抗体构建体”是使用(尤其)重组DNA技术或基因工程产生或生产的抗体/抗体构建体。
本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的氨基酸取代变化的优选类型涉及取代亲本抗体结构的高变区内的一个或多个残基。一般来讲，选择用于进一步开发的一种或多种所得变体相对于产生它们的亲本抗体结构将具有改善的生物特性。用于产生此类取代变体的便利方式涉及使用噬菌体展示的亲和力成熟。简言之，将高变区的几个位点(例如6-7个位点)突变以在每个位点产生所有可能的氨基酸取代。由此产生的变体以单价方式从丝状噬菌体颗粒展示为与每个颗粒内包装的M13的基因III产物的融合物。然后如本文所披露那样筛选噬菌体展示的变体的生物活性(例如结合亲和力)。为了鉴定对抗原结合有显著贡献的候选高变区位点(修饰候选物)，还可以进行丙氨酸扫描诱变。可替代地或另外地，分析在抗原与抗体/抗体构建体或结合结构域之间的复合物的晶体结构以鉴定在抗体/抗体构建体结合结构域与其特异性抗原之间的接触点可能是有益的。根据本文阐述的技术，此类接触残基和相邻残基是用于取代的候选者。一旦产生了此类变体，就如本文所述对这组变体进行筛选，并且可以选择在一种或多种相关测定中具有优异特性的抗体、其抗原结合片段、抗体构建体或结合结构域用于进一步的开发。
本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)具体地包括“嵌合”形式(其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而一条或多条链的其余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源)，以及此类抗体的片段或变体，只要它们表现出希望的生物活性即可(美国专利号4,816,567；Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],81:6851-6855(1984))。本文感兴趣的嵌合抗体、抗体构建体或结合结构域包括“灵长类化”抗体，这些抗体包含衍生自非人灵长类动物(例如，旧大陆猴、猿等)的可变结构域抗原结合序列、和人恒定区序列。已经描述了多种用于制备嵌合抗体或抗体构建体的方法。参见，例如Morrison等人,Proc.Natl.Acad.ScL U.S.A.[美国国家科学院院刊]81:6851,1985；Takeda等人,Nature[自然]314:452,1985；Cabilly等人,美国专利号4,816,567；Boss等人,美国专利号4,816,397；Tanaguchi等人,EP 0171496；EP 0173494；和GB 2177096。
“人源化”单克隆抗体、其变体或片段、抗体构建体和结合结构域基于主要人序列的免疫球蛋白，这些主要人序列含有一个或多个衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。在大多数情况下，人源化抗体、其变体或片段、抗体构建体和结合结构域基于人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自高变区或CDR的残基被来自非人物种(供体抗体)(如具有所希望的特异性、亲和力、能力和/或生物活性的啮齿动物(例如，小鼠、仓鼠、大鼠、或兔))的高变区或CDR的残基替代。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被相应的非人类残基替代。此外，如本文使用的，“人源化”抗体、变体或其片段、抗体或其构建体和结合结构域还可以包含在受体抗体或供体抗体中均未发现的残基。进行这些修饰以进一步改进和优化抗体性能。人源化抗体、变体或其片段、抗体构建体和结合结构域还可以至少包含免疫球蛋白恒定区(如Fc)的一部分，典型地人免疫球蛋白的恒定区的一部分。对于更多的细节，参见Jones等人,Nature[自然],321:522-525(1986)；Reichmann等人,Nature[自然],332:323-329(1988)；和Presta，Curr.Op.Struct.Biol.[结构生物学新见],2:593-596(1992)。
人源化抗体、其变体或片段、抗体构建体和结合结构域可以通过用人(Fv)可变区的等效序列替代不直接参与抗原结合的(Fv)可变区的序列来产生。用于产生此类分子的示例性方法由以下提供：Morrison(1985)Science[科学]229:1202-1207；Oi等人(1986)BioTechniques[生物技术]4:214；以及US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,693,762；US 5,859,205；以及US 6,407,213。这些方法包括分离、操纵和表达编码来自重链或轻链中的至少一者的全部或部分免疫球蛋白(Fv)可变区的核酸序列。此类核酸可以获得自如上所述的产生针对预定靶的抗体的杂交瘤，以及其他来源。然后可以将编码人源化抗体、其变体或片段、抗体构建体或结合结构域的重组DNA克隆到合适的表达载体中。
人源化抗体、其变体或片段、抗体构建体和结合结构域还可以使用转基因动物(如表达人重链和轻链基因但不能表达内源性小鼠免疫球蛋白重链和轻链基因的小鼠)来产生。Winter描述了可用于制备本文所述的人源化分子的示例性CDR移植方法(美国专利号5,225,539)。特定人序列的全部CDR可以用至少一部分非人CDR替代，或者仅一些CDR可以用非人CDR替代。仅需要替代用于将人源化分子与预定抗原结合所需的CDR数量。
可以通过引入保守取代、共有序列取代、种系取代和/或回复突变来优化人源化抗体、其变体或片段、抗体构建体或结合结构域。此类改变的免疫球蛋白分子可以通过本领域已知的几种技术中的任何一种来制备(例如，Teng等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊],80:7308-7312,1983；Kozbor等人,Immunology Today[今日免疫学],4:7279,1983；Olsson等人,Meth.Enzymol.[酶学方法],92:3-16,1982，以及EP 239 400)。
根据一个实施例，该单克隆抗体(或抗体构建体)是“兔”。术语“兔抗体”、“兔抗体构建体”和“兔结合结构域”分别包括具有抗体衍生的区的抗体、抗体构建体和结合结构域，这些抗体衍生的区如基本上对应于本领域中已知的兔种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区或结构域。本发明的兔抗体构建体或结合结构域可以包含例如CDR中且特别是CDR3中不由兔种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。兔抗体、抗体构建体或结合结构域可以具有至少1个、2个、3个、4个、5个或更多个被不由兔种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基替代的位置。如本文使用的兔抗体、抗体构建体和结合结构域的定义还涵盖完全兔抗体、抗体构建体和结合结构域，这些完全兔抗体、抗体构建体和结合结构域仅包含非人工和/或遗传改变的兔抗体序列。
设想本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)是“分离的”或“基本上纯的”抗体。当用于描述本文披露的抗体时，“分离的”或“基本上纯的”意指抗体已从其产生环境的组分中鉴定、分离和/或回收。优选地，抗体不与或基本上不与来自其产生环境的所有其他组分缔合。其产生环境的污染组分(如由重组转染细胞产生的污染组分)是可以干扰例如抗体(或抗体构建体)的诊断用途的材料，并且可能包括酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质化合物。应当理解，根据情况，分离的或基本上纯的抗体(或抗体构建体)可以构成给定样本中总蛋白质/多肽含量的以重量计从5％至99.9％。通过使用诱导型启动子或高表达启动子，能以显著更高的浓度产生所希望的抗体(或抗体构建体)。该定义包括在本领域中已知的多种生物体和/或宿主细胞中产生抗体(或抗体构建体)。在某些实施例中，抗体(1)通过使用旋杯式序列分析仪纯化至足以获得至少15个N末端或内部氨基酸序列的残基的程度，或(2)可以通过SDS-PAGE在非还原或还原条件下使用考马斯蓝或优选银染色纯化至均质。然而，通常通过至少一个纯化步骤来制备分离的抗体或抗体构建体。
本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)与可溶性BCMA(sBCMA)结合。“可溶性BCMA”是膜结合的BCMA的切割片段。切割通过例如分泌酶进行，并且脱落的BCMA(sBCMA)从细胞表面释放出来。与健康个体相比，可溶性BCMA水平在MM患者中通常会增加，而在其他疾病患者中也会增加。此外，患者血清中的sBCMA水平可能与疾病状态和预后相关联。成功治疗与BCMA过表达或增加的sBCMA水平有关的疾病后，sBCMA水平也可以显著降低。设想sBCMA是人sBCMA。整个(膜结合的)人BCMA分子的氨基酸序列(B细胞成熟抗原，TNFRSF17，CD269)显示于SEQ ID NO:33中，并且人BCMA的细胞外结构域的氨基酸序列显示于SEQ ID NO:34中。该序列也对应于脱落的或可溶性BCMA。换言之，设想sBCMA具有如SEQ ID NO:34所描绘的氨基酸序列。
在本发明的上下文中，术语“结合在……的存在下发生”意指两种(或多种)抗体(或抗体构建体)同时与同一靶标(此处：sBCMA)结合。换言之，两种(或多种)抗体(或抗体构建体)(彼此)不竞争或不显著竞争结合靶标(此处：sBCMA)。根据一个实施例，这还可能意味着一种单克隆抗体(或抗体构建体)与sBCMA表位结合，该sBCMA表位不同于第二单克隆抗体或抗体构建体(或另外的第三抗体或抗体构建体，参见下文)的sBCMA表位。
根据本发明的一个方面，单克隆抗体(或抗体构建体)与sBCMA的结合除了在与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)的存在下发生之外，也在与sBCMA结合的第三抗体或抗体构建体的存在下发生。该第三抗体或抗体构建体可以是与BCMA的细胞外结构域结合的治疗性抗体或抗体构建体。
在本发明的一个实施例中，该第三抗体或抗体构建体与BCMA的表位簇3结合。更优选地，它结合人BCMA的表位簇3。人BCMA的表位簇3的氨基酸序列描述于SEQ ID NO:35中。具有结合所述BCMA的表位簇3的结构域的抗体构建体详细描述于WO 2013/072406中，将其内容通过引用特此并入。这些抗体构建体显示具有非常有益的表位/活性关系。设想如WO2013/072406所要求保护的，本发明的“第三抗体或抗体构建体”包含与BCMA结合并包含含有VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3的VH区和含有VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3的VL区的结构域。此外设想如WO 2013/072406的权利要求中所披露的，其包含与BCMA结合并且包含VH区和/或VL区的结构域。还设想如WO 2013/072406中所披露和要求保护的，其包括与BCMA结合的结构域和与CD3(如人CD3，优选地CD3-ε或人CD3-ε)结合的结构域。还设想其与WO 2013/072406中定义和要求保护的抗体结合相同的sBCMA表位，或与WO 2013/072406中定义和要求保护的抗体竞争结合sBCMA。
针对(人)CD3或特异性针对CD3ε的抗体(或双特异性抗体构建体)在本领域中是已知的，并且它们的CDR、VH和VL序列可以作为本发明的“第一”、“第二”或“第三”抗体/抗体构建体的第二结合结构域的基础。例如，Kung等人在1979年报道了OKT3(Ortho Kung T3)的开发，这是识别人T细胞上的CD3(特别是CD3的ε链)的第一个mAb。OKT3(莫罗单抗(muromonab))是第一种可用于人疗法的鼠源性单克隆抗体。更新的抗CD3单克隆抗体包括奥特昔珠单抗(otelixizumab)(TRX4)、特普利珠单抗(teplizumab)(MGA031)、弗雷鲁单抗(foralumab)和威司利珠单抗(visilizumab)，均靶向CD3的ε链。针对(癌症)靶和CD3的双特异性抗体构建体也正在开发和(预)临床测试中，并且它们的CD3结合结构域(CDR、VH、VL)可以作为本发明的第一、第二或第三抗体/抗体构建体的第二结合结构域的基础。实例包括但不限于博纳吐单抗、索利托单抗(MT110、AMG 110)、卡妥索单抗(Catumaxomab)、度妥昔珠单抗(Duvortuxizumab)、厄妥玛索单抗(Ertumaxomab)、洛莫索珠单抗(Mosunetuzumab)、FBTA05(Bi20、TPBs05)、CEA-TCB(RG7802、RO6958688)、AFM11、和MGD006(S80880)。例如在US7,994,289B2、US 7,728,114B2、US 7,381,803B1、US 6,706,265B1中披露了CD3结合结构域的其他实例。
此外，设想本发明的第三抗体构建体包含与本文所述的BCMA结合的结构域、与本文所述的CD3结合的结构域以及提供抗体构建体半衰期延长的结构域。这后一个结构域可包含两个多肽单体，每个多肽单体包含铰链、CH2结构域和CH3结构域，其中所述两个多肽单体经由肽接头彼此融合。此类抗体构建体和HLE结构域在WO 2017/134134中有详细描述，其内容通过引用附在本文中。
在另一个实施例中，“第三抗体或抗体构建体”是WO 2014/089335中披露的具有以下氨基酸序列的抗体/抗体构建体：WO 2014/089335的VH-CDR(SEQ ID NO:4-6)、VL-CDR(SEQ ID NO:106-108)、VH(SEQ ID NO:206)、VL(SEQ ID NO:240)。因此，第三抗体或抗体构建体可以包含VH区和VL区，其中VH区包含WO 2014/089335的SEQ ID NO:4所描绘的VH-CDR1、SEQ ID NO:5所描绘的VH-CDR2和SEQ ID NO:6所描绘的VH-CDR3，并且VL区包含WO2014/089335的SEQ ID NO:107所描绘的VL-CDR1、SEQ ID NO:107所描绘的VL-CDR2和SEQID NO:108所描绘的VL-CDR3。它也可以包含WO 2014/089335的SEQ ID NO:206所描绘的VH区，或WO 2014/089335的SEQ ID NO:240所描绘的VL区。第三抗体或抗体构建体还可与本文上文定义的抗体结合相同的sBCMA表位，或与本文上文定义的抗体(即具有从WO 2014/089335引用的序列的抗体)竞争结合sBCMA。
设想本发明的单克隆抗体/抗体构建体包含(a)兔VH区、(b)兔VL区或(c)兔VH区和兔VL区。此外，整个单克隆抗体可以是兔抗体。因此，可变区或抗体/抗体构建体本身衍生自兔。术语“兔抗体”、“兔抗体构建体”、“兔结合结构域”和“兔VH/VL区”分别包括抗体、抗体构建体、结合结构域和VH/VL区，包含抗体衍生区，如可变区和恒定区或基本上对应于本领域已知的兔种系免疫球蛋白序列的结构域。本发明的兔抗体、抗体构建体或结合结构域可以包含例如CDR中且特别是CDR3中不由兔种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。如本文使用的兔抗体、抗体构建体和结合结构域的定义还涵盖完全兔抗体、抗体构建体、VH/VL区和结合结构域，这些完全兔抗体、抗体构建体、VH/VL区和结合结构域仅包含非人工和/或遗传改变的兔抗体序列。它们可能，例如，使用本领域已知的标准技术通过兔子的免疫活动获得。本发明的单克隆抗体还可以包含兔VH区和/或兔VL区以及抗体恒定区，这些区为例如兔恒定区(如SEQID NO:31的示例性兔重链恒定区或SEQ ID NO:32的示例性兔轻链恒定区)或来自其他物种(人、小鼠、大鼠、仓鼠、山羊等)的恒定区，取决于sBCMA检测***的要求和设计。
根据本发明的一个实施例，单克隆抗体或抗体构建体包括：
a)包含如SEQ ID NO:1中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:2中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:3中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:4中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:5中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:6中所描绘的VL-CDR3的VL区；
b)包含如SEQ ID NO:11中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:12中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:13中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:14中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:15中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:16中所描绘的VL-CDR3的VL区；或
c)包含如SEQ ID NO:21中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:22中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:23中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:24中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:25中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:26中所描绘的VL-CDR3的VL区。
进一步设想，本发明的单克隆抗体与上述a)、b)或c)的抗体结合相同的sBCMA表位，或者与上述a)、b)或c)的抗体竞争结合sBCMA。
抗体、抗体构建体或结合结构域是否与另一给定抗体、抗体构建体或结合结构域结合sBCMA的(或BCMA的细胞外结构域的)相同表位可通过不同分析(例如通过用嵌合或突变的BCMA分子进行表位作图，如WO 2013/072406中所述)测量。本文描述了确定表位的其他方法，如丙氨酸扫描(参见例如Morrison KL&Weiss GA.Curr Opin Chem Biol.[化学生物学新见]2001年6月；5(3):302-7)，其中待分析的靶氨基酸序列内的每个残基都被丙氨酸替代，例如通过定点诱变替代。丙氨酸的使用是因为其具有非巨大的、化学惰性的甲基官能团，但仍然模仿许多其他氨基酸所具有的二级结构参考。在需要保守突变残基的大小的情形下，有时可以使用巨大的氨基酸(如缬氨酸或亮氨酸)。这种将氨基酸的***突变引入靶蛋白序列，并测试抗体与每种突变蛋白的结合以鉴定构成表位的氨基酸的方法，也称为“定点诱变”。可用于对靶抗原上的抗体表位作图的其他方法包括高通量鸟枪诱变表位作图、交联耦合质谱法、X射线共晶体学、低温电子显微镜检查和氢-氘交换。
可以在竞争性测定如竞争性ELISA中测量抗体或抗体构建体是否与另一种给定抗体或抗体构建体竞争结合抗原(如BCMA或sBCMA)。也可以使用抗生物素蛋白偶联的微粒(珠粒)。与抗生物素蛋白涂覆的ELISA板类似，当与生物素化蛋白质反应时，这些珠粒中的每一个都可用作可在其上进行测定的底物。将抗原涂覆在珠粒上，并且然后用第一抗体预涂覆。添加第二抗体并且确定任何另外的结合。经由流式细胞术进行读出。可使用基于细胞的竞争测定，使用天然表达BCMA的细胞或用BCMA稳定地或瞬时地转化的细胞。此外，本发明的实例2b)描述了Octet竞争测定，其也可以用于确定两种抗体/抗体构建体之间与sBCMA结合的竞争。在本文的上下文中，术语“竞争结合”意指在两种测试的抗体之间发生的至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、或至少90％的竞争(如通过上文披露的任何一种测定所确定的)。
根据本发明的一个实施例，该单克隆抗体包括：
a)如SEQ ID NO:7、17或27的任一项中所描绘的VH区；
b)如SEQ ID NO:8、18或28的任一项中所描绘的VL区；
c)如SEQ ID NO:7所描绘的VH区和如SEQ ID NO:8所描绘的VL区；
d)如SEQ ID NO:17所描绘的VH区和如SEQ ID NO:18所描绘的VL区；
e)如SEQ ID NO:27所描绘的VH区和如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；或本发明的单克隆抗体
f)与c)的抗体结合相同的sBCMA表位或与c)的抗体竞争结合sBCMA；
g)与d)的抗体结合相同的sBCMA表位或与d)的抗体竞争结合sBCMA；或
h)与e)的抗体结合相同的sBCMA表位或与e)的抗体竞争结合sBCMA。
设想本发明的单克隆抗体(或“第一单克隆抗体”)和/或本文定义的第二单克隆抗体与样本中的sBCMA结合。根据一个实施例，该样本可以是生物学样本。根据一个实施例，该样本是人样本，例如人生物学样本。该生物学样本可以是(人)血清样本、血浆样本、血液样本、骨髓样本或组织样本。该样本也可以是从(人)骨髓单核细胞或(人)外周血单核细胞的细胞培养物中获得的上清液。该样本可获得自受试者，例如疑似患有或患有(被诊断患有)与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的人类受试者，或者接受过与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病治疗的受试者。
“血液”是人类和其他动物体内的一种体液，它向细胞输送必需的物质，如营养物质和氧，并从这些细胞中转移代谢废物。在脊椎动物中，血液由悬浮在血浆中的血细胞组成。血液血浆或“血浆”是血液的液体成分，其中悬浮有几种类型的血细胞。它主要是水，并且含有溶解的蛋白质(如血清白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等)、葡萄糖、凝血因子、电解质、激素、二氧化碳和氧气。血液血清或“血清”是不含凝血因子的血浆。因此，血清包括所有未用于凝血的血浆蛋白。“骨髓”是半固态组织，可以在骨头的海绵状或网眼状部分内找到。“组织”是介于细胞与完整器官之间的细胞组织水平。组织是来自相同起源的相似细胞及其细胞外基质的集合，它们一起执行特定功能。然后通过将多个组织功能性分组在一起形成器官。
