CN112386622B - 一种祛斑活性物的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种高效祛斑活性物的制备方法及其应用,其特征在于采用以下步骤:A.新鲜艾叶经干燥后与去离子水加入到圆底烧瓶中,浓盐酸调节pH至2.0‑3.0,水浴加热提取,冷凝管出液口用锥形瓶接收艾叶精油;在pH6.5‑7.0环境下对第一道滤渣进行水浴提取;在pH8.2‑8.6环境下对第二道滤渣进行水浴提取;B.第一道滤液、第二道滤液、第三道滤液合并后过滤,得艾叶提取液;C.将艾叶提取液减压蒸馏浓缩得艾叶提取物浸膏,取适量浸膏加入到乙醇/硫酸铵双水相体系中,用浓盐酸调节pH至3‑4,充分震荡,然后静置;收集上层乙醇相,减压浓缩得艾叶黄酮类物质;D.将艾叶精油与艾叶黄酮类物质进行混合,得高效祛斑活性物。本发明所得高效祛斑活性物对黄褐斑具有良好的改善功效。

Description

一种祛斑活性物的制备方法及其应用
技术背景
黄褐斑是一种多发于女性面部的色素沉着性疾病。它的临床反应主要为淡褐色到深褐色的色素斑点,部分带有一定程度皮损,多分布于面部、颧部、颊部、鼻部等部位。黄褐斑的发病原因机理较为复杂,目前认为导致黄褐斑产生的主要因素有内分泌、遗传、日光照射、自由基等。因此想要改善黄褐斑不仅要注意心情的调节,减少日光的照射,针对自由基以及炎症的控制也尤为重要。
参考国内外文献可知,黄褐斑主要的干预治疗包括局部使用药物、化学品换肤、激光治疗以及口服用药等。在化妆品诸多的黄褐斑干预手段中,最常用的美白剂有果酸及其衍生物、维生素C、熊果苷、传明酸等,但在实际应用过程中,果酸及其衍生物具有较为严格的pH依赖性,维生素C也具有较强的热不稳定性及极易变色的特质,熊果苷在酸性环境下极易分解,传明酸则有一定程度的致敏性。与此同时,基于中医理论的中药外敷法,因其温和的性质及较低的致敏性具有较好的普适性,一些纯天然的中草药植物同样可以展现较好的酪氨酸酶抑制活性以及B-16黑色素细胞抑制活性,其活性成分提取物针对黄褐斑的改善具有较高的研究价值。
作为我国传统药食两用的中草药,艾叶常在消炎配伍方中出现,单独的使用较少。如艾叶、苏木、红花、石榴皮、黄柏、地肤子白蒺藜、芒硝根据一定的比例配伍而成的苏木红花外洗方等。艾叶的主要活性成分包括挥发油、黄酮类物质、桉叶烷类、三萜类等。艾叶中的黄酮主要以游离黄酮为主,具有较好的自由基清除活性。有文献报道艾叶对于炎症发生的早、中、晚期均具有较好的抑制。艾叶挥发油主要包含单萜、萜品醇、倍半萜、芳香化合物等,其中提供抗炎活性的物质主要集中在倍半萜、单萜中。有研究证实,艾叶油可以抑制NF-κB活化;下调JNK、P38、MAPK磷酸化水平;阻断JAK2/STAT3等多个炎症通路,减少了NO、PGE2、TNF-1等炎症因子的释放,降低了TNF-α、iNOS、COX-2的表达,从而在多水平抑制炎症的发生。
发明内容
本发明要解决的技术问题是,提供一种高效祛斑活性物的制备方法及其应用,所述高效祛斑活性物同时含有艾叶挥发油和艾叶黄酮类物质,对黄褐斑具有良好的改善功效;所述方法制备的高效祛斑活性物可直接应用到祛斑、美白类化妆品中。
为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:一种高效祛斑活性物的制备方法,其特征在于采用以下步骤:
A. 采摘新鲜艾叶,平铺于烘筛上置于烘干机中干燥6-8h,干燥温度为60℃,干燥至艾叶含水量低于2%,得干燥艾叶;称取适量干燥艾叶,加入到圆底烧瓶中,然后加入去离子水,去离子水的质量为干燥艾叶质量的5-10倍;使用化学纯浓盐酸调节烧瓶内液体的pH至2.0-3.0,将圆底烧瓶置于75-95℃水浴中加热提取,冷凝管出液口采用装有去离子水的锥形瓶接收艾叶精油;当加热至不再有黄色油状液体生成后,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第一道滤液,将第一道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第一道滤渣质量5-10倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至6.5-7.0,将其置于75-95℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