CN112543868A - 分析方法和分析装置 - Google Patents
分析方法和分析装置 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112543868A CN112543868A CN201980052538.8A CN201980052538A CN112543868A CN 112543868 A CN112543868 A CN 112543868A CN 201980052538 A CN201980052538 A CN 201980052538A CN 112543868 A CN112543868 A CN 112543868A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- ions
- carbons
- intensity
- acyl groups
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims abstract description 101
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims abstract description 181
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 90
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims abstract description 87
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 87
- 150000001840 cholesterol esters Chemical class 0.000 claims abstract description 53
- -1 cholesterol ester peroxide Chemical class 0.000 claims abstract description 38
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 19
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 105
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 82
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 61
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 54
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 51
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 50
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 40
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 38
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 24
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 24
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 claims description 13
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 6
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 6
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 229940067605 phosphatidylethanolamines Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 201
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 57
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 26
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 21
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 20
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 19
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 19
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 15
- 230000010365 information processing Effects 0.000 description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 10
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 9
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 9
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 238000001360 collision-induced dissociation Methods 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 6
- BHYOQNUELFTYRT-UHFFFAOYSA-N Cholesterol sulfate Natural products C1C=C2CC(OS(O)(=O)=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 BHYOQNUELFTYRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- BHYOQNUELFTYRT-DPAQBDIFSA-N cholesterol sulfate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OS(O)(=O)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 BHYOQNUELFTYRT-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 5
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- PSVRFUPOQYJOOZ-QNPWAGBNSA-N 1-stearoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC PSVRFUPOQYJOOZ-QNPWAGBNSA-N 0.000 description 4
- ANRKEHNWXKCXDB-BHFWLYLHSA-N 1-stearoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC ANRKEHNWXKCXDB-BHFWLYLHSA-N 0.000 description 4
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 4
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- HBZNVZIRJWODIB-NHCUFCNUSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC HBZNVZIRJWODIB-NHCUFCNUSA-N 0.000 description 3
- WTJKGGKOPKCXLL-VYOBOKEXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z-octadecenoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-VYOBOKEXSA-N 0.000 description 3
- FORFDCPQKJHEBF-VPUSDGANSA-N 1-octadecanoyl-2-[(9Z,12Z)-octadecadienoyl]-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC FORFDCPQKJHEBF-VPUSDGANSA-N 0.000 description 3
- QIBZFHLFHCIUOT-NPBIGWJUSA-N 1-palmitoyl-2-palmitoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCC QIBZFHLFHCIUOT-NPBIGWJUSA-N 0.000 description 3
- YDTWOEYVDRKKCR-KNERPIHHSA-N 1-stearoyl-2-linoleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC YDTWOEYVDRKKCR-KNERPIHHSA-N 0.000 description 3
- PDIGSOAOQOXRDU-WJPZTBRDSA-N LysoPC(20:5(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)) Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C PDIGSOAOQOXRDU-WJPZTBRDSA-N 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- YEYCQJVCAMFWCO-PXBBAZSNSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] formate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 YEYCQJVCAMFWCO-PXBBAZSNSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- LSOWKZULVQWMLY-APPDJCNMSA-N 1-(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-docosahexaenoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C LSOWKZULVQWMLY-APPDJCNMSA-N 0.000 description 2
- PZRFVAHZNWPPAC-VBKSFVIKSA-N 1-[(11Z)-octadecenoyl]-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCC\C=C/CCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C PZRFVAHZNWPPAC-VBKSFVIKSA-N 0.000 description 2
- BBNHCUBQEQJHIG-FZZJNMCHSA-N 1-[(8Z,11Z,14Z)-icosatrienoyl]-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C BBNHCUBQEQJHIG-FZZJNMCHSA-N 0.000 description 2
- GOMVPVRDBLLHQC-VEJNOCSESA-N 1-[(8Z,11Z,14Z,17Z)-icosatetraenoyl]-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C GOMVPVRDBLLHQC-VEJNOCSESA-N 0.000 description 2
- ROPRRXYVXLDXQO-XSQXPFHXSA-N 1-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(=O)OCCN ROPRRXYVXLDXQO-XSQXPFHXSA-N 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-HSZRJFAPSA-N 1-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-HSZRJFAPSA-N 0.000 description 2
- YVYMBNSKXOXSKW-HXUWFJFHSA-N 1-hexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(=O)OCCN YVYMBNSKXOXSKW-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 2
