CN112402610A - 1-磷酸鞘氨醇受体调节剂在制备治疗糖尿病的药物中的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，提供了一种制备治疗糖尿病药物的应用，所述应用包括向所述个体施用治疗有效量的1‑磷酸鞘氨醇(S1P)受体调节剂。所述糖尿病是1型糖尿病或2型糖尿病，其中1‑磷酸鞘氨醇受体是S1PR1和/或S1PR5。其中1‑磷酸鞘氨醇受体调节剂选自西波尼莫德(Siponimod)、SEW2871、KRP‑203、CS‑0777、波内西莫德、奥扎尼莫德、塞拉菲莫德、GSK2018682以及MT‑1303或其药学上可接受的盐。

Description

1-磷酸鞘氨醇受体调节剂在制备治疗糖尿病的药物中的新 用途

技术领域

本发明一般涉及医药技术领域。具体涉及使用西波尼莫德(Siponimod)及其它1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体调节剂制备治疗糖尿病药物的应用。

背景技术

糖尿病是一类代谢性疾病，糖尿病可分为三种主要类型：1型糖尿病(T1D)，2型糖尿病(T2D)，和妊娠糖尿病。T1D曾被称为“胰岛素依赖性糖尿病”或“青少年糖尿病”，是由自身免疫特异地破坏胰岛β细胞，不能产生胰岛素而导致的高血糖症。T2D，曾被称为“非胰岛素依赖性糖尿病”，一般始于胰岛素抵抗。患病初始阶段，身体的胰岛β细胞会产生额外的胰岛素来弥补胰岛素抵抗。但是，随着时间的推移，功能性胰岛β细胞损失，无法制造足够的胰岛素来使血糖保持在正常水平。妊娠期糖尿病是孕妇对高血糖水平不耐受的第三种主要形式。此外，患有前期糖尿病的人血糖水平高于正常水平，虽不足以诊断为糖尿病，但他们患2型糖尿病和其他健康问题的风险极高，如心脏病和中风。

用于治疗糖尿病的药物是有限的。针对T1D只能用胰岛素或合成胰岛素类似物治疗。针对T2D已经开发了几组药物，例如α-葡糖苷酶抑制剂(阿卡波糖和米格列醇)，双胍(例如二甲双胍)，多巴胺激动剂(例如溴隐亭)，DPP-4抑制剂(例如阿格列汀)，葡萄糖样肽，氯茴苯酸，葡萄糖转运2抑制剂(例如达格列嗪)，磺酰脲类(例如格列美脲)和噻唑烷二酮类(例如罗格列酮)。然而，这些药物需要长期持续服用才能控制血糖水平，其中一些药物可能会引起严重的副作用。因此，一直需要治疗糖尿病的有效药物和治疗方法。

1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一类生物活性鞘脂类代谢物，具有生长因子的作用，通过与一组G蛋白偶联受体(GPCR)作用，刺激细胞增殖和存活。用糖尿病db/db小鼠为模型，S1P的第一代类似物FTY720能够诱导胰岛β-细胞再生，可使db/db小鼠的血糖正常化。db/db小鼠是一个最广泛应用的肥胖2型糖尿病模型，其特征之一是合成胰岛素的β-细胞随年龄严重受损，胰岛素逐渐缺失。

西波尼莫德英文名为Siponimod，中文名称为西尼莫德。代号BAF-312，化学名为3-[[4-[(1E)-1-[[[4-环己基-3-(三氟甲基)苯基]甲氧基]亚氨基]乙基]-2-乙基苯基]-甲基]-3-氮杂环丁烷羧酸富马酸盐，它是选择性的鞘氨醇-1-磷酸(S1P)受体调节剂，用于治疗复发型多发性硬化症。结构上，西波尼莫德是S1P的类似物，是1-磷酸鞘氨醇受体激动剂，其对S1PR1和S1PR5具有高度的选择性，对前二者的选择性高于S1PR2、S1PR3和S1PR4(在放射配基结合试验中，抑制上述五个1-磷酸鞘氨醇受体的EC50分别是0.39、0.98、>10000、>1000和750nM)。西波尼莫德被证明通过与S1PR1受体结合，激活下游信息通路，来启动和完成它的生物功能。目前尚未有关于激活S1PR1与糖尿病关联的相关验证。已发现的芬戈莫德是S1PR1、S1PR3、S1PR4和S1PR5的激动剂，但尚且不能确定S1PR1或S1PR5是否与控制糖尿病有关。

发明内容

本发明提供了一种制备治疗糖尿病药物的的应用，包括向所述个体施用治疗有效量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂。

