KR20110128384A

KR20110128384A - 미담 경옥고를 이용한 피부 주름, 보습, 미백을 위한 조성물질 및 제조법

Info

Publication number: KR20110128384A
Application number: KR1020100047793A
Authority: KR
Inventors: 오성덕; 이경준
Original assignee: 이경준
Priority date: 2010-05-23
Filing date: 2010-05-23
Publication date: 2011-11-30

Abstract

본 발명은 홍삼, 백복령, 생지황, 꿀, 백문동, 천문동 및 지골피를 포함하는 복합 생약추출물을 유효성분으로 함유하는 미담경옥고(MiDamKyungokko, MDK)를 유효 성분으로 함유하는 피부 주름, 보습, 미백 개선 및 치료용 한방 미용 생약 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 미담경옥고(MiDamKyungokko, MDK)는 피부세포의 항산화, 세포 생리 활성을 촉진하여 피부 노화 방지의 효능, 피부 주름, 보습 및 미백에 대한 개선을 위한 조성물 개발을 목적으로 발명되었다.

도 1

Description

미담 경옥고를 이용한 피부 주름, 보습, 미백을 위한 조성물질 및 제조법{The composition material and the manufacturing process for skin-wrinkle, moisture and skin-lightening uses by Midam-Kyungokko}

본 발명은 미담 경옥고를 이용하여 이루어진 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 미담경옥고를 이용하여 이루어진 화장료용 조성물, 비누용 조성물 및 이들의 제조 방법에 관한 것이다.

경옥고란 정혈(精血)을 돕고 생명을 연장시키는 익수 보약의 일종으로서, 동의보감에 의하면 인체내 모든 기관의 기능을 유지 및 활성화시키는 데에 대단한 효과가 있다고 전해진다. 또한, 경옥고는 정혈제 및 정력제로서의 약효뿐만 아니라, 구체적으로는 오장이 허약하여 피로를 자주 느끼는 환자, 위장이 약하여 소화불량이 심한 환자, 장염 장경련이 자주 일어나 복통이 심한 환자, 날씨가 조금만 음냉하면 감기에 잘 걸리고 기관지 천식으로 숨이 차고 해수 기침이 심한 환자에게 효과적이며 특히, 심신이 허약한 노약자들이 장복할 경우 흰머리가 검어지고 치아가 새로 돋아나며 생명을 연장시키는 효과가 있는 것으로 기재되어 있다.

한편, 경옥고의 현대적 연구 결과에 의하면, 경옥고는 항산화 효과를 가짐으로써, 세포 생리 활성에 기여한다. 뿐만 아니라, 경옥고는 피부 노화 현상을 완화하는 데에도 유효하여, 피부 주름을 개선하고 피부 미백 효과를 갖는 것으로 알려져 있다.

그러나, 이러한 경옥고는 상기와 같은 장점에도 불구하고, 그 제조에 장시간이 소요되고, 제조 방법이 매우 복잡하기 때문에, 현대 산업에 적용하는 데에 한계가 있다. 경옥고의 제조 방법을 보다 단순화하기 위한 방안들이 부단히 제공되고 있지만, 전통적인 제조 방법에 따른 경옥고만큼의 효능을 담보하지 못한다. 나아가, 전통적인 제조 방법에 의한 경옥고의 경우에도 항산화 효능, 피부 주름 개선 효과, 피부 미백 효과 등이 충분하지 못하여, 아직 현대적 약재, 화장품, 또는 비누 등의 재료로 사용되기에는 부족한 점이 있다.

최근 우리나라에서는 이러한 피부의 문제점을 극복하고자, 한의학적 접근법이 필요성이 대두 되어 지고 있다.

인삼(Panax ginseng C.A.Meyer) 뿌리에는 각종 생리활성을 갖는 인삼 사포닌 (ginsenoside Ra ·Rb1 ·Rb2 ·Rb3 ·Rc ·Rd ·Re ·Ro) 등을 포함한다. 또, 많은 종류의 amino acid, 당류, vatamin, flavonoid, 휘발성 정유, 무기질 등을 함유한다. 인삼은 원기 부족으로 인한 신체 허약, 면역 증강효과와 기억력 감퇴, 권태, 피로, 땀이 많은 증상들과 정신을 편안케 하고 정신력 증강, 사고력 증강, 발기부전 등에 탁월한 효과가 있어, 건위 소화약, 정장 지사약, 진통 진경약 등으로 사용된다. 인삼의 약리작용으로는 혈당강하작용, 항암효과, 혈청단백 함성촉진, 항체생산촉진작용, 중추흥분작용, 항피로작용 등이 있다. 또한, 심인성 쇼크에 유효하고, 중기나 말기 위암 수술환자에게 현저한 항암효과를 나타내며, 발기부전, 조루, 사정부족, 성기능 감퇴에 유효하고, 당뇨병, 고혈압, 관상동맥경화, 백혈구감소증, 간기능 회복 등에 효과가 있다(도해 향약 대사전, 정보석, 신민교 편저, 도서출판 영림사, p.440-441, 1998). 본 명세서에서 언급되는 인삼은 홍삼을 포함한다.

복령(Poria cocos Wolf)은 균핵에는 β-pachyman이 함유되어 건조중량의 약 93%를 차지한다. 또 triterpeniod 화합물의 pachymic acid, tumulosic acid, 3 β-hydroxylanosta-7, 9(11), 24-triene-2-산을 함유한다. 이 밖에도 식물고무질, chitin질, 단백질, 지방, sterol, lecithin, 포도당, adenine, histidine, choline, β-pachyman 분해효소, lipase, proteinase 등이 함유되어 있다. 효능으로는 이뇨작용, 항균작용, 소화기계에 작용하여 궤양예방효과와 위산을 감소시킨다. 또한 혈당을 저하시키는 작용도 있다(도해 향약 대사전, 정보석, 신민교 편저, 도서출판 영림사, p.41-42, 1998).

생지황(Rehmannia glutinosa)은 현삼과의 여러해살이풀. 높이는 30cm 정도이며, 잎은 모여나고 긴 타원형이다. 6~7월에 연자주색 꽃이 총상(總狀) 꽃차례로 피고 열매는 타원형의 삭과를 맺는다. 뿌리는 약용하고 중국이 원산지로 우리나라 각지에 분포한다. 지황 근경의 주요성분은 β-sitosterol과 mannitol이며 또 소량의 stigmasterol과 미량의 campesterol을 함유하며 rehmanin, alkaloid, 지방산, capalpol(catalpinoside, des-p-hydroxybenzolcatalpside), glucose와 0.0053%의 vitamin A 군 물질을 함유한다. 뿌리는 또 stachyose, 4.2%의 arginine과 3.0%의 γ-butyl amino acids를 함유한다. 맛은 달고 쓰며 성질은 차다. 효능은 청열, 양혈, 생진, 지갈의 효능이 있다. 열에 의한 번갈, 의식이 혼미하여 뚜렷하지 않을 때, 반지, 토혈, 비출혈, 해수사 출혈, 소갈, 변비를 치료한다(도해 향약 대사전, 정보석, 신민교 편저, 도서출판 영림사, p.907-908, 1998).

꿀은 밀봉과에 속한 재래벌꿀 및 양봉의 봉과 중에서 점차적으로 형성된 당류물질을 정제한 꿀이다. 신선한 것은 반투명의 걸쭉한 액체로서 약간 오래 저장하면 변색되어 불투명하게 되고 냉암처에 저장하면 백색의 과립상 결정이 된다. 맛은 달고 무난하며 무독하다. 폐를 부드럽게 하고 해수를 다스리며, 장을 운동시켜서 변비에 효능이 있다. 또한 해독작용이 있어 생초오나 생오두를 복용하여 중독 되었을때 물에 타서 먹으면 좋다(임상본초학, 신민교 편저, 도서출판 영림사, p.183-184, 2000).

백문동(Liriope platyphyllla)은 소엽맥문동 및 등속 근연식물의 괴근이다. 상품의 대부분은 재배품이다. 대개 재배 후 2, 3년째의 5월 상순에 캐내고 야생은 4월 상순부터 캔다. 괴근만 잘라내어 깨끗이 씻어 3~4일간 햇볕에 말린 다음 통풍이 잘 되는 곳에 쌓아서 수분을 증발시킨다. 이때 약 3일마다 한번씩 널어서 건조한다. 이와 같이 2~3회 반복하여 일건한 다음 잔뿌리와 잡질을 제거한다. 맛은 감미고하고 성질은 차다. 폐, 위, 심경에 들어간다. 성분으로는 맥문동의 괴근에는 여러 종류의 steroid계 saponid이 함유하고 그 aglycone은 ruscogenin이다. 또 β- sitosterol, stigmasterol, β- sitosterol-β-d-glucoside를 함유하고 있다. 과실에는 ophioside를 함유하며 이것은 kaempferol-3-glucogalactoside이다. 약리작용으로는 혈당을 낮추었으며, 백색포도구균, 대장균에 어느 정도의 항균작용이 있다(도해 향약 대사전, 정보석, 신민교 편저, 도서출판 영림사, p.177-178, 1998).

천문동은 천문동(Asparagus cochinchinensis)의 괴근으로 가을과 겨울에 캐며 겨울에 캔 것이 양질이다. 깨끗이 씻은 후 수염뿌리를 제거하고 크기에 따라 분류하여 외피가 벗겨지기 쉽게 끓는 물로 삶거나 증숙하여 건져내 청수에 담가 뜨거울때 외피를 벗기고 깨끗이 씻어 약한 불에 홍건하다. 또는 유황으로 훈증한 후 재차 홍건한다. 맛은 감고하고 성질은 차며 무독하다. 폐, 신경에 들어간다. 성분으론 뿌리에는 asparagine, 점액질, β- sitosterol 및 5-methoxymethyl-furfural을 함유하고 함유된 고미의 성분은 steroidsaponin으로 smilagenin, rhamnose, xylose, 포도당으로 이루어져 있다. 효능으로는 항균작용, 모기, 파리 유충의 살충작용, 항종양작용 등이 있다(도해 향약 대사전, 정보석, 신민교 편저, 도서출판 영림사, p. 164-165, 1998).

지골피(Lycium chinense) 구기자나무의 근피이다. 입춘이나 입추 후 채집하여 진흙을 털어내고 깨끗이 씻어 근피를 벗겨 햇볕에 말린다. 맛는 달고 성질은 차다. 폐, 간, 신경에 들어간다. 근피는 계피산 및 다량이 phenol계 물질, betaine이 포함되어 있다. Betaine은 구기자나무의 잎과 과실에 함유되어 있지만 근피 속에는 존재하지 않는다는 보고도 있다. 뿌리에는 그 밖에 비타민 B₁ 의 활성을 억제하는 물질이 포함되어 있지만, 그 억제작용은 cystein 및 비타민 C에 의해서 해제되다. 지골피에는 이외에 β- sitosterol, linoleic acid, linolenic acid, melissic acid 등도 함유되어 있다. 약리작용으로는 심혈관계에 작용하여 지골피의 팅크제 및 탕제를 마취한 개, 고양이, 토끼에게 정맥주사를 놓으면 뚜렷한 강압작용이 나타나서 심박수가 감소되어 호흡이 빨라진다. 혈당저하작용과 해열작용도 있다(도해 향약 대사전, 정보석, 신민교 편저, 도서출판 영림사, p. 827-828, 1998).

경옥고는 상기한 바와 같은 인삼, 지황, 복령, 및 복밀의 배합물을 중탕시켜 농축한 농축물 또는 그 추출물이다. 상기한 인삼, 지황, 복령, 및 복밀의 배합으로 경옥고는 다양한 약리적 활성을 갖는다. 기존의 경옥고에 백문동, 천문동, 지골피를 첨가하여 이에 대한 효과를 입증한 예는 아직 보고되지 않았다. 또한. 지금까지 상기한 문헌들 및 연구 보고들에서, 상기 생약복합제 추출물의 피부 주름, 보습, 미백에 대한 개선효과에 대해서는 교시되거나 개시된 바 없다. 따라서 본 발명자들은 미담경옥고에서 피부 주름에 대한 개선효과 및 피부 보습 개선, 피부 미백의 개선을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 항산화, 세포 생리 활성, 및/또는 피부 노화 방지의 효능이 개선된 미담 경옥고를 이용하여 이루어진 조성물을 제공하고자 하는 것이다. 본 발명이 이루고자 하는 다른 기술적 과제는 상기한 바와 같은 조성물을 제조하는 방법을 제공하고자 하는 것이다.

본 발명은 홍삼, 백복령, 생지황, 꿀, 백문동, 천문동 및 지골피를 포함하는 복합 생약추출물을 유효성분으로 함유하는 피부의 주름, 보습, 미백 개선 및 미용 생약 조성물을 제공한다 (이하, 미담경옥고(MiDamKyungokko, MDK)이라 명명함).

본 발명의 미담경옥고(MDK)은 기존 경옥고에는 성분으로 포함되어 있지 않는 홍삼, 백문동, 천문동 및 지골피를 적정 비율로 최적화하여 항산화 및 세포 생리 활성 증가되어 피부 주름이 개선, 보습 증가 및 피부 미백의 효능을 가질 뿐만 아니라, 안전성 측면에서도 매우 우수한 효과를 갖는다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 미담경옥고(MDT) 제조하는 방법의 순서도이다.
도2는 미담경옥고를 포함하는 화장료용 조성물을 사용 전 피검자의 얼굴 의 피부(2a)와 두 달간 사용한 전후의 피검자의 얼굴 피부(2b)의 미백 효과를 검증한 사진이다.
도 3은 미담경옥고를 포함하는 화장료용 조성물을 사용 전 피검자의 피부(3a)와 한 달간 사용한 전후의 피검자의 피부(3b)의 주름 개선과 보습 효과를 검증한 사진이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 홍삼, 백복령, 생지황, 백밀, 맥문동, 천문동 및 지골피를 포함하는 복합 생약추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선, 보습, 미백의 개선 및 미용 생약 조성물을 제공한다.

본 발명의 각 생약 조성물들의 조성비는 이에 한정되는 것은 아니나, 바람직하게는, 홍삼, 백복령, 생지황, 백밀, 맥문동, 천문동 및 지골피의 개개 중량 조성비가 약 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 0.1~1 : 0.1~1 : 0.1~1, 더욱 바람직하게는 약 1~5 : 1~5 :1~10 : 1~10 : 0.1~0.5 : 0.1~0.5 : 0.1~0.5, 가장 바람직하게는 1~2 : 1~2 : 1~10 : 1~6 : 0.1~0.3 : 0.1~0.3 : 0.1~0.3 이다.

본 발명의 미담경옥고를 함유하는 피부 주름 개선, 보습 및 미백 개선 및 예방을 위한 생약 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량 % 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 미담경옥고를 제조 과정을 살펴보면, 홍삼, 백복령, 생지황, 맥문동, 천문동 및 지골피를 배합한다. 상기 배합비는 홍삼분말 3Kg, 백복령분말 6kg 생지황즙 18kg, 백밀 10kg, 맥문동 600g, 천문동 600g 및 지골피 600g일 수 있다. 그러나, 배합비가 상기 열거된 예에 제한되는 것은 아니며, 필요에 따라 가감될 수 있음은 물론이다.

이어서, 상기 배합물을 1차 중탕한다. 상기 1차 중탕은 밀폐된 옹기에 고루 섞어진 상기 배합물을 넣고, 약 3 일 동안 95℃의 온도에서 중탕 처리하는 것으로 진행될 수 있다. 이어서, 상기 배합물을 냉각한다. 냉각 시간은 예컨대 약 1일 정도 일 수 있다.

다시, 냉각된 상기 배합물을 2차 중탕한다. 2차 중탕은 24시간 동안 섭씨 90도의 온도로 중탕하여 남은 물기를 제거할 수 있다. 그 결과 미담경옥고가 제조된다.

생약	학명	양(g)
인삼	Panax ginseng C.A.Meyer	3000
백복령	Poria cocos Wolf	6000
생지황	Rehmannia glutino	18000
백밀	Honey	10000
맥문동	Liriope platyphyllla	600
천문동	Asparagus cochinchinensis	600
지골피	Lycium chinense	600

또한, 본 발명의 실시 예들에 따른 미담경옥고를 포함하는 조성물은 상기 발효의 영향으로 pH가 7.0보다 작다. 상기 조성물의 pH는 미담경옥고의 숙성 정도, 함량 등에 따라 달라질 수 있지만, 예를 들어 2.0 내지 6.5의 범위를 가질 수 있다. 본 발명의 몇몇 실시 예들에 따른 조성물은 4.0 내지 6.0의 pH를 가질 수 있다.

이와 같은 미담경옥고 생성물은 본 발명의 실시 예들에 따른 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 내지 30% 중량의 함량을 가질 수 있다. 바람직하게는 미담경옥고 생성물은 상기 조성물의 총 중량에 대하여 0.001 내지 20% 중량의 함량을 가질 수 있다.

더욱 구체적으로 설명하면, 본 발명의 몇몇 실시 예에 따른 조성물은 미담경옥고의 우수한 항산화, 세포활성, 피부 주름 개선, 피부 미백, 안정성 등의 효과를 이용하여 화장료용 조성물로 적용될 수 있다. 이 경우, 상기 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 비누제형 및 분무제로 이루어진 제형군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.

상기 조성물이 화장료용 조성물로서 적용될 경우, 상기 조성물은 상술한 미담경옥고 이외에, 화장료에 수용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 화장료에 수용가능한 담체란 화장품 제재에 포함될 수 있는 것으로서, 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 정도의 독성, 안정성, 및 자극성 요건을 갖는 것을 포함한다. 화장료에 수용 가능한 담체는 예컨대, 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등일 수 있으며, 이들 중에서 선택된 하나 또는 2 이상의 화장료에 수용 가능한 담체가 상기 조성물에 포함될 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

상기 조성물의 총 중량에 대한 상기한 화장료에 수용가능한 담체의 함량은 예를 들어, 1 내지 99% 중량일 수 있으며, 바람직하게는 90 내지 99% 중량일 수 있다. 그러나, 이에 제한되는 것은 아니며, 상기한 조성물의 제형이나 상기 조성물이 적용되는 부위에 따라 상기 함량이 다르게 변형될 수 있음은 물론이다.

또, 본 발명의 다른 몇몇 실시 예에 따른 조성물은 미담경옥고의 우수한 항산화, 세포 활성, 피부 주름 개선, 피부 미백, 안전성 등의 효과를 이용한 약제학적 조성물로 적용될 수 있다. 상기 조성물에 포함되어 있는 미담경옥고는 추가적으로, 아토피 피부염 개선, 피부 트러블 개선 등의 약리 효과를 더 가질 수 있다.

상기 조성물이 약제학적 조성물로서 적용될 경우 용액, 현탁액, 유화액, 로션, 및 연고로 이루어진 제형군으로부터 선택된 어느 하나의 제형을 가질 수 있다. 미담경옥고를 포함하는 약제학적 조성물은 비경구 방식으로 인체에 투여될 수 있다. 바람직하기로는 국소 투여 방식으로 피부에 직접 투여될 수 있다. 이때, 투여량은 예컨대 1일에 0.001 내지 150mg/kg일 수 있고, 1회 또는 수회로 나누어 투여될 수 있다. 그러나, 상기 투여량은 하나의 예시에 불과하며, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중, 중증도 등에 따라 변형될 수 있음은 물론이다.

이하, 본 발명을 실시예, 제형예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 제형예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 제형예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. 미담경옥고의 제조

현대 약업사에서 구입한 하기 표 1의 생약들을 상기 배합물을 1차 중탕한다. 상기 1차 중탕은 밀폐된 옹기에 고루 섞어진 상기 배합물을 넣고, 약 3 일 동안 95℃의 온도에서 중탕 처리하는 것으로 진행될 수 있다. 이어서, 상기 배합물을 냉각한다. 냉각 시간은 예컨대 약 1일 정도 일 수 있다.

실험예 1. 미담경옥고에 함유된 성분의 물리적 성상변화

상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고의 성분을 분석하기 위하여 HPLC(High Performance Liquid Chromatography) 테스트를 수행하였다. 먼저 경옥고 발효 생성물 100mg을 10ml의 80% 메탄올에 녹이고, 이를 원심 분리하여 상등액을 취하였다. 이어서, 상등액을 0.2㎛의 포어 사이즈를 갖는 멤브레인 필터에 여과하였다.상기 여과액을 육안으로 그 색상을 검사하고, pH를 조사하였다.

실험예 2. 미담경옥고의 항산화 효과의 측정

상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고의 항산화 효과를 측정하기 위하여 자유 라디칼 소거 실험(Free Radical Scavenging Activity Test)를 실시하였다. 구체적으로, 0.2mM의 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl, Sigma사) 용액이 1ml씩 포함되어 있는 3개의 튜브를 준비하였다. 하나의 튜브는 대조군으로서 정제수를 첨가하였고, 다른 2개의 튜브는 실험군으로서 각각 경옥고, 및 상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고를 각각 첨가하였다. 그 다음, 상기 3개의 튜브를 각각 실온에서 10분간 방치한 후, 상기 3개의 튜브에 대하여 525nm에서 흡광도를 측정한 다음 하기 수학식 1을 이용하여 실험군의 자유 라디컬 소거율을 계산하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

수학식 1

자유 라디칼 소거율(%) = [100-{(실험군의 흡광도-대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도}×100]

실험군	자유 라디칼 소거율(%)
경옥고가 첨가된 실험군	13.5
미담경옥고가 첨가된 실험군	52.4

실험예 3. 미담경옥고의 멜라닌 생성 억제 효과

먼저, DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media)에 10%의 우태아혈청(fetal bovine serum)이 첨가된 24-웰 플레이트(well plate) 배지를 준비하였다. 상기 배지에 쥐의 색소세포(B16 melanoma cell line)를 10⁵세포/웰(cells/well)의 농도로 접종하고, 37℃, 5% CO2 조건하에서 배양하였다. 이어서, 상기 색소세포의 부착을 확인한 뒤, 상기 배지에 실험군으로서 경옥고 및 상기 제조예 2에 의해 제조된 경옥고 발효 생성물을 각각 첨가하고, 각각 3일 동안 배양하였다. 또한, 대조군으로서, 경옥고 및 경옥고 발효 생성물이 첨가되지 않은 배지를 3일 동안 함께 배양하였다.

이어서, 상기 실험군 및 대조군으로부터 각각 배양액을 제거하고, PBS로 세척하였다. 이어서, 1N 수산화나트륨으로 상기 색소세포를 녹여 400nm에서 흡광도를 측정한 다음 하기 수학식 2에 따라 멜라닌 생성 억제율을 계산하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

수학식 2

멜라닌 생성 억제율(%) = [100-(실험군의 흡광도/대조군의 흡광도)×100]

실험군	멜라닌 생성 억제율(%)
경옥고가 첨가된 실험군	21.2
미담경옥고가 첨가된 실험군	44.3

상기 표 3으로부터 상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고가 경옥고보다 색소세포의 멜라닌 생성을 억제하는 효과가 우수함을 알 수 있다.

실험 예 4. 미담경옥고의 인간 섬유아세포 콜라겐 생합성 증가효과

먼저, DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media)에 10%의 우태아혈청(fetal bovine serum)이 첨가된 96-웰 플레이트를 준비하였다. 상기 플레이트에 인간 섬유아세포를 5,000 세포/웰(cells/well)의 농도로 접종하고, 37℃, 5% CO2 조건하에서 70% 내지 80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이어서, 상기 플레이트에 실험군으로서 경옥고 및 상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고를 각각 첨가하고, 각각 1일 동안 배양하였다. 상기 배양된 세포 배양액을 각각 채취하여 상업적으로 이용가능한 콜라겐 생합성 측정 기구(일본, Takara Shuzo Co., Ltd. Catalog #: MK101)를 이용하여 콜라겐 생성 정도를 측정하였다.

구체적으로, 1차 콜라겐 항체가 균일하게 도포된 96-웰 플레이트에 상기 채취된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항온조에서 항원-항체 반응을 실시하였다. 그 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-웰 플레이트에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 그 다음, 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시켰다. 이어서, 1M 황산을 넣어 발색을 중지시켰다. 발색이 중지된 96-웰 플레이트를 흡광계를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였고, 이를 하기 수학식 3에 대입하여 콜라겐의 생성 정도를 계산하였다. 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 하기 수학식 3에서 대조군의 흡광도는 경옥고 및 경옥고 발효 생성물이 첨가되지 않은 플레이트가 이용하여 측정되었다.

수학식 3

콜라겐 생성율(%) = (실험군의 반응 흡광도/대조군의 반응 흡광도)×100

실험군	콜라겐 생성율(%)
경옥고가 첨가된 실험군	19.5
미담경옥고가 첨가된 실험군	48.7

상기 표 4로부터 상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고가 경옥고보다 콜라겐 생성율이 훨씬 우수하여, 콜라겐 생합성 효과가 훨씬 우수함을 알 수 있다.

실험예 5. 미담경옥고의 인간 섬유아세포 증식 효과

실험군으로서, 경옥고이 첨가된 인간 섬유아세포 배양액 및 상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고가 첨가된 인간 섬유아세포 배양액을 준비하였다. 상기 준비된 실험군에 대하여 MTT 환원법 [3(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide reduction method]를 수행하고, 포르마잔 생성물(formazan product)을 이소프로필 알코올로 추출하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 이를 하기 수학식 4에 대입하여 세포 증식능을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 하기 수학식 4에서 대조군의 흡광도는 경옥고 또는 미담경옥고가 첨가되지 않은 인간 섬유아세포 배양액에 대하여 측정되었다.

수학식 4

세포 증식능(%)= (실험군의 흡광도/대조군의 흡광도)×100

실험군	세포증식능(%)
경옥고가 첨가된 실험군	9.2
미담경옥고가 첨가된 실험군	25.3

상기 표 5로부터 상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고가 경옥고보다 인간 섬유아세포 증식 능력이 훨씬 우수함을 알 수 있다.

실험예 6. 미담경옥고의 세포 독성 실험

상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고의 세포 독성 여부를 검증하기 위하여, 상기 미담경옥고에 대하여 L929세포(생쥐섬유모세포주)를 배양하고, 참고 문헌(Mossman T. Rapid colorimetric assay for cellular growth & survival: application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods, 1983, 65, 55~63)에 개시된 방법으로 MTT 시험을 수행하였다. 세포독성 표지 물질로는 소디움 라우릴 설페이트(Sodium Lauryl Sulphate, SLS)를 사용하였다. 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

시료	50%의 세포를 사멸시키는 농도[IC50(%, w/v)]
SLS	0.005
미담경옥고	12.5

상기 표 6으로부터 알 수 있는 바와 같이 상기 제조예 2에 의해 제조된 미담경옥고의 IC50의 값이 SLS보다 약 2500배 이상이었다. 따라서, 경옥고 발효 생성물의 세포 독성이 매우 낮음을 알 수 있다.

제조예 2. 미담경옥고을 포함하는 화장료용 조성물의 제조

상기 제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고를 포함하는 조성물로서 화장료용 조성물을 제조하기 위하여 하기 표 7에 기재된 바와 같은 원료를 준비하였다. 먼저, 하기 표 7의 1~7번 원료를 혼합하고, 70℃에서 용해하여 제1 파트를 제조하였다. 또한, 하기 표 7의 8~14번 원료를 혼합하고, 70℃에서 용해하여 제2 파트를 제조하

였다. 상기 제조된 제2 파트를 상기 제1 파트에 첨가하고, 호모 믹서(일본, Tokushu Kika사)를 이용하여 교반하여 1차 유화한 다음, 하기 표 7의 15번 원료를 첨가하여 점증하였다. 이어서, 상기 점증된 조성물로부터 기포를 제거한 후, 실온으로 냉각시켜 화장수 제형의 화장료용 조성물을 제조하였다.

원료 번호	성분	첨가량(g)
1	정제수	100
2	글리세린	8
3	부틸렌글리콜	4
4	히아루론산 추출물	5
5	베타글루칸	7
6	카보머	0.1
7	제조예 1에 의해 제조된 미담경옥고	3
8	카프릴릭 가프릭 트리글리세라이드	8
9	스쿠알렌	5
10	세테아릴 글루코사이드	1.5
11	소르비탄 스테아레이트	0.4
12	세레아릴 알코올	1
13	방부제	적량
14	허브향	적량
15	트리에탄올 아민	0.1

비교제조예 1. 미담경옥고를 포함하지 않는 화장료용 조성물의 제조

상기 표 7의 7번 원료를 혼합하지 않은 것을 제외하고는 상기 제조예 3과 동일한 방법으로 비교제조예 1 에 따른 화장료용 조성물을 제조하였다.

실험예 7. 화장료용 조성물의 인간 피부에 대한 미백 효과

건강한 12 명의 남자를 대상으로 피검자의 윗팔뚝 부위에 직경 1.5cm의 구멍 4개가 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤, 각 피검자의 최소 홍반량(Minimal Erythema Dose)의 1.5배에서 2배 정도의 자외선을 조사하여 피부의 흑화를 유도하였다. 이어서, 상기 색차계를 이용하여 흑화된 피부의 명암(L1: 피부가 어두울수록 그 값이 작아짐)을 측정하였다.

그 다음, 상기 제조예 2, 비교제조예 1에 따른 화장료용 조성물을 상기 흑화된 피부에 아침, 저녁 2회씩 2달 동안 매일 바르도록 하였다. 그 후, 색차계를 이용하여 상기 흑화되었던 피부의 명암(L2)를 측정하였다. 상기 측정 결과를 토대로 하기 수학식 5를 이용하여 상기 명암의 차이를 계산한 다음, 각 피검자별

명암의 차이의 평균을 하기 표 8에 나타내었다.

수학식 5

명암의 차이(ΔL)= L1(화장료용 조성물의 도포 전 명암)-L2(마지막 화장료 조성물의 도포 후 명암)

실험군	각 피검자별 ΔL의 평균값
제조예 2	4.11
비교 제조예 1	1.42

상기 표 8로부터 알 수 있는 바와 같이, 제조예 2에 따른 명암 차이는 비교 제조예 1보다 약 3배 이상 훨씬 크게 나타났다. 도2는 미담경옥고를 포함하는 화장료용 조성물을 두 달간 사용한 전후의 미백 효과를 검증한 사진이다. 따라서, 미담