- SPJFYYJXNPEZDW-FTJOPAKQSA-N 1-linoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C SPJFYYJXNPEZDW-FTJOPAKQSA-N 0.000 description 2
- PYVRVRFVLRNJLY-MZMPXXGTSA-N 1-oleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(=O)OCCN PYVRVRFVLRNJLY-MZMPXXGTSA-N 0.000 description 2
- IHNKQIMGVNPMTC-RUZDIDTESA-N 1-stearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C IHNKQIMGVNPMTC-RUZDIDTESA-N 0.000 description 2
- SVRBKLJIDJHADS-USWSLJGRSA-N 2-linoleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)O[C@H](CO)COP(O)(=O)OCCN SVRBKLJIDJHADS-USWSLJGRSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- VOEVEGPMRIYYKC-HNJOWPRISA-N cholesteryl (4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosahexaenoate Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OC(=O)CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CC)C1 VOEVEGPMRIYYKC-HNJOWPRISA-N 0.000 description 2
- XZFUGMCJZFRBKF-BDJFIEMMSA-N cholesteryl (5Z,8Z,11Z,14Z,17Z-eicosapentaenoate) Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CC)C1 XZFUGMCJZFRBKF-BDJFIEMMSA-N 0.000 description 2
- XOLZNHXNFMEUGA-DCDLNIKOSA-N cholesteryl (7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosapentaenoate Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OC(=O)CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CC)C1 XOLZNHXNFMEUGA-DCDLNIKOSA-N 0.000 description 2
- NAACPBBQTFFYQB-LJAITQKLSA-N cholesteryl linoleate Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC)C1 NAACPBBQTFFYQB-LJAITQKLSA-N 0.000 description 2
- FYMCIBHUFSIWCE-WVXFKAQASA-N cholesteryl linolenate Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CC)C1 FYMCIBHUFSIWCE-WVXFKAQASA-N 0.000 description 2
- RJECHNNFRHZQKU-RMUVNZEASA-N cholesteryl oleate Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)C1 RJECHNNFRHZQKU-RMUVNZEASA-N 0.000 description 2
- HODJWNWCVNUPAQ-XDOSKZMUSA-N cholesteryl palmitoleate Chemical compound C([C@@H]12)C[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC[C@H]3[C@@H]1CC=C1[C@]2(C)CC[C@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCC)C1 HODJWNWCVNUPAQ-XDOSKZMUSA-N 0.000 description 2
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- XEVRBOQZSXWGQO-PAUXXPOVSA-N lysophosphatidylethanolamine (22:6(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)/0:0) Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(=O)OCCN XEVRBOQZSXWGQO-PAUXXPOVSA-N 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M [(2r)-3-acetyloxy-2-hydroxypropyl] 2-aminoethyl phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCCN CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000024711 extrinsic asthma Diseases 0.000 description 1
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000000752 ionisation method Methods 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000002552 multiple reaction monitoring Methods 0.000 description 1
- 239000000101 novel biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
- G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/62—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating the ionisation of gases, e.g. aerosols; by investigating electric discharges, e.g. emission of cathode
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
-
- H—ELECTRICITY
- H01—ELECTRIC ELEMENTS
- H01J—ELECTRIC DISCHARGE TUBES OR DISCHARGE LAMPS
- H01J49/00—Particle spectrometers or separator tubes
- H01J49/0027—Methods for using particle spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2560/00—Chemical aspects of mass spectrometric analysis of biological material
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
分析方法具备如下步骤:将试样供于液相色谱法;进行供于液相色谱法的试样的第一质谱分析,检测对应于胆固醇酯的第一离子和对应于胆固醇酯过氧化物的第二离子;以及,根据检测到的第一离子的强度与检测到的第二离子的强度之比,进行试样的氧化度的解析。
Description
技术领域
本发明涉及分析方法和分析装置。
背景技术
试样中所含的构成脂质的各分子的解析对于生物试样的解析、医学诊断和药物开发等而言非常重要。特别是对构成脂质的多种多样的分子全体进行综合解析的脂类组学对疾病生物标记物的探索、疾病机理的研究极为有用。脂类组学中的新型生物标记物的探索中,经长期从许多个体逐次采集试样并保管,在一部分个体发生特定疾病时,追溯所保管的试样并进行解析,从而能够发现与该疾病相关的分子。
为了适宜地进行包含脂质的试样的解析,评价经保管的试样的品质是重要的。非专利文献1中,逐次测定经3年以上冷冻保存的血浆中的磷脂、胆固醇酯的量,评价基于质谱分析的定量精度,对冷冻保存的脂质的稳定性也获得了认识。非专利文献2中,将血液试样在室温下放置几小时后,对于血液试样中的脂质和代谢产物,报道了放置前与放置后的基于质谱分析的检测强度的增减。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1:Laura A.Heiskanen,Matti Suoniemi,Hung Xuan Ta,KirillTarasov,and Kim Ekroos,“Long-Term Performance and Stability of MolecularShotgun LipidomicAnalysis of Human Plasma Samples”Analytical Chemistry(美国),ACS Publications,2013年9月、Volume 85,Issue 18,pp.8757-8763
非专利文献2:Beate Kamlage,Sandra Gonzalez Maldonado,Bianca Bethan,Erik Peter,Oliver Schmitz,Volker Liebenberg,Philipp Schatz"Quality markersaddressing preanalytical variations of blood and plasma processing identifiedby broad and targeted metabolite profiling,"Clinical Chemistry(美国),AmericanAssociation for Clinical Chemistry,2014年2月、Volume 60,Issue 2,pp.399-412
发明内容
发明要解决的问题
为了评价经保管的试样等的品质,理想的是,能够通过质谱分析定量性评价试样的氧化度。
用于解决问题的方案
根据本发明的第一方式,分析方法具备如下步骤:将试样供于液相色谱法;进行供于前述液相色谱法的前述试样的第一质谱分析,检测对应于胆固醇酯的第一离子和对应于胆固醇酯过氧化物的第二离子;以及,根据检测到的前述第一离子的强度与检测到的前述第二离子的强度之比,进行前述试样的氧化度的解析。
根据本发明的第二方式,在第一方式的分析方法中,优选的是,具备如下步骤:根据前述第一离子的强度和前述第二离子的强度中的任一者除以另一者所得的比率,算出表示前述试样的氧化度的指标。
根据本发明的第三方式,在第二方式的分析方法中,优选的是,具备如下步骤:输出前述指标或根据前述指标来表示前述试样的氧化度的信息。
根据本发明的第四方式,在第二或第三方式的分析方法中,优选的是,具备如下步骤:根据前述指标,解析通过前述第一质谱分析得到的测定数据。
根据本发明的第五方式,在第一~第四中任一方式的分析方法中,优选的是,具备如下步骤:通过前述第一质谱分析,检测分别与前述试样的各个成分对应的源自试样的离子;算出前述源自试样的离子之中对应于磷脂的离子的强度的和;以及,使用前述和,将检测到的各个前述源自试样的离子的强度进行标准化。
根据本发明的第六方式,在第五方式的分析方法中,优选的是,前述磷脂包含溶血磷脂和具备多个酰基的磷脂。
根据本发明的第七方式,在第五或第六方式的分析方法中,优选的是,通过第二质谱分析检测不变动离子,使用前述不变动离子的强度将通过前述第二质谱分析检测到的各个离子的强度进行标准化,其中,所述不变动离子为如下离子:在对同一前述试样隔着规定时间进行至少2次前述第一质谱分析时,标准化的前述强度的变动为规定比例以下。
根据本发明的第八方式,在第一~第四中任一方式的分析方法中,优选的是,具备如下步骤:使用对应于规定物质的离子的强度,将在前述第一质谱分析中检测到的分别与前述试样的各个成分对应的源自试样的离子的强度进行标准化,前述物质为选自由具备碳数为18且碳间具有1处双键的酰基的胆固醇酯、具备碳数为20且碳间具有5处双键的酰基的胆固醇酯、具备碳数为20且碳间具有5处双键的酰基的溶血磷脂酰胆碱、具备碳数合计为32且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺、具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺和具备碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的2个酰基的磷脂酰乙醇胺组成的组中的至少一个分子。
根据本发明的第九方式,在第八方式的分析方法中,优选的是,使用与前述物质中所含的胆固醇酯对应的离子的强度的和,将在前述第一质谱分析中检测到的、分别与前述试样的各个胆固醇酯对应的前述源自试样的离子的强度进行标准化。