本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的共价修饰也包括在本发明的范围内，并且通常但不总是在翻译后进行。例如，通过使抗体的特定氨基酸残基与能够与选择的侧链或N或C末端残基反应的有机衍生剂反应，将抗体的若干种类型的共价修饰引入到分子中。用双功能剂衍生化可用于将本发明的抗体交联到水不溶性载体基质或表面以用于多种方法(特别是检测方法)中。谷氨酰胺酰残基和天冬酰胺酰残基通常分别脱酰胺成相应的谷氨酰残基和天冬氨酰残基。可替代地，这些残基在弱酸性条件下脱酰胺。这些残基的任一形式都属于本发明的范围内。其他修饰包括对脯氨酸和赖氨酸的羟基化、对丝氨酰或苏氨酰残基的羟基的磷酸化、对赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基的甲基化(T.E.Creighton,Proteins:Structure and Molecular Properties[蛋白质：结构和分子特性],W.H.Freeman&Co.[W.H.弗里曼公司],San Francisco[旧金山],1983,第79-86页)、对N末端胺的乙酰化和对任何C末端羧基的酰胺化。
根据本发明，将单克隆抗体(或抗体构建体)、“第一”单克隆抗体(或抗体构建体)和/或第二单克隆抗体(或抗体构建体)偶联至可检测标记。在一些实施例中，本发明的单克隆抗体的共价修饰包括添加一种或多种标记，如检测标记。标记或标记基团可以经由各种长度的间隔臂与抗体偶联以减少潜在的空间位阻。用于标记蛋白质的各种方法在本领域中是已知的并且可以用于进行本发明。术语“标记”或“标记基团”是指任何可检测的标记。一般来讲，标记属于多种类别，这取决于将检测它们的测定-以下实例包括但不限于：
a)同位素标记，这些同位素标记可以是放射性同位素或重同位素，如放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、89Zr、90Y、99Tc、111In、125I、131I)
b)磁性标记(例如磁性颗粒)
c)氧化还原活性部分
d)光学染料(包括但不限于，生色团、磷光体和荧光团)，如荧光基团(例如FITC、罗丹明、镧系元素磷光体)、化学发光基团和荧光团，这些荧光团可以是“小分子”荧光剂或蛋白质荧光剂
e)酶促基团(例如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶)
f)生物素化基团
g)由第二报道基因识别的预定多肽表位(例如，亮氨酸拉链对序列、第二抗体的结合位点、金属结合结构域、表位标签等)
“荧光标记”意指可以经由其固有的荧光特性检测到的任何分子。合适的荧光标记包括但不限于荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明、伊红、赤藓红、香豆素、甲基-香豆素、芘、孔雀石绿、二苯乙烯、荧光黄、瀑布蓝J、德克萨斯红、IAEDANS、EDANS、BODIPY FL、LC红640、Cy5、Cy5.5、LC红705、俄勒冈绿、Alexa-Fluor染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、AlexaFluor 488、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680)、瀑布蓝、瀑布黄和R-藻红蛋白(PE)(俄勒冈州尤金市的分子探针公司(Molecular Probes,Eugene,OR))、FITC、罗丹明和德克萨斯红(伊利诺伊州罗克福德的皮尔斯公司(Pierce,Rockford,IL))、Cy5、Cy5.5、Cy7(宾夕法尼亚州匹兹堡市的阿默舍姆生命科学公司(Amersham Life Science,Pittsburgh,PA))。合适的光学染料(包括荧光团)描述于Richard P.Haugland的Molecular Probes Handbook[分子探针手册]中。
合适的蛋白质荧光标记还包括但不限于，绿色荧光蛋白，包括GFP的Renilla、Ptilosarcus、或Aequorea种类(Chalfie等人,1994,Science[科学]263:802-805)、EGFP(Clontech实验室公司，
Figure BDA0002950082390000331
登录号U55762)、蓝色荧光蛋白(BFP，量子生物技术公司(Quantum Biotechnologies,Inc.)，加拿大魁北克省蒙特利尔市迈松纳夫大道西1801号第8层(邮编：H3H 1J9)(1801de Maisonneuve Blvd.West,8th Floor,Montreal,Quebec,Canada H3H 1J9)；Stauber,1998,Biotechniques[生物技术]24:462-471；Heim等人,1996,Curr.Biol.[现代生物学]6:178-182)、增强的黄色荧光蛋白(EYFP，Clontech实验室公司)、萤光素酶(Ichiki等人,1993,J.Immunol.[免疫学杂志]150:5408-5417)、β半乳糖苷酶(Nolan等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]85:2603-2607)和Renilla(WO 92/15673、WO 95/07463、WO 98/14605、WO 98/26277、WO 99/49019、美国专利号5,292,658；5,418,155；5,683,888；5,741,668；5,777,079；5,804,387；5,874,304；5,876,995；5,925,558)。
本发明的抗体/抗体构建体还可以包含另外的结构域，这些结构域例如有助于分离分子或涉及该分子的适应性药代动力学分布。有助于分离抗体/抗体构建体的结构域可以选自肽基序或辅助性地引入的部分，这些部分可以在分离方法(例如分离柱)中捕获。此类另外的结构域的非限制性实施例包括称为Myc-标签、HAT-标签、HA-标签、TAP-标签、GST-标签、几丁质结合结构域(CBD-标签)、麦芽糖结合蛋白(MBP-标签)、Flag-标签、Strep-标签以及其变体(例如StrepII-标签)和His-标签的肽基序。以鉴定的CDR为特征的本文披露的所有抗体构建体都可以包含His-标签结构域，该His-标签结构域通常称为分子的氨基酸序列中的连续His残基的重复序列，例如5个His残基或6个His残基(六聚组氨酸)的重复序列。His-标签可以位于例如抗体构建体的N末端或C末端。在一个实施例中，六组氨酸标签经由肽键连接至根据本发明的抗体构建体的C末端。
本发明进一步提供了编码本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的多核苷酸/核酸分子。核酸分子是由核苷酸构成的生物聚合物。多核苷酸是由共价键合在链中的13个或更多个核苷酸单体构成的生物聚合物。DNA(如cDNA)和RNA(如mRNA)是具有不同生物功能的多核苷酸/核酸分子的实例。核苷酸是充当核酸分子如DNA或RNA的单体或亚单位的有机分子。本发明的核酸分子或多核苷酸可以是双链的或单链的、线性的或环状的。设想核酸分子或多核苷酸被包含在载体中。此外，设想这样的载体被包含在宿主细胞中。所述宿主细胞例如在用本发明的载体或多核苷酸/核酸分子转化或转染后能够表达单克隆抗体(或抗体构建体)。为此目的，将多核苷酸或核酸分子可操作地连接至控制序列。
遗传密码是将遗传物质(核酸)内编码的信息翻译成蛋白质的一组规则。活细胞中的生物解码是通过以由mRNA指定的顺序连接氨基酸的核糖体，使用tRNA分子携带氨基酸并一次读出mRNA三个核苷酸来完成。该密码定义了这些核苷酸三联体的序列(称为密码子)如何指定在蛋白质合成期间接下来将添加哪种氨基酸。除了一些例外，核酸序列中的三核苷酸密码子指定单一氨基酸。因为绝大多数基因都使用完全相同的密码进行编码，所以该特定密码通常称为规范或标准遗传密码。
密码子的简并性是遗传密码的冗余，表现为指定氨基酸的三碱基对密码子组合的多样性。简并性发生是因为存在比可编码的氨基酸更多的密码子。编码一种氨基酸的密码子在它们的三个位置中的任何一个都可以不同；然而，这种差异通常是在第二或第三位置。例如，密码子GAA和GAG都指定谷氨酸并表现出冗余；但是，都没有指定任何其他氨基酸，并因此没有表现出歧义。不同生物体的遗传密码可能偏向于使用编码相同氨基酸的几个密码子之一而不是其他密码子-也就是说，将发现比偶然预期具有更大频率的一个。例如，亮氨酸由六种不同的密码子指定，其中一些很少被使用。可获得详细说明大多数生物体的基因组密码子使用频率的密码子使用表。重组基因技术通常通过实施称为密码子优化的技术来利用这种效应，其中将那些密码子用于设计被各自宿主细胞(如人仓鼠起源的细胞、大肠杆菌(Escherichia coli)细胞或酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞)偏好的多核苷酸，例如以便增加蛋白质表达。因此，设想本披露的多核苷酸/核酸分子是密码子优化的。然而，可以使用编码所希望的氨基酸的任何密码子来设计编码本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的多核苷酸/核酸分子。
根据一个实施例，编码本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的本发明的多核苷酸/核酸分子呈一个单一分子的形式或两个或更多个分开的分子的形式。如果本发明的抗体构建体是单链抗体构建体，则编码这种构建体的多核苷酸/核酸分子将最可能也呈一个单一分子的形式。然而，还设想单克隆抗体(如重链和轻链)或抗体构建体的不同成分位于单独的多肽链上，在这种情况下，多核苷酸/核酸分子最有可能呈现两个(或更多个)独立分子的形式。
这同样适用于包含本发明的多核苷酸/核酸分子的载体。如果本发明的抗体构建体是单链抗体构建体，则一个载体可以在一个单一位置(作为一个单一开放阅读框，ORF)包含编码抗体构建体的多核苷酸。一个载体还可以在分开的位置(具有单独的ORF)包含两个或更多个多核苷酸/核酸分子，它们中的每一个编码本发明的单克隆抗体(如重链和轻链)或抗体构建体的不同组分。设想包含本发明的多核苷酸/核酸分子的载体呈一个单一载体的形式或处于两个或更多个分开的载体的形式。在一个实施例中，并且出于在宿主细胞中表达单克隆抗体(或抗体构建体)的目的，本发明的宿主细胞应包含编码单克隆抗体(或抗体构建体)的多核苷酸/核酸分子或包含这种多核苷酸/核酸分子的载体全部，这意味着单克隆抗体(或抗体构建体)的所有组分-无论是编码为一个单一分子还是在单独的分子/位置编码-将在翻译之后组装并一起形成本发明的生物学活性的单克隆抗体(或抗体构建体)。
本发明还提供了包含本发明的多核苷酸/核酸分子的载体。载体是用作将(外来)遗传物质转移到细胞中的媒介物的核酸分子，通常出于复制和/或表达的目的。术语“载体”涵盖但不限于质粒、病毒、粘粒和人造染色体。一些载体专门设计用于克隆(克隆载体)，其他载体设计用于蛋白质表达(表达载体)。所谓的转录载体主要用于扩增其***物。通常在含有其在大肠杆菌中维持所需的元件的大肠杆菌载体上进行DNA操作。然而，载体也可以具有允许它们维持在另一种生物体如酵母、植物或哺乳动物细胞中的元件，并且这些载体被称为穿梭载体。将载体***靶标或宿主细胞中通常被称为转化(对于细菌细胞)和转染(对于真核细胞)，而病毒载体的***通常被称为转导。
一般来讲，工程化载体包含复制起点、多克隆位点和选择性标记。载体本身通常是包含***物(转基因)和充当载体“骨架”的较大序列的核苷酸序列(通常为DNA序列)。虽然遗传密码决定了给定编码区的多肽序列，但其他基因组区域可能会影响这些多肽产生的时间和地点。因此，现代载体可以涵盖除转基因***物和骨架之外的额外特征：启动子、遗传标记、抗生素抗性、报告基因、靶向序列、蛋白质纯化标签。称为表达载体(表达构建体)的载体尤其用于在靶细胞中表达转基因，并且通常具有控制序列。
术语“控制序列”是指在特定宿主生物体中表达可操作连接的编码序列所必需的DNA序列。例如，适用于原核生物的控制序列包括启动子、任选的操纵子序列和核糖体结合位点。已知真核细胞利用启动子、聚腺苷酸化信号、Kozak序列和增强子。
当核酸与另一核酸序列处于功能关系时，该核酸是“可操作地连接的”。例如，如果将前序列或分泌前导序列的DNA表达为参与多肽分泌的前蛋白，则该前序列或分泌前导序列的DNA可操作地连接至该多肽的DNA；如果启动子或增强子影响编码序列的转录，则该启动子或增强子可操作地连接至该序列；或者如果核糖体结合位点被定位成使得有助于翻译，则该核糖体结合侧可操作地连接至编码序列。一般来讲，“可操作地连接”意指所连接的核苷酸序列是连续的，并且在分泌性前导序列的情形下是连续的并处于阅读相(readingphase)中。然而，增强子不必是连续的。连接通过在方便的限制性位点进行接合来完成。如果不存在此类位点，则根据常规实践使用合成的寡核苷酸衔接子或接头。
“转染”是有意将核酸分子或多核苷酸(包括载体)引入到靶细胞中的过程。该术语主要用于真核细胞中的非病毒方法。转导通常用于描述病毒介导的核酸分子或多核苷酸的转移。动物细胞的转染典型地涉及打开细胞膜中的瞬时孔或“洞”，以允许摄取物质。转染可以使用生物粒子(如病毒转染，也称为病毒转导)、基于化学的方法(如使用磷酸钙、脂质转染、Fugene、阳离子聚合物、纳米粒子)或物理处理(如电穿孔、显微注射、基因枪、细胞挤压、磁转染、静水压力、穿刺转染(impalefection)、超声波、光学转染、热休克)进行。
术语“转化”用于描述核酸分子或多核苷酸(包括载体)向细菌中，以及向非动物真核细胞(包括植物细胞)中的非病毒转移。因此，转化是细菌或非动物真核细胞的基因改变，该基因改变是因通过一个或多个细胞膜从其周围直接摄取并随后并入外源遗传物质(核酸分子)而产生。转化可以通过人工手段进行。为了发生转化，细胞或细菌必须处于感受态，这可能作为对诸如饥饿等环境条件和细胞密度的时间限制反应而发生，并且也可以被人工诱导。
此外，本发明提供了一种宿主细胞，该宿主细胞经本发明的多核苷酸/核酸分子或本发明的载体转化或转染。如本文使用的，术语“宿主细胞”或“受体细胞”旨在包括可以是或已经是编码本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的载体、外源性核酸分子和/或多核苷酸的受体、和/或该单克隆抗体(或抗体构建体)本身的受体的任何单个细胞或细胞培养物。通过转化、转染等方式将对应的物质引入细胞中(参见上文)。术语“宿主细胞”还旨在包括单细胞的后代或潜在后代。因为某些修饰可能由于天然的、意外的或有意的突变或由于环境影响而在后代中发生，所以这种后代事实上可能与亲本细胞不完全相同(在形态或基因组或全部DNA补体中)，但仍包括在本文所用术语的范围内。合适的宿主细胞包括原核细胞或真核细胞，并且还包括但不限于-细菌(如大肠杆菌)、酵母细胞、真菌细胞、植物细胞和动物细胞，诸如昆虫细胞和哺乳动物细胞，例如仓鼠、鼠类、大鼠、猕猴或人细胞。
除了原核生物之外，真核微生物(如丝状真菌或酵母)是本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的合适的克隆或表达宿主。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或普通面包酵母是低等真核宿主微生物中最常用的。然而，许多其他属、物种和菌株通常可获得并且可用于本文中，如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、克鲁维酵母属(Kluyveromyce)宿主，如乳酸克鲁维酵母(K.lactis)、脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)(ATCC12424)、保加利亚克鲁维酵母(K.bulgaricus)(ATCC 16045)、威克克鲁维酵母(K.wickeramii)(ATCC 24178)、瓦尔提鲁维酵母(K.waltii)(ATCC56500)、果蝇克鲁维酵母(K.drosophilarum)(ATCC 36906)、耐热克鲁维酵母(K.thermotolerans)和马克斯克鲁维酵母(K.marxianus)；耶氏酵母属(EP 402 226)；毕赤酵母(EP 183 070)；假丝酵母属；瑞氏木霉(EP 244 234)；粗糙脉孢菌；许旺酵母属(Schwanniomyces)，如西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)；和丝状真菌，如脉孢菌属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、弯颈霉属(Tolypocladium)和曲霉属(Aspergillus)宿主，如构巢曲霉(A.nidulans)和黑曲霉(A.niger)。
用于表达糖基化单克隆抗体(或抗体构建体)的合适宿主细胞衍生自多细胞生物体。无脊椎动物细胞的实例包括植物细胞和昆虫细胞。已经鉴定了来自如草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(毛虫)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)(蚊子)、白纹伊蚊(Aedesalbopictus)(蚊子)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)(果蝇)和家蚕(Bombyx mori)的宿主的许多杆状病毒株和变体以及相应的许可性昆虫宿主细胞。用于转染的多种病毒株是公众可获得的，例如苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)NPV的L-1变体和家蚕NPV的Bm-5株，并且根据本发明，此类病毒可以用作本文的病毒，特别是用于转染草地贪夜蛾细胞。
棉花、玉米、马铃薯、大豆、矮牵牛、番茄、拟南芥和烟草的植物细胞培养物也可以用作宿主。可用于在植物细胞培养物中产生蛋白质的克隆和表达载体是本领域技术人员已知的。参见，例如Hiatt等人,Nature[自然](1989)342:76-78；Owen等人(1992)Bio/Technology[生物/技术]10:790-794；Artsaenko等人(1995)The Plant J[植物杂志]8:745-750和Fecker等人(1996)Plant Mol Biol[植物分子生物学]32:979-986。
然而，对脊椎动物细胞的兴趣最大，并且培养物(细胞培养物)中脊椎动物细胞的繁殖已成为常规程序。有用的哺乳动物宿主细胞系的实例是由SV40(如COS-7，ATCC CRL1651)转化的猴肾CV1系；人胚胎肾系(如293细胞或亚克隆用于在悬浮培养中生长的293细胞，Graham等人,J.Gen Virol.[普通病毒学杂志]36:59(1977))；幼仓鼠肾细胞(如BHK，ATCC CCL 10)；中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(如CHO，Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]77:4216(1980))；小鼠塞托利细胞(如TM4,Mather,Biol.Reprod.[生殖生物学]23:243-251(1980))；猴肾细胞(如CVI ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(如VERO-76，ATCC CRL1587)；人***细胞(如HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(如MDCK，ATCCCCL 34)；布法罗大鼠肝细胞(如BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(如W138，ATCC CCL75)；人肝细胞(如Hep G2,1413 8065)；小鼠乳腺肿瘤(如MMT 060562,ATCC CCL-51)；TRI细胞(Mather等人,Annals N.Y Acad.Sci.[纽约科学院年刊](1982)383:44-68)；MRC 5细胞；FS4细胞；和人肝癌细胞系(如Hep G2)。
在另一个实施例中，本发明提供了一种用于产生本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的方法，所述方法包括在允许表达本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的条件下培养本发明的宿主细胞并且从培养物中回收所产生的单克隆抗体(或抗体构建体)。
如本文使用的，术语“培养”是指细胞在合适的条件下在培养基中的体外维持、分化、生长、增殖和/或繁殖。使细胞在适当的温度和气体混合物下在细胞生长培养基中生长并维持。对于每种细胞类型，培养条件变化很大。典型的生长条件是约37℃的温度、约5％的CO2浓度和约95％的湿度。生长培养基的配方可以例如在pH值、碳源(如葡萄糖)浓度、生长因子的性质和浓度、以及其他营养素(如氨基酸或维生素)的存在方面变化。用于补充培养基的生长因子通常衍生自动物血液的血清，如胎牛血清(FBS)、牛小牛血清(FCS)、马血清和猪血清。细胞可以在悬浮液中生长或作为贴壁培养物生长。还存在如下细胞系，这些细胞系已经被修饰以能够在悬浮培养物中存活，因此它们可以按比贴壁条件将允许的更高密度生长。
术语“表达”包括涉及产生本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、折叠、翻译后修饰、靶向特定亚细胞或细胞外位置、和分泌。术语“回收”是指旨在从细胞培养物中分离单克隆抗体(或抗体构建体)的一系列过程。“回收”或“纯化”过程可以分离细胞培养物的蛋白质和非蛋白质部分，并最终将所希望的单克隆抗体(或抗体构建体)与所有其他多肽和蛋白质分离。分离步骤通常利用蛋白质大小、物理化学特性、结合亲和力和生物活性的差异。制备型纯化旨在产生相对大量的纯化蛋白质供后续使用，而分析型纯化产生相对少量的蛋白质用于各种研究或分析目的。
当使用重组技术时，单克隆抗体(或抗体构建体)可以在周质间隙中细胞内产生，或直接分泌到培养基中。如果单克隆抗体(或抗体构建体)是在细胞内产生，则作为第一步，例如通过离心或超滤去除宿主细胞或溶解片段的微粒状碎片。本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)可以例如在诸如大肠杆菌等细菌中产生。在表达之后，将构建体从可溶性级分中的细菌细胞糊中分离出来，并且可以例如经由亲和色谱和/或尺寸排阻进行纯化。最终纯化可以以与用于纯化在哺乳动物细胞中表达并分泌到培养基中的单克隆抗体(或抗体构建体)的方法类似的方式进行。Carter等人(Biotechnology(NY)[生物技术(NY)]1992年2月；10(2):163-7)描述了用于分离分泌到大肠杆菌的周质间隙中的抗体的程序。