在一些实施例中，本发明所述的糖尿病是1型糖尿病或2型糖尿病。

在一些实施方案中，本发明所述的1-磷酸鞘氨醇受体是S1PR1和/或S1PR5。

本发明在一些实施方案中，本发明所述的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂是西波尼莫德(BAF-312)、SEW2871，KRP-203，CS-0777，波内西莫德，奥扎尼莫德，塞拉菲莫德，GSK2018682，MT-1303或其药学上可接受的盐。

本发明所述西波尼莫德的游离态的化学名称是3-[[4-[(1E)-1-[[[4-环己基-3-(三氟甲基)苯基]甲氧基]亚氨基]乙基]-2-乙基苯基]-甲基]-3-氮杂环丁烷羧酸。

本发明所述的SEW2871的的游离态的化学名称是5-(4-苯基-5-三氟甲基噻吩-2-基)-3-(3-三氟甲基苯基)-1,2,4-噁二唑。

本发明所述的CS-0777的的游离态的化学名称是1-[5-[(3R)-3-氨基-4-羟基-3甲基丁基]-1-甲基-1H-吡咯-2-基]-4-(4-甲基苯基)-1-酮。

本发明所述的奥扎尼莫德(RPC1063)的的游离态的化学名称是5-(3-[(1S)-1-[(2-羟乙基)氨基]-2,3-二氢-1H-茚-4-基]-1,2,4-噁二唑-5-基)-2-[(丙烷-2-基)氧基]苯甲腈。

本发明所述的塞拉菲姆(ONO-4641，也称为塞拉莫德)的的游离态的化学名称是5-氯-4-羟基-1-甲基-2-氧-N-苯基-1,2-二羟基喹啉-3-酰胺。

本发明所述的GSK2018682的的游离态的化学名称是4-[5-氯-6-(1-甲基乙氧基)-3-吡啶基]-1,2,4-噁二唑-3-基]-1H-吲哚-1-丁酸。

本发明所述的MT-1303的的游离态的化学名称是2-(4-(庚氧基)-3-三氟甲基苯乙基)-2-氨基-丙烷-1,3-二醇。

本发明所述的波内西莫德的英文名是Ponesimod(ACT-128800)，CAS号是854107-55-4，其游离态的化学名称(Z)-2-((Z)-3-氯-4-((R)-2,3-二羟丙氧基)苯亚甲基)-5-(丙胺基)-4-(氧-甲苯基)二羟基噻吩-3(2H)-酮。

在一些实施方案中，本发明所述的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂是西波尼莫德、其游离态或其游离态与其他酸根碱基所成的药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，本发明的所述的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂治疗有效量每次剂量为约0.01mg至约10mg/kg体重。在某些实施方案中，治疗有效量每次剂量为约0.001mg/kg体重，0.01mg/kg体重，0.1mg/kg体重，约0.5mg/kg体重，约1mg/kg体重，约1.5mg/公斤体重，约2mg/kg体重，约2.5mg/kg体重，约3mg/kg体重，约3.5mg/kg体重，约4mg/kg体重，约4.5mg/kg体重，约5mg/kg体重，约5.5mg/kg体重，或约6mg/kg体重。

在某些实施方案中，本发明所述的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂每天施用一次，一周一次，一周两次或一周三次。

本发明还提供了一种包含权利要求1所述1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的组合物，其中，所述的受体调节剂选自西波尼莫德、SEW2871，KRP-203，CS-0777，波内西莫德，奥扎尼莫德，塞拉菲莫德，GSK2018682，MT-1303或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明所述的1-磷酸鞘氨醇1-磷酸鞘氨醇受体调节剂是西波尼莫德(BAF-312)，或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，本包含所述1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的组合物单位剂量为约0.001mg至约10mg。

在某些实施方案中，本发明所述的1-磷酸鞘氨醇1-磷酸鞘氨醇受体调节剂是通过注射、口服或粘膜给药，优选通过静脉内、皮下、口服、肌肉内、心室内或通过吸入给药。

本发明还公开了含有上述药物的药物制剂或药物组合物，所述的组合物包含所述的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂及药学上可接受的辅料，并配制成片剂、丸剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、乳膏、气溶胶、粉末或悬浮液。

在另一个方面，本发明内容提供了用于在患有糖尿病的受试者中保持或增加功能性β细胞的质量的方法。所述方法包括向所述个体施用有效量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂或包含1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的组合物，优选地，1-磷酸鞘氨醇受体调节剂为西波尼莫德。