根据本发明的第十方式,在第八或第九方式的分析方法中,优选的是,使用与前述物质中所含的溶血磷脂酰胆碱对应的离子的强度,将在前述第一质谱分析中检测到的、分别与前述试样的各个溶血磷脂对应的前述源自试样的离子的强度进行标准化。
根据本发明的第十一方式,在第八~第十一中任一方式的分析方法中,优选的是,使用与前述物质中所含的磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺对应的离子的强度的和,将在前述第一质谱分析中检测到的、分别与前述试样的各个含有多个酰基的磷脂对应的源自试样的离子的强度进行标准化。
根据本发明的第十二方式,在第一~第四中任一方式的分析方法中,优选的是,具备如下步骤:通过前述第一质谱分析,检测分别与前述试样的各个成分对应的源自试样的离子;算出前述源自试样的离子之中与溶血磷脂和具备多个酰基的磷脂对应的离子的强度的和;以及使用前述和,将检测到的各个前述源自试样的离子的强度进行标准化,前述磷脂不包含具有碳数为20且碳间的双键数为4的酰基的分子。
根据本发明的第十三方式,在第五~第十一中任一方式的分析方法中,优选的是,前述源自试样的离子包含具有碳数为20且碳间的双键数为4的脂肪酸或酰基的脂质分子,根据对应于前述脂质分子的离子的标准化的强度来判定前述试样是否获取自健康人。
根据本发明的第十四方式,在第一~第十三中任一方式的分析方法中,优选的是,前述试样是在血液的状态下保管的试样。
根据本发明的第十五方式,分析装置具备:试样导入部,其将试样导入;液相色谱仪,其将前述试样分离;质谱分析部,其进行被前述液相色谱仪分离的前述试样的第一质谱分析,检测对应于胆固醇酯的第一离子和对应于胆固醇酯过氧化物的第二离子;以及,氧化度解析部,其根据检测到的前述第一离子的强度与检测到的前述第二离子的强度之比,进行前述试样的氧化度的解析。
发明的效果
根据本发明,能够通过质谱分析定量性评价试样的氧化度,评价经保管的试样的品质。
附图说明
图1为用于说明分析装置的概念图。
图2为示出一实施方式的分析方法的流程的流程图。
图3为示出一实施方式的分析方法的流程的流程图。
图4为示出一实施方式的分析方法的流程的流程图。
图5为在2017年3月对试样进行质谱分析所得到的质谱图。
图6为在2018年3月对试样进行质谱分析所得到的质谱图。
图7:图7的(A)为示出在2017年3月对试样进行质谱分析所得到的对应于胆固醇酯的峰的质谱图,图7的(B)为示出在2018年3月对试样进行质谱分析所得到的对应于胆固醇酯的峰的质谱图。
图8:图8的(A)为示出在2017年3月对试样进行质谱分析所得到的对应于溶血磷脂酰胆碱的峰的质谱图,图8的(B)为示出在2018年3月对试样进行质谱分析所得到的对应于溶血磷脂酰胆碱的峰的质谱图。
图9为示出在2017年3月对试样进行质谱分析所得到的对应于磷脂酰胆碱的峰的质谱图。
图10为示出在2018年3月对试样进行质谱分析所得到的对应于磷脂酰胆碱的峰的质谱图。
图11为示出在2017年3月对试样进行质谱分析所得到的对应于磷脂酰乙醇胺的峰的质谱图。
图12为示出在2018年3月对试样进行质谱分析所得到的对应于磷脂酰乙醇胺的峰的质谱图。
图13为多个酰基的碳数合计为32且碳间的双键数合计为1的磷脂酰胆碱的质谱图、以及构成该磷脂酰胆碱的多个不同分子的质谱图。
图14为多个酰基的碳数合计为34且碳间的双键数合计为1的磷脂酰胆碱的质谱图、以及构成该磷脂酰胆碱的多个不同分子的质谱图。
图15为多个酰基的碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的磷脂酰胆碱的质谱图、以及构成该磷脂酰胆碱的多个不同分子的质谱图。
图16为多个酰基的碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的磷脂酰胆碱的质谱图、以及构成该磷脂酰胆碱的多个不同分子的质谱图。
图17为多个酰基的碳数合计为34且碳间的双键数合计为2的磷脂酰乙醇胺的质谱图、以及构成该磷脂酰乙醇胺的多个不同分子的质谱图。
图18为多个酰基的碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的磷脂酰乙醇胺的质谱图、以及构成该磷脂酰乙醇胺的多个不同分子的质谱图。
图19为多个酰基的碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的磷脂酰乙醇胺的质谱图、以及构成该磷脂酰乙醇胺的多个不同分子的质谱图。
具体实施方式
以下,参照附图说明用于实施本发明的方式。以下的实施方式中“脂质”是指,包含脂肪酸或烃链的生物来源的物质。
-第一实施方式-
本实施方式的分析方法通过液相色谱/质谱分析(LC/MS)进行与试样中的胆固醇酯和胆固醇酯过氧化物对应的离子的检测,根据由该检测得到的测定数据进行试样的氧化度的解析。
试样只要为包含脂质的液体或固体,且能制备成向液相色谱仪导入的分析用的试样,就没有特别限定。本实施方式的分析方法中,从适用于生物学或医学用途的观点出发,试样优选为自人类等生物体获取的血液等体液。或者,从同样的观点出发,试样优选为自人类等生物体获取的包含器官等组织、细胞或外来体等固体的试样。以下说明以自人类采血所获取的血液作为试样进行分析的例子。
试样的前处理的方法没有特别限定,构成试样中所含的脂质的分子(以下称为脂质分子)之中作为分析对象的脂质分子只要能通过LC/MS分离并检测即可。这样的分析对象的脂质分子没有特别限定,除了胆固醇酯和胆固醇酯过氧化物之外,还可以包含胆固醇酯氢氧化物、仅具备1个酰基的磷脂(以下称为溶血磷脂)、具备多个酰基的磷脂、甘油三酯等。作为分析对象的溶血磷脂可以包含溶血磷脂酰胆碱,作为分析对象的磷脂可以包含磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺或磷脂酰丝氨酸等。
需要说明的是,分析对象中也可以包含除脂质分子以外的分子。例如,可以将胆固醇、胆固醇硫酸酯等胆固醇的衍生物作为分析对象。
作为适宜的前处理的方法,可列举出例如用甲醇提取脂质分子等的方法。在该方法中,称量经冷冻保存的全血后,添加以液体计的体积的几十倍至几百倍等的量的甲醇,进行搅拌而将脂质分子提取至甲醇侧,离心分离后,采集上清。对于经冷藏保存的血液、除血液以外的试样,也可以同样地进行。由此,能够迅速地进行试样的前处理,自动化也容易。进行前处理的试样被导入至分析装置的液相色谱仪。
需要说明的是,在自生物体采集的试样包含固体的情况下,可以适宜添加缓冲液等液体并使组织破碎,均质化等后,将液体成分供于前处理。
图1为示出本实施方式的分析方法的分析装置的构成的概念图。分析装置1具备测定部100和信息处理部40。测定部100具备液相色谱仪10和质谱仪20。
需要说明的是,分析装置1可以具备分注装置和离心分离机,并与进行前处理的前处理部一体化。
液相色谱仪10具备流动相容器11a、11b;送液泵12a、12b;试样导入部13;以及,分析柱14。质谱仪20具备:电离室21,其具备电离部211;第一真空室22a,其具备离子透镜221;毛细管212,其从电离室21向第一真空室22a导入离子;第二真空室22b,其具备离子引导件222;以及,第三真空室22c。第三真空室22c具备第一质量分离部23、碰撞室24、第二质量分离部25和检测部30。碰撞室24具备离子引导件240和CID气体导入口241。
信息处理部40具备输入部41、通信部42、存储部43、输出部44和控制部50。控制部50具备装置控制部51、解析部52和输出控制部53。解析部52具备色谱制作部521、氧化度解析部522和标准化部523。
液相色谱仪(LC)10利用试样中的各个成分对于流动相与分析柱14的固定相的亲和性的差异,将该成分分离并在不同的保留时间使其洗脱。只要能够以期望的精度分离分析对象的脂质分子,使得能够用质谱仪20分离并检测该脂质分子,则不限定液相色谱仪10的种类。作为液相色谱仪10,可以使用纳升液相色谱仪(nano LC)、微流液相色谱仪(microLC)、高效液相色谱仪(HPLC)和超高效液相色谱仪(UHPLC)等。液相色谱法与注入分析相比会减少电离抑制等,因此定量精度变高。
流动相容器11a和11b具备小瓶、瓶等能容纳液体的容器,容纳不同组成的流动相。分别将流动相容器11a和11b中容纳的流动相称为流动相A和流动相B。流动相A和流动相B只要能够以期望的精度分离分析对象的脂质分子,则对其组成没有特别限定。例如,作为流动相A可以使用甲酸铵水溶液,作为流动相B可以使用以体积比1:1等规定比例包含乙腈和异丙醇的液体等。
送液泵12a和12b分别对流动相A和流动相B以规定的流量进行送液。分别自送液泵12a和12b送出的流动相A和流动相B在流路的中途被混合,导入至试样导入部13。通过送液泵12a和12b分别改变流动相A和流动相B的流量,从而随着时间改变导入至分析柱14的流动相的组成。
将表示从试样的导入等与分析开始对应的时刻起算的各时间的流动相的组成的数据称为梯度数据。根据梯度数据用后述装置控制部51控制送液泵12a和12b,将设定的组成的流动相导入至分析柱14。流动相的组成的时间变化只要能够以期望的精度分离分析对象的脂质分子就没有特别限定。
试样导入部13具备自动进样器等试样导入装置,将进行过前处理的试样S导入至流动相(箭头A1)。导入到试样导入部13的试样S适宜通过未图示的保护柱而导入至分析柱14。
分析柱14具备固定相,利用导入的试样S中所含的分析对象的脂质分子对于流动相和固定相的亲和性的差异,将各脂质分子在不同的时间洗脱。分析柱14的种类只要能够以期望的精度分离脂质分子就没有特别限定,从处理的容易度、质谱分析中的电离的容易度的观点出发,优选反相柱。分析柱14的固定相优选例如负载在硅胶等载体上的键合有C8、C18等直链烃的硅烷。
从分析柱14洗脱的包含脂质分子的洗脱试样导入至质谱仪20的电离部21。分析柱14的洗脱液优选通过在线控制而输入至质谱仪20,而不需要由分析装置1的用户(以下简称为“用户”)进行分注等操作。
质谱仪20对从分析柱14导入的洗脱试样进行串联质谱分析,检测分析对象的脂质分子。用点划线的箭头A2示意性示出洗脱试样电离而得到的来源于试样S的源自试样的离子Si的路径。
质谱仪20的电离部21将导入的洗脱试样电离。电离的方法只要能够按照以期望的精度检测分析对象的脂质分子的程度使脂质分子电离就没有特别限定,如本实施方式这样进行LC/MS/MS的情况下,优选电喷雾法(ESI),在以下的实施方式中也以进行ESI的情况进行说明。通过洗脱试样从离子源211射出并被电离而得到的源自试样的离子Si利用电离室21与第一真空室22a之间的压力差等而移动,通过毛细管212而入射至第一真空室22a。
第一真空室22a、第二真空室22b和第三真空室22c的真空度依次变高,利用未图示的真空泵将第三真空室22c排气至例如10-2Pa以下等的高真空。入射至第一真空室22a的源自试样的离子Si通过离子透镜221而被导入至第二真空室22b。入射至第二真空室22b的源自试样的离子Si通过离子引导件222之间而被导入至第三真空室22c。导入至第三真空室22c的源自试样的离子Si被射出至第一质量分离部23。在直至入射至第一质量分离部23为止的期间内,离子透镜221、离子引导件222等利用电磁作用对通过的源自试样的离子Si进行聚焦。
第一质量分离部23具备四极质量过滤器,通过基于施加于四极质量过滤器的电压的电磁作用,使具有设定的m/z的源自试样的离子Si作为前体离子选择性通过并向碰撞室24射出。第一质量分离部23使源自试样的离子Si中所含的经电离的分析对象的脂质分子作为前体离子选择性通过。
碰撞室24通过离子引导件240控制源自试样的离子Si的移动,并且通过碰撞诱导解离(Collision Induced Dissociation;CID)使经电离的分析对象的脂质分子解离,生成碎片离子。包含CID时与源自试样的离子Si撞击的氩气、氮气等的气体(以下称为CID气体)以在碰撞室内成为规定压力的方式从CID气体导入口241导入(箭头A3)。包含生成的碎片离子的源自试样的离子Si向第二质量分离部25射出。
需要说明的是,只要能检测碎片离子,则解离的方法不限定于CID。
第二质量分离部25具备四极质量过滤器,通过基于施加于四极质量过滤器的电压的电磁作用,使具有设定的m/z的源自试样的离子Si作为产物离子选择性通过并向检测部30射出。第二质量分离部25使源自试样的离子Si中所含的分析对象的脂质分子的碎片离子选择性通过。
检测部30具备二次电子倍增管、光电子倍增管等离子检测器,对入射的包含分析对象的脂质分子的碎片离子的源自试样的离子Si进行检测。检测模式可以为检测正离子的正离子模式和检测负离子的负离子模式中的任意者。检测源自试样的离子Si而得到的检测信号通过未图示的A/D转换器进行A/D转换,成为数字信号并作为测定数据而输入至信息处理部40的控制部50(箭头A4)。
信息处理部40具备电子计算机等信息处理装置,除了适宜作为与用户的界面之外,还进行各种数据相关的通信、存储、运算等处理。信息处理部40成为进行测定部100的控制、解析、显示的处理的处理装置。
需要说明的是,信息处理部40可以构成为与液相色谱仪10和/或质谱仪20成为一体的一个装置。另外,本实施方式的分析方法中使用的数据的一部分可以保存在远程服务器等,该分析方法中进行的运算处理的一部分可以在远程服务器等中进行。测定部100的各部工作的控制可以由信息处理部40进行,也可以由构成各部的装置分别进行。
信息处理部40的输入部41可以包含鼠标、键盘、各种按钮和/或触控面板等输入装置而构成。输入部41从用户处接收要检测的源自试样的离子Si的m/z的值等控制部50进行处理所需的信息等。
信息处理部40的通信部42包含能借助互联网等网络通过无线、有线的连接进行通信的通信装置而构成。通信部42接收测定部100的测定所需的数据,或发送解析部52的解析结果等控制部50处理所得的数据,或适宜地发送/接收所需的数据。
信息处理部40的存储部43具备不挥发性的存储介质。存储部43存储从测定部100输出的测定数据和用于控制部50执行处理的程序等。
信息处理部40的输出部44通过输出控制部53进行控制,包含液晶显示器等显示装置和/或打印机而构成,将与测定部100的测定相关的信息、解析部52的解析结果等显示于显示装置或印刷于印刷介质来进行输出。