第二道滤液,将第二道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第二道滤渣质量5-10倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至8.2-8.6,将其置于75-95℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第三道滤液,弃去滤渣;取锥形瓶中的上层黄色油状液体,得艾叶精油;
B. 将步骤A中所得第一道滤液、第二道滤液、第三道滤液合并后经200目滤袋过滤,得到艾叶粗提液;向艾叶粗提液中添加占艾叶粗提液质量2%的活性炭,所述活性炭的粒径为200目,在80℃水浴条件下吸附20min;在布氏漏斗中铺垫质量为艾叶粗提液质量8%的硅藻土,所述硅藻土的粒径为150目,将艾叶粗提液通过布氏漏斗抽滤后得到艾叶提取液;
C. 将步骤B所得艾叶提取液于70℃温度下减压蒸馏浓缩得到艾叶提取物浸膏,称取适量艾叶提取物浸膏进入到乙醇/硫酸铵双水相体系中,得预混液;所述乙醇/硫酸铵双水相体系中无水乙醇的质量浓度为27%,硫酸铵的质量浓度为17%-22%,其余为去离子水;艾叶提取物浸膏占乙醇/硫酸铵双水相体系总质量的5%;用化学纯浓盐酸调节所述预混液的pH至3-4,搅拌10min后,转移至分液漏斗中,充分震荡10次,静置得到澄清分层的溶液,其中上层为乙醇相,下层为盐相;收集上层乙醇相于70-80℃条件下减压浓缩至浸膏状,得艾叶黄酮类物质;
D. 将步骤A所得艾叶精油与步骤C所得艾叶黄酮类物质进行混合,得高效祛斑活性物。
本发明所得高效祛斑活性物作为活性物添加到美白霜、祛斑霜产品中,添加量为质量比0.05-0.2%。
在现有技术中,艾叶单独使用常用于熏蒸、足浴,而外用敷贴常与其他中药成分配伍,单独使用于祛斑的应用较少,本发明针对艾叶现有提取工艺提取的有效成分单一,艾叶油与黄酮类物质不能同时提取的问题,通过一套挥发油和黄酮类物质联合提取的工艺,制备得到一种具有高效祛除黄褐斑功效的活性物。本发明采用艾叶为原料制备的高效祛斑活性物具有较好的体外试验功效,单独使用亦具有较好的祛斑效果。另外,本法提升了艾叶植物的综合利用率。
本发明所述工艺具有以下优点:采用半仿生提取法实现对艾叶中功效成分的高效提取,同时采用双水相萃取法进行分离提纯,最终得到艾叶高效祛斑活性物。
1. 采用半仿生提取法提取艾叶精油以及同时对艾叶黄酮类物质进行高效提取。依据仿生学原理,通过控制提取过程中pH值的变化,模拟中药在人体胃、小肠、大肠体液pH下的消化吸收过程,从而高效提取中草药中的活性成分。半仿生提取法能够有效的破坏植物细胞,使细胞组织膨胀,从而使得溶液溶解能力及渗透能力增强,有利于艾叶挥发油及艾叶黄酮类物质的高效提取,并且此工艺能够实现艾叶精油及艾叶黄酮类物质的同时提取。
2. 采用一种新型液-液萃取纯化技术,双水相纯化法。利用黄酮类物质在乙醇相与盐相中溶解度的不同来对艾叶中黄酮类物质进行高效分离,此法能实现黄酮类物质的高效分离富集,相较于大孔吸附树脂纯化具有操作简便,降低有机溶剂用量的优势,利于其在护肤中的应用。本发明同时提取艾叶中具有抗炎和抗自由基活性的艾叶精油及黄酮类物质,提升了艾叶植物的综合利用率。
为验证本发明所述方法提取所得高效祛斑活性物的黄褐斑改善功效,以实施例1所得高效祛斑活性物与中药活性成分常用提取方法所的艾叶常规提取液进行对比,进行了以下体外试验。艾叶常规提取液制备步骤:70%乙醇回流提取,提取物经活性炭吸附过滤,并在70℃减压蒸馏得到浸膏,浸膏与蒸馏水丙二醇混合物以1:20配比得到艾叶常规提取物。
一、美白活性体外测试
1、酪氨酸酶抑制试验
按照表1用移液器取前3种物质加入到离心管中,混匀,放入37℃水浴中温浴10min,再加入200U/ml酪氨酸酶溶液,放入37℃水浴中温浴40min,90℃终止反应,取200ul加入到96孔板中,酶标仪475nm波长下测定吸光度。
表1 酪氨酸酶抑制试验试剂添加表
Figure DEST_PATH_IMAGE002
酪氨酸酶抑制率%=(空白对照吸光度-提取液吸光度)/空白对照吸光度×100%;
实验结果如表2所示,与70%乙醇回流提取法比较,同等浓度本发明所得高效祛斑活性物对酪氨酸酶的抑制活性更高,并且高效祛斑活性物的美白活性呈剂量依赖性。所示**为与熊果苷阳性对照组相比差异极显著(p<0.01),*为与熊果苷阳性对照相比差异显著(p<0.05)。
表2高效祛斑活性物酪氨酸酶抑制试验
Figure DEST_PATH_IMAGE004
注:表中*表示同列数据差异显著p<0.05,表中**表示同列数据差异极显著p<0.01。
2、B-16黑色素细胞抑制试验
B16细胞来源:桑戈生物;货号:ATCC CRL-6475;
代数:第16代;计数:细胞数量为2×104个/孔,24孔板;
将高效祛斑活性物浓度稀释为1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL。以空白对照中黑色素含量计为100%,使用IBMX(作为阳性刺激,终浓度为22.2µg/ml)刺激细胞生成黑色素得到细胞黑色素含量为261.71%的细胞。分别在细胞液中点样加入不同浓度高效祛斑活性物。设立熊果苷(0.3mg/ml)作为对照组,孵育样品48h后测定细胞黑色素含量变化情况。
黑色素抑制率/%=(IBMX黑色素含量-孵育后黑色素含量)/ IBMX黑色素含量×100%。
表3高效祛斑活性物B16细胞黑色素活性试验
Figure DEST_PATH_IMAGE006
注:表中*表示同列数据差异显著p<0.05,表中**表示同列数据差异极显著p<0.01。.
实验结果如表3所示,与70%乙醇回流提取法比较,同等浓度高效祛斑活性物对B16细胞黑色素抑制活性显著增高。表3所示**为与熊果苷阳性对照组相比差异极显著(p<0.01),*为与熊果苷阳性对照相比差异显著(p<0.05)。
3、抗炎活性体外测试试验,即RAW264.7细胞NO含量抑制试验:
将大鼠巨噬细胞RAW264.7经1μg/mL的LPS作用后所生成的NO含量记为100%(阳性对照),同时设置未加入LPS组为阴性对照,再将艾叶提取液经梯度稀释后点样,记录NO释放量的变化情况。NO的释放量降低代表炎性细胞的活性减弱,抗炎效果较好。
表4高效祛斑活性物NO释放量变化情况
Figure DEST_PATH_IMAGE008
注:表中*表示同列数据差异显著p<0.05,表中**表示同列数据差异极显著p<0.01
由表4可知,本发明所得高效祛斑活性物具有非常好的抗炎活性,并呈剂量依赖趋势。表4中**为与LPS阳性对照组相比差异极显著(p<0.01),*为与LPS阳性对照相比差异显著(p<0.05)。
4、细胞活性试验(CCK-8试剂盒)
将高效祛斑活性物经梯度稀释后点样,记录各浓度艾叶提取物下的细胞活性情况。
表5 高效祛斑活性物细胞毒性实验结果
Figure DEST_PATH_IMAGE010
注:表中*表示同列数据差异显著p<0.05,表中**表示同列数据差异极显著p<0.01
如表5所示,设定细胞存活率高于80%时均认定为细胞毒性弱,可使用。经CCK-8细胞存活率试验证实,高效祛斑活性物经AB-8树脂纯化后在25μg/mL以上时均有较强的细胞毒性。因此在可以选择较低的高效祛斑活性物浓度。表5中**为与空白阳性对照组相比差异极显著(p<0.01),*为与空白阳性对照相比差异显著(p<0.05)。
5、人体功效评价试验
受试者:共54人,均为黄褐斑女性患者,年龄分布为30±3岁。(其中排除:1. 对壬二酸过敏者;2. 怀孕或正处于哺乳期妇女;3. 正在接受其他方法治疗的患者)受试人员分为6组,每组9人,分别为空白组、阳性对照组以及高效祛斑活性物组1、2、3、4。
样品准备:配制含有0.5%浓度的壬二酸的稳定的水包油型的样品A,及分别含有高效祛斑活性物0.5%、1%、1.5%、2%的稳定水包油型样品B、C、D、E,所有样品基质成分完全相同。试验过程中,样品涂抹者及数据采集者均不知样品的浓度,待试验结束后揭晓各个样品的浓度,进行统计分析。
功效评价方法:早晚均使用于黄褐斑部位,连续使用8周,空白对照组不使用任何产品。
祛斑功效评估方法:分别采用分光光度计(MX18 型)和色度计(CD-2600)测定使用产品前、2周、4周、6周、8周时测量皮肤的黑素值和色度 L* 值,通过对比自身涂抹样品前后黑素值以及L* 值的变化来评价样品的祛斑功效。每次测量时需保证室内光线、温度(20±2)℃、湿度(40±5)%均一致,受试者当天不使用任何产品,休息15min后进行试验,于同一部位测量3次。取其平均值。
色度值变化量:△L* 值 = 第n天L*值 - 基础L*值;
黑素值变化量:△黑素值 = 第n天黑素值 - 基础黑素值。
表6 高效祛斑活性物人体测试△L* 值变化量
Figure DEST_PATH_IMAGE012
如表6所示,与空白组相比,添加了高效祛斑活性物的样品B、C、D、E在前4周皮肤色度L*改善不明显(p>0.05),但连续使用30天后皮肤色度显著改善(p<0.05),同时,改善程度与阳性对照壬二酸相比略低。
表7高效祛斑活性物人体测试黑素值变化量
Figure DEST_PATH_IMAGE014
如表7所示,使用高效祛斑活性物的样品A、B、C、D黑素值相较于初始水平有明显改善(p<0.05),并且改善能力呈剂量依赖型。通过黑素值以及L* 值的变化情况证实了高效祛斑活性物具有较好的改善黄褐斑的活性。
综上所述,本发明制备的高效祛斑活性物具有显著的酪氨酸酶抑制作用,且对B16细胞黑色素抑制活性显著,具有非常好的美白作用,同时高效祛斑活性物也具有较好的大鼠巨噬细胞RAW264.7的NO抑制活性。结合人体实验结果的证实,可以直接作为活性物添加到祛斑、美白类化妆品中,起到祛除黄褐斑的功效。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明,但本发明并不局限于以下实施例。
实施例1:一种高效祛斑活性物的制备方法,其特征在于:采用以下步骤:
A. 采摘新鲜艾叶,平铺于烘筛上置于烘干机中干燥6h,干燥温度为60℃,干燥至艾叶含水量低于2%,得干燥艾叶;称取适量干燥艾叶,加入到圆底烧瓶中,然后加入去离子水,去离子水的质量为干燥艾叶质量的5倍;使用化学纯浓盐酸调节烧瓶内液体的pH至2.0,将圆底烧瓶置于75℃水浴中加热提取,冷凝管出液口采用装有去离子水的锥形瓶接收艾叶精油;当加热至不再有黄色油状液体生成后,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第一道滤液,将第一道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第一道滤渣质量5倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至6.5,将其置于75℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第二道滤液,将第二道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第二道滤渣质量5倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至8.2,将其置于75℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取。将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第三道滤液,弃去滤渣;取锥形瓶中的上层黄色油状液体,得艾叶精油;
B. 将步骤A中所得第一道滤液、第二道滤液、第三道滤液合并后经200目滤袋过滤,得到艾叶粗提液;向艾叶粗提液中添加占艾叶粗提液质量2%的活性炭,所述活性炭的粒径为200目,在80℃水浴条件下吸附20min;在布氏漏斗中铺垫质量为艾叶粗提液质量8%的硅藻土,所述硅藻土的粒径为150目,将艾叶粗提液通过布氏漏斗抽滤后得到艾叶提取液;
C. 将步骤B所得艾叶提取液于70℃温度下减压蒸馏浓缩得到艾叶提取物浸膏,称取适量艾叶提取物浸膏进入到乙醇/硫酸铵双水相体系中,得预混液;所述乙醇/硫酸铵双水相体系中无水乙醇的质量浓度为27%,硫酸铵的质量浓度为17%,其余为去离子水;艾叶提取物浸膏占乙醇/硫酸铵双水相体系总质量的5%;用化学纯浓盐酸调节所述预混液的pH至3,搅拌10min后,转移至分液漏斗中,充分震荡10次,静置得到澄清分层的溶液,其中上层为乙醇相,下层为盐相;收集上层乙醇相于70℃条件下减压浓缩至浸膏状,得艾叶黄酮类物质;
D. 将步骤A所得艾叶精油与步骤C所得艾叶黄酮类物质进行混合,得高效祛斑活性物。
实施例2:
一种高效祛斑活性物的制备方法,其特征在于:采用以下步骤:
A. 采摘新鲜艾叶,平铺于烘筛上置于烘干机中干燥7h,干燥温度为60℃,干燥至艾叶含水量低于2%,得干燥艾叶;称取适量干燥艾叶,加入到圆底烧瓶中,然后加入去离子水,去离子水的质量为干燥艾叶质量的8倍;使用化学纯浓盐酸调节烧瓶内液体的pH至2.5,将圆底烧瓶置于85℃水浴中加热提取,冷凝管出液口采用装有去离子水的锥形瓶接收艾叶精油;当加热至不再有黄色油状液体生成后,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第一道滤液,将第一道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第一道滤渣质量8倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至6.8,将其置于85℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第二道滤液,将第二道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第二道滤渣质量8倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至8.4,将其置于85℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取。将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第三道滤液,弃去滤渣;取锥形瓶中的上层黄色油状液体,得艾叶精油;
B. 将步骤A中所得第一道滤液、第二道滤液、第三道滤液合并后经200目滤袋过滤,得到艾叶粗提液;向艾叶粗提液中添加占艾叶粗提液质量2%的活性炭,所述活性炭的粒径为200目,在80℃水浴条件下吸附20min;在布氏漏斗中铺垫质量为艾叶粗提液质量8%的硅藻土,所述硅藻土的粒径为150目,将艾叶粗提液通过布氏漏斗抽滤后得到艾叶提取液;
C. 将步骤B所得艾叶提取液于70℃温度下减压蒸馏浓缩得到艾叶提取物浸膏,称取适量艾叶提取物浸膏进入到乙醇/硫酸铵双水相体系中,得预混液;所述乙醇/硫酸铵双水相体系中无水乙醇的质量浓度为27%,硫酸铵的质量浓度为20%,其余为去离子水;艾叶提取物浸膏占乙醇/硫酸铵双水相体系总质量的5%;用化学纯浓盐酸调节所述预混液的pH至3.5,搅拌10min后,转移至分液漏斗中,充分震荡10次,静置得到澄清分层的溶液,其中上层为乙醇相,下层为盐相;收集上层乙醇相于75℃条件下减压浓缩至浸膏状,得艾叶黄酮类物质;
D. 将步骤A所得艾叶精油与步骤C所得艾叶黄酮类物质进行混合,得高效祛斑活性物。
实施例3:
一种高效祛斑活性物的制备方法,其特征在于:采用以下步骤:
A. 采摘新鲜艾叶,平铺于烘筛上置于烘干机中干燥8h,干燥温度为60℃,干燥至艾叶含水量低于2%,得干燥艾叶;称取适量干燥艾叶,加入到圆底烧瓶中,然后加入去离子水,去离子水的质量为干燥艾叶质量的10倍;使用化学纯浓盐酸调节烧瓶内液体的pH至3.0,将圆底烧瓶置于95℃水浴中加热提取,冷凝管出液口采用装有去离子水的锥形瓶接收艾叶精油;当加热至不再有黄色油状液体生成后,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第一道滤液,将第一道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第一道滤渣质量10倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至7.0,将其置于95℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第二道滤液,将第二道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第二道滤渣质量10倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至8.6,将其置于95℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取。将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第三道滤液,弃去滤渣;取锥形瓶中的上层黄色油状液体,得艾叶精油;
B. 将步骤A中所得第一道滤液、第二道滤液、第三道滤液合并后经200目滤袋过滤,得到艾叶粗提液;向艾叶粗提液中添加占艾叶粗提液质量2%的活性炭,所述活性炭的粒径为200目,在80℃水浴条件下吸附20min;在布氏漏斗中铺垫质量为艾叶粗提液质量8%的硅藻土,所述硅藻土的粒径为150目,将艾叶粗提液通过布氏漏斗抽滤后得到艾叶提取液;
C. 将步骤B所得艾叶提取液于70℃温度下减压蒸馏浓缩得到艾叶提取物浸膏,称取适量艾叶提取物浸膏进入到乙醇/硫酸铵双水相体系中,得预混液;所述乙醇/硫酸铵双水相体系中无水乙醇的质量浓度为27%,硫酸铵的质量浓度为22%,其余为去离子水;艾叶提取物浸膏占乙醇/硫酸铵双水相体系总质量的5%;用化学纯浓盐酸调节所述预混液的pH至4,搅拌10min后,转移至分液漏斗中,充分震荡10次,静置得到澄清分层的溶液,其中上层为乙醇相,下层为盐相;收集上层乙醇相于80℃条件下减压浓缩至浸膏状,得艾叶黄酮类物质;
D. 将步骤A所得艾叶精油与步骤C所得艾叶黄酮类物质进行混合,得高效祛斑活性物。

Claims (2)

1.一种祛斑活性物的制备方法,其特征在于采用以下步骤:
A. 采摘新鲜艾叶,平铺于烘筛上置于烘干机中干燥6-8h,干燥温度为60℃,干燥至艾叶含水量低于2%,得干燥艾叶;称取适量干燥艾叶,加入到圆底烧瓶中,然后加入去离子水,去离子水的质量为干燥艾叶质量的5-10倍;使用化学纯浓盐酸调节烧瓶内液体的pH至2.0-3.0,将圆底烧瓶置于75-95℃水浴中加热提取,冷凝管出液口采用装有去离子水的锥形瓶接收艾叶精油;当加热至不再有黄色油状液体生成后,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第一道滤液,将第一道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第一道滤渣质量5-10倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至6.5-7.0,将其置于75-95℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第二道滤液,将第二道滤渣重新装入圆底烧瓶,并加入第二道滤渣质量5-10倍的去离子水,然后添加适宜浓度的氢氧化钠溶液调节瓶内液体的pH至8.2-8.6,将其置于75-95℃水浴温度下加热提取,至不再有黄色油状液体生成,停止加热提取;将圆底烧瓶中的混合物过滤,收集第三道滤液,弃去滤渣;取锥形瓶中的上层黄色油状液体,得艾叶精油;
B. 将步骤A中所得第一道滤液、第二道滤液、第三道滤液合并后经200目滤袋过滤,得到艾叶粗提液;向艾叶粗提液中添加占艾叶粗提液质量2%的活性炭,所述活性炭的粒径为200目,在80℃水浴条件下吸附20min;在布氏漏斗中铺垫质量为艾叶粗提液质量8%的硅藻土,所述硅藻土的粒径为150目,将艾叶粗提液通过布氏漏斗抽滤后得到艾叶提取液;
C. 将步骤B所得艾叶提取液于70℃温度下减压蒸馏浓缩得到艾叶提取物浸膏,称取适量艾叶提取物浸膏进入到乙醇/硫酸铵双水相体系中,得预混液;所述乙醇/硫酸铵双水相体系中无水乙醇的质量浓度为27%,硫酸铵的质量浓度为17%-22%,其余为去离子水;艾叶提取物浸膏占乙醇/硫酸铵双水相体系总质量的5%;用化学纯浓盐酸调节所述预混液的pH至3-4,搅拌10min后,转移至分液漏斗中,充分震荡10次,静置得到澄清分层的溶液,其中上层为乙醇相,下层为盐相;收集上层乙醇相于70-80℃条件下减压浓缩至浸膏状,得艾叶黄酮类物质;
D. 将步骤A所得艾叶精油与步骤C所得艾叶黄酮类物质进行混合,得祛斑活性物。
2.权利要求1所述祛斑活性物的应用,其特征在于:所述祛斑活性物作为制备美白霜或祛斑霜产品中活性物的应用,添加量为质量比0.05-0.2%。
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