在单克隆抗体(或抗体构建体)分泌到培养基中的情况下，通常首先使用可商购的蛋白质浓缩滤器(例如，超滤单元自此类表达***的上清液进行浓缩。
可以使用例如羟基磷灰石色谱法、凝胶电泳、透析和亲和色谱法回收或纯化从宿主细胞制备的本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)。根据待回收的单克隆抗体(或抗体构建体)，也可获得用于蛋白质纯化的其他技术，如离子交换柱上分级分离、混合模式离子交换、HIC、乙醇沉淀、尺寸排阻色谱、反相HPLC、在二氧化硅上进行的色谱、在肝素琼脂糖上进行的色谱、在阴离子或阳离子交换树脂(如聚天冬氨酸柱)上进行的色谱、免疫亲和(如蛋白质A/G/L)色谱、色谱聚焦、SDS-PAGE、超速离心和硫酸铵沉淀。蛋白酶抑制剂可以被包括在任何前述步骤中以便抑制蛋白水解，并且抗生素可以被包括来防止污染物的生长。
此外，本发明提供了一种组合物或配制品，该药物组合物或配制品包含本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)或包含根据本发明的方法产生的单克隆抗体(或抗体构建体)。该组合物优选地是诊断组合物。如本文所用，术语“诊断组合物”涉及适合用于诊断试剂盒或检测***中的组合物。本发明的一种可能的诊断组合物包含一种或多种本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)，优选地其量可用于检测样本中的sBCMA。该诊断组合物可以进一步包含一种或多种载体、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂的合适配制品。本发明的诊断组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。
该组合物可以包含载体，如诊断学上可接受的载体。一般来讲，如本文使用的，“诊断学上可接受的载体”意指与诊断用途相容的任何和所有的水性和非水性溶液、无菌溶液、溶剂、缓冲剂(如磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液)、水、悬浮液、乳液(如油/水乳液)、各种类型的润湿剂、脂质体、分散介质和包衣。此类介质和药剂在诊断组合物中的使用在本领域中是熟知的，并且包含此类载体的组合物可以通过熟知的常规方法配制。
某些实施例提供了诊断组合物，这些药物组合物包含本发明的抗体构建体和另外一种或多种赋形剂，如在本部分和本文其他地方说明性描述的那些赋形剂。赋形剂在本发明中可用于多种目的，诸如调整配制品的物理、化学或生物特性，诸如调整粘度和/或本发明的方法以改善有效性和/或稳定此类配制品和方法，以防止例如由于在制造、运输、存储、使用前制备、投与和其后过程中发生的压力而导致的降解和腐坏。通常将赋形剂以其最低有效浓度使用。
在某些实施例中，出于改变、保持或保存组合物的某些特征(如pH、摩尔渗透压浓度、粘度、透明度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、吸附性或渗透性)的目的，诊断组合物可以含有配制物质(参见Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明登氏药学全书],第18版,1990,Mack Publishing Company[马克出版公司])。在此类实施例中，合适的配制物质可以包括但不限于：
·氨基酸
·抗微生物剂，如抗细菌剂和抗真菌剂
·抗氧化剂
·用于将组合物维持在生理pH或稍低的pH下(典型地在约5至约8或9的pH范围内)的缓冲液、缓冲***和缓冲剂
·非水性溶剂、植物油和可注射的有机酯
·水性载体，包括水、醇/水性溶液、乳剂或悬浮液，包括盐水和缓冲的介质
·生物可降解聚合物，如聚酯
·增积剂
·螯合剂
·等渗剂和吸收延迟剂
·络合剂
·填充剂
·碳水化合物
·(低分子量)蛋白质、多肽或蛋白质载体，优选人起源的
·着色剂和调味剂
·含硫还原剂
·稀释剂
·乳化剂
·亲水性聚合物
·成盐抗衡离子
·防腐剂
·金属络合物
·溶剂和助溶剂
·糖和糖醇
·悬浮剂
·表面活性剂或润湿剂
·稳定性增强剂
·张力增强剂
·肠胃外递送媒介物
·静脉内递送媒介物
众所周知，诊断组合物的不同成分可以具有不同的效应，例如，并且氨基酸可以充当缓冲液、稳定剂和/或抗氧化剂；甘露醇可以充当膨胀剂和/或张力增强剂；氯化钠可以充当递送媒介物和/或张力增强剂；等。
根据另一方面，本发明提供一种检测***，该检测***包含：
a)与sBCMA结合的第一单克隆抗体(或抗体构建体)，和
b)与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)，
其中第一单克隆抗体(或抗体构建体)与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)的存在下发生的。
本发明还提供一种检测***，该检测***包含：
a)与sBCMA结合的第一单克隆抗体(或抗体构建体)，和
b)与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)，
其中第二单克隆抗体(或抗体构建体)与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第一单克隆抗体(或抗体构建体)的存在下发生的。
本发明还提供一种检测***，该检测***包含：
a)与sBCMA结合的第一单克隆抗体(或抗体构建体)，和
b)与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)，
其中第一单克隆抗体(或抗体构建体)与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)的存在下发生的，并且其中第二单克隆抗体(或抗体构建体)与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第一单克隆抗体(或抗体构建体)的存在下发生的。
“检测***”是包含用于进行分析测定的试剂的试剂盒或工具(或诊断试剂盒/工具)。在本发明的上下文中，该测定检测和/或定量样本(通常是液体样本)中sBCMA的存在。该检测***包括与sBCMA结合的一对抗体(第一和第二单克隆抗体)。通常，检测***涉及使用固体支持物(如微量滴定板或膜)，该固体支持物可以作为一个表面来固定待检测抗原(例如在“直接ELISA”的情况下)或与sBCMA结合的(单克隆)抗体(“捕获抗体”)或与sBCMA结合的抗体(捕获抗体)结合的“第二抗体”(例如抗Fc抗体)。通常，这种固定是非特异性地(通过吸附到表面上)或特异性地(通过由抗体例如第二抗体捕获)发生的。此外，检测***可包括与sBCMA结合的(单克隆)检测抗体(任选地与酶、可检测标记或报告基团偶联)，以及任选地第二抗体(例如抗Fc抗体)，该第二抗体与检测抗体结合并且与酶、可检测标记或报告基团偶联。在当前情况下，捕获抗体可以是“与sBCMA结合的第一单克隆抗体(或抗体构建体)”，而检测抗体可以是“与sBCMA结合的第二单克隆抗体(或抗体构建体)”，反之亦然。换言之，本发明的第一或第二单克隆抗体或抗体构建体可以与酶、可检测标记或报告基团偶联。
一种非常熟知的检测***是ELISA测定，其可以用于本发明的目的。“夹心”ELISA用于检测样本抗原(此处：sBCMA)或定量未知量的抗原。这些步骤可能包括：提供与已知量的“捕获抗体”结合的表面。这种结合可以通过将捕获抗体吸附到表面上直接发生，或者通过被吸附在表面上并与捕获抗体结合的第二抗体(例如抗Fc抗体)发生。表面上的任何非特异性结合位点均被阻断。将含有抗原的样本施加到表面，并且抗原被抗体捕获(结合)。洗涤板以去除未结合的抗原。添加“检测抗体”并且“检测抗体”与抗原结合。该检测抗体可以与酶、可检测标记或报告基团偶联(例如共价连接)。如果不是这种情况，则施用与酶、可检测标记或报告基团偶联并与检测抗体结合(例如与其Fc区结合)的第二抗体。洗涤板以去除任何未结合的抗体。添加化学底物，该化学底物被转化(例如被酶)成可检测的形式，如光信号(例如彩色或荧光)或电化学信号。测量板孔或表面的吸光度或者荧光或电化学信号(例如，电流)，以确定抗原的存在和/或量。常用的酶标志物包括：
-OPD(邻苯二胺二盐酸盐)变成琥珀色以检测辣根过氧化物酶(HRP)，该酶通常用作缀合蛋白
-TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)在检测HRP时变为蓝色，并且在检测硫酸或磷酸时变为黄色
-检测HRP时，ABTS(2,2'-连氮双[3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]-二铵盐)变为绿色
-检测碱性磷酸酶时，PNPP(对硝基苯磷酸二钠盐)变为黄色
传统的ELISA典型地涉及发色的报告分子和底物，它们会产生可观察到的颜色变化以指示抗原的存在。类似于ELISA的新技术使用荧光、电化学发光和定量PCR报告分子来产生可定量的信号。这些新的报告分子可以具有多种优势，包括更高的灵敏度和多路复用。从技术上讲，这些测定并非严格意义上的“ELISA”，因为它们不是“酶联”的，而是与一些非酶报告分子相连的。但是，由于这些测定中的一般原理在很大程度上是相似的，因此它们通常与ELISA归为同一类别。
该检测***可以以定性或定量形式使用。定性结果可为样本提供简单的阳性或阴性结果(是或否)。阳性与阴性之间的截止可能是统计上的。通常使用标准偏差(测试固有的误差)的两倍或三倍区分阳性样本与阴性样本。以定量形式，将样本的光密度(OD)或电化学信号与标准曲线进行比较，该曲线典型地是已知浓度的靶标分子(sBCMA)溶液的连续稀释物。
如上文所提供的，根据本发明的单克隆抗体和第二单克隆抗体的定义和说明类似地适用于本发明的检测***中所包括的第一单克隆抗体和第二单克隆抗体。例如，设想sBCMA具有如SEQ ID NO:34所描绘的氨基酸序列。还设想第一单克隆抗体与sBCMA的结合和第二单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第三抗体或抗体构建体的存在下发生的。该第三抗体或抗体构建体可以是治疗性抗BCMA抗体或抗体构建体，如抗体药物缀合物(ADC)或CD3xBCMA双特异性抗体。第三抗体或抗体构建体可存在于待使用检测***分析的样本(例如生物学样本)中。关于与sBCMA结合的第三抗体/抗体构建体的更多详细信息，参见上文。此外，设想检测***的第一单克隆抗体(或抗体构建体)包含(a)兔VH区、(b)兔VL区或(c)兔VH区和兔VL区。同样，检测***的第二单克隆抗体(或抗体构建体)可以包含(a)兔VH区、(b)兔VL区或(c)兔VH区和兔VL区。此外，检测***的整个第一单克隆抗体和/或整个第二单克隆抗体可以是兔抗体。还设想检测***的第一单克隆抗体和/或第二单克隆抗体对sBCMA具有约≤10-7M、≤10-8M、≤10-9M或≤10-10M的亲和力(KD)。还设想检测***的第一单克隆抗体和/或检测***的第二单克隆抗体是IgG、IgD、IgE、IgM或IgA抗体。根据一个实施例，第一和/或第二单克隆抗体是IgG抗体，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。该抗体的同种型和亚类可以是兔的(例如，兔IgG、兔IgG1等)。
本发明还提供了检测***的第一单克隆抗体(或抗体构建体)：
a)包含含有如SEQ ID NO:1中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:2中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:3中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:4中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:5中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:6中所描绘的VL-CDR3的VL区；
b)包含含有如SEQ ID NO:11中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:12中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:13中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:14中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:15中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:16中所描绘的VL-CDR3的VL区；
c)与a)的抗体结合相同的sBCMA表位或与a)的抗体竞争结合sBCMA；或
d)与b)的抗体结合相同的sBCMA表位或与b)的抗体竞争结合sBCMA；和/或检测***的第二单克隆抗体(或抗体构建体)：
e)包含含有如SEQ ID NO:21中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:22中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:23中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:24中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:25中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:26中所描绘的VL-CDR3的VL区；或
f)与e)的抗体结合相同的sBCMA表位或与e)的抗体竞争结合sBCMA。
本发明还提供了检测***的第一单克隆抗体(或抗体构建体)：
a)包含如SEQ ID NO:7或17所描绘的VH区；
b)包含如SEQ ID NO:8或18所描绘的VL区；
c)包含如SEQ ID NO:7所描绘的VH区和如SEQ ID NO:8所描绘的VL区；
d)包含如SEQ ID NO:17所描绘的VH区和如SEQ ID NO:18所描绘的VL区；
e)与c)的抗体结合相同的sBCMA表位或与c)的抗体竞争结合sBCMA；或
f)与d)的抗体结合相同的sBCMA表位或与d)的抗体竞争结合sBCMA；和/或检测***的第二单克隆抗体(或抗体构建体)：
g)包含如SEQ ID NO:27所描绘的VH区；
h)包含如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；
i)包含如SEQ ID NO:27所描绘的VH区和如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；或
j)与i)的抗体结合相同的sBCMA表位或与i)的抗体竞争结合sBCMA。
设想用于检测***，其中
a)该第一单克隆抗体(或抗体构建体)用作捕获抗体，该第二单克隆抗体(或抗体构建体)用作检测抗体，或
b)该第一单克隆抗体(或抗体构建体)用作检测抗体，该第二单克隆抗体(或抗体构建体)用作捕获抗体。
在另一个方面，本发明还提供本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)在以下方面的用途或本发明的检测***在以下方面的用途：
-检测样本中的sBCMA；
-定量样本中的sBCMA；
-诊断与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病；
-对被诊断患有与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的患者进行分层；
-监测与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的进展；或
-监测对与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的治疗的反应。
在一个实施例中，该样本是生物学样本，如人生物学样本。样本(生物学样本/人生物学样本)可以是血清样本、血浆样本、血液样本、骨髓样本或组织样本。该样本也可以是从骨髓单核细胞或外周血单核细胞的细胞培养物中获得的上清液。该样本可获得自受试者，例如疑似患有或患有(被诊断患有)与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的人类受试者，或接受过与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病治疗的受试者。
疾病是一种特殊的异常状况，这种状况会对生物体(如人)的一部分或全部的结构或功能产生负面影响，而并非由于任何外部伤害造成。疾病通常被解释为与特定体征和症状相关联的“医学状况”或“障碍”。根据本发明的疾病与sBCMA或增加的sBCMA有关。可以例如在骨髓、血液、血清或血浆(例如人类受试者的骨髓、血液、血清或血浆)中，或者在从骨髓单核细胞或外周血单核细胞(例如人类受试者的骨髓单核细胞或外周血单核细胞)的细胞培养物中获得的上清液中检测和/或定量该sBCMA。术语“增加”用于与健康受试者(即没有患这种疾病的受试者)进行的比较。根据一个实施例，与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病是“BCMA阳性赘生物”。
“赘生物”是组织的异常生长，通常但不总是形成肿块。当也形成肿块时，通常称之为“肿瘤”。在脑肿瘤中，细胞的不受控制的***意指赘生物的肿块尺寸增加，并且在如颅内腔的受限空间中这很快造成问题，因为该肿块侵入大脑的空间将其推到旁边，导致脑组织压缩和颅内压增高以及实质破坏。根据本发明，“赘生物”或“肿瘤”还指将从用以下进行的治疗中受益的病症：针对BCMA的疗法，特别是针对在细胞表面表达的BCMA的疗法(如BCMA特异性抗体-包括裸抗体、抗体-药物缀合物(ADC)、双特异性抗体(如针对BCMA和CD3的那些)-以及细胞疗法(如嵌合抗原受体T细胞(CAR-T))，这些疗法包括但不限于AMG 420、AMG 701、GSK 916、JNJ-64007957(JNJ-7957)、PF-06863135(PF-3135)、CC-93269、REGN5458、HPN217、TNB-383B、P-BCMA-101、JNJ-68284528、JCARH125和bb2121。该病症包括慢性和急性障碍或疾病，这些障碍或疾病包括那些使哺乳动物易患所讨论的病症(赘生物或肿瘤)的病理学病症。
赘生物或肿瘤可以是良性的、潜在恶性的(癌前)、或恶性的(癌性的)。恶性赘生物/肿瘤通常被称为癌症。它们通常侵入并破坏周围组织，并可能形成转移，即它们扩散到身体的其他部位、组织或器官。“原发性肿瘤”是在肿瘤进展开始并且继续产生癌性肿块的解剖部位生长的肿瘤。例如，当脑内形成异常细胞时，就会发生脑肿瘤。大多数癌症在其原发部位发展，但随后继续形成转移或扩散到身体的其他部位(例如组织和器官)。这些进一步的肿瘤是继发性肿瘤。大多数癌症以它们的原发部位命名，甚至在它们已经扩散到身体的其他部位后也是如此。
淋巴瘤和白血病是造血或淋巴赘生物。出于本发明的目的，淋巴瘤和白血病也被术语“肿瘤”、“癌症”或“赘生物”涵盖。淋巴瘤是一组从淋巴细胞(一类白细胞)发展而来的血癌。白血病是一组通常在骨髓中开始并导致大量异常白细胞的癌症。这些白细胞尚未完全发育，并且被称为母细胞或白血病细胞。淋巴瘤和白血病是造血和淋巴组织肿瘤更广泛集合的一部分。
出于本发明的目的，术语“赘生物”、“肿瘤”和“癌症”可互换地使用，并且它们包括原发性肿瘤/癌症和继发性肿瘤/癌症(或“转移性”)两者，以及肿块形成赘生物(肿瘤)和淋巴赘生物(如淋巴瘤和白血病)，以及MRD。
术语“微小残留病”(MRD)是指在癌症治疗后留在患者体内的少量残留癌细胞存在的证据，例如当患者处于反应期时(患者没有疾病症状或迹象)。通过常规手段通常无法检测到极少数剩余的癌细胞，因为用于评估或检测癌症的标准测试没有灵敏到足以检测MRD。如今，MRD的分子生物学测试非常灵敏，这些测试如流式细胞术、PCR和新一代测序。这些测试可以测量组织样本中最低水平的癌细胞，有时测量百万个正常细胞中低至一个癌细胞。在本发明的上下文中，设想无论是否检测到MRD，赘生物的术语“预防”、“治疗”或“改善”也涵盖“预防、治疗或改善MRD”。
设想BCMA阳性赘生物是B细胞赘生物或浆细胞赘生物。B细胞(也称为B淋巴细胞)是一类淋巴细胞亚型的白细胞。它们通过分泌抗体在适应性免疫***的体液免疫组分中起作用。另外地，B细胞呈递抗原(它们也被分类为专职性抗原呈递细胞)并分泌细胞因子。在哺乳动物中，B细胞在骨髓中成熟，骨髓是大多数骨骼的核心。与其他两类淋巴细胞(T细胞和自然杀伤(NK)细胞)不同，B细胞在其细胞膜上表达B细胞受体(BCR)。BCR允许B细胞与特异性抗原结合，并将针对该抗原启动抗体应答。浆细胞(Plasma cell)(也称为血浆B细胞、浆细胞(plasmocyte)或效应B细胞)是分泌大量抗体的白细胞。它们通常由血浆和淋巴***运输。浆细胞起源于骨髓。B细胞分化成浆细胞，这些浆细胞在前体B细胞受体之后产生紧密模拟的抗体分子。一旦释放到血液和淋巴液中，这些抗体分子与靶抗原结合并开始其中和作用或破坏作用。
“与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病”、“BCMA阳性赘生物”或“(BCMA阳性)B细胞赘生物或浆细胞赘生物”可以选自下组，包括但不限于：多发性骨髓瘤、复发性和/或难治性多发性骨髓瘤、重链多发性骨髓瘤、轻链多发性骨髓瘤、髓外骨髓瘤(髓外浆细胞瘤、髓外多发性骨髓瘤)、浆细胞瘤、浆细胞白血病、沃尔丹斯特伦氏巨球蛋白血症(淋巴浆细胞性淋巴瘤)、冒烟型骨髓瘤(冒烟型多发性骨髓瘤)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、原发性中枢神经***淋巴瘤(PCNSL)和B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)。多发性骨髓瘤可以选自由以下组成的组或包含以下：复发性和/或难治性多发性骨髓瘤、重链多发性骨髓瘤、轻链多发性骨髓瘤、髓外多发性骨髓瘤、和冒烟型多发性骨髓瘤。