信息处理部40的控制部50包含CPU等处理器而构成。控制部50通过执行测定部100的控制、从测定部100输出的测定数据的解析等存储于存储部43等的程序来进行各种处理。
处理部50的装置控制部51根据与经由输入部41的输入等相应地设定的分析条件等来控制测定部100的测定工作。
解析部52根据从测定部100输出的测定数据来进行试样S的氧化度的解析、分析对象的脂质分子的定量等解析。
解析部52的色谱制作部521制作与质谱图对应的质谱图数据。质谱图数据中,保留时间与该保留时间处的各个分析对象的脂质分子的碎片离子所对应的检测强度是相对应的。色谱制作部521将制作的质谱图数据存储至存储部43。
解析部52的氧化度解析部522根据检测到的胆固醇酯的碎片离子(以下称为非过氧化体离子)的强度与检测到的胆固醇酯过氧化物的碎片离子(以下称为过氧化体离子)的强度之比来进行试样S的氧化度的解析。作为它们的强度,优选使用与非过氧化体离子和过氧化体离子的峰对应的峰强度或峰面积(即,峰处的积分的强度)的值,没有特别限定,可以使用表示与非过氧化体离子和过氧化体离子对应的检测信号的大小的任意的统计值等。此处,峰强度是指峰处的最大强度。氧化度解析部522优选适当进行平滑处理、背景扣除等减小噪音的处理来算出峰强度和峰面积等的统计值。
用质谱仪20进行质谱分析并用于氧化度的解析的胆固醇酯和胆固醇酯过氧化物没有特别限定,优选具有碳数为18的酰基、更优选具备碳数为18且碳间具有2或3处的双键的酰基。氧化度解析部522优选针对具有碳数和碳间的双键数相同的酰基的胆固醇酯,根据非过氧化体离子的强度与过氧化体离子的强度之比进行氧化度的解析。由此,由于对具有同一构成的分子定量非过氧化体和过氧化体来解析氧化度,因此能够更准确地解析氧化度。
需要说明的是,作为用于氧化度的解析的胆固醇酯和胆固醇酯过氧化物,也可以根据检测到的分别对应于多个胆固醇酯的多个碎片离子的强度的和、与检测到的分别对应于多个胆固醇酯过氧化物的多个碎片离子的强度的和之比,进行试样S的氧化度的解析。
氧化度解析部522算出过氧化体离子的强度除以非过氧化体离子的强度所得的比率(以下称为氧化度比率)作为试样S的氧化度的指标(以下称为氧化度指标)。氧化度指标的值越大,解释为试样S的氧化度越高。
需要说明的是,氧化度指标只要基于氧化度比率即可,也可以不是氧化度比率的值自身。另外,也可以将非过氧化体离子的强度除以过氧化体离子的强度所得的比率作为氧化度比率。此时,氧化度指标越大,解释为试样S的氧化度越低。如此,氧化度指标与试样S的氧化度相应地适宜设置。
氧化度解析部522根据氧化度指标和规定的阈值(以下称为氧化度阈值)评价试样S的氧化度。氧化度阈值没有特别限定,可以适宜设定为任意的值。例如2个氧化度阈值为0.5和2.0,氧化度解析部522可以在氧化度指标不足0.5时评价为试样S的品质高,在0.5以上且不足2.0时评价为试样S的品质为中等水平,在2.0以上时评价为试样S的品质低。氧化度阈值的个数没有特别限定,可以为1,也可以为3以上。氧化度阈值的值预先根据表示氧化度与试样的品质的关系的数据、理论等适当设定并存储于存储部43等。氧化度解析部522将算出的氧化度指标、表示试样的品质的上述评价的信息(品质的“低”、“中”和“高”等)存储至存储部43。
解析部52的标准化部523将与分析对象的脂质分子的碎片离子对应的强度除以标准化因子而算出标准化的强度(以下称为标准化强度)。标准化部523在后述实施例中使用与血液试样的长期保管中的变动量少的以下的物质(以下称为不变动物质)对应的碎片离子等检测到的离子(以下称为不变动离子)的强度作为标准化因子。此时,作为该强度,也可以适宜使用峰强度、峰面积等统计值。
上述不变动物质优选为选自由具备碳数为18且碳间具有1处双键的酰基的胆固醇酯、具备碳数为20且碳间具有5处双键的酰基的胆固醇酯、具备碳数为20且碳间具有5处双键的酰基的溶血磷脂酰胆碱、具备碳数合计为32且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺、具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺和具备碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的2个酰基的磷脂酰乙醇胺组成的组中的至少一个。由此,以试样S保管时变动少的分子作为基准,将分别与试样S的各个成分对应的源自试样的离子Si进行定量,因此即使在不同试样之间脂质浓度不同的情况下,也能够进行定量比较。
上述不变动物质中,关于具备碳数合计为32且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱,优选的是包含碳数为16且碳间的双键数为0的酰基、以及碳数为16且碳间的双键数为1的酰基的磷脂酰胆碱。
上述不变动物质中,关于具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱,优选的是包含碳数为16且碳间的双键数为0的酰基、以及碳数为18且碳间的双键数为1的酰基的磷脂酰胆碱。
上述不变动物质中,关于具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰胆碱,优选的是包含碳数为18的2个酰基的磷脂酰胆碱。
上述不变动物质中,关于具备碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的2个酰基的磷脂酰胆碱,优选的是包含碳数为18且碳间的双键数为0的酰基、以及碳数为20且碳间的双键数为4的酰基的磷脂酰胆碱。
上述不变动物质中,关于具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺,优选的是包含碳数为16且碳间的双键数为0的酰基、以及碳数为18且碳间的双键数为2的酰基的磷脂酰乙醇胺。
上述不变动物质中,关于具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺,优选的是包含碳数为18的2个酰基的磷脂酰乙醇胺。
上述不变动物质中,关于具备碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的2个酰基的磷脂酰乙醇胺,优选的是包含碳数为18且碳间的双键数为0的酰基、以及碳数为20且碳间的双键数为4的酰基的磷脂酰乙醇胺。
标准化部523优选使用与上述不变动物质中所含的胆固醇酯对应的不变动离子的强度的和,将质谱仪20的质谱分析中检测到的分别与试样S的各个胆固醇酯对应的源自试样的离子Si的强度进行标准化。由此,即使在不同试样之间胆固醇酯全体的浓度不同的情况下,也能够进行定量比较。
标准化部523优选使用与上述不变动物质中所含的溶血磷脂酰胆碱对应的不变动离子的强度,将质谱仪20的质谱分析中检测到的分别与试样S的各个溶血磷脂对应的源自试样的离子Si的强度进行标准化。由此,即使在不同试样之间溶血磷脂酰胆碱等的溶血磷脂的浓度不同的情况下,也能够进行定量比较。
标准化部523优选使用与上述不变动物质中所含的磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺对应的不变动离子的强度的和,将质谱仪20的质谱分析中检测到的分别与试样S的各个含有多个酰基的磷脂对应的源自试样的离子Si的强度进行标准化。由此,即使在不同试样之间包括磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺等多个磷脂的磷脂的浓度不同的情况下,也能够进行定量比较。
需要说明的是,由标准化部523使用不变动物质的检测强度进行的标准化的方法没有特别限定。例如也可以使用全部的与上述不变动物质对应的不变动离子的强度的和来进行标准化。由此,即使在不同试样之间全体脂质浓度不同的情况下,也能够进行定量比较。
不变动物质会预先设定,对不变动物质进行质谱分析时的保留时间、作为前体离子和产物离子进行检测的2个m/z的值(以下将该2个m/z的值的组合称为转变(transition))等分析条件相关的数据存储于存储部43等。标准化部523参照该数据,根据色谱制作部521制作的质谱图数据算出与不变动物质对应的检测强度。
因未设定不变动物质等理由而未在存储部43等存储关于不变动物质的数据,或质谱仪20未检测与上述不变动物质对应的不变动离子的情况下,标准化部523在不使用不变动离子的强度的条件下进行标准化。该情况下,标准化部523算出源自试样的离子Si之中与磷脂对应的碎片离子等的检测到的离子的强度的和,将检测到的各个源自试样的离子Si的强度除以该和来进行标准化,算出标准化的强度(以下该情况下也称为标准化强度)。此处,该磷脂优选包含溶血磷脂、以及含有多个酰基的磷脂。由此,在试样S的保管中,即使在脂肪酸从含有多个酰基的磷脂脱离而形成为溶血磷脂、或脂肪酸与溶血磷脂结合而不再是溶血磷脂的情况下,也会由于标准化因子的值不会变动而能够进行更稳定反映脂质浓度的标准化。
需要说明的是,在能够实施使用不变动物质的标准化的情况下,也可以制作使用对应于磷脂的离子的强度的和进行了标准化的数据,使用其进行解析。
在探索并选择上述那样的不变动物质的方法中,可以选择在对同一试样S隔着规定时间进行至少2次质谱分析时使用对应于磷脂的离子的强度的和进行了标准化的强度的变动为规定的比例以下的离子所对应的物质作为不变动物质。上述规定时间适宜设定为1个月以上、1年以上等。上述规定的比例适宜设定为20%以下、15%以下、10%以下等。
解析部52根据氧化度解析部522算出的氧化度指标、表示试样S的品质的评价的信息,对通过试样S的质谱分析所得的测定数据进行解析。例如,在试样S的品质的评价低的情况下,解析部52可以出于可靠性低而不进行一部分的解析。
输出控制部53制作包含关于测定部100的测定条件和/或解析部52的解析结果等信息等的输出图像,输出至输出部44。输出控制部53制作包含关于氧化度指标或根据氧化度指标来表示试样S的氧化度的信息的输出图像,输出至输出部44。
图2至图4为示出本实施方式的分析方法的流程的流程图。图2为示出用于探索并设定不变动物质的质谱分析(以下称为不变动物质探索质谱分析)的流程的流程图,图3和图4为示出使用基于设定的不变动物质的标准化因子进行解析的分析方法的流程的流程图。若不变动物质是已知的,则也可以不进行图2的流程图的各工序。
需要说明的是,图2~图4的各质谱分析可以用不同的分析装置进行。
步骤S1001(图2)中,由医护人员等自生物体获取血液。步骤S1001结束后,开始步骤S1003。步骤S1003中,由医护人员、分析员或用户等保管所获取的血液的一部分,对血液的另一部分进行前处理,制备试样S。步骤S1003结束后,开始步骤S1005。
步骤S1005中,试样导入部13将试样S导入至液相色谱仪10,试样S供于液相色谱法。步骤S1005结束后,开始步骤S1007。步骤S1007中,质谱仪20进行供于液相色谱法的试样S的质谱分析(不变动物质探索质谱分析),检测分别与试样S的各个成分对应的源自试样的离子Si。步骤S1007结束后,开始步骤S1009。
步骤S1009中,标准化部523算出源自试样的离子Si之中对应于磷脂的离子的强度的和。步骤S1009结束后,开始步骤S1011。步骤S1011中,用步骤S1009中算出的和,将检测到的各个源自试样的离子Si的强度进行标准化,算出各个源自试样的离子Si的标准化强度。步骤S1011结束后,开始步骤S1013。
步骤S1013中,对于步骤S1003中保管的血液,在经过规定的期间后,由医护人员、分析员或用户等进行前处理,制备试样S。步骤S1013结束后,开始步骤S1015。步骤S1015中,分析装置1对于步骤S1015中制备的试样S与步骤S1005~S1011同样地进行液相色谱法和不变动物质探索质谱分析,算出源自试样的离子Si的标准化强度。步骤S1015结束后,开始步骤S1017。
步骤S1017中,解析部52将步骤S1011中算出的标准化强度与步骤S1015中算出的标准化强度进行比较,选择变动为规定的比例以下的物质作为不变动物质,存储部43存储不变动物质的保留时间和对不变动物质进行质谱分析时的转变(transition)。步骤S1017结束后,不变动物质的探索处理结束,开始步骤S2001,使用基于不变动物质的标准化因子来进行分析。
步骤S2001(图3)中,由医护人员等自生物体获取血液。步骤S2001结束后,开始步骤S2003。该生物体可以是与步骤S1001中获取过血液的个体不同的个体,也可以是同一个体。步骤S2003中,由医护人员、分析员或用户等对获取的血液进行前处理,制备试样S。步骤S2003结束后,开始步骤S2005。
步骤S2005中,试样导入部13将试样S导入至液相色谱仪10,试样S供于液相色谱法。步骤S2005结束后,开始步骤S2007。步骤S2007中,质谱仪20进行供于液相色谱法的试样S的质谱分析,检测分别与包含胆固醇酯和胆固醇酯过氧化物以及不变动物质的试样S的各个成分对应的源自试样的离子Si。步骤S2007结束后,开始步骤S2009。
步骤S2009中,氧化度解析部522根据检测到的对应于胆固醇酯的离子的强度和对应于胆固醇酯过氧化物的离子的强度中的任一者除以另一者而得到的氧化度比率,算出表示试样S的氧化度的氧化度指标。步骤S2009结束后,开始步骤S2011。
步骤S2011中,标准化部523使用基于不变动物质的标准化因子,算出试样S的各个成分的标准化强度。
图4为示出步骤S2011的流程的流程图。步骤S2011-1中,标准化部523算出与属于不变动物质的胆固醇酯对应的强度的和。步骤S2011-1结束后开始步骤S2011-2。步骤S2011-2中,标准化部523用步骤S2011-1中算出的和,将检测到的分别与各个胆固醇酯对应的源自试样的离子Si的强度进行标准化,算出分别与各个胆固醇酯对应的源自试样的离子Si的标准化强度。步骤S2011-2结束后,开始步骤S2011-3。