在另一个方面，本发明内容提供了用于增加患有糖尿病的受试者中的胰岛素水平的方法所述方法包括向所述个体施用有效量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂或包含1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的组合物，优选地，1-磷酸鞘氨醇受体调节剂为西波尼莫德。

在某些实施方案中，本发明所述个体为人或其他哺乳动物，优选为人。

在本发明中，用db/db小鼠为模型，证明一种新一代的S1PR1和/或S1PR5受体调节剂，如西波尼莫德(BAF312)，能够阻止或逆转DB/DB小鼠的血糖升高。同时也证明S1PR1和/或S1PR5受体调节剂能够阻止非肥胖糖尿病(NOD)小鼠发展为糖尿病。NOD与人类1型糖尿病的许多遗传和免疫特性相似，NOD小鼠是目前应用最广泛的1型糖尿病(T1D)研究的小鼠模型。

发明详述

在更详细地描述本发明之前，应该清楚的是，本发明不限于所描述的特定实施例子，因此可能会有所不同。还应清楚，因为本发明的范围仅限于所附权利要求，所以本文所用术语仅用于描述特定实施例子，并不应理解为对权利要求范围的限制。如果提供了一个剂量范围，则应理解为该范围的上限和下限与该规定范围内的任何其他规定值或干预值之间的每一干预值都包含在本发明中。这些较小范围的上限和下限可以独立地包含在较小范围内，并且也包含在本发明中，但受所述范围内任何特别排除的限制的限制。如果所述范围包括一个或两个限制，则不包括其中一个或两个限制的范围也包括在披露中。

除非另有定义，否则本发明中使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。尽管与本文所述方法和材料类似或等效的任何方法和材料也可用于本发明的实践或测试中，但现在描述的是首选方法和材料。

本说明书中引用的所有出版物和专利均通过引用并入本文，如同每个单独的出版物或专利被具体和单独地指出通过引用并入本文并且通过引用并入本文以公开和描述所述方法和/或材料。与出版物有关的联系。任何出版物的引用是在其提交日之前的公开内容，并且不应被解释为承认本发明内容无权凭借在先公开而先于此类出版物。此外，提供的出版日期可能与实际出版日期不同，需要独立确认。

对于本领域技术人员在阅读本发明内容时将显而易见的是，本文描述和示出的每个单独实施例具有可以容易地与任何其他几个的特征分离或组合的离散组件和特征。在不脱离本发明的范围或精神的情况下的实施例。任何列举的方法可以按照所述事件的顺序或以逻辑上可能的任何其他顺序进行。

定义

提供以下定义以帮助读者。除非另有定义，本文中使用的所有艺术术语、符号和其他科学或医学术语或所用术语，具有化学和医学领域技术人员通常理解的含义。在某些情况下，为了清楚和/或方便参考，本文定义了具有普遍理解含义的术语，并且不必将这些包含在本文中的定义解释认为与本领域中普遍理解的术语定义存在实质性差异。

如本文所用，单数形式“一”和“一个”，“该”包括复数指代，除非上下文另有明确说明。

如本文所用，“约”一词是指使用它的数字的正负10％。因此，约5mg/kg体重意味着在4.9至5.1mg/kg体重范围内。

S1PR1和/或S1PR5的定义，在S1P信号通路上，某些药物可通过激动或抑制S1P受体而改变S1P在不同疾病中的生理功能，S1P受体数据G蛋白偶联受体，有5个亚型，即S1PR1、S1PR2、S1PR3、S1PR4和S1PR5，其中S1PR1、S1PR2、S1PR3广泛表达于各种组织，S1PR4主要在淋巴***和血液***中表达，S1PR5主要在中枢神经***中表达。调节不同的亚型通路及其相应酶活性，从而起到治疗不同疾病的作用，本发明中S1PR1和/或S1PR5指的是针对S1PR1或S1PR5其中之一或针对两者有效的S1P调节剂。

应注意，在本发明中，诸如“包含”，“包含”，“包含”，“含有”，“含有”等术语具有中国专利法中赋予的含义；它们是包容性的或开放式的，不排除其他未列举的元素或方法步骤。诸如“基本上由......组成”和“基本上由......组成”之类的术语具有中国专利法中的含义；它们允许包含不会对要求保护的发明的基本和新颖特征产生实质影响的其他成分或步骤。术语“由...组成”和“由...组成”具有中国专利法中赋予它们的含义；即这些术语是封闭式的。

如本文所用“1-磷酸鞘氨醇受体调节剂”或“1-磷酸鞘氨醇受体调节剂”包括但不限于化学品、化合物和蛋白质，或具有调节1-磷酸鞘氨醇受体活性的组合物。S1P是一种生物活性溶血磷脂代谢物，可作为细胞间脂质介质。已知1-磷酸鞘氨醇受体有五种，即S1PR1-5。1-磷酸鞘氨醇受体在各种细胞和组织中表现出重叠或不同的表达模式，因此，S1P的各种细胞功能已被指定为1-磷酸鞘氨醇受体亚型。已经发现了各种1-磷酸鞘氨醇受体调节剂，包括激动剂和拮抗剂。这些1-磷酸鞘氨醇受体调节剂中的一些表现出1-磷酸鞘氨醇受体亚型选择性活性。

本文所用的“个体”是指哺乳动物或人，例如豚鼠，小鼠，大鼠，沙鼠，猫，兔，狗，猴，黑猩猩，残端猕猴，人类和非人类，灵长类动物。

如本文所用，“盐”是指药学上可接受的盐和适用于工业过程的盐，例如化合物的制备。

如本文所用，关于病症的“治疗”可指预防该病症、减少或结束与该病症相关的症状、导致该病症的完全或部分恢复。本文所用关于病症的“预防”可指对病症或与病症相关的症状的全部或部分预防。例如，“预防”可指完全停止疾病或其症状的发展，或延迟疾病的发作或发展，延迟与疾病相关的症状的发作或发展，或降低发生疾病的风险。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指1-磷酸鞘氨醇受体调节剂或其药学上可接受的盐的剂量或浓度，其能够预防，延迟发作，改善糖尿病的症状。本文提供的治疗有效量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂或其药学上可接受的盐将取决于本领域已知的各种因素，例如体重，年龄，既往病史，现有药物，健康状况。受试者和交叉反应，过敏，敏感性和不良副作用的可能性，以及糖尿病发展的给药途径和程度。

如本文所用，术语“药学上可接受的”意指适用于哺乳动物，表明指定的载体，媒介物，稀释剂，赋形剂和/或盐通常在化学上和/或物理上与另一种相容。包含该制剂的成分，并且与其接受者在生理上相容。

如本文所用，术语“单位剂量”是指为了方便、安全或监测而将所述内容物作为单一剂量直接从所述载体投与所述个体的单个单位载体。在某些实施例中，单位剂量的非肠道制剂包装在带针的安瓿、小瓶或注射器中。如所属领域内已知和实践的，所有用于非肠道给药的制剂应无菌且不发热。化合物的单位剂量是指不含载体重量的化合物的重量(当使用载体时)。

如本文所用，术语“每周一次”是指单位剂量，例如，1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的单位剂量，在七天期间给药一次，最好是在每周的同一天给药。在每周一次的给药方案中，单位剂量通常约每七天给药一次。每七天给药一次的一个非限制性实例是每周日给予单位剂量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂。

如本文所用，术语“每天一次”是指单位剂量，例如1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的单位剂量，在一天期间内给药一次，最好在每天的同一时间给药。在每天一次的给药方案中，通常每24小时施用单位剂量。每日一次给药方案的一个非限制性实例是在每天上午9:00给予单位剂量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂。

本发明内容提供了使用BAF312及其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂治疗糖尿病的方法。在一个方面，该方法预防或改善1型糖尿病中β细胞的自身免疫性损伤，增加β细胞的数量。另一方面，该方法预防或改善1型或2型糖尿病中β细胞的炎症损伤。在另一方面，该方法促进1型或2型糖尿病中的β细胞再生，并能够促进体外培养的胰岛素分泌细胞的存活。

在一个方面，本发明提供了治疗糖尿病患者的方法，包括向患者施用包含治疗有效量的西波尼莫德。

在另一个方面，本发明提供了治疗糖尿病患者的方法，包括向患者施用包含治疗有效量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的化合物。

在某些实施方案中，1-磷酸鞘氨醇受体调节剂是SEW2871，KRP-203，CS-0777，ACT-128800，RPC1063，ONO-4641，GSK2018682，MT-1303或其药学上可接受的盐。

SEW2871，KRP-203，BAF312，CS-0777，ACT-128800，RPC1063，ONO-4641，GSK2018682，和MT-1303的正式名称和靶向选择性见下表1。

表1. 1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的游离态的名称及结构式

如上所述，本文提供的治疗有效量的西波尼莫德或其它1-磷酸鞘氨醇受体调节剂将取决于本领域已知的各种因素，例如受试者，体重，目标疾病，给药途径等。在一些实施方案中，1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的治疗有效量为约0.001mg/kg体重至约10mg/kg体重。在一些实施方案中，治疗有效量为约0.001mg/kg体重，约0.01mg/kg体重，约0.1mg/kg体重，约0.2mg/kg体重，约0.3mg/kg体重，约0.4mg/kg体重，约0.5mg/kg体重，约0.6mg/kg体重，约0.7mg/kg体重，约0.8mg/kg体重，约0.9mg/kg体重，约1mg/kg公斤体重，约1.1mg/kg体重，约1.2mg/kg体重，约1.3mg/kg体重，约1.4mg/kg体重，约1.5mg/kg体重，约2mg/kg体重，约2.5mg/kg体重，约3mg/kg体重，约3.5mg/kg体重，约4mg/kg体重，约4.5mg/kg体重，约5mg/kg体重，约5.5mg/公斤体重，约6mg/kg体重，约6.5mg/kg体重，约7mg/kg体重，约7.5mg/kg体重，约8mg/kg体重，约8.5mg/kg体重，约9mg/kg体重，约9.5mg/kg体重，或约10mg/kg体重。

在一些实施方案中，本发明的西波尼莫德或其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂化合物的单位剂量为约0.001mg至约10mg。例如，本发明组合物的单位剂量为约0.001mg，约0.01mg，约0.1mg，约0.2mg，约0.3mg，约0.4mg，约0.5mg，约0.6mg，约0.7mg，约0.8mg，约0.9mg，约1mg，约1.1mg，约1.2mg，约1.3mg，约1.4mg，约1.5mg，约2mg，约2.5mg，约3mg，约3.5mg，约4mg，约4.5mg mg，约5mg，约5.5mg，约6mg，约6.5mg，约7mg，约7.5mg，约8mg，约8.5mg，约9mg，约9.5mg，或约10mg。在优选的实施方案中，本发明的化合物的单位剂量为约5mg。

在一些实施方案中，本发明的西波尼莫德化其他化合物可通过适当的途径给予有需要的受试者，包括但不限于口服，注射(例如静脉内，肌肉内，皮下，皮内，心内，鞘内，胸膜内，腹膜内)等，粘膜(如鼻腔，口腔内给药等)，舌下，直肠，经皮和肺部给药。在一些实施方案中，化合物可以通过静脉内，皮下，口服，肌肉内，脑室内或通过呼吸途径施用。

在一些实施方案中，西波尼莫德或其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂化合物是注射制剂。注射制剂包括无菌水溶液或分散液，悬浮液或乳液。在所有情况下，注射制剂应该是无菌的并且应该是流动的以便于注射。它应该在制造和储存条件下稳定，并且必须防止微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水，乙醇，多元醇(例如甘油，丙二醇和液体聚乙二醇等)，及其合适的混合物和/或植物油。注射制剂应保持适当的流动性。例如，通过使用诸如卵磷脂的包衣，通过使用表面活性剂等，可以保持适当的流动性。通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯，氯丁醇，苯酚，山梨酸，硫柳汞等，可以防止微生物的感染作用。

在一些实施方案中，西波尼莫德或其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂化合物是口服制剂。口服制剂包括但不限于胶囊，扁囊剂，丸剂，片剂，锭剂(使用调味基础，通常为蔗糖和***胶或黄蓍胶)，粉末，颗粒，或作为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或作为水包油或油包水液体乳液，或作为酏剂或糖浆，或作为锭剂(使用***基质，如明胶和甘油，或蔗糖和***胶)和/或作为漱口水和类似物。

在用于口服给药的固体剂型(例如，胶囊，片剂，丸剂，糖衣丸，粉末，颗粒等)中，将西波尼莫德或其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂与一种或多种药学上可接受的载体混合，例如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或以下任何一种：(1)填充剂或增量剂，例如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，如羧甲基纤维素，藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和/或***胶；(3)保湿剂，如甘油；(4)崩解剂，如琼脂，碳酸钙，马铃薯或木薯淀粉，海藻酸，某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶液缓凝剂，如石蜡；(6)吸收促进剂，如季铵化合物；(7)润湿剂，如乙酰醇和甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，如滑石，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，十二烷基硫酸钠及其混合物；(10)着色剂。

在用于口服给药的液体剂型中，西波尼莫德或其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂与以下任何一种混合：药学上可接受的乳液，微乳液，溶液，悬浮液，糖浆和酏剂。除1-磷酸鞘氨醇受体调节剂外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苄基醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1,3-丁二醇，油(特别是棉籽，花生，玉米，橄榄油，蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢糠醇，聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，以及它们的混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可包括佐剂，如润湿剂，乳化剂和悬浮剂，甜味剂，调味剂，着色剂，芳香剂和防腐剂。

在一些实施方案中，组合物是口腔喷雾制剂或鼻喷雾制剂。喷雾制剂包括但不限于水性气溶胶，非水悬浮液，脂质体制剂或固体颗粒制剂等。通过混合药剂的水溶液或悬浮液和常规的药学上可接受的载体和稳定剂来制备水性气溶胶。载体和稳定剂根据具体化合物的要求而改变，但通常包括非离子表面活性剂(吐温或聚乙二醇)，油酸，卵磷脂，氨基酸如甘氨酸，缓冲溶液，盐，糖或糖醇。气溶胶通常通过等渗溶液制备，并且可以通过喷雾器递送。

在一些实施方案中，有效治疗剂量的西波尼莫德或其他化合物为约0.001mg/kg体重，约0.01mg/kg体重，约0.1mg/kg体重，约0.2mg/kg体重，约0.3mg/kg体重，约0.4mg/kg体重，约0.5mg/kg体重，约0.6mg/kg体重，约0.7mg/kg体重，约0.8mg/kg体重，约0.9mg/kg体重体重，或约1mg/kg体重，其中组合物每天给药一次。

在一些实施方案中，有效治疗剂量为约0.01mg/kg体重，约0.1mg/kg体重，约0.2mg/kg体重，约0.3mg/kg体重，约0.4mg/kg体重体重，约0.5mg/kg体重，约0.6mg/kg体重，约0.7mg/kg体重，约0.8mg/kg体重，约0.9mg/kg体重，约1mg/kg体重，约2mg/kg体重，约3mg/kg体重，约4mg/kg体重，约5mg/kg体重，或约10mg/kg体重，其中组合物每周施用一次。

在一些实施方案中，本发明所述的个体主要指包括人和哺乳动物。本发明的主题还可以是家畜，例如牛，猪，绵羊，家禽和马，或家畜，例如狗和猫。优选地，本发明的主题是人。可以是男性或女性，可以是老年人，并且可以是成人，青少年，儿童或婴儿。人类主体可以是高加索人，非洲人，亚洲人，闪米特人或其他种族背景，或者是这种种族背景的混合物。

附图说明

图1：西波尼莫德对db/db小鼠血糖的影响

图2：西波尼莫德对db/db小鼠糖耐量的影响

图3：西波尼莫德对db/db小鼠胰岛beta细胞量的影响

图4：西波尼莫德对NOD小鼠糖尿病发病率的影响

图5：不同1-磷酸鞘氨醇受体调节剂对INS-1细胞生长的影响。

具体实施方式

提供以下实施实例以更好地说明要求保护的发明，而不应解释为限制本发明的范围。

以下描述的所有具体组合物，材料和方法全部或部分地包括在本发明的范围内。这些具体的化合物，材料和方法不是为了限制本发明，而仅仅是为了说明包括在本发明范围内的具体实施方案。本领域技术人员可以在不脱离本发明的范围的情况下开发出等同的组合物，材料和方法而无需发明创造性的能力。应当理解，可以在本文所述的程序中进行许多变化，同时仍然保持在本发明的范围内。发明人的意图是这些变化包括在本发明的范围内。

实施例1评估西波尼莫德或其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂对糖尿病小鼠血糖影响的试验

五周龄雌性db/db小鼠(BKS.Cg-m+/-Leprdb)购自Jackson Laboratories(BarHarbor，缅因州)。将小鼠置于受控光(12小时光照/12小时黑暗)和温度条件下，并且可以自由获取食物(正常的啮齿动物食物)和水。所有实验程序均由机构动物护理和使用委员会(IACUC)批准，并根据实验动物护理和使用指南(ILAR，National Academies Press，USA2011)进行。1周后，测量6周龄小鼠的空腹血糖水平。空腹血糖在Glc>7mM范围的小鼠随机分为对照组(n＝10)和西波尼莫德受试组(n＝10)。治疗组中的小鼠每天通过喂食管喂食10mg/kg的西波尼莫德，并且每周测量两次食物摄取和体重。在每周结束时测量空腹血糖水平。在给药8周后，停止给药，继续测定各项指标2周(X,n＝10)。t-检验方法用来分析统计显著性，*P<0.05为有统计学差异。

结果如图1：显示了口服西波尼莫德阻止了db/db小鼠空腹血糖水平升高。对照组db/db小鼠空腹血糖水平不断升高。

实施例2小鼠腹膜内葡萄糖耐量试验

对于葡萄糖耐量试验(GTT)，将小鼠禁食16小时并腹膜内注射10％葡萄糖(1mg/g体重)。然后通过Glucometer Elite(Bayer Corp.，Elkhart，Ind。)在0,15，30,60,90，和120分钟后尾端采血，测量葡萄糖水平。结果如附图2：

显示了对照组和受试组小鼠的葡萄糖耐量试验(GTT)。口服西波尼莫德极大地改善了db/db小鼠的葡萄糖耐量。10周后的对照组(O，n＝10)和受试组(·，n＝10)被空腹12小时，并经腹腔内注射10％的葡萄糖(1mg/g体重)，在0，15，30，60，90，120min尾部采血测量血糖水平。*P<0.05为有统计学差异。

实施例3西波尼莫德治疗6周后对小鼠胰腺中的胰岛面积影响试验

小鼠胰岛区域的定量评估

为了评估用西波尼莫德或其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂治疗6周后胰腺中的胰岛面积，使用来自胰腺的六个连续石蜡切片(10μm)(对照组为5个胰腺，治疗组为5个胰腺)，进行胰岛素免疫荧光染色。整个切片上的所有胰岛素染色区域(即胰岛面积)，均由Axioplan2显微镜以X10放大率拍摄，每个胰岛区域通过基于Java的图像处理程序ImageJ(NationalInstitutes of Health，Bethesda，Md。)测量，并且所有胰岛区域的总和一节中的胰岛区域被认为是每个胰腺的胰岛区域。

采取实施例1的小鼠，最后一次测量空腹血糖后，从db/db小鼠中取出胰腺，在4％甲醛溶液中固定过夜，并包埋在石蜡中。将石蜡切片(10μm厚)再水化，并使用微波在10mM柠檬酸钠溶液中进行抗原修复，然后在3％H 2O 2溶液中阻断内源性过氧化物酶。使用以下一抗：豚鼠抗猪胰岛素(1：300；DAKO Corp.，Carpinteria，CA)，兔抗胰高血糖素(1：200；购自Thermo Fisher Scientific公司，Fremont，CA)，小鼠反式环肽D3(1:40；购自Vector研究室，勃林格姆，CA)，小鼠抗BrdU(1:10；购自BD公司)，兔抗Ki67(1：100；购自Abcam，Cambridge，Mass。)和兔抗p57KIP2(1：100；购自Abcam，Cambridge，Mass。)。将山羊抗小鼠/兔IgG和与ALEXA FLUOR染料缀合的山羊抗豚鼠-小鼠/兔IgG(ALEXA FLUOR 488和ALEXAFLUOR，Invitrogen)用于第二抗体。所有图像均由Zeiss Axioplan 2显微镜捕获。

结果如附图3，显示了对照组和西波尼莫德受试组的db/db小鼠胰岛素阳性区域的体视学定量分析。口服西波尼莫德增加了胰岛素分泌细胞的量。5个连续的石蜡切片(10μm)从每个胰腺(5个对照的胰腺和5个来自西波尼莫德受试组db/db小鼠的胰腺)进行胰岛素免疫荧光染色。整个切片上的所有胰岛素染色区域(胰岛面积)，由Axioplan 2显微镜在×10倍放大率下拍摄，每个胰岛面积由基于Java的图像处理程序ImageJ测量，每个胰岛面积之和被认为是每个胰腺的胰岛面积。*p<0.05为有统计学差异。

实施例4西波尼莫德阻止非肥胖糖尿病(NOD)小鼠发展为糖尿病的试验

选取NOD小鼠，这是自身免疫性疾病1型糖尿病的模型，将小鼠置于受控光(12小时光照/12小时黑暗)和温度条件下，并且可以自由获取食物(正常的啮齿动物食物)和水。从13周龄开始，NOD小鼠被随机地分为两组，对照组NOD小鼠(n＝12只)给生理盐水，受试组(n＝12只)给1.0mg/kg西波尼莫德(从CAYMAN CHEMICALS，安阿伯，密歇根州)每天一次。在37周龄时停止给药。每2-3星期测定空腹血糖一次，NOD小鼠血糖超过260毫克/分升被定义为糖尿病。

结果如附图4，显示了口服西波尼莫德对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病发病率的影响。口服西波尼莫德有效地阻止了NOD小鼠发展为糖尿病。

实施例5西波尼莫德等1-磷酸鞘氨醇受体调节剂对离体培养的INS-1细胞的影响

在培养基中培养胰岛细胞(INS-1细胞)(含有10％胎牛血清，2mM L-谷氨酰胺，1％丙酮酸钠，50μMβ-巯基乙醇，100单位/ml的RPMI 1640培养基，含青霉素和链霉素各100μg/ml)。对于INS-1细胞的处理，将细胞在RPMI培养基中培养过夜，并改变为含有2mM葡萄糖和0.5％FBS的Hanks'平衡盐溶液，即在没有生长因子的条件下过夜培养。然后在分别含有1mg/ml的SEW2871，KRP-203，CS-0777，ACT-128800，RPC1063，ONO-4641，GSK2018682，MT-1303的相同培养基中处理细胞24小时。然后用SIGMA的测定细胞生长试剂盒(MTT)测试细胞增殖。该分析基于在电子耦合试剂存在下四氮唑盐MTT裂解。产生的不溶于水的甲氧基氮盐。在96孔组织培养板中生长的细胞用MTT溶液孵育约4小时。在这个潜伏期之后，形成一种不溶于水的染料，用扫描多孔分光光度计定量测定。测定的吸光度(O.D.)与活细胞数呈线性关系，即O.D.值越大，细胞数月多。结果如附图5，图中10％FBS为阳性对照，(-FBS)为阴性对照。

附图5显示了西波尼莫德及其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂对INS-1细胞生长的影响。胰岛素分泌细胞INS-1细胞在RPMI-1640培养基中培养，然后用10μM 1-磷酸鞘氨醇受体调节剂，24小时后用细胞增殖检测试剂盒(XTT)对细胞进行生长分析。吸光度(A492 nm–A690nm)由微板阅读器测量。测试的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂有：SEW2871，KRP-203，BAF312，CS-0777，ACT-128800，RPC1063，ONO-4641，GSK2018682，MT-1303。西波尼莫德及其他1-磷酸鞘氨醇受体调节剂不同程度地促进INS-1细胞生长。

上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种制备治疗糖尿病药物的应用，所述应用包括向所述个体施用治疗有效量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂，所述糖尿病是1型糖尿病或2型糖尿病，其中1-磷酸鞘氨醇受体是S1PR1和/或S1PR5。

2.根据权利要求1的应用，其中1-磷酸鞘氨醇受体调节剂选自西波尼莫德、SEW2871，KRP-203，CS-0777，波内西莫德，奥扎尼莫德，塞拉菲莫德，GSK2018682，MT-1303或其药学上可接受的盐；

优选地，1-磷酸鞘氨醇受体调节剂为西波尼莫德或其药学上可接受的盐。

3.根据权利要求1的应用，其中治疗有效量每次剂量为0.001mg/kg体重至10mg/kg体重。

4.根据权利要求1的应用，其中治疗有效量每次剂量为0.001mg/kg体重，0.01mg/kg体重，0.1mg/kg体重，0.5mg/kg体重，1mg/kg体重，1.5mg/kg体重，2mg/kg体重，2.5mg/kg体重，3mg/kg体重，3.5mg/kg体重，4mg/kg体重，4.5mg/kg体重，5mg/kg体重，5.5mg/kg体重，或6mg/kg体重。

5.根据权利要求1所述组合物，每天给药一次，一周给药一次，一周给药两次或一周给药三次。

6.一种包含权利要求1所述1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的组合物，其中，所述的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂选自西波尼莫德、SEW2871，KRP-203，CS-0777，波内西莫德，奥扎尼莫德，塞拉菲莫德，GSK2018682或MT-1303或其药学上可接受的盐；

优选地，1-磷酸鞘氨醇受体调节剂为西波尼莫德或其药学上可接受的盐。

7.权利要求6所述组合物，通过注射，口服，或通过粘膜给药，优选通过静脉内，皮下，口服，肌肉内，心室内或通过吸入给药。

8.包含权利要求1所述药物的药物制剂，所述药物制剂包含权利要求1所述的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂及药学上可接受的辅料，配制成片剂，丸剂，胶囊，液体，凝胶，糖浆，浆液，乳膏，气溶胶，粉末或悬浮液，其单位剂量为0.001mg至10mg。

9.一种在患有糖尿病的个体中保持或增加功能性β细胞的应用，所述应用包括向所述个体施用有效量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂或包含1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的组合物，优选地，1-磷酸鞘氨醇受体调节剂为西波尼莫德。

10.一种在患有糖尿病的个体中增加胰岛素水平的应用，所述应用包括向所述个体施用有效量的1-磷酸鞘氨醇受体调节剂或包含1-磷酸鞘氨醇受体调节剂的组合物，优选地，1-磷酸鞘氨醇受体调节剂为西波尼莫德。

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