“诊断”或“医学诊断”是确定哪种障碍或病症可以解释受试者的症状和体征的过程。通常，在此过程中会执行一种或多种诊断程序，如诊断测试或医学测试。在医学中，术语“监测”是指随着时间的推移观察疾病、病症或一项或多项医学参数。它可以通过使用医疗监视器连续测量某些参数和/或通过重复执行医学测试来执行。诊断测试或医学测试是为检测、诊断或监测疾病、疾病过程、易感性和/或确定治疗过程而执行的医学程序。它与临床化学和分子诊断有关，并且这些程序典型地在医学实验室中执行。
医学疗法或治疗是治愈或改善疾病的努力。在医学领域，常见的治疗包括药疗。使用药疗(也称为药品、制药药物或药物)来诊断、治愈、治疗或预防疾病。因此，术语“治疗”是指治疗性治疗和预防性(prophylactic或preventative)措施两者。在本发明的上下文中，治疗包括将抗BCMA抗体或抗体构建体施用至或投与患有如本文所述的疾病、具有这种疾病的症状或具有患这种疾病的倾向的有需要的患者或受试者的身体、分离组织或细胞，目的是治愈、痊愈、缓和、减轻、改变、补救、缓解、改善、改进或影响该疾病、该疾病症状或患该疾病的倾向。
在另一个方面，本发明还提供了一种用于检测和/或定量样本中的sBCMA的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使用本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)或使用本发明的检测***确定样本中的sBCMA含量；以及
(b)将步骤(a)中确定的sBCMA含量与以下比较：
(i)该sBCMA含量的预定义值，
(ii)对照样本中确定的sBCMA含量，或
(iii)在先前时间点从同一来源或受试者获得的样本中确定的sBCMA含量。
为了本发明的目的，(sBCMA的)术语“含量”可以与术语(sBCMA的)“水平”、“量”或“浓度”互换使用。“sBCMA含量的预定义值”可以是已经预先确定的“截止值”。该值可以例如指示样本中的一定sBCMA含量指示着与sBCMA或增加的sBCMA或BCMA阳性赘生物有关的疾病。例如，如果确定样本中的sBCMA含量为高于预定义截止值三个标准偏差，则从其获得样本的受试者被认为呈多发性骨髓瘤(或本文所述的其他疾病)阳性。“对照样本”通常从与待分析样本(如血清样本)具有相同性质的来源获得。对照样本可以是代表“正常”sBCMA含量(例如代表健康受试者)的样本(“阴性对照样本”)，或者也可以是代表sBCMA含量“异常增加”的样本(“阳性对照样本”)(例如代表患有本文定义的疾病的受试者)。
在另一个方面，本发明提供了一种用于诊断与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使用本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用本发明的检测***，来确定样本中的sBCMA含量；以及
(b)将步骤(a)中确定的sBCMA含量与以下比较：
(i)指示没有这种疾病的该sBCMA含量的预定义截止值，或者
(ii)代表不存在这种疾病的在对照样本中确定的sBCMA含量，
其中相比于(i)的预定义截止值或(ii)的在对照样本中确定的sBCMA含量，步骤(a)中确定的sBCMA含量更高指示存在与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病。
在另一个方面，本发明还提供了一种用于监测与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的进展或监测对与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的治疗的反应的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使用本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用本发明的检测***，在第一个时间点确定从被诊断患有这种疾病的受试者获得的生物学样本中的sBCMA含量；
(b)使用本发明的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用本发明的检测***，在第二个(稍后的)时间点或在治疗后确定从受试者获得的生物学样本中的sBCMA含量；以及
(c)将步骤(a)中确定的sBCMA含量与步骤(b)中确定的sBCMA含量比较；
其中相比于步骤(b)中确定的sBCMA含量，步骤(a)中确定的sBCMA含量更高指示疾病正在发展，和/或其中相比于步骤(b)中确定的sBCMA含量，步骤(a)中确定的sBCMA含量更低指示所述疾病正在进入缓解期或所述疾病对治疗有反应。
对于上述方法，设想“样本”是生物学样本，如人生物学样本。该样本可以是(人)血清样本、血浆样本、血液样本、骨髓样本、组织样本或者从(人)骨髓单核细胞或(人)外周血单核细胞的细胞培养物中获得的上清液。该“样本”还可以获得自人类受试者，优选地，疑似患有或患有(被诊断为患有)与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的人类受试者，或已经接受与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的治疗的受试者，如上文所定义的。
对于上述方法，设想“与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病”可以是BCMA阳性赘生物。所述疾病或BCMA阳性赘生物可以选自下组，该组由以下组成：多发性骨髓瘤、复发性和/或难治性多发性骨髓瘤、重链多发性骨髓瘤、轻链多发性骨髓瘤、髓外骨髓瘤(髓外浆细胞瘤、髓外多发性骨髓瘤)、浆细胞瘤、浆细胞白血病、沃尔丹斯特伦氏巨球蛋白血症(淋巴浆细胞性淋巴瘤)、冒烟型骨髓瘤(冒烟型多发性骨髓瘤)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、原发性中枢神经***淋巴瘤(PCNSL)和B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)。
本发明是指以下项目：
项目1.一种与可溶性BCMA(sBCMA)结合的单克隆抗体，其中该抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第二单克隆抗体的存在下发生的。
项目2.如项目1所述的单克隆抗体，其中sBCMA具有如SEQ ID NO:34所描绘的氨基酸序列。
项目3.如项目1或2所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第三抗体或抗体构建体的存在下发生的。
项目4.如项目3所述的单克隆抗体，其中该第三单克隆抗体或抗体构建体与BCMA的表位簇3结合，优选地与人BCMA的表位簇3结合，其优选地具有如SEQ ID NO:35所描绘的氨基酸序列。
项目5.根据前述任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体包含兔VH区和/或兔VL区。
项目6.根据前述任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体对sBCMA的亲和力(KD)为约≤10-7M、≤10-8M、≤10-9M或≤10-10M。
项目7.如项目6所述的单克隆抗体，其中该亲和力在Biacore测定中确定。
项目8.如前述项目中任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体：
a)包含含有如SEQ ID NO:1中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:2中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:3中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:4中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:5中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:6中所描绘的VL-CDR3的VL区；
b)包含含有如SEQ ID NO:11中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:12中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:13中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:14中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:15中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:16中所描绘的VL-CDR3的VL区；
c)包含含有如SEQ ID NO:21中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:22中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:23中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:24中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:25中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:26中所描绘的VL-CDR3的VL区；
d)与a)的抗体结合相同的sBCMA表位或与a)的抗体竞争结合sBCMA；
e)与b)的抗体结合相同的sBCMA表位或与b)的抗体竞争结合sBCMA；或
f)与c)的抗体结合相同的sBCMA表位或与c)的抗体竞争结合sBCMA。
项目9.如项目8所述的单克隆抗体，该单克隆抗体包含
a)VH区，其包含与SEQ ID NO:7至少60％、65％或70％同源，优选地至少75％或80％同源，更优选地至少85％、90％、91％、92％、93％、94％同源，并且最优选95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列；和VL区，其包含与SEQ ID NO:8至少60％、65％或70％同源，优选地至少75％或80％同源，更优选地至少85％、90％、91％、92％、93％、94％同源，并且最优选95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列；并任选地包含SEQ ID NO:1所描绘的VH-CDR1、SEQ ID NO:2所描绘的VH-CDR2和SEQ ID NO:3所描绘的VH-CDR3，并任选包含SEQ ID NO:4所描绘的VL-CDR1、SEQ ID NO:5所描绘的VL-CDR2和SEQ ID NO:6所描绘的VL-CDR3；
b)VH区，其包含与SEQ ID NO:17至少60％、65％或70％同源，优选地至少75％或80％同源，更优选地至少85％、90％、91％、92％、93％、94％同源，并且最优选95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列；和VL区，其包含与SEQ ID NO:18至少60％、65％或70％同源，优选地至少75％或80％同源，更优选地至少85％、90％、91％、92％、93％、94％同源，并且最优选95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列；并任选地包含含有如SEQID NO:11中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:12中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:13中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:14中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:15中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:16中所描绘的VL-CDR3的VL区；或
c)VH区，其包含与SEQ ID NO:27至少60％、65％或70％同源，优选地至少75％或80％同源，更优选地至少85％、90％、91％、92％、93％、94％同源，并且最优选95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列；和VL区，其包含与SEQ ID NO:28至少60％、65％或70％同源，优选地至少75％或80％同源，更优选地至少85％、90％、91％、92％、93％、94％同源，并且最优选95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列；并任选地包含含有如SEQID NO:21中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:22中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:23中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:24中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:25中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:26中所描绘的VL-CDR3的VL区。
项目10.如项目8所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体：
a)包含如SEQ ID NO:7、17或27的任一项中所描绘的VH区；
b)包含如SEQ ID NO:8、18或28的任一项中所描绘的VL区；
c)包含如SEQ ID NO:7所描绘的VH区和如SEQ ID NO:8所描绘的VL区；
d)包含如SEQ ID NO:17所描绘的VH区和如SEQ ID NO:18所描绘的VL区；
e)包含如SEQ ID NO:27所描绘的VH区和如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；
f)与c)的抗体结合相同的sBCMA表位或与c)的抗体竞争结合sBCMA；
g)与d)的抗体结合相同的sBCMA表位或与d)的抗体竞争结合sBCMA；或
h)与e)的抗体结合相同的sBCMA表位或与e)的抗体竞争结合sBCMA。
项目11.如项目7至10中任一项所述的单克隆抗体，其中通过用嵌合或突变的BCMA分子进行的表位作图、定点诱变(例如丙氨酸扫描)、高通量鸟枪诱变表位作图、交联耦合质谱法、X射线共晶体学、低温电子显微镜检查和氢-氘交换来确定与该sBCMA表位的结合。
项目12.如项目7至10中任一项所述的单克隆抗体，其中与sBCMA结合的竞争是在竞争性ELISA测定中、在Octet竞争测定中(如本文实例2中所述)或在使用亲和素偶联微粒的竞争测定中确定的。
项目13.如项目7至10或12中任一项所述的单克隆抗体，其中与sBCMA结合的竞争被定义为在至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的两种测试抗体之间发生的竞争。
项目14.如前述项目中任一项所述的单克隆抗体，该单克隆抗体是IgG、IgD、IgE、IgM或IgA抗体，优选地是IgG抗体，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
项目15.如前述项目中任一项的单克隆抗体，其中该单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体与生物学样本中的sBCMA结合，该生物样本优选地为人生物学样本，如(人)血清样本、(人)血浆样本、(人)血液样本、(人)骨髓样本、(人)组织样本或者从(人)骨髓单核细胞或(人)外周血单核细胞的细胞培养物中获得的上清液。
项目16.一种多核苷酸，该多核苷酸编码如前述项目中任一项所定义的单克隆抗体。
项目17.一种载体，该载体包含如项目16中所定义的多核苷酸。
项目18.一种宿主细胞，该宿主细胞经如项目16中所定义的多核苷酸或如项目17中所定义的载体转化或转染。
项目19.一种用于产生如项目1至15中任一项所定义的单克隆抗体的方法，所述方法包括在允许所述单克隆抗体表达的条件下培养如项目18中所定义的宿主细胞并从培养物中回收所产生的单克隆抗体。
项目20.一种组合物，该组合物包含如项目1至15中任一项所定义的或如项目19所述的方法所产生的单克隆抗体。
项目21.一种检测***，该检测***包含
a)与sBCMA结合的第一单克隆抗体，和
b)与sBCMA结合的第二单克隆抗体第一单克隆，
其中该第一单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的该第二单克隆抗体的存在下发生的，和/或其中该第二单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的该第一单克隆抗体的存在下发生的。
项目22.如项目21所述的检测***，其中sBCMA具有如SEQ ID NO:34所描绘的氨基酸序列。
项目23.如项目21或22所述的检测***，其中该第一单克隆抗体与sBCMA的结合和该第二单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第三抗体或抗体构建体的存在下发生的。
项目24.如项目23所述的检测***，其中该第三抗体或抗体构建体与BCMA的表位簇3结合，优选地与人BCMA的表位簇3结合，该人BCMA的表位簇3优选地具有如SEQ ID NO:35所描绘的氨基酸序列。
项目25.如项目21至24中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体包含兔VH区和/或兔VL区。
项目26.如项目21至25中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体对sBCMA的亲和力(KD)为约≤10-7M、≤10-8M、≤10-9M或≤10-10M。
项目27.如项目21至26中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体：
a)包含含有如SEQ ID NO:1中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:2中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:3中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:4中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:5中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:6中所描绘的VL-CDR3的VL区；
b)包含含有如SEQ ID NO:11中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:12中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:13中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:14中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:15中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:16中所描绘的VL-CDR3的VL区；或
c)与a)或b)的抗体结合相同的sBCMA表位或者与a)或b)的抗体竞争结合sBCMA；
和/或其中该第二单克隆抗体：
d)包含含有如SEQ ID NO:21中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:22中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:23中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:24中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:25中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:26中所描绘的VL-CDR3的VL区；或
e)与d)的抗体结合相同的sBCMA表位或与d)的抗体竞争结合sBCMA。
项目28.如项目27所述的检测***，其中该第一单克隆抗体：
a)包含如SEQ ID NO:7或17所描绘的VH区；
b)包含如SEQ ID NO:8或18所描绘的VL区；
c)包含如SEQ ID NO:7所描绘的VH区和如SEQ ID NO:8所描绘的VL区；
d)包含如SEQ ID NO:17所描绘的VH区和如SEQ ID NO:18所描绘的VL区；或
e)与c)或d)的抗体结合相同的sBCMA表位或者与c)或d)的抗体竞争结合sBCMA；
和/或其中该第二单克隆抗体：
f)包含如SEQ ID NO:27所描绘的VH区；
g)包含如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；
h)包含如SEQ ID NO:27所描绘的VH区和如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；或
i)与h)的抗体结合相同的sBCMA表位或与h)的抗体竞争结合sBCMA。
项目29.如项目21至28中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体是IgG、IgD、IgE、IgM或IgA抗体，优选地是IgG抗体，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
项目30.如项目21至29中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体用作捕获抗体，并且该第二单克隆抗体用作检测抗体，或者其中该第一单克隆抗体用作检测抗体，并且该第二单克隆抗体用作捕获抗体。
项目31.如项目1至15中任一项所述的单克隆抗体或如项目21至30中任一项所述的检测***在以下方面的用途：
-检测样本中的sBCMA；
-定量样本中的sBCMA；
-诊断与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病；
-对被诊断患有与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的患者进行分层；
-监测与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的进展；或
-监测对与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的治疗的反应。
项目32.一种检测和/或定量样本中的sBCMA的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使用如项目1至15中任一项所述的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用如项目21至30中任一项所述的检测***，确定样本中的sBCMA含量；以及
(b)将步骤(a)中确定的sBCMA含量与以下比较：
(i)该sBCMA含量的预定义值，
(ii)对照样本中确定的sBCMA含量，或
(iii)在先前时间点从同一来源或受试者获得的样本中确定的sBCMA含量。
项目33.一种用于诊断与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使用如项目1至15中任一项所述的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用如项目21至30中任一项所述的检测***，确定样本中的sBCMA含量；以及
(b)将步骤(a)中确定的sBCMA含量与以下比较：
(i)指示没有这种疾病的该sBCMA含量的预定义截止值，或者
(ii)代表不存在这种疾病的在对照样本中确定的sBCMA含量，
其中相比于(i)的预定义截止值或(ii)的在对照样本中确定的sBCMA含量，步骤(a)中确定的sBCMA含量更高指示存在与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病。
项目34.一种用于监测与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的进展或监测对与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的治疗的反应的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使用如项目1至15中任一项所述的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用如项目21至30中任一项所述的检测***，在第一个时间点确定从被诊断患有这种疾病的受试者获得的生物学样本中的sBCMA含量；
(b)使用如项目1至15中任一项所述的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用如项目21至30中任一项所述的检测***，在第二个时间点或在治疗后确定从受试者获得的生物学样本中的sBCMA含量；以及
(c)将步骤(a)中确定的sBCMA含量与步骤(b)中确定的sBCMA含量比较；
其中相比于步骤(b)中确定的sBCMA含量，步骤(a)中确定的sBCMA含量更高指示疾病正在发展，和/或其中相比于步骤(b)中确定的sBCMA含量，步骤(a)中确定的sBCMA含量更低指示所述疾病正在进入缓解期或所述疾病对治疗有反应。
项目35.如项目31所述的用途或如项目32至34中任一项所述的方法，其中该样本是生物样本，优选地是人生物学样本，如血清样本、血浆样本、血液样本、骨髓样本、组织样本或者从骨髓单核细胞或外周血单核细胞的细胞培养物中获得的上清液。
项目36.如项目31或35所述的用途或如项目32至35中任一项所述的方法，其中该样本获得自人类受试者，优选地疑似患有或患有与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的人类受试者，或者已接受与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的治疗的受试者。
项目37.如项目31、35或36中任一项所述的用途或如项目32至36中任一项的方法，其中所述疾病选自下组，该组由以下组成：多发性骨髓瘤、复发性和/或难治性多发性骨髓瘤、重链多发性骨髓瘤、轻链多发性骨髓瘤、髓外骨髓瘤(髓外浆细胞瘤、髓外多发性骨髓瘤)、浆细胞瘤、浆细胞白血病、沃尔丹斯特伦氏巨球蛋白血症(淋巴浆细胞性淋巴瘤)、冒烟型骨髓瘤(冒烟型多发性骨髓瘤)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、原发性中枢神经***淋巴瘤(PCNSL)和B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)。
如本文使用的，除非上下文另外明确指示，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”也包括复数指示物。因此，例如，对“一种试剂”的提及包括此类不同试剂中的一种或多种，并且对“所述方法”的提及包括提及本领域普通技术人员已知的可以修改或取代本文所述的方法的等效步骤和方法。
除非另外指示，否则在一系列元素前面的术语“至少”应被理解为指该系列中的每一个元素。本领域技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文所述的本发明的具体实施例的许多等效物。此类等效物旨在涵盖在本发明中。
术语“和/或”在本文使用时包括“和”、“或”和“由所述术语连接的要素的全部或任何其他组合”的含义。
如本文使用的，术语“约”或“大约”意指在给定值或范围的±20％内、优选在15％内、更优选在10％内、并且最优选在5％内。它还包括具体值，例如“约50”包括值“50”。
贯穿本说明书及权利要求书，除非上下文另外要求，否则词语“包含/包括(comprise以及变型如comprises和comprising)”应当被理解成隐含包括所陈述的整体或步骤、或者整体或步骤的组，但不排除任何其他整体或步骤、或者整体或步骤的组。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有”或“包括”来取代，或者有时在本文中使用时用术语“具有”取代。
当在本文中使用时，“由……组成”时，排除了在权利要求要素中未指定的任何要素、步骤或成分。当在本文中使用时，“基本上由……组成”并不排除不实质性地影响权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。
在本文的每个例子中，术语“包含/包括”、“基本上由……组成”和“由……组成”中的任何一个可以用其他两个术语中的任一个替代。
应当理解，以上描述和以下实例提供了示例性的布置，但是本发明不限于本文描述的特定方法、技术、方案、材料、试剂、物质等，并且因此可以变化。本文使用的术语仅用于描述特定实施例的目的，而不打算限制仅由权利要求限定的本发明的范围。在独立权利要求中提供了本发明的方面。在从属权利要求中提供了本发明的一些可选特征。
本说明书全文中引用的所有出版物和专利(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、说明书等)，无论是上文还是下文，均据此通过引用以其全文特此并入。本文没有任何内容应解释为承认本发明无权由于先前发明而早于这些披露内容。通过引用并入的材料在一定程度上与本说明书发生冲突或不一致时，本说明书将替代任何此类材料。
将从以下实例中获得对本发明及其优点的更好理解，这些实例仅用于说明目的。这些实例并不打算并不应该被解释为以任何方式限制本发明的范围。
实例
实例1：兔单克隆抗sBCMA夹心mAb的产生
本研究的目的是产生非干扰抗体对(“夹心对”)来检测sBCMA，即使存在治疗性抗BCMA抗体或抗体构建体，如“Ther-Ab1”或“Ther-Ab2”或其他抗体/抗体构建体，如具有相同或相似CDR和/或与sBCMA内的相同表位结合的那些抗体/抗体构建体。Ther-Ab2是CD3 xBCMA双特异性半衰期延长抗体构建体，先前已显示其与BCMA细胞外结构域的表位簇3(SEQID NO:35)结合，参见WO 2013/072406。Ther-Ab1具有IgG1格式，并且目前显示干扰使用商业ELISA试剂盒(R&D***公司(R&D systems)山羊多克隆抗体BCMA捕获和检测)进行的BCMA检测/定量(参见图1A)。WO 2014/089335中披露了Ther-Ab1具有以下氨基酸序列：WO 2014/089335的VH-CDR(SEQ ID NO:4-6)、VL-CDR(SEQ ID NO:106-108)、VH(SEQ ID NO:206)、VL(SEQ ID NO:240)。
在下一步中，针对BCMA产生了约400个
Figure BDA0002950082390000611
杂交瘤，并在ELISA测定中测试为对与BCMA结合呈阳性。但是，筛选这些
Figure BDA0002950082390000612
杂交瘤未鉴定出任何Ther-Ab1夹心抗体，即使是使用不同的Octet形式(参见图1B)。
在随后的步骤中，用包含BCMA作为免疫原的嵌合蛋白进行兔免疫活动。针对Ther-Ab1夹心来筛选兔血清。使用以下材料：
·链霉亲和素生物传感器(Pall ForteBio 18-5021)
·生物素化BCMA
·Ther-Ab1
·兔下腔静脉采血(terminal bleeds)
·兔不相关型IgG(Abcam 172730)
·384孔平底黑色聚丙烯微孔板(Greiner BioOne 781209)
·96孔平底黑色聚丙烯微孔板(Greiner BioOne 655209)
·ForteBio Octet HTX
·Octet测定缓冲液(10mM Tris，0.1％Triton，150mM NaCl，1mM CaCl2，0.1mg/mLBSA，pH 7.4)
所有样本均在Octet测定缓冲液中制备。制备10μg/ml的Ther-Ab1和兔不相关型IgG以及0.15μg/ml的生物素-BCMA。将样本以80μL/孔的速度添加到384孔板中。使用96孔板在200μL的Octet缓冲液中预孵育生物传感器。
将该测定设置在ForteBio HTX上以如下方式运行(另外参见图1C)：
1.基线(Octet缓冲液，60秒)
2.负载(生物素-BCMA，300秒)
3.缔合(Ther-Ab1，900秒)
4.基线(Octet缓冲液，60秒)
5.夹心抗体(兔血清或不相关型IgG抗体，300秒)
使用Octet上的报告分子点分析功能(reporter point analysis function)来确定抗体夹心步骤中的结合信号。首先将抗体夹心步骤调零，以使计算出的信号为绝对值。通过Octet在兔血清中确认了Ther-Ab1夹心抗体。
在进一步富集与BCMA结合的兔衍生细胞后，用Ther-Ab2进行了另一个Octet BCMA夹心测定，确认了Ther-Ab2夹心抗体的存在。
最后，鉴定了三种新的兔抗sBCMA抗体(sBCMA-mAb1、sBCMA-mAb2和sBCMA-mAb3)，并对它们的重链和轻链可变区进行了测序。在以下测定中，更详细地表征了这些抗体。
实例2：Octet测定中兔单克隆抗sBCMA夹心mAb的表征
a)针对Ther-Ab2夹心筛选纯化的重组抗体sBCMA-mAb1和sBCMA-mAb2。使用以下材料：
·抗huFc(动力学)生物传感器(Pall ForteBio 18-5064)
·BCMA
·Ther-Ab2
·不相关型(CD3 x靶标-X)双特异性抗体构建体(仅在靶标结合结构域中与Ther-Ab2不同)
·sBCMA-mAb2未纯化但定量的上清液
·sBCMA-mAb1
·兔不相关型IgG(Abcam 172730)
·384孔斜底黑色聚丙烯微孔板(ForteBio 18-5080)
·96孔平底黑色聚丙烯微孔板(GreinerBioOne 655209)
·ForteBio Octet HTX
·Octet测定缓冲液(10mM Tris，0.1％Triton，150mM NaCl，1mM CaCl2，0.1mg/mLBSA，pH 7.4)
所有样本均在Octet测定缓冲液中制备。制备5μg/mL的测试抗体、兔不相关型IgG和不相关型双特异性抗体构建体。制备2μg/mL的BCMA。将样本以60μL/孔添加到384孔板中。使用96孔板在200μL的Octet缓冲液中预孵育生物传感器。
将该测定设置在ForteBio HTX上以如下方式运行：
1.基线(Octet缓冲液，60秒)
2.第一抗体负载(Ther-Ab2或不相关型双特异性抗体构建体，120秒)
3.激活(BCMA，120秒)
4.基线(Octet缓冲液，60秒)
5.第二抗体(sBCMA-mAb2、sBCMA-mAb1或不相关型兔抗体，120秒)
使用Octet上的报告分子点分析功能来确定第二抗体步骤中的结合信号。首先将第二抗体步骤调零，以使计算出的信号为绝对值。结果显示于图2中。显示兔抗sBCMA抗体sBCMA-mAb1和sBCMA-mAb2有Ther-Ab2夹心。
b)与实例2a)中所描述的测定一致，进行了进一步的Octet测定。以下设置证明抗体sBCMA-mAb1和sBCMA-mAb2共享相似的sBCMA表位(竞争测定)：
1.基线(Octet缓冲液)
2.第一抗体负载(Ther-Ab2)
3.激活(BCMA)
4.基线(Octet缓冲液)
5.兔抗体1(sBCMA-mAb1、sBCMA-mAb2或不相关型兔IgG抗体，参见下表2)
6.兔抗体2(sBCMA-mAb2、sBCMA-mAb1或不相关型兔IgG抗体，参见下表2)
表2：不同实验方法中兔抗体1和2的组合(1-9)
Figure BDA0002950082390000631
Figure BDA0002950082390000641
c)值得注意的是，在226种针对sBCMA的兔抗体中，只有一种能够进行Ther-Ab2和sBCMA-mAb1夹心，即sBCMA-mAb3。这在包括以下步骤的Octet夹心测定中得到了证明：
1.在SA Octet传感器上捕获B山羊抗兔Fc
2.结合sBCMA-mAb1
3.不相关型IgG的阻断传感器
4.结合Ther-Ab2或不相关型双特异性抗体构建体+/-BCMA
5.结合sBCMA-mAb3
结果显示于图3中。这些结果在使用sBCMA-mAb1和sBCMA-mAb3作为纯化的重组抗体并且包括以下Octet夹心步骤的进一步测定中得到了确认：
1.在SA Octet传感器上捕获B山羊抗兔Fc
2.结合sBCMA-mAb1
3.不相关型IgG的阻断传感器
4.结合+/-BCMA
5.结合Ther-Ab2
6.结合sBCMA-mAb3
结果显示于图4中。在该测定中，在进一步添加BCMA、Ther-Ab2和sBCMA-mAb3(阴性对照)后，步骤2中用不相关IgG替代sBCMA-mAb1并没有得到任何信号。
d)以下设置证明，就对Ther-Ab2的最小干扰而言，最佳的sBCMA/Ther-Ab2夹心是用sBCMA-mAb1捕获并用sBCMA-mAb3检测：
1.在SA Octet传感器上捕获B山羊抗兔Fc
2.结合sBCMA-mAb1(设置1)或结合sBCMA-mAb3(设置2)
3.不相关型IgG的阻断传感器
4.结合+/-BCMA
5.结合Ther-Ab2
6.结合sBCMA-mAb3(设置1)或结合sBCMA-mAb1(设置2)
与使用sBCMA-mAb3作为捕获抗体相比，使用sBCMA-mAb1作为捕获抗体时，使用BCMA和不使用BCMA的设置之间的信号差异更加明显。
实例3：兔单克隆抗sBCMA夹心mAb的亲和力确定
测量了以下兔单克隆抗sBCMA夹心mAb的结合亲和力概况：
-sBCMA-mAb1(储备液浓度1.43mg/ml)
-sBCMA-mAb2(储备液浓度2.251mg/ml)
-sBCMA-mAb3(储备液浓度0.78mg/ml)
使用Biacore 3000(GE医疗集团(GE Healthcare))在25℃下进行实验。运行缓冲液为HBS-P(10mM HEPES，pH 7.4，150mM NaCl，0.05％表面活性剂P-20)+0.1％BSA，并以高流速(100μl/min)进行动力学。使用pH 1.7的10mM甘氨酸进行再生。
表面制备：将山羊抗兔IgG Fc(来自杰克森研究公司(Jackson Research)的产品号111-005-046)在乙酸钠(pH 5)中1/20稀释，并使用胺偶联共价偶联至样品和CM5传感器芯片的参考Fc(Fc 1)。在HBS-P+0.1％BSA中稀释单独的mAb，并以0.3μg/ml的浓度捕获在Fc2、3或4上，用于进行sBCMA结合的动力学分析。
相互作用参数：将sBCMA(1.19mg/ml储备液)作为分析物以600nM、300nM、150nM、75nM、37.5nM、18.8nM和9.4nM进样，将75nM集中运行两次以担保可重复性。监测缔合速率2.5分钟。解离时间为20分钟，以确定那些具有较慢解离速率的mAb的更准确的动力学。数据是双重背景参考，因为从数据中减去了参考Fc和0nM分析物浓度。在Biacore评价软件中使用1:1朗格缪尔传质结合模型。
结果显示于图5和下表3中：
表3：兔单克隆抗sBCMA夹心mAb的亲和力确定
mAb KD(M) ka(1/Ms) kd(1/s)
sBCMA-mAb1 1.03x10<sup>-10</sup> 6.3x10<sup>5</sup> 6.47x10<sup>-5</sup>
sBCMA-mAb2 3.77x10<sup>-7</sup> 4.92x10<sup>4</sup> 0.0185
sBCMA-mAb3 4.5x10<sup>-9</sup> 9.01x10<sup>5</sup> 4.05x10<sup>-3</sup>
表4：序列表
Figure BDA0002950082390000661
Figure BDA0002950082390000671
序列表
<110> 安进公司（Amgen Inc.）
<120> 针对可溶性BCMA的抗体
<130> 32243/53500A/US
<150> US 62/738,997
<151> 2018-09-28
<160> 35
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 1
Ser Gly Tyr Tyr Ile Cys
1 5
<210> 2
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 2
Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 3
Asp Tyr Gly His Ser Tyr Trp Asn Leu
1 5
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 4
Gln Ala Ser Glu Asp Ile Ser Ser Arg Leu Ala
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 5
Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 6
Leu Gly Asp Tyr Tyr Val Ser Ser Tyr Gly Asn Ala
1 5 10
<210> 7
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 7
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Phe
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Gly His Ser Tyr Trp Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Ser Ser Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Gly Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Asp Tyr Tyr Val Ser Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 9
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 9
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Phe
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Cys Ile Tyr Thr Gly Ser Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Gly His Ser Tyr Trp Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser
180 185 190
Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr
260 265 270
Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln
275 280 285
Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln
325 330 335
Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu
340 345 350
Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val
405 410 415
Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 10
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Glu Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Ser Ser Arg
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Gly Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Asp Tyr Tyr Val Ser Ser
85 90 95
Tyr Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys Gly Asp
100 105 110
Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Leu Phe Pro Pro Ser Ser Asp Glu Val
115 120 125
Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro
130 135 140
Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly
145 150 155 160
Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys
180 185 190
Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser
195 200 205
Phe Ser Arg Lys Asn Cys
210
<210> 11
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 11
Ser Ser Tyr Trp Ile Cys
1 5
<210> 12
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 12
Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Asp Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 13
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 13
Asp Ala Ala Thr Ser Tyr Tyr Ser His Tyr Phe Thr Leu
1 5 10
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 14
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Gly Leu Ala
1 5 10
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 15
Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser
1 5
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 16
Gln Val Thr His Tyr Glu Ser Gly Val Pro
1 5 10
<210> 17
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 17
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Asp Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Ala Thr Ser Tyr Tyr Ser His Tyr Phe Thr Leu Trp
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 18
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Thr His Tyr Glu Ser Gly
85 90 95
Val Pro Leu Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Glu
100 105
<210> 19
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 19
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Cys Ile Tyr Ala Gly Ser Gly Asp Phe Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp
50 55 60
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Ala Thr Ser Tyr Tyr Ser His Tyr Phe Thr Leu Trp
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr
130 135 140
Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro
165 170 175
Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser
180 185 190
Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala
195 200 205
Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys
210 215 220
Pro Thr Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro
275 280 285
Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu
290 295 300
Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro
340 345 350
Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys
370 375 380
Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln
405 410 415
Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 20
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 20
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Cys
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Thr His Tyr Glu Ser Gly
85 90 95
Val Pro Leu Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Glu Gly Asp Pro Val
100 105 110
Ala Pro Thr Val Leu Leu Phe Pro Pro Ser Ser Asp Glu Val Ala Thr
115 120 125
Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr Phe Pro Asp Val
130 135 140
Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr Thr Gly Ile Glu
145 150 155 160
Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr Tyr Asn Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser His Lys Glu Tyr
180 185 190
Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val Gln Ser Phe Ser
195 200 205
Arg Lys Asn Cys
210
<210> 21
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 21
Ser Tyr Tyr Tyr Met Cys
1 5
<210> 22
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 22
Cys Ile Phe Ser Asp Ser Gly Gly His Thr Ala Tyr Ala Ser Trp Ala
1 5 10 15
Glu Gly
<210> 23
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 23
Asp Arg Arg Asp Val Val Tyr Ile Arg Asp Leu
1 5 10
<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 24
Gln Ser Ser Glu Ser Val Tyr Asn Asn Asn Ala Leu Ala
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 25
Gly Ala Ser Ser Leu Ala Ser
1 5
<210> 26
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 26
Ala Gly Tyr Lys Arg Tyr Asn Asn Asp Gly His Ala
1 5 10
<210> 27
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 27
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Met Asp Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Phe Ser Asp Ser Gly Gly His Thr Ala Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Ala Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val
65 70 75 80
Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Arg Arg Asp Val Val Tyr Ile Arg Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 28
Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Lys Arg Tyr
85 90 95
Asn Asn Asp Gly His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
<210> 29
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 29
Gln Glu Gln Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Lys Ala Ser Gly Met Asp Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Tyr Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Ala Cys Ile Phe Ser Asp Ser Gly Gly His Thr Ala Tyr Ala Ser
50 55 60
Trp Ala Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val
65 70 75 80
Thr Leu Gln Met Thr Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
85 90 95
Cys Ala Arg Asp Arg Arg Asp Val Val Tyr Ile Arg Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val
130 135 140
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Leu Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser
165 170 175
Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Ser Val
180 185 190
Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Thr
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu
275 280 285
Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile Arg Val Val Ser Thr Leu Pro
290 295 300
Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg
340 345 350
Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala
370 375 380
Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg
405 410 415
Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 30
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<400> 30
Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Ser Cys Gln Ser Ser Glu Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Glu Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Tyr Lys Arg Tyr
85 90 95
Asn Asn Asp Gly His Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Leu Phe Pro Pro Ser Ser Asp
115 120 125
Glu Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr
130 135 140
Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr
145 150 155 160
Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr
165 170 175
Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser
180 185 190
His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val
195 200 205
Gln Ser Phe Ser Arg Lys Asn Cys
210 215
<210> 31
<211> 323
<212> PRT
<213> 穴兔属（Oryctolagus）
<400> 31
Gly Gln Pro Lys Ala Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Cys Gly
1 5 10 15
Asp Thr Pro Ser Ser Thr Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Leu Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Thr Leu Thr Asn
35 40 45
Gly Val Arg Thr Phe Pro Ser Val Arg Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Ser Val Thr Ser Ser Ser Gln Pro Val Thr Cys
65 70 75 80
Asn Val Ala His Pro Ala Thr Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Ala
85 90 95
Pro Ser Thr Cys Ser Lys Pro Thr Cys Pro Pro Pro Glu Leu Leu Gly
100 105 110
Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
115 120 125
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
130 135 140
Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Thr Trp Tyr Ile Asn Asn Glu Gln Val
145 150 155 160
Arg Thr Ala Arg Pro Pro Leu Arg Glu Gln Gln Phe Asn Ser Thr Ile
165 170 175
Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Ala His Gln Asp Trp Leu Arg Gly
180 185 190
Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
195 200 205
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Pro Leu Glu Pro Lys Val
210 215 220
Tyr Thr Met Gly Pro Pro Arg Glu Glu Leu Ser Ser Arg Ser Val Ser
225 230 235 240
Leu Thr Cys Met Ile Asn Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ser Val Glu
245 250 255
Trp Glu Lys Asn Gly Lys Ala Glu Asp Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Ala
260 265 270
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val
275 280 285
Pro Thr Ser Glu Trp Gln Arg Gly Asp Val Phe Thr Cys Ser Val Met
290 295 300
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Ile Ser Arg Ser
305 310 315 320
Pro Gly Lys
<210> 32
<211> 104
<212> PRT
<213> 穴兔属
<400> 32
Gly Asp Pro Val Ala Pro Thr Val Leu Leu Phe Pro Pro Ser Ser Asp
1 5 10 15
Glu Val Ala Thr Gly Thr Val Thr Ile Val Cys Val Ala Asn Lys Tyr
20 25 30
Phe Pro Asp Val Thr Val Thr Trp Glu Val Asp Gly Thr Thr Gln Thr
35 40 45
Thr Gly Ile Glu Asn Ser Lys Thr Pro Gln Asn Ser Ala Asp Cys Thr
50 55 60
Tyr Asn Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Ser Thr Gln Tyr Asn Ser
65 70 75 80
His Lys Glu Tyr Thr Cys Lys Val Thr Gln Gly Thr Thr Ser Val Val
85 90 95
Gln Ser Phe Ser Arg Lys Asn Cys
100
<210> 33
<211> 184
<212> PRT
<213> 智人
<400> 33
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu
50 55 60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile
65 70 75 80
Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu
85 90 95
Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu
100 105 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys
115 120 125
Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe
130 135 140
Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys
145 150 155 160
Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu
165 170 175
Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
180
<210> 34
<211> 54
<212> PRT
<213> 智人
<400> 34
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala
50
<210> 35
<211> 18
<212> PRT
<213> 智人
<400> 35
Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg
1 5 10 15
Tyr Cys

Claims (31)

1.一种与可溶性BCMA(sBCMA)结合的单克隆抗体，其中该抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第二单克隆抗体的存在下发生的。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其中sBCMA具有如SEQ ID NO:34所描绘的氨基酸序列。
3.如权利要求1或2所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第三抗体或抗体构建体的存在下发生的。
4.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体包含兔VH区和/或兔VL区。
5.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体对sBCMA的亲和力(KD)为约≤10-7M、≤10-8M、≤10-9M或≤10-10M。
6.如权利要求5所述的单克隆抗体，其中该亲和力是在Biacore测定中确定的。
7.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体：
a)包含含有如SEQ ID NO:1中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:2中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:3中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:4中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:5中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:6中所描绘的VL-CDR3的VL区；
b)包含含有如SEQ ID NO:11中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:12中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:13中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:14中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:15中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:16中所描绘的VL-CDR3的VL区；
c)包含含有如SEQ ID NO:21中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:22中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:23中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:24中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:25中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:26中所描绘的VL-CDR3的VL区；
d)与a)的抗体结合相同的sBCMA表位或与a)的抗体竞争结合sBCMA；
e)与b)的抗体结合相同的sBCMA表位或与b)的抗体竞争结合sBCMA；或
f)与c)的抗体结合相同的sBCMA表位或与c)的抗体竞争结合sBCMA。
8.如权利要求7所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体：
a)包含如SEQ ID NO:7、17或27的任一项中所描绘的VH区；
b)包含如SEQ ID NO:8、18或28的任一项中所描绘的VL区；
c)包含如SEQ ID NO:7所描绘的VH区和如SEQ ID NO:8所描绘的VL区；
d)包含如SEQ ID NO:17所描绘的VH区和如SEQ ID NO:18所描绘的VL区；
e)包含如SEQ ID NO:27所描绘的VH区和如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；
f)与c)的抗体结合相同的sBCMA表位或与c)的抗体竞争结合sBCMA；
g)与d)的抗体结合相同的sBCMA表位或与d)的抗体竞争结合sBCMA；或
h)与e)的抗体结合相同的sBCMA表位或与e)的抗体竞争结合sBCMA。
9.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，该单克隆抗体是IgG、IgD、IgE、IgM或IgA抗体，优选地是IgG抗体，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
10.如前述权利要求中任一项所述的单克隆抗体，其中该单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体与人血清、人血浆或人血液样本中的sBCMA结合。
11.一种多核苷酸，该核苷酸编码如前述权利要求中任一项所定义的单克隆抗体。
12.一种载体，该载体包含如权利要求11中所定义的多核苷酸。
13.一种宿主细胞，该宿主细胞经如权利要求11中所定义的多核苷酸或如权利要求12中所定义的载体转化或转染。
14.一种用于产生如权利要求1至10中任一项所定义的单克隆抗体的方法，所述方法包括：在允许表达所述单克隆抗体的条件下培养如权利要求13中所定义的宿主细胞并且从培养物中回收所产生的单克隆抗体。
15.一种组合物，该组合物包含如权利要求1至10中任一项所定义的或如权利要求14所述的方法所产生的单克隆抗体。
16.一种检测***，该检测***包含
a)与sBCMA结合的第一单克隆抗体，和
b)与sBCMA结合的第二单克隆抗体第一单克隆，
其中该第一单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的该第二单克隆抗体的存在下发生的，和/或其中该第二单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的该第一单克隆抗体的存在下发生的。
17.如权利要求16所述的检测***，其中sBCMA具有如SEQ ID NO:34所描绘的氨基酸序列。
18.如权利要求16或17所述的检测***，其中该第一单克隆抗体与sBCMA的结合和该第二单克隆抗体与sBCMA的结合是在与sBCMA结合的第三抗体或抗体构建体的存在下发生的。
19.如权利要求16-18中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体包含兔VH区和/或兔VL区。
20.如权利要求16-19中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体对sBCMA的亲和力(KD)为约≤10-7M、≤10-8M、≤10-9M或≤10-10M。
21.如权利要求16-20中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体：
a)包含含有如SEQ ID NO:1中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:2中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:3中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及含有如SEQ ID NO:4中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:5中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:6中所描绘的VL-CDR3的VL区；
b)包含含有如SEQ ID NO:11中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:12中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:13中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:14中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:15中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:16中所描绘的VL-CDR3的VL区；或
c)与a)或b)的抗体结合相同的sBCMA表位或者与a)或b)的抗体竞争结合sBCMA；
和/或其中该第二单克隆抗体：
d)包含含有如SEQ ID NO:21中所描绘的VH-CDR1、如SEQ ID NO:22中所描绘的VH-CDR2和如SEQ ID NO:23中所描绘的VH-CDR3的VH区，以及包含如SEQ ID NO:24中所描绘的VL-CDR1、如SEQ ID NO:25中所描绘的VL-CDR2和如SEQ ID NO:26中所描绘的VL-CDR3的VL区；或
e)与d)的抗体结合相同的sBCMA表位或与d)的抗体竞争结合sBCMA。
22.如权利要求21所述的检测***，其中该第一单克隆抗体：
a)包含如SEQ ID NO:7或17所描绘的VH区；
b)包含如SEQ ID NO:8或18所描绘的VL区；
c)包含如SEQ ID NO:7所描绘的VH区和如SEQ ID NO:8所描绘的VL区；
d)包含如SEQ ID NO:17所描绘的VH区和如SEQ ID NO:18所描绘的VL区；或
e)与c)或d)的抗体结合相同的sBCMA表位或者与c)或d)的抗体竞争结合sBCMA；
和/或其中该第二单克隆抗体：
f)包含如SEQ ID NO:27所描绘的VH区；
g)包含如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；
h)包含如SEQ ID NO:27所描绘的VH区和如SEQ ID NO:28所描绘的VL区；或
i)与h)的抗体结合相同的sBCMA表位或与h)的抗体竞争结合sBCMA。
23.如权利要求16-22中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体和/或该第二单克隆抗体是IgG、IgD、IgE、IgM或IgA抗体，优选地是IgG抗体，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
24.如权利要求16-23中任一项所述的检测***，其中该第一单克隆抗体用作捕获抗体，并且该第二单克隆抗体用作检测抗体，或者其中该第一单克隆抗体用作检测抗体，并且该第二单克隆抗体用作捕获抗体。
25.如权利要求1-10中任一项所述的单克隆抗体或如权利要求16-24中任一项所述的检测***在以下方面的用途：
-检测样本中的sBCMA；
-定量样本中的sBCMA；
-诊断与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病；
-对被诊断患有与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的患者进行分层；
-监测与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的进展；或
-监测对与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的治疗的反应。
26.一种检测和/或定量样本中的sBCMA的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使用如权利要求1-10中任一项所述的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用如权利要求16-24中任一项所述的检测***，确定样本中的sBCMA含量；以及
(b)将步骤(a)中确定的sBCMA含量与以下比较：
(i)该sBCMA含量的预定义值，
(ii)对照样本中确定的sBCMA含量，或
(iii)在先前时间点从同一来源或受试者获得的样本中确定的sBCMA含量。
27.一种用于诊断与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使用如权利要求1-10中任一项所述的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用如权利要求16-24中任一项所述的检测***，确定样本中的sBCMA含量；以及
(b)将步骤(a)中确定的sBCMA含量与以下比较：
(i)指示没有这种疾病的该sBCMA含量的预定义截止值，或者
(ii)代表不存在这种疾病的在对照样本中确定的sBCMA含量，
其中相比于(i)的预定义截止值或(ii)的在对照样本中确定的sBCMA含量，步骤(a)中确定的sBCMA含量更高指示存在与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病。
28.一种用于监测与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的进展或监测对与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的治疗的反应的方法，该方法包括以下步骤：
(a)使用如权利要求1-10中任一项所述的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用如权利要求16-24中任一项所述的检测***，在第一个时间点确定从被诊断患有这种疾病的受试者获得的生物学样本中的sBCMA含量；
(b)使用如权利要求1-10中任一项所述的单克隆抗体(或抗体构建体)，或使用如权利要求16-24中任一项所述的检测***，在第二个时间点或在治疗后确定从该受试者获得的生物学样本中的sBCMA含量；以及
(c)将步骤(a)中确定的sBCMA含量与步骤(b)中确定的sBCMA含量比较；
其中相比于步骤(b)中确定的sBCMA含量，步骤(a)中确定的sBCMA含量更高指示疾病正在发展，和/或其中相比于步骤(b)中确定的sBCMA含量，步骤(a)中确定的sBCMA含量更低指示所述疾病正在进入缓解期或所述疾病对治疗有反应。
29.如权利要求25所述的用途或如权利要求26-28中任一项所述的方法，其中该样本是生物样本，优选地是人生物学样本，如血清样本、血浆样本、血液样本、骨髓样本、组织样本或者从骨髓单核细胞或外周血单核细胞的细胞培养物中获得的上清液。
30.如权利要求25或29所述的用途或如权利要求26-29中任一项所述的方法，其中该样本获得自人类受试者，优选地是疑似患有或患有与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的人类受试者，或者已经接受与sBCMA或增加的sBCMA有关的疾病的治疗的受试者。
31.如权利要求25、29或30中任一项所述的用途或如权利要求26-30中任一项所述的方法，其中该疾病选自下组，该组由以下组成：多发性骨髓瘤、复发性和/或难治性多发性骨髓瘤、重链多发性骨髓瘤、轻链多发性骨髓瘤、髓外骨髓瘤(髓外浆细胞瘤、髓外多发性骨髓瘤)、浆细胞瘤、浆细胞白血病、沃尔丹斯特伦氏巨球蛋白血症(淋巴浆细胞性淋巴瘤)、冒烟型骨髓瘤(冒烟型多发性骨髓瘤)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、原发性中枢神经***淋巴瘤(PCNSL)和B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)。
CN201980056983.1A 2018-09-28 2019-09-27 针对可溶性bcma的抗体 Pending CN112703204A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862738997P 2018-09-28 2018-09-28
US62/738,997 2018-09-28
PCT/US2019/053433 WO2020069303A1 (en) 2018-09-28 2019-09-27 Antibodies against soluble bcma