步骤S2011-3中,标准化部523算出与属于不变动物质的溶血磷脂酰胆碱对应的强度。步骤S2011-3结束后开始步骤S2011-4。步骤S2011-4中,标准化部523用步骤S2011-3中算出的强度,将检测到的分别与各个溶血磷脂对应的源自试样的离子Si的强度进行标准化,算出分别与各个溶血磷脂对应的源自试样的离子Si的标准化强度。步骤S2011-4结束后,开始步骤S2011-5。
步骤S2011-5中,标准化部523算出与属于不变动物质的磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺对应的强度的和。步骤S2011-5结束后开始步骤S2011-6。步骤S2011-6中,标准化部523用步骤S2011-5中算出的和,将检测到的分别与含有多个酰基的各个磷脂对应的源自试样的离子Si的强度进行标准化,算出分别与各个所述磷脂对应的源自试样的离子Si的标准化强度。步骤S2011-6结束后,开始步骤S2013。
需要说明的是,将关于胆固醇酯、溶血磷脂和上述磷脂的源自试样的离子Si的强度进行标准化的顺序没有特别限定。
回到图3,步骤S2013中,解析部52使用关于氧化度指标或根据氧化度指标的试样S的氧化度的信息、以及步骤S2011中算出的标准化强度来进行试样S的解析。步骤S2013结束后,开始步骤S2015。步骤S2015中,输出部44显示通过步骤S2013中进行的解析而得到的信息。步骤S2015结束后,结束处理。
根据上述实施方式,得到如下的作用效果。
(1)本实施方式的分析方法具备如下步骤:将试样S供于液相色谱法;进行供于液相色谱法的试样S的质谱分析,检测对应于胆固醇酯的非过氧化体离子和对应于胆固醇酯过氧化物的过氧化体离子;以及,根据检测到的非过氧化体离子的强度和检测到的过氧化体离子的强度之比,进行试样S的氧化度的解析。由此,能够使用质谱分析定量评价试样S的氧化度,评价经保管的试样S的品质。
(2)本实施方式的分析方法和分析装置1中,氧化度解析部522可以根据非过氧化体离子的强度和过氧化体离子的强度中的任一者除以另一者所得的氧化度比率,算出表示试样S的氧化度的氧化度指标。由此,能够使用指标对试样S的氧化度进行定量比较。
(3)本实施方式的分析方法和分析装置1中,输出部44输出氧化度指标或根据氧化度指标来表示试样S的氧化度的信息。由此,能够基于定量值以易于理解的方式向用户等传达试样S的氧化度。
(4)本实施方式的分析方法和分析装置1中,解析部52根据氧化度指标来解析通过试样S的质谱分析得到的测定数据。由此,根据试样S的氧化度等品质,能够更精密地解析测定数据。
(5)本实施方式的分析方法和分析装置1中,标准化部523使用预先设定的对应于不变动物质的离子的强度,将在质谱分析中检测到的分别与试样S的各个成分对应的源自试样的离子Si的强度进行标准化。由此,即使在不同试样S中脂质浓度不同的情况下,也能够对分析对象的脂质分子的量进行定量比较。
(6)本实施方式的分析方法具备如下步骤:通过后续的质谱分析检测不变动离子,使用上述不变动离子的强度将通过该质谱分析检测到的各个源自试样的离子Si的强度进行标准化,其中,所述不变动离子为如下离子:在对同一试样S隔着规定时间进行至少2次不变动物质探索质谱分析时,标准化强度的变动为规定的比例以下。由此,根据实际的质谱分析所得到的不变动物质,即使在不同试样S中脂质浓度不同的情况下,也能够对分析对象的脂质分子的量进行定量比较。
(7)本实施方式的分析方法中,试样S为在血液的状态下保管的试样。由此,能迅速、简便地采集,通过包含多种多样的成分的血液中的脂质分子的解析,能够得到许多认识。
(8)本实施方式的分析装置具备:试样导入部13,其导入试样S;液相色谱仪10,其分离试样S;质谱分析部(质谱仪20),其进行用液相色谱仪10分离的试样S的质谱分析,检测非过氧化体离子和过氧化体离子;以及,氧化度解析部522,其根据检测到的非过氧化体离子的强度与检测到的过氧化体离子的强度之比,进行试样S的氧化度的解析。由此,能够使用质谱分析来定量评价试样S的氧化度,评价经保管的试样S的品质。
如下的变形也包括在本发明的范围内,可与上述实施方式组合。以下的变形例中,对于示出与上述实施方式同样的结构、功能的部位,以同一符号进行参照,适宜省略说明。
(变形例1)
上述实施方式中,质谱仪20采用了通过2个四极质量过滤器进行质量分离的串联质谱仪,但质谱仪20的构成、质谱仪20的种类、质谱分析的方法只要能够以期望的精度检测与试样S中的分析对象的脂质分子对应的源自试样的离子Si就没有特别限定。例如,也可以通过对附着有试样S的探针施加高电压来进行电离的探针电喷雾法,进行试样S的电离。关于探针电喷雾法的详情,可参照国际公开第2010/047399号。
(变形例2)
上述实施方式中,根据对应于胆固醇酯的检测到的离子的强度与对应于胆固醇酯过氧化物的检测到的离子的强度之比,算出氧化度指标。但是,也可以根据对应于胆固醇酯的检测到的离子的强度与对应于胆固醇酯氢氧化物或胆固醇硫酸酯的检测到的离子的强度之比,来算出氧化度指标。由于胆固醇酯氢氧化物和胆固醇硫酸酯在经氧化的试样中会观察到显著的增加,因此可以适当地用作氧化度指标。
(变形例3)
上述实施方式中,利用多个检测到的离子的强度的和来算出标准化因子时,也可以在该和中不包含与具备碳数为20且碳间的双键数为4的酰基的分子对应的碎片离子等检测到的离子的强度。该分子优选具有与花生四烯酸对应的酰基。人类等生物体发生感染、外伤等时,由于酶(PLA2)而使花生四烯酸从磷脂切出。因此,以特应性皮炎、哮喘等过敏性疾病或糖尿病等慢性发炎的疾病为代表,存在因各种各样的疾病而使磷脂中的花生四烯酸的量减少的可能性。因此,通过在标准化因子中不包含花生四烯酸或含有与花生四烯酸对应的酰基(以下称为“花生四烯酸等”)的分子所对应的离子的强度,能够使用更稳定的标准化因子来精密进行分析对象的脂质分子的解析。
例如,标准化部523利用与包含溶血磷脂的磷脂对应的离子的强度的和算出标准化因子时,可以在该磷脂中不包含含有花生四烯酸等的磷脂。作为其它例子,标准化部523可以使用上述不变动物质之中不含有花生四烯酸等的物质、即选自由具备碳数为18且碳间具有1处双键的酰基的胆固醇酯、具备碳数为20且碳间具有5处双键的酰基的胆固醇酯、具备碳数为20且碳间具有5处双键的酰基的溶血磷脂酰胆碱、具备碳数合计为32且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺和具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺组成的组中的至少一个所对应的离子的强度来进行标准化。
解析部52也可以使用与含有花生四烯酸等的分子对应的碎片离子等检测到的离子的强度,来判定试样S是源自健康人,还是源自患有慢性炎症等疾病的人,输出控制部53将关于该判定的信息输出至输出部44。解析部52根据基于预先取得的自健康人获取的试样中的检测强度以及自患有慢性炎症等疾病的人获取的试样中的检测强度的阈值来进行该判定。与含有花生四烯酸等的分子对应的离子的强度可以适宜采用通过上述标准化因子进行了标准化的值。
本变形例的分析方法中,源自试样的离子Si包含具有碳数为20且碳间的双键数为4的脂肪酸或酰基的脂质分子,解析部52根据对应于脂质分子的离子的标准化的强度来判定试样S是否获取自健康人。由此,能够分析试样S来源的生物体的健康状态,而且能够从采集时的生物体的健康状态的观点出发进行试样S的品质的评价。
本发明不限定于上述实施方式的内容。在本发明的技术构思的范围内想到的其它方式也包括在本发明的范围内。
实施例
以下的实施例中,对于自人类采集的血液的一部分在2017年3月进行质谱分析,将另一部分冷藏保存并在2018年3月进行质谱分析,对于分析血液中的成分的变动所得的实验结果、以及在2017年5月分析各化合物的酰基的构成所得的实验结果进行说明。
需要说明的是,本发明不限定于以下的实施例所示的数值、条件。
(2017年3月和2018年3月进行的质谱分析)
前处理
在全血5μL中添加500μL的甲醇,搅拌几分钟,提取脂质成分后,进行离心分离,采集上清1μL,作为向液相色谱-质谱联用仪导入的试样。
液相色谱法的条件
在以下的条件下通过液相色谱法分离试样。
***:LCMS-8060(株式会社岛津制作所)
分析柱:Kinetex C8(Phenomenex)(内径2.1mm、长度150mm、粒径2.6μm)
注入量:3μL
柱温度:45℃
流动相:
(A)20mM甲酸铵水溶液
(B)以体积比1:1的比例混合乙腈和异丙醇所得的溶液
流速:0.3mL/min
梯度程序:
为了在二酰基磷脂的洗脱时间方面增大成分之间的洗脱时间的差异,从2分钟至25分钟使流动相B的浓度相对于时间呈非线性变化。
质谱分析的条件
对于上述液相色谱法中洗脱得到的洗脱试样,用与洗脱口直接连接的串联质谱分析进行检测。
***:LCMS-8060(株式会社岛津制作所)
电离的方法:电喷雾法、正离子模式/负离子模式
测定模式:多反应监测(MRM)
温度:
脱溶剂管(Desolvation Line;DL)温度:250℃
加热块温度:400℃
接口温度(对应于电离部的周围的加热气体的温度):-
接口电压(自毛细管前端对DL入口施加的电压):1.0kV
气体流量:
雾化气体流量:2.0L/min
干燥气体流量:10.0L/min
加热气体流量:10.0L/min
将洗脱试样中所含的各化合物的保留时间、转变、各转变中的峰强度、以及该峰强度除以检测到的包含溶血磷脂的磷脂的峰强度的和所得的标准化强度示于以下的表A和表B。需要说明的是,表A涉及2017年3月的质谱分析,表B涉及2018年3月的质谱分析。对于表B,还示出了相对于2017年3月的质谱分析中的标准化强度的、2018年3月的质谱分析中的标准化强度的增加率。
关于化合物名称,CE是指胆固醇酯、Chol是指胆固醇、Chol_sulfate是指胆固醇硫酸酯、LPC是指溶血磷脂酰胆碱、LPE是指溶血磷脂酰乙醇胺、PC是指磷脂酰胆碱、PE是指磷脂酰乙醇胺、PS是指磷脂酰丝氨酸。进而,化合物名称中的x:y的记载中,x表示各化合物所含的酰基的碳数的合计,y表示各化合物所含的酰基中的碳间的双键数的合计。CE18:2-OH是具备碳数为18且碳间的双键为2个的酰基的胆固醇酯氢氧化物。CE18:2-OOH是具备碳数为18且碳间的双键为2个的酰基的胆固醇酯过氧化物。CE18:3-OOH是具备碳数为18且碳间的双键为3个的酰基的胆固醇酯的过氧化物。
转变的记载中,在“>”的左侧示出前体离子的m/z,在“>”的右侧示出产物离子的m/z。
【表1】
表A:各化合物的质谱分析中的测定条件和测定结果(2017年3月)
ID | 化合物名称 | 保留时间 | 转变 | 峰强度 | 标准化强度 |
1 | PS(40:6) | 13.404 | 836.55>651.50 | 139781 | 0.1822112 |
2 | CE 18:3 | 22.624 | 664.70>369.40 | 492633 | 0.6421705 |
3 | CE 22:5 | 23.263 | 716.70>369.40 | 36362 | 0.0473996 |
4 | PE(38:6) | 14.329 | 764.50>623.50 | 46653 | 0.0608144 |
5 | PE(38:5) | 14.816 | 766.55>625.50 | 38282 | 0.0499024 |
6 | PC(34:4) | 13.484 | 754.55>184.10 | 39873 | 0.0519763 |
7 | CE 22:4 | 23.967 | 718.70>369.40 | 9170 | 0.0119535 |
8 | PC(34:2) | 14.583 | 758.55>184.10 | 18628037 | 24.28253 |
9 | PC(36:5) | 13.76 | 780.55>184.10 | 509801 | 0.6645498 |
10 | PC(34:3) | 13.852 | 756.55>184.10 | 276084 | 0.3598886 |
11 | CE 20:4 | 22.961 | 690.70>369.40 | 3806809 | 4.9623561 |
12 | CE 18:2 | 23.566 | 666.70>369.40 | 11895559 | 15.506425 |
13 | LPC(18:2) | 7.416 | 520.35>184.10 | 1128047 | 1.4704628 |
14 | PE(36:4) | 14.64 | 740.50>599.50 | 126536 | 0.1649457 |
15 | CE 22:6 | 22.276 | 714.70>369.40 | 493268 | 0.6429982 |
16 | PC(38:6) | 14.156 | 806.55>184.10 | 1741634 | 2.2703025 |
17 | PS(40:5) | 13.649 | 838.55>653.55 | 10303 | 0.0134304 |
18 | PE(36:3) | 14.929 | 742.55>601.50 | 52059 | 0.0678614 |
19 | LPE(18:2) | 7.53 | 478.30>337.25 | 2402 | 0.0031311 |
20 | PC(36:4) | 14.465 | 782.55>184.10 | 8199413 | 10.688324 |
21 | Chol | 13.402 | 369.30>161.10 | 40309 | 0.0525447 |
22 | PS(38:5) | 13.049 | 810.55>625.50 | 1795 | 0.0023399 |
23 | CE 20:5 | 21.968 | 688.70>369.40 | 265414 | 0.3459797 |
【表2】
表A(续):各化合物的质谱分析中的测定条件和测定结果(2017年3月)
ID | 化合物名称 | 保留时间 | 转变 | 峰强度 | 标准化强度 |
24 | PE(36:2) | 15.728 | 744.55>603.55 | 91200 | 0.1188835 |
25 | PE(38:4) | 15.614 | 768.55>627.55 | 113102 | 0.1474338 |
26 | PC(38:5) | 14.645 | 808.60>184.10 | 428711 | 0.5588451 |
27 | PS(38:4) | 13.668 | 812.55>627.50 | 62115 | 0.0809698 |
28 | PC(32:1) | 14.39 | 732.55>184.10 | 669338 | 0.8725138 |
29 | PC(36:3) | 14.86 | 784.60>184.10 | 3436522 | 4.4796694 |
30 | PC(40:5) | 15.445 | 836.60>184.10 | 234049 | 0.305094 |
31 | PE(34:2) | 14.745 | 716.50>575.50 | 92930 | 0.1211387 |
32 | PC(38:4) | 15.468 | 810.60>184.10 | 3514268 | 4.581015 |
33 | LPC(20:5) | 6.771 | 542.30>184.10 | 19383 | 0.0252667 |
34 | PC(34:1) | 15.396 | 760.60>184.10 | 9140113 | 11.914571 |
35 | PC(36:2) | 15.612 | 786.60>184.10 | 8108316 | 10.569574 |
36 | CE 18:1 | 24.703 | 668.70>369.40 | 838524 | 1.0930558 |
37 | PC(44:12) | 18.543 | 878.55>184.10 | 26139 | 0.0340734 |
38 | PC(32:2) | 13.597 | 730.55>184.10 | 130252 | 0.1697897 |
39 | PC(30:1) | 14.169 | 704.50>184.10 | 2931718 | 3.8216335 |
40 | LPC(20:3) | 7.789 | 546.35>184.10 | 109247 | 0.1424086 |
41 | LPC(16:0) | 7.86 | 496.35>184.10 | 7623053 | 9.9370112 |
42 | PC(40:7) | 14.321 | 832.60>184.10 | 40881 | 0.0532903 |
43 | PC(38:3) | 15.888 | 812.60>184.10 | 1266701 | 1.6512048 |
44 | LPC(18:1) | 8.144 | 522.35>184.10 | 974586 | 1.2704191 |
45 | PC(40:6) | 15.133 | 834.60>184.10 | 477220 | 0.6220789 |
46 | CE14:0 | 23.361 | 614.70>369.40 | 2148 | 0.0028 |
【表3】
表A(续):各化合物的质谱分析中的测定条件和测定结果(2017年3月)
ID | 化合物名称 | 保留时间 | 转变 | 峰强度 | 标准化强度 |
47 | PC(36:1) | 16.451 | 788.60>184.10 | 1242120 | 1.6191623 |
48 | PC(28:1) | 13.161 | 676.50>184.10 | 143946 | 0.1876404 |
49 | LPC(20:4) | 7.376 | 544.35>184.10 | 274879 | 0.3583178 |
50 | PE(34:1) | 15.533 | 718.55>577.50 | 119517 | 0.1557961 |
51 | PC(32:0) | 15.188 | 734.55>184.10 | 940866 | 1.2264635 |
52 | CE 16:1 | 23.455 | 640.70>369.40 | 88918 | 0.1159088 |
53 | PC(38:2) | 17.496 | 814.65>184.10 | 387757 | 0.5054596 |
54 | PC(40:4) | 16.197 | 838.65>184.10 | 119271 | 0.1554754 |
55 | LPC(22:6) | 7.254 | 568.35>184.10 | 35039 | 0.045675 |
56 | PE(36:1) | 16.52 | 746.55>605.55 | 38270 | 0.0498868 |
57 | CE 16:0 | 24.567 | 642.70>369.40 | 99597 | 0.1298294 |
58 | LPE(18:1) | 8.275 | 480.30>339.30 | 2586 | 0.003371 |
59 | LPC(18:0) | 8.961 | 524.35>184.10 | 2451005 | 3.1950013 |
60 | LPE(22:6) | 7.234 | 526.30>385.25 | 535 | 0.0006974 |
61 | PC(30:0) | 14.576 | 706.55>184.10 | 89142 | 0.1162008 |
62 | PC(38:1) | 18.699 | 816.65>184.10 | 216375 | 0.2820551 |
63 | PC(30:2) | 13.311 | 702.50>184.10 | 218398 | 0.2846922 |
64 | LPE(20:4) | 7.35 | 502.30>361.25 | 1023 | 0.0013335 |
65 | LPE(16:0) | 7.984 | 454.30>313.25 | 2468 | 0.0032172 |
66 | Chol_sulfate | 9.466 | 465.30>97.00 | 3433 | 0.0044751 |
67 | CE18:2-OH | 20.149 | 682.80>369.40 | 2289 | 0.0029838 |
68 | CE18:2-OOH | 18.32 | 698.80>369.40 | 3674 | 0.0047892 |
69 | CE18:3-OOH | 18.076 | 696.80>369.40 | 2433 | 0.0031715 |
【表4】
表B:各化合物的质谱分析中的测定条件和测定结果(2018年3月)
ID | 化合物名称 | 保留时间 | 转变 | 峰强度 | 标准化强度 | 增加率 |
1 | PS(40:6) | 12.848 | 836.55>651.50 | 65582 | 0.04537255 | 0.25 |
2 | CE 18:3 | 21.329 | 664.70>369.40 | 314177 | 0.21736163 | 0.34 |
3 | CE 22:5 | 21.613 | 716.70>369.40 | 28656 | 0.0198255 | 0.42 |
4 | PE(38:6) | 13.72 | 764.50>623.50 | 40477 | 0.02800379 | 0.46 |
5 | PE(38:5) | 14.175 | 766.55>625.50 | 36352 | 0.02514993 | 0.50 |
6 | PC(34:4) | 13.074 | 754.55>184.10 | 40543 | 0.02804945 | 0.54 |
7 | CE 22:4 | 22.53 | 718.70>369.40 | 9530 | 0.00659328 | 0.55 |
8 | PC(34:2) | 14.202 | 758.55>184.10 | 19688927 | 13.6216759 | 0.56 |
9 | PC(36:5) | 13.344 | 780.55>184.10 | 538931 | 0.37285645 | 0.56 |
10 | PC(34:3) | 13.453 | 756.55>184.10 | 303770 | 0.2101616 | 0.58 |
11 | CE 20:4 | 21.631 | 690.70>369.40 | 4348977 | 3.00881583 | 0.61 |
12 | CE 18:2 | 22.172 | 666.70>369.40 | 13770738 | 9.52720938 | 0.61 |
13 | LPC(18:2) | 7.205 | 520.35>184.10 | 1347125 | 0.93200103 | 0.63 |
14 | PE(36:4) | 14.01 | 740.50>599.50 | 151585 | 0.10487325 | 0.64 |
15 | CE 22:6 | 21.013 | 714.70>369.40 | 644435 | 0.44584881 | 0.69 |
16 | PC(38:6) | 13.739 | 806.55>184.10 | 2308546 | 1.59715486 | 0.70 |
17 | PS(40:5) | 12.968 | 838.55>653.55 | 13992 | 0.00968029 | 0.72 |
18 | PE(36:3) | 14.275 | 742.55>601.50 | 71972 | 0.04979343 | 0.73 |
19 | LPE(18:2) | 7.286 | 478.30>337.25 | 3373 | 0.00233359 | 0.75 |
20 | PC(36:4) | 14.046 | 782.55>184.10 | 11723880 | 8.11110192 | 0.76 |
21 | Chol | 14.22 | 369.30>161.10 | 57788 | 0.03998031 | 0.76 |
22 | PS(38:5) | 12.332 | 810.55>625.50 | 2582 | 0.00178634 | 0.76 |
23 | CE 20:5 | - | 688.70>369.40 | 424282 | 0.29353717 | 0.85 |
【表5】
表B(续):各化合物的质谱分析中的测定条件和测定结果(2018年3月)
ID | 化合物名称 | 保留时间 | 转变 | 峰强度 | 标准化强度 | 增加率 |
24 | PE(36:2) | 15.035 | 744.55>603.55 | 149689 | 0.10356151 | 0.87 |
25 | PE(38:4) | 14.932 | 768.55>627.55 | 193760 | 0.13405179 | 0.91 |
26 | PC(38:5) | 14.055 | 808.60>184.10 | 735222 | 0.5086593 | 0.91 |
27 | PS(38:4) | 12.999 | 812.55>627.50 | 107186 | 0.07415604 | 0.92 |
28 | PC(32:1) | 13.994 | 732.55>184.10 | 1213962 | 0.83987294 | 0.96 |
29 | PC(36:3) | 14.468 | 784.60>184.10 | 6474696 | 4.47948283 | 1.00 |
30 | PC(40:5) | 15.053 | 836.60>184.10 | 457559 | 0.31655968 | 1.04 |
31 | PE(34:2) | 14.104 | 716.50>575.50 | 183670 | 0.12707108 | 1.05 |
32 | PC(38:4) | 15.057 | 810.60>184.10 | 7141696 | 4.94094312 | 1.08 |
33 | LPC(20:5) | 6.585 | 542.30>184.10 | 39489 | 0.02732025 | 1.08 |
34 | PC(34:1) | 15.018 | 760.60>184.10 | 19293380 | 13.3480189 | 1.12 |
35 | PC(36:2) | 15.242 | 786.60>184.10 | 17323681 | 11.9852935 | 1.13 |
36 | CE 18:1 | 23.196 | 668.70>369.40 | 1799556 | 1.24501293 | 1.14 |
37 | PC(44:12) | 18.281 | 878.55>184.10 | 57859 | 0.04002943 | 1.17 |
38 | PC(32:2) | 13.891 | 730.55>184.10 | 290671 | 0.20109913 | 1.18 |
39 | PC(30:1) | 13.709 | 704.50>184.10 | 6579180 | 4.55176951 | 1.19 |
40 | LPC(20:3) | 7.562 | 546.35>184.10 | 250373 | 0.17321918 | 1.22 |
41 | LPC(16:0) | 7.636 | 496.35>184.10 | 17756555 | 12.284775 | 1.24 |
42 | PC(40:7) | 13.9 | 832.60>184.10 | 95424 | 0.06601857 | 1.24 |
43 | PC(38:3) | 15.514 | 812.60>184.10 | 3032217 | 2.09782266 | 1.27 |
44 | LPC(18:1) | 7.899 | 522.35>184.10 | 2365111 | 1.63628904 | 1.29 |
45 | PC(40:6) | 14.72 | 834.60>184.10 | 1207776 | 0.83559319 | 1.34 |
46 | CE 14:0 | 21.972 | 614.70>369.40 | 5590 | 0.00386741 | 1.38 |
【表6】
表B(续):各化合物的质谱分析中的测定条件和测定结果(2018年3月)
ID | 化合物名称 | 保留时间 | 转变 | 峰强度 | 标准化强度 | 增加率 |
47 | PC(36:1) | 16.108 | 788.60>184.10 | 3405026 | 2.35574852 | 1.45 |
48 | PC(28:1) | 12.716 | 676.50>184.10 | 409118 | 0.28304604 | 1.51 |
49 | LPC(20:4) | 7.166 | 544.35>184.10 | 806152 | 0.55773183 | 1.56 |
50 | PE(34:1) | 14.853 | 718.55>577.50 | 351046 | 0.24286925 | 1.56 |
51 | PC(32:0) | 14.83 | 734.55>184.10 | 2829881 | 1.95783761 | 1.60 |
52 | CE 16:1 | 22.071 | 640.70>369.40 | 271519 | 0.18784893 | 1.62 |
53 | PC(38:2) | 17.097 | 814.65>184.10 | 1228117 | 0.84966599 | 1.68 |
54 | PC(40:4) | 15.816 | 838.65>184.10 | 382858 | 0.2648782 | 1.70 |
55 | LPC(22:6) | 7.051 | 568.35>184.10 | 125960 | 0.08714473 | 1.91 |
56 | PE(36:1) | 15.796 | 746.55>605.55 | 142109 | 0.09831733 | 1.97 |
57 | CE 16:0 | 23.076 | 642.70>369.40 | 386182 | 0.26717789 | 2.06 |
58 | LPE(18:1) | 7.983 | 480.30>339.30 | 10917 | 0.00755287 | 2.24 |
59 | LPC(18:0) | 8.681 | 524.35>184.10 | 10756394 | 7.44175205 | 2.33 |
60 | LPE(22:6) | 7.136 | 526.30>385.25 | 2605 | 0.00180225 | 2.58 |
61 | PC(30:0) | 13.796 | 706.55>184.10 | 438635 | 0.30346721 | 2.61 |
62 | PC(38:1) | 18.379 | 816.65>184.10 | 1106530 | 0.7655467 | 2.71 |
63 | PC(30:2) | 12.854 | 702.50>184.10 | 1227277 | 0.84908485 | 2.98 |
64 | LPE(20:4) | 7.253 | 502.30>361.25 | 7692 | 0.00532167 | 3.99 |
65 | LPE(16:0) | 7.717 | 454.30>313.25 | 24040 | 0.01663194 | 5.17 |
66 | Chol_sulfate | 9.07 | 465.30>97.00 | 50791 | 0.03513947 | 7.85 |
67 | CE18:2-OH | 19.607 | 682.80>369.40 | 271568 | 0.18788283 | 62.97 |
68 | CE18:2-OOH | 17.439 | 698.80>369.40 | 1256989 | 0.86964093 | 181.58 |
69 | CE18:3-OOH | 17.171 | 696.80>369.40 | 1347331 | 0.93214355 | 293.91 |
需要说明的是,与上述包含溶血磷脂的磷脂对应的峰强度的和中,PC
(34∶2)(ID8)由于强度饱和,因此未添加。
图5和图6中示出针对作为分析对象的分子的一部分分别由2017年3月和2018年3月的质谱分析获取的质谱图。图5和图6的质谱图中,示出了将保留时间为17.5分钟附近的峰放大而得到的质谱图Mi。这些质谱图中,观察到与胆固醇酯(CE)、胆固醇酯过氧化物(CE-OOH)、磷脂(PLs)和溶血磷脂(LPLs)对应的峰。如表B中的ID2、ID12、ID68和69所示那样,试样中的相对于胆固醇酯量的胆固醇酯过氧化物量因约1年的保存而大幅增加。对于胆固醇硫酸酯和胆固醇酯氢氧化物,也观察到由约1年的保存导致的增加(ID66和67)。
如表B所示,对于与ID#23~36对应的各化合物,2018年3月的质谱分析中的标准化强度相对于2017年3月的质谱分析中的标准化强度的变动的比例为15%以下,认为是即使在1年以上的冷藏保存中变动也少的化合物。
图7的(A)和图7的(B)分别将2017年3月和2018年3月的质谱分析中获取的质谱图之中与(a)胆固醇酯(18:1)(ID36)和(b)胆固醇酯(20:5)(ID23)对应的峰放大并示出。
图8的(A)和图8的(B)分别将2017年3月和2018年3月的质谱分析中获取的质谱图之中与溶血磷脂酰胆碱(20:5)(ID33)对应的峰放大并示出。
图9和图10分别将2017年3月和2018年3月的质谱分析中获取的质谱图之中与(a)磷脂酰胆碱(32:1)(ID28)、(b)磷脂酰胆碱(34:1)(ID34)、(c)磷脂酰胆碱(36:2)(ID35)和磷脂酰胆碱(38:4)(ID32)对应的峰放大并示出。
图11和图12分别将2017年3月和2018年3月的质谱分析中获取的质谱图之中与(a)磷脂酰乙醇胺(34:2)(ID31)、(b)磷脂酰乙醇胺(36:2)(ID24)和(c)磷脂酰乙醇胺(38:4)(ID25)对应的峰放大并示出。
(2018年5月进行的质谱分析)
对于冷藏保存的上述试样,在以下的分析条件下进行LC/MS。
液相色谱法的条件
***:LCMS-8060(株式会社岛津制作所)
分析柱:Kinetex C8(Phenomenex)(内径2.1mm、长度150mm、粒径2.6μm)
柱温度:50℃
流动相:
(A)20mM甲酸铵水溶液
(B)以体积比1:1的比例混合乙腈和异丙醇所得的溶液
流速:0.4mL/min
梯度程序:
为了在二酰基磷脂的洗脱时间方面增大成分之间的洗脱时间的差异,从1分钟至14分钟使流动相B的浓度相对于时间呈非线性变化。
质谱分析的条件与2017年3月和2018年3月进行的上述质谱分析相同,对于表B的ID23~36的各化合物之中具备多个酰基的一部分的化合物,以能够将酰基的碳数和碳间的双键数进行区别并解析的方式设定转变。以下,将具备碳数为x1且碳间的双键数为y1的酰基、以及碳数为x2且碳间的双键为y2的酰基这两者的磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰乙醇胺(PE)分别记作PC(x1:y1-x2:y2)和PE(x1:y1-x2:y2)。
图13为示出对应于PC(32:1)全体的质谱图、以及对应于PC(16:0-16:1)的基于不同转变的2个质谱图的图。在与PC(32:1)全体的峰对应的保留时间观察到PC(16:0-16:1)的峰。
图14为示出对应于PC(34:1)全体的质谱图、与PC(16:0-18:1)对应的基于不同转变的2个质谱图、以及与PC(16:1-18:0)对应的基于不同转变的2个质谱图的图。在与PC(34:1)全体的峰对应的保留时间观察到PC(16:0-18:1)的峰。
图15为示出与PC(36:2)全体对应的质谱图、与PC(18:0-18:2)对应的基于不同转变的2个质谱图、以及与PC(18:1-18:1)对应的质谱图的图。在与PC(36:2)全体的峰对应的保留时间观察到PC(18:0-18:2)和PC(18:1-18:1)的峰。
图16为示出与PC(38:4)全体对应的质谱图、与PC(18:0-20:4)对应的基于不同转变的2个质谱图、与PC(18:1-20:3)对应的基于不同转变的2个质谱图、以及与PC(18:2-20:2)对应的基于不同转变的2个质谱图的图。在与PC(38:4)全体的峰对应的保留时间观察到PC(18:0-20:4)的峰。
图17为示出与PE(34:2)全体对应的质谱图、与PE(16:0-18:2)对应的基于不同转变的2个质谱图、以及与PE(16:1-18:1)对应的基于不同转变的2个质谱图的图。在与PE(34:2)全体的峰对应的保留时间观察到PE(16:0-18:2)的峰。
图18为示出与PE(36:2)全体对应的质谱图、与PE(18:0-18:2)对应的基于不同转变的2个质谱图、以及与PE(18:1-18:1)对应的质谱图的图。在与PE(36:2)全体的峰对应的保留时间观察到PE(18:0-18:2)和PE(18:1-18:1)的峰。
图19为示出与PE(38:4)全体对应的质谱图、与PE(18:0-20:4)对应的基于不同转变的2个质谱图、以及与PE(18:1-20:3)对应的基于不同转变的2个质谱图的图。在与PE(38:4)全体的峰对应的保留时间观察到PE(18:0-20:4)的峰。
以下的优选权基础申请的公开内容作为引用文而并入于此。
日本特许申请2018年第109023号(2018年6月6日申请)
附图标记说明
1…分析装置、10…液相色谱仪、14…分析柱、20…质谱仪、21…电离室、23…第一质量分离部、24…碰撞室、25…第二质量分离部、30…检测部、40…信息处理部、43…存储部、44…输出部、50…控制部、52…解析部、100…测定部、521…色谱制作部、522…氧化度解析部、523…标准化部、S…试样、Si…源自试样的离子。
Claims (15)
1.一种分析方法,其具备如下步骤:
将试样供于液相色谱法;
进行供于所述液相色谱法的所述试样的第一质谱分析,检测对应于胆固醇酯的第一离子和对应于胆固醇酯过氧化物的第二离子;以及,
根据检测到的所述第一离子的强度与检测到的所述第二离子的强度之比,进行所述试样的氧化度的解析。
2.根据权利要求1所述的分析方法,其具备如下步骤:
根据所述第一离子的强度和所述第二离子的强度中的任一者除以另一者所得的比率,算出表示所述试样的氧化度的指标。
3.根据权利要求2所述的分析方法,其具备如下步骤:
输出所述指标、或根据所述指标来表示所述试样的氧化度的信息。
4.根据权利要求2所述的分析方法,其具备如下步骤:
根据所述指标,解析通过所述第一质谱分析得到的测定数据。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的分析方法,其具备如下步骤:
通过所述第一质谱分析,检测分别与所述试样的各个成分对应的源自试样的离子;
算出所述源自试样的离子之中对应于磷脂的离子的强度的和;以及,
使用所述和,将检测到的各个所述源自试样的离子的强度进行标准化。
6.根据权利要求5所述的分析方法,其中,所述磷脂包含溶血磷脂和具备多个酰基的磷脂。
7.根据权利要求5所述的分析方法,其具备如下步骤:
通过第二质谱分析检测不变动离子,使用所述不变动离子的强度,将通过所述第二质谱分析检测到的各个离子的强度进行标准化,其中,所述不变动离子为如下离子:在对同一所述试样隔着规定时间进行至少2次所述第一质谱分析时,标准化的所述强度的变动为规定比例以下。
8.根据权利要求1~4中任一项所述的分析方法,其具备如下步骤:
使用对应于规定物质的离子的强度,将在所述第一质谱分析中检测到的分别与所述试样的各个成分对应的源自试样的离子的强度进行标准化,
所述物质为选自由具备碳数为18且碳间具有1处双键的酰基的胆固醇酯、具备碳数为20且碳间具有5处双键的酰基的胆固醇酯、具备碳数为20且碳间具有5处双键的酰基的溶血磷脂酰胆碱、具备碳数合计为32且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为1的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的2个酰基的磷脂酰胆碱、具备碳数合计为34且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺、具备碳数合计为36且碳间的双键数合计为2的2个酰基的磷脂酰乙醇胺、以及具备碳数合计为38且碳间的双键数合计为4的2个酰基的磷脂酰乙醇胺组成的组中的至少一个分子。
9.根据权利要求8所述的分析方法,其中,使用与所述物质中所含的胆固醇酯对应的离子的强度的和,将在所述第一质谱分析中检测到的、分别与所述试样的各个胆固醇酯对应的所述源自试样的离子的强度进行标准化。
10.根据权利要求8所述的分析方法,其中,使用与所述物质中所含的溶血磷脂酰胆碱对应的离子的强度,将在所述第一质谱分析中检测到的、分别与所述试样的各个溶血磷脂对应的所述源自试样的离子的强度进行标准化。
11.根据权利要求8所述的分析方法,其中,使用与所述物质中所含的磷脂酰胆碱和磷脂酰乙醇胺对应的离子的强度的和,将在所述第一质谱分析中检测到的、分别与所述试样的各个含有多个酰基的磷脂对应的源自试样的离子的强度进行标准化。
12.根据权利要求1~4中任一项所述的分析方法,其具备如下步骤:
通过所述第一质谱分析,检测分别与所述试样的各个成分对应的源自试样的离子;
算出所述源自试样的离子之中与溶血磷脂和具备多个酰基的磷脂对应的离子的强度的和;以及
使用所述和,将检测到的各个所述源自试样的离子的强度进行标准化,
所述磷脂不包含具有碳数为20且碳间的双键数为4的酰基的分子。
13.根据权利要求5所述的分析方法,其中,所述源自试样的离子包含具有碳数为20且碳间的双键数为4的脂肪酸或酰基的脂质分子,
根据对应于所述脂质分子的离子的标准化的强度来判定所述试样是否获取自健康人。
14.根据权利要求1~4中任一项所述的分析方法,其中,所述试样是在血液的状态下保管的试样。
15.一种分析装置,其具备:
试样导入部,其将试样导入;
液相色谱仪,其将所述试样分离;
质谱分析部,其进行被所述液相色谱仪分离的所述试样的第一质谱分析,检测对应于胆固醇酯的第一离子和对应于胆固醇酯过氧化物的第二离子;以及,
氧化度解析部,其根据检测到的所述第一离子的强度与检测到的所述第二离子的强度之比,进行所述试样的氧化度的解析。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018-109023 | 2018-06-06 | ||
JP2018109023 | 2018-06-06 | ||
PCT/JP2019/009393 WO2019235011A1 (ja) | 2018-06-06 | 2019-03-08 | 分析方法および分析装置 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112543868A true CN112543868A (zh) | 2021-03-23 |
Family
ID=68769398
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201980052538.8A Pending CN112543868A (zh) | 2018-06-06 | 2019-03-08 | 分析方法和分析装置 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11860138B2 (zh) |
EP (1) | EP3805750A4 (zh) |
JP (1) | JP7107368B2 (zh) |
CN (1) | CN112543868A (zh) |
WO (1) | WO2019235011A1 (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102884435A (zh) * | 2009-11-27 | 2013-01-16 | 贝克Idi心脏和糖尿病研究院控股有限公司 | 用于稳定和不稳定心脏病的脂质生物标记物 |
WO2017029401A1 (en) * | 2015-08-19 | 2017-02-23 | Metanomics Gmbh | Means and methods for diagnosing cardiac disease in a subject |
CN107923826A (zh) * | 2015-05-29 | 2018-04-17 | 普度研究基金会 | 用于分析组织样品的方法 |
CN108020592A (zh) * | 2017-11-03 | 2018-05-11 | 中国科学院武汉物理与数学研究所 | 一种毛细管电泳的质谱联用定量分析血清中磷脂酰胆碱的方法及应用 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060177888A1 (en) | 2003-03-20 | 2006-08-10 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Method for evaluating antioxidation capability of organism sample |
US8450682B2 (en) | 2008-10-22 | 2013-05-28 | University Of Yamanashi | Ionization method and apparatus using a probe, and analytical method and apparatus |
US20120118761A1 (en) | 2009-07-17 | 2012-05-17 | Health Sciences University Of Hokkaido | Method for electric measurement of peroxide using cnt sensor |
JP6119150B2 (ja) | 2011-09-13 | 2017-04-26 | 大正製薬株式会社 | リン脂質酸化体を用いた疲労の判定方法 |
FR2982489B1 (fr) | 2011-11-10 | 2013-12-27 | Inst Biophytis Sas | Phytoecdysones pour leur utilisation dans la stabilisation du poids apres un regime amaigrissant |
GB201310214D0 (en) | 2013-06-07 | 2013-07-24 | Medical Res Council | Separation and Analysis Systems and Methods |
GB2523114A (en) * | 2014-02-12 | 2015-08-19 | Kratos Analytical Ltd | Oxidized lipid detection |
JP6611009B2 (ja) * | 2016-04-14 | 2019-11-27 | 株式会社島津製作所 | 質量分析を用いた多成分一斉分析方法及び多成分一斉分析用プログラム |
JP2017191066A (ja) | 2016-04-15 | 2017-10-19 | 国立大学法人東北大学 | 磁気特性観察装置及び磁気特性観察方法 |
-
2019
- 2019-03-08 JP JP2020523520A patent/JP7107368B2/ja active Active
- 2019-03-08 CN CN201980052538.8A patent/CN112543868A/zh active Pending
- 2019-03-08 WO PCT/JP2019/009393 patent/WO2019235011A1/ja unknown
- 2019-03-08 EP EP19814017.0A patent/EP3805750A4/en active Pending
- 2019-03-08 US US16/972,174 patent/US11860138B2/en active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102884435A (zh) * | 2009-11-27 | 2013-01-16 | 贝克Idi心脏和糖尿病研究院控股有限公司 | 用于稳定和不稳定心脏病的脂质生物标记物 |
CN107923826A (zh) * | 2015-05-29 | 2018-04-17 | 普度研究基金会 | 用于分析组织样品的方法 |
WO2017029401A1 (en) * | 2015-08-19 | 2017-02-23 | Metanomics Gmbh | Means and methods for diagnosing cardiac disease in a subject |
CN108020592A (zh) * | 2017-11-03 | 2018-05-11 | 中国科学院武汉物理与数学研究所 | 一种毛细管电泳的质谱联用定量分析血清中磷脂酰胆碱的方法及应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2019235011A1 (ja) | 2021-06-17 |
WO2019235011A1 (ja) | 2019-12-12 |
US20210262993A1 (en) | 2021-08-26 |
US11860138B2 (en) | 2024-01-02 |
JP7107368B2 (ja) | 2022-07-27 |
EP3805750A4 (en) | 2022-03-23 |
EP3805750A1 (en) | 2021-04-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Hu et al. | Mass‐spectrometry‐based lipidomics | |
Beale et al. | Review of recent developments in GC–MS approaches to metabolomics-based research | |
Baker et al. | Mass spectrometry for translational proteomics: progress and clinical implications | |
Wolrab et al. | Oncolipidomics: Mass spectrometric quantitation of lipids in cancer research | |
AU2018254394B2 (en) | Mass spectrometry assay method for detection and quantitation of organic acid metabolites | |
JP7393206B2 (ja) | 腎機能代謝産物の検出及び定量化のための質量分析アッセイ方法 | |
JP4818116B2 (ja) | メタボノミクスにおいてlc−msまたはlc−ms/msデータの処理を行うための方法およびデバイス | |
Guo et al. | DaDIA: Hybridizing data-dependent and data-independent acquisition modes for generating high-quality metabolomic data | |
Mullard et al. | A new strategy for MS/MS data acquisition applying multiple data dependent experiments on Orbitrap mass spectrometers in non-targeted metabolomic applications | |
Spickett et al. | Identification of oxidized phospholipids by electrospray ionization mass spectrometry and LC–MS using a QQLIT instrument | |
JP5665863B2 (ja) | 質量分析計の機能を点検するテスト方法および装置ならびに質量分析でのイオン収量変動の補償する方法および装置 | |
da Silva et al. | Optimization of a liquid chromatography-ion mobility-high resolution mass spectrometry platform for untargeted lipidomics and application to HepaRG cell extracts | |
JP6508342B2 (ja) | 高分子化合物の定量分析方法及び該定量分析のためのデータ処理装置 | |
Zhou et al. | Comparison of different approaches for direct coupling of solid-phase microextraction to mass spectrometry for drugs of abuse analysis in plasma | |
CN111830112A (zh) | 用于非目标数据的稳定同位素标记示踪 | |
Alsaleh et al. | Mass spectrometry: a guide for the clinician | |
Bjerrum | Metabonomics: analytical techniques and associated chemometrics at a glance | |
CN112543868A (zh) | 分析方法和分析装置 | |
Cvačka et al. | Computer‐assisted interpretation of atmospheric pressure chemical ionization mass spectra of triacylglycerols | |
Fancy et al. | GC-MS-based metabolomics | |
US9905405B1 (en) | Method of generating an inclusion list for targeted mass spectrometric analysis | |
dos Santos et al. | Current status and advances in untargeted LC-MS tissue lipidomics studies in cardiovascular health | |
Lokhov et al. | Mass spectrometry methods in metabolomics | |
WO2014039803A1 (en) | Techniques for performing mass spectrometry | |
Lin et al. | Lipidomics Analysis in Ferroptosis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |