CN112578033B - 一种经典名方大建中汤的黄酮类成分测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种经典名方大建中汤的黄酮类成分测定方法。该方法以大建中汤制剂为供试品，进行高效液相色谱检测，同时测定大建中汤制剂中的芦丁、金丝桃苷和槲皮素。对按照经典名方大建中汤(金匮要略)古方工艺制得的大建中汤制剂，采用本发明的方法制成供试品溶液，在本发明特定的色谱条件下，不仅可以有效排除糖类物质的干扰，还能够对大建中汤制剂中的多个黄酮类成分(芦丁、金丝桃苷和槲皮素)进行定性分析和定量测定。本发明的测定方法可以准确、全面评价大建中汤的质量，简便快速，稳定性和重复性好，有利于提高大建中汤质量标准，提高药物的安全性和可靠性，应用前景广阔。

Description

一种经典名方大建中汤的黄酮类成分测定方法

技术领域

本发明属于中药质量控制领域，具体涉及一种经典名方大建中汤的黄酮类成分测定方法。

背景技术

大建中汤出自《金匮要略(汉·张仲景)腹满寒疝宿食病脉证治第十》：心胸中大寒痛，呕不能饮食，腹中寒，上冲皮起，出见有头足，上下痛而不可触近，大建中汤主之。大建中汤方：蜀椒二合(去汗)，干姜四两，人参二两；上三味，以水四升，煮取二升，去滓，内胶饴一升，微火煮取一升半，分温再服；如一炊顷，可饮粥二升，后更服。当一日食糜，温覆之。大建中汤主治脾胃虚寒之胸腹满痛之症，方中蜀椒味辛大热，温脾胃，助命火，并能散积杀虫；干姜辛热，温中助阳，散寒降逆；人参补益脾胃，扶助正气；重用饴糖建中缓急，并能缓和椒、姜燥烈之性。诸药合用，共奏温中补虚，降逆止痛之功。

大建中汤制剂作为汉方制剂在日本上市，目前日本药局方对大建中汤制剂的质量标准仅对无糖处方中人参皂苷Rb1和6-姜酚进行含量测定。目前国内研究大建中汤制剂的质量标准也是针对无糖处方进行人参皂苷Rg1、Rb1、Re和6-姜辣素的含量测定。也就是说，现在国内外对大建中汤制剂的质量控制标准都是针对不含胶饴的无糖类大建中汤制剂，而且，尚无以大建中汤制剂中的水溶性黄酮类成分(比如芦丁、金丝桃苷、槲皮素)为指标性成分进行质量控制的方法。

有研究表明，黄酮类化合物具有清除自由基、镇痛、解痉、抗炎、抗菌等多种作用。大建中汤制剂的制备方法为水煎提取，故其中可吸收的有效成分多为水溶性，而水溶性成分中，黄酮类成分(比如芦丁、金丝桃苷、槲皮素)是大建中汤中祛寒止痛的主要活性成分。因此，研究出一种能够同时测定大建中汤制剂中多种黄酮类成分含量的方法，对大建中汤的质量控制具有非常重要的意义。

随着中药经典名方开发成为当下中医药界研究的热点，相关管理部门已经规定经典名方需严格遵从古方的处方、剂量和制备工艺进行研究。2018年5月29日，国家药品监督管理局发布了《古代经典名方中药复方制剂简化注册审批管理规定》，明确了古代经典名方制剂研制的2个阶段：经典名方物质基准研制与制剂研制。其中，经典名方物质基准是指以古代医籍中记载的古代经典名方制备方法为依据制备而得的中药药用物质的标准，除成型工艺外，其余制备方法应当与古代医籍记载基本一致。因此，对经典名方大建中汤制剂的物质基准研究必须是在按照古方记载、加入胶饴所得制剂的基础上进行。

但是，按照经典名方大建中汤(金匮要略)古方工艺制得的大建中汤制剂中胶饴的质量占比较高，会对制剂中指标性成分含量的测定产生较大的干扰。所以，研究出一种能够排除制剂中糖类物质的干扰，同时准确测定大建中汤制剂中多种黄酮类成分(比如芦丁、金丝桃苷、槲皮素)的方法，对经典名方大建中汤制剂的质量控制具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种经典名方大建中汤(含糖类物质)的黄酮类成分测定方法，同时对大建中汤中的黄酮类成分(包括芦丁、金丝桃苷和槲皮素)进行定性和定量的分析，为经典名方大建中汤的质量控制提供一种新的思路。

本发明提供了一种同时测定大建中汤制剂中多种黄酮类成分的方法，所述方法是以大建中汤制剂为供试品，进行高效液相色谱检测，同时测定大建中汤制剂中的芦丁、金丝桃苷和槲皮素；包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取大建中汤制剂，加入水溶解，然后加入醇类试剂提取，收集醇类试剂层，干燥，然后用溶剂溶解，过滤，取滤液，即得供试品溶液；

(2)注入高效液相色谱仪检测；

色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：由A相和B相组成，A相为乙腈，B相为磷酸水溶液。

进一步地，所述方法为定量测定芦丁、金丝桃苷和槲皮素的方法。

进一步地，所述方法以芦丁、金丝桃苷和槲皮素为对照品，测定大建中汤中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量；对照品溶液的制备方法如下：分别称取芦丁、金丝桃苷和槲皮素，加溶剂溶解，即得；优选的，所述溶剂为醇类溶剂，更优选为甲醇。

进一步地，步骤(1)中，所述大建中汤制剂是通过以下方法制得的：取人参、干姜、蜀椒，加水提取，过滤，取滤液，加入糖类物质，浓缩或干燥，即得。

进一步地，所述人参、干姜、蜀椒的质量比为(25～35)：(55～65)：9，优选为30：60：9；所述人参与水的质量体积比为1:(20～35)g/ml，优选为1：27g/ml；所述提取方式为煎煮，煎煮时间为煎煮至体系的体积减少至原来的一半；所述糖类物质为麦芽糖；所述人参与糖类物质的质量比为1：(8～12)，优选为1:10。

进一步地，步骤(1)中，所述提取方式为振摇提取；所述大建中汤制剂与水的质量体积比为1：(3～5)，优选为1:4g/ml；所述醇类试剂为正丁醇，优选为水饱和的正丁醇；所述振摇提取的次数为2～4次，优选为4次，每次振摇提取加入的醇类试剂与大建中汤制剂的体积质量比为(3～5):1ml/g，优选为5:1ml/g；所述用溶剂溶解时采用的溶剂为醇类溶剂，优选为甲醇。

进一步地，步骤(2)中，所述磷酸水溶液的质量浓度为0.05％～0.10％，优选为0.10％。

进一步地，步骤(2)中，所述色谱条件为梯度洗脱，洗脱条件如下表所示：

时间	流动相A％	流动相B％
			0	10	90
5	15	85
			15	15	85
16	18	82
			30	18	82
32	25	75
			40	25	75
41	90	10
			48	90	10

表中时间的单位为分钟，％A表示A相占流动相的体积，％B表示B相占流动相的体积。

进一步地，步骤(2)中，所述色谱条件中的检测波长为340～380nm，优选为360nm。

进一步地，步骤(2)中，所述色谱条件中的柱温为25～35℃，优选为35℃；流速为0.8～1.2ml/min，优选为0.8ml/min。

本发明中，蜀椒经基源考证为现代芸香科花椒属植物花椒Zanthoxylumbungeanum Maxim.的干燥果皮。古代供药用自《神农本草经》因生长地区分为“秦椒”(下品)，“蜀椒”(中品)，其性状有一定差异。《本草纲目》蜀椒释名：巴椒，汉椒，川椒，南椒，蓎藙，点椒。蜀，古国名。汉，水名。今川西成都、广汉、潼川诸处是矣。巴亦国名，又水名。今川东重庆、夔州、顺庆、阆中诸处是矣。川则巴蜀之总称，因岷、沱、黑、白四大水，分东、西、南、北为四川也。本发明中所使用“蜀椒”均产于四川汉源。

胶饴为古方说法，又名饴糖、软糖、饧、饧糖等，为粳米、糯米、大麦、小麦、栗、玉蜀黍、薏苡仁及各种富含淀粉的可食物质经发酵糖化制成的糖类食品。现代将胶饴称为饴糖或麦芽糖。

续滤液是指初滤液倒掉之后继续采集到的滤液。

本发明中，0.10％磷酸指质量浓度为0.10％(g/g)的磷酸水溶液。

实验结果表明，对按照经典名方大建中汤(金匮要略)古方工艺制得的含糖类物质的大建中汤制剂，采用本发明的方法(特别是以水饱和的正丁醇为提取溶剂)制成供试品溶液，在本发明特定的色谱条件下，不仅可以有效排除糖类物质的干扰，还能够对大建中汤制剂中的多个黄酮类成分(芦丁、金丝桃苷和槲皮素)进行定性分析和定量测定。

本发明的测定方法可以准确、全面评价大建中汤的质量，简便快速，稳定性和重复性好，有利于提高大建中汤质量标准，提高药物的安全性和可靠性，应用前景广阔。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为实施例2大建中汤供试品溶液的色谱图。

图2为对照品芦丁、金丝桃苷、槲皮素的标准曲线。

具体实施方式

本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。

水饱和的正丁醇的制备方法为：将正丁醇和蒸馏水混合(混合比例为体积比1:1)，振摇，混匀，静置分层，上层为水饱和的正丁醇溶液，下层为正丁醇饱和的水溶液。

芦丁对照品购买于中国食品药品检定研究院，纯度91.7％；金丝桃苷对照品购买于中国食品药品检定研究院，纯度99.41％；槲皮苷对照品购买于中国食品药品检定研究院，纯度99.17％。

本发明实施例采用的大建中汤制剂是按照经典名方大建中汤(金匮要略)古方工艺制得的，具体制备方法如下：取蜀椒9g(去汗)，干姜60g，人参30g。在上述3味药材中加入水800ml，煎煮至液体剩余400ml，过滤，取出药渣，保留滤液，内胶饴(即加入麦芽糖)200ml(重量为300g)，微火煮取300ml。浓缩至稠膏状，60℃减压干燥14小时，放冷，粉碎过2号筛，即得(干燥后干物质重量为250g)。

实施例1、定性测定大建中汤中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的方法

在以下色谱条件下，同时测定大建中汤中是否含有芦丁、金丝桃苷、槲皮素。

大建中汤供试品溶液的制备：同实施例2。

色谱条件：同实施例2。

测定：精密吸取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，检测得到色谱图。然后根据上述色谱条件下芦丁、金丝桃苷、槲皮素的保留时间进行定性分析，判断该大建中汤样品中是否含有芦丁、金丝桃苷、槲皮素。

实施例2、定量测定大建中汤中芦丁、金丝桃苷和槲皮素含量的方法

以芦丁、金丝桃苷、槲皮素为对照品，在以下色谱条件下，同时测定大建中汤中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量。

大建中汤供试品溶液的制备：取大建中汤制剂2g，加入纯水8ml，振摇使完全溶解，加入水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次加入水饱和的正丁醇的量为10ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣用少量甲醇溶解，转移至2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液即得。

对照品溶液的制备：分别称取芦丁对照品112.93mg、金丝桃苷对照品25.22mg、槲皮苷对照品24.80mg，精密称定，分别加入甲醇配制成浓度约1mg/ml的溶液作为3种对照品储备液；分别精密吸取以上对照品储备液各20～40μl，转移至同一容量瓶(1ml)中，用甲醇定容，摇匀，即得混合对照品溶液。混合对照品溶液中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的浓度如表1所示。

表1混合对照品溶液的配置

色谱条件：色谱柱GL Sciencess InertSustain AQ-C18，4.6×250mm，5μm，填充剂为十八烷基硅烷键合硅；流动相由A相和B相组成，A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速0.8ml/min，柱温35℃，检测波长360nm，进样10μl。

梯度洗脱条件如表2所示：

表2梯度洗脱条件

时间(min)	流动相A％(体积百分比)	流动相B％(体积百分比)
			0	10	90
5	15	85
			15	15	85
16	18	82
			30	18	82
32	25	75
			40	25	75
41	90	10
			48	90	10

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，检测得到的色谱图如图1所示。

然后根据芦丁、金丝桃苷、槲皮素的标准曲线(标准曲线如表7所示)，计算得到该大建中汤样品中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量。

以下通过实验例证明本发明的有益效果。

实验例1、色谱条件筛选实验

1、实验方法

参照实施例2的测定方法，根据表3所示参数调整色谱条件(包括流动相组成、柱温、流速、色谱柱、检测波长)，其余条件与实施例2相同，分别对同一批大建中汤制剂制得的大建中汤供试品溶液进行测定，根据色谱峰分离度(R)及峰形进行评价。

2、实验结果

表3色谱条件筛选

从表3可以看出，在以十八烷基硅烷键合硅为填充剂，流动相由A相和B相组成，A相为乙腈，B相为0.05％～0.1％磷酸水溶液，流速0.8～1.2ml/min，柱温25～35℃，检测波长360nm的色谱条件下，大建中汤供试品溶液的色谱峰均具有良好的分离度，可以用来对大建中汤供试品中的芦丁、金丝桃苷、槲皮素进行定性和定量的分析。

综合考虑色谱图的峰行，以下色谱条件是同时测定大建中汤中芦丁、金丝桃苷、槲皮素含量的优选色谱条件：色谱柱GL Sciencess InertSustain AQ-C18，4.6×250mm，5μm；流动相由A相和B相组成，A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱(梯度洗脱条件如表2所示)，流速0.8ml/min，柱温35℃，检测波长360nm，进样10μl。

实验例2、供试品溶液制备方法筛选实验

(1)提取方法筛选

提取方法1-1：取大建中汤制剂2g，加入纯水10ml，振摇使完全溶解，加入甲醇30ml(使混合溶液甲醇浓度为75％)振摇，过滤，取续滤液作为供试品溶液1-1。

提取方法1-2：取大建中汤制剂2g，加入75％甲醇40ml，超声40min，放冷，补足重量，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液1-2。

然后在实施例2所述色谱条件下，分别检测供试品溶液1-1、供试品溶液1-2中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量。

表4不同提取方法下所得供试品溶液中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量

提取方法	芦丁μg/g	金丝桃苷μg/g	槲皮苷μg/g	合计μg/g
					1-1	6.52	28.63	5.31	40.47
1-2	6.15	27.11	3.67	36.94

结果如表4所示，可以看出，与提取方法1-2相比，提取方法1-1所得大建中汤供试品溶液中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的总含量更高。说明在都采用75％甲醇作为提取溶剂的情况下，将大建中汤制剂先用水溶解后再振摇提取，比直接超声提取更利于提高大建中汤供试品溶液中的芦丁、金丝桃苷、槲皮素总含量。

此外，观察发现上述两种提取方法制得的供试品溶液较为粘稠，密度较大，不易过滤，这是因为其中仍含有较多糖类物质，对大建中汤制剂中黄酮类成分的含量测定也存在较大干扰。

(2)提取溶剂筛选

水饱和的正丁醇提取：取大建中汤制剂2g，加入纯水8ml，振摇使完全溶解，加入水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次加入水饱和的正丁醇的量为8ml，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣用少量甲醇溶解，转移至2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

70％甲醇提取：取大建中汤制剂2g，加入纯水8ml，振摇使完全溶解，然后加入甲醇18.7ml(使混合溶液甲醇浓度为70％)，振摇，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

75％甲醇提取：取大建中汤制剂2g，加入纯水8ml，振摇使完全溶解，然后加入甲醇24ml(使混合溶液甲醇浓度为75％)，振摇，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

然后在实施例2所述色谱条件下，分别检测供试品溶液中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量。

表5不同提取溶剂下所得供试品溶液中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量

结果如表5所示，可以看出，在上述提取方法下，与75％甲醇、70％甲醇相比，以水饱和的正丁醇为提取溶剂所得大建中汤供试品溶液中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的总含量更高。

此外，观察发现上述方法以70％甲醇作为提取溶剂和以75％甲醇作为提取溶剂时，制得的供试品溶液较为粘稠，密度较大，不易过滤，这是因为其中仍含有较多糖类物质。上述方法以水饱和的正丁醇作为提取溶剂时，提取液回收溶剂至干后用甲醇复溶制得到的供试品溶液不粘稠，容易过滤，糖类杂质去除更完全。

(3)水饱和正丁醇振摇提取条件筛选

取大建中汤制剂2g，加入纯水(纯水的体积与大建中汤制剂重量的比例为3-5ml/g)，振摇使完全溶解，然后加入水饱和的正丁醇振摇提取2-4次，每次加入水饱和的正丁醇的体积与大建中汤制剂重量的比例为3-5ml/g，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣用少量甲醇溶解，转移至2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。具体筛选条件如表6所示。

然后在实施例2所述色谱条件下，分别检测各供试品溶液中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量。

表6不同振摇提取条件下所得供试品溶液中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的含量

观察发现上述10个用水饱和正丁醇振摇提取的工艺所得供试品溶液均为澄清溶液，不粘稠，易过滤，糖类杂质去除效果均很好。

结果如表6所示，可以看出，在上述提取方法下，当纯水的体积与大建中汤制剂重量的比例为4ml/g，加入水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次加入水饱和的正丁醇的体积与大建中汤制剂重量的比例为5ml/g时，所制得的大建中汤供试品中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的总含量最高。此时排除了麦芽糖对芦丁、金丝桃苷、槲皮素测试的干扰。

上述实验结果表明，利用本发明的色谱条件，可以对大建中汤的提取工艺进行优化。而且采用以下提取方法所得大建中汤供试品中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的总含量最高，该提取方法排除了麦芽糖对芦丁、金丝桃苷、槲皮素测试的干扰：取大建中汤制剂2g，加入纯水8ml(4倍量)，振摇使完全溶解，加入水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次加入水饱和的正丁醇的体积为10ml(5倍量)，合并正丁醇液，回收溶剂至干，残渣用少量甲醇溶解，转移至2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

实验例3、方法学考察

(1)标准曲线绘制

按照实施例2的方法配置混合对照品溶液，精密吸取该混合对照品溶液，在实施例2所示色谱条件下测定。以混合对照品溶液中对照品的进样浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，进行线性回归，得到对照品的标准曲线方程及线性范围。结果见表7和图2所示。

表7对照品的标准曲线方程及线性范围

(2)精密度实验

按照实施例2的方法制得大建中汤供试品溶液，在实施例2所述的色谱条件下，连续进样6次，记录峰面积，计算各成分(芦丁、金丝桃苷、槲皮苷)的含量并计算RSD，结果见表8。

表8精密度测试结果

编号	芦丁μg/g	金丝桃苷μg/g	槲皮苷μg/g
				1	10.24	41.85	7.59
2	10.17	42.01	7.63
				3	10.32	42.10	7.64
4	10.37	42.29	7.64
				5	10.63	43.05	7.77
6	10.37	42.46	7.66
				RSD(％)	1.55	1.01	0.81

可以看出，各成分(芦丁、金丝桃苷、槲皮苷)的含量RSD值均≤2％，说明本发明的检测方法具有良好的精密度。

(3)重复性实验

按照实施例2的方法平行配置6份大建中汤供试品溶液，在实施例2所述的色谱条件下分别进样测定，记录峰面积，计算各成分(芦丁、金丝桃苷、槲皮苷)的含量并计算RSD，结果见表9。

表9重复性测试结果

编号	芦丁μg/g	金丝桃苷μg/g	槲皮苷μg/g
				1	11.02	44.76	8.07
2	11.69	46.94	8.55
				3	11.34	44.48	8.05
4	11.28	46.17	8.39
				5	11.36	46.13	8.38
6	11.11	44.99	8.12
				RSD(％)	2.06	2.13	2.51

可以看出，各成分(芦丁、金丝桃苷、槲皮苷)的含量RSD值均＜2.51％，说明本发明的检测方法具有良好的重复性。

(4)稳定性实验

按照实施例2的方法平行配置6份大建中汤供试品溶液，在实施例2所述的色谱条件下，分别在供试品溶液配置后0、1、2、4、8、12、16、20、24h进样测定，记录峰面积，计算各成分(芦丁、金丝桃苷、槲皮苷)的含量并计算RSD，结果见表10。

表10稳定性测试结果

可以看出，各进样时间下样品中测定的各成分(芦丁、金丝桃苷、槲皮苷)的含量RSD值均＜1.5％，说明本发明制得的大建中汤供试品溶液在24小时内稳定性良好。

(5)加样回收实验

取已知芦丁、金丝桃苷、槲皮苷含量的大建中汤制剂1g共6份，精密称定，分别精密加入芦丁、金丝桃苷、槲皮苷对照品，按照实施例2的方法平行配置6份大建中汤供试品溶液。按照实施例2所述色谱条件测定，记录峰面积，计算各成分加样回收率并计算RSD，结果见表11。

表11加样回收实验结果

可以看出，本发明的测定方法对芦丁、金丝桃苷、槲皮苷含量的测定准确度良好。

综上，本发明提供了一种经典名方大建中汤(含糖类物质)制剂的黄酮类成分测定方法。该方法以按照经典名方大建中汤(金匮要略)古方工艺制得的大建中汤制剂为供试品，进行高效液相色谱检测，同时测定大建中汤中的芦丁、金丝桃苷和槲皮素。在本发明特定的色谱条件下，利用上述测定方法可有效排除糖类物质的干扰，不仅能够对大建中汤中的多个黄酮类成分(芦丁、金丝桃苷和槲皮素)进行定性分析，还能进行定量测定。本发明的测定方法可以准确、全面评价大建中汤的质量，简便快速，稳定性和重复性好，有利于提高大建中汤质量标准，提高药物的安全性和可靠性，应用前景广阔。

Claims (8)

1.一种同时测定大建中汤制剂中多种黄酮类成分的方法，其特征在于：所述方法是以大建中汤制剂为供试品，进行高效液相色谱检测，同时测定大建中汤制剂中的芦丁、金丝桃苷和槲皮素；包括如下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取大建中汤制剂，加入水溶解，然后加入醇类试剂提取，收集醇类试剂层，干燥，然后用溶剂溶解，过滤，取滤液，即得供试品溶液；

所述大建中汤制剂是通过以下方法制得的：取人参、干姜、蜀椒，加水提取，过滤，取滤液，加入糖类物质，浓缩或干燥，即得；所述提取方式为振摇提取，所述大建中汤制剂与水的质量体积比为1：（3~5），所述醇类试剂为水饱和的正丁醇，所述振摇提取的次数为2~4次，每次振摇提取加入的醇类试剂与大建中汤制剂的体积质量比为（3~5）:1 ml/g，所述用溶剂溶解时采用的溶剂为甲醇；

（2）注入高效液相色谱仪检测；

色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：由A相和B相组成，A相为乙腈，B相为磷酸水溶液；所述磷酸水溶液的质量浓度为0.05%~0.10%；

所述色谱条件为梯度洗脱，洗脱条件如下表所示：

表中时间的单位为分钟，%A表示A相占流动相的体积，%B表示B相占流动相的体积；

所述色谱条件中的检测波长为360nm，所述色谱条件中的柱温为25~35℃，流速为0.8~1.2 ml/min。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法为定量测定芦丁、金丝桃苷和槲皮素的方法。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法以芦丁、金丝桃苷和槲皮素为对照品，测定大建中汤中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量；对照品溶液的制备方法如下：分别称取芦丁、金丝桃苷和槲皮素，加甲醇溶解，即得。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述人参、干姜、蜀椒的质量比为（25~35）：（55~65）：9；所述人参与水的质量体积比为1:（20~35） g/ml；所述提取方式为煎煮，煎煮时间为煎煮至体系的体积减少至原来的一半；所述糖类物质为麦芽糖；所述人参与糖类物质的质量比为1：（8~12）。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述人参、干姜、蜀椒的质量比为30： 60：9；所述人参与水的质量体积比为1：27 g/ml；所述人参与糖类物质的质量比为1:10。

6.根据权利要求1~3任一项所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述大建中汤制剂与水的质量体积比为1:4 g/ml；所述振摇提取的次数为4次，每次振摇提取加入的醇类试剂与大建中汤制剂的体积质量比为5:1 ml/g。

7.根据权利要求1~3任一项所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述磷酸水溶液的质量浓度为0.10%。

8.根据权利要求1~3任一项所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述色谱条件中的柱温为35℃，流速为0.8ml/min。

Images