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112703204A true CN112703204A (zh) 2021-04-23

Family

ID=68296657

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201980056983.1A Pending CN112703204A (zh) 2018-09-28 2019-09-27 针对可溶性bcma的抗体

Country Status (11)

Country Link
US (1) US11505614B2 (zh)
EP (1) EP3856781A1 (zh)
JP (1) JP2022501389A (zh)
KR (1) KR20210068408A (zh)
CN (1) CN112703204A (zh)
AR (1) AR116548A1 (zh)
BR (1) BR112021005669A2 (zh)
MA (1) MA53732A (zh)
TW (1) TW202028239A (zh)
UY (1) UY38393A (zh)
WO (1) WO2020069303A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3819007A1 (en) * 2019-11-11 2021-05-12 Amgen Research (Munich) GmbH Dosing regimen for anti-bcma agents

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3029068A1 (en) * 2014-12-03 2016-06-08 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA for use in the treatment of diseases
WO2017083511A1 (en) * 2015-11-13 2017-05-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-bcma polypeptides and proteins

Family Cites Families (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1985A (en) 1841-02-18 Charles m
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
US4879231A (en) 1984-10-30 1989-11-07 Phillips Petroleum Company Transformation of yeasts of the genus pichia
US4751180A (en) 1985-03-28 1988-06-14 Chiron Corporation Expression using fused genes providing for protein product
US4935233A (en) 1985-12-02 1990-06-19 G. D. Searle And Company Covalently linked polypeptide cell modulators
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
GB8610600D0 (en) 1986-04-30 1986-06-04 Novo Industri As Transformation of trichoderma
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
JPH02500329A (ja) 1987-05-21 1990-02-08 クリエイテイブ・バイオマリキユールズ・インコーポレーテツド ターゲット化多機能蛋白質
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0402226A1 (en) 1989-06-06 1990-12-12 Institut National De La Recherche Agronomique Transformation vectors for yeast yarrowia
US5683888A (en) 1989-07-22 1997-11-04 University Of Wales College Of Medicine Modified bioluminescent proteins and their use
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5292658A (en) 1989-12-29 1994-03-08 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Boyd Graduate Studies Research Center Cloning and expressions of Renilla luciferase
DE69131780T2 (de) 1991-03-11 2000-11-16 Univ Georgia Res Foundation At Klonierung und expression der luziferase aus renilla
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
US7381803B1 (en) 1992-03-27 2008-06-03 Pdl Biopharma, Inc. Humanized antibodies against CD3
CA2169298A1 (en) 1993-09-10 1995-03-16 Martin Chalfie Uses of green fluorescent protein
WO1995021191A1 (en) 1994-02-04 1995-08-10 William Ward Bioluminescent indicator based upon the expression of a gene for a modified green-fluorescent protein
US5777079A (en) 1994-11-10 1998-07-07 The Regents Of The University Of California Modified green fluorescent proteins
CA2219361C (en) 1995-04-27 2012-02-28 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
US5874304A (en) 1996-01-18 1999-02-23 University Of Florida Research Foundation, Inc. Humanized green fluorescent protein genes and methods
US5804387A (en) 1996-02-01 1998-09-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University FACS-optimized mutants of the green fluorescent protein (GFP)
US5876995A (en) 1996-02-06 1999-03-02 Bryan; Bruce Bioluminescent novelty items
US5925558A (en) 1996-07-16 1999-07-20 The Regents Of The University Of California Assays for protein kinases using fluorescent protein substrates
US5976796A (en) 1996-10-04 1999-11-02 Loma Linda University Construction and expression of renilla luciferase and green fluorescent protein fusion genes
EP1500329B1 (en) 1996-12-03 2012-03-21 Amgen Fremont Inc. Human antibodies that specifically bind human TNF alpha
ATE290205T1 (de) 1996-12-12 2005-03-15 Prolume Ltd Vorrichtung und verfahren zum nachweis und identifizieren von infektiösen wirkstoffen
CA2324648C (en) 1998-03-27 2013-02-26 Prolume, Ltd. Luciferases, fluorescent proteins, nucleic acids encoding the luciferases and fluorescent proteins and the use thereof in diagnostics, high throughput screening and novelty items
JP4169478B2 (ja) 1998-04-21 2008-10-22 マイクロメット アーゲー Ｃｄ１９×ｃｄ３特異的ポリペプチドおよびその使用
GB9815909D0 (en) 1998-07-21 1998-09-16 Btg Int Ltd Antibody preparation
DE69911793T2 (de) 1998-07-28 2004-08-12 Micromet Ag Heterominikörper
DK1673398T3 (da) 2003-10-16 2011-04-18 Micromet Ag Multispecifikke, deimmuniserede CD3-bindere
BRPI0511782B8 (pt) 2004-06-03 2021-05-25 Novimmune Sa anticorpos anti-cd3, uso e método de produção dos mesmos, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico isolada e vetor
JP2010524851A (ja) 2007-04-03 2010-07-22 マイクロメット アーゲー 種間特異的結合ドメイン
US10981998B2 (en) 2008-10-01 2021-04-20 Amgen Research (Munich) Gmbh Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody
HUE038225T2 (hu) 2011-08-23 2018-10-29 Roche Glycart Ag Bispecifikus, T-sejtaktiváló antigénkötõ, molekulák
US20130078250A1 (en) 2011-08-23 2013-03-28 Oliver Ast Bispecific t cell activating antigen binding molecules
TWI679212B (zh) * 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
TW201425336A (zh) 2012-12-07 2014-07-01 Amgen Inc Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質
US20140308285A1 (en) 2013-03-15 2014-10-16 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
AR095374A1 (es) * 2013-03-15 2015-10-14 Amgen Res (Munich) Gmbh Moléculas de unión para bcma y cd3
AU2014236769B2 (en) 2013-03-15 2018-09-27 Amgen Inc. Heterodimeric bispecific antibodies
US20140302037A1 (en) 2013-03-15 2014-10-09 Amgen Inc. BISPECIFIC-Fc MOLECULES
WO2015048272A1 (en) 2013-09-25 2015-04-02 Amgen Inc. V-c-fc-v-c antibody
ES2898329T3 (es) * 2016-01-12 2022-03-07 Oncotracker Inc Métodos mejorados para supervisar el estado inmunitario de un sujeto
MA43955B1 (fr) 2016-02-03 2022-02-28 Amgen Inc Anticorps anti-bcma et anti-cd3 bispécifiques de format bite

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3029068A1 (en) * 2014-12-03 2016-06-08 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA for use in the treatment of diseases
WO2017083511A1 (en) * 2015-11-13 2017-05-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-bcma polypeptides and proteins

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ERIC SANCHEZ等: "Serum B-cell maturation antigen is elevated in multiple myeloma and correlates with disease status and survival", BRITISH JOURNAL OF HAEMATOLOGY, vol. 158, no. 6, pages 727 - 738, XP055186278, DOI: 10.1111/j.1365-2141.2012.09241.x *
J. M. PE´REZ DE LA LASTRA等: "Epitope mapping of 10 monoclonal antibodies against the pig analogue of human membrane cofactor protein (MCP)", IMMUNOLOGY, vol. 96, no. 4, pages 663 - 670 *
MICHAEL GHERMEZI等: "Serum B-cell maturation antigen: a novel biomarker to predict outcomes for multiple myeloma patients", HAEMATOLOGICA, vol. 102, no. 4, pages 785 - 795, XP055564051, DOI: 10.3324/haematol.2016.150896 *

Also Published As

Publication number Publication date
UY38393A (es) 2020-03-31
JP2022501389A (ja) 2022-01-06
BR112021005669A2 (pt) 2021-06-22
WO2020069303A1 (en) 2020-04-02
US11505614B2 (en) 2022-11-22
TW202028239A (zh) 2020-08-01
EP3856781A1 (en) 2021-08-04
MA53732A (fr) 2022-01-05
US20200102398A1 (en) 2020-04-02
AR116548A1 (es) 2021-05-19
KR20210068408A (ko) 2021-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109937212B (zh) B7-h3抗体、其抗原结合片段及其医药用途
CN104271602B (zh) 双特异性抗体
CN110914304B (zh) Cd96抗体、其抗原结合片段及医药用途
KR20200005746A (ko) 이중특이적 항체의 제조 방법, 이중특이적 항체 및 이러한 항체의 치료적 용도
KR20150041801A (ko) 복합체-특이적 항체 및 항체 단편 및 그의 용도
AU2015298480B2 (en) Anti-tenascin C antibodies and uses thereof
NL2011406C2 (en) Method for obtaining april-binding peptides, process for producing the peptides, april-binding peptides obtainable with said method/process and use of the april-binding peptides.
WO2021139758A1 (zh) 新型多肽复合物
CN109336973B (zh) 抗转铁蛋白抗体及其用途
TW202237651A (zh) 靶向ＣＤ３９及ＴＧＦβ之新穎結合物分子
US11505614B2 (en) Antibodies binding to soluble BCMA
US20230129844A1 (en) Diagnostic antibodies against mucin 17 and uses thereof
CN111892657A (zh) 用于检测米田堡血型抗原的抗体及其片段、试剂盒及方法
US20110245100A1 (en) Generation of antibodies to an epitope of interest
US20130109586A1 (en) Generation of antibodies to an epitope of interest that contains a phosphomimetic amino acid
TWI615408B (zh) 人源化之單株抗體及其用途
TW202313681A (zh) Ｍａｇｅｂ２結合構建體
CA3213771A1 (en) Methods of treatment using protein binders to irhom2 epitopes
KR20240004694A (ko) 항체
KR20240034954A (ko) SIRPα 변이체에 특이적으로 결합하는 항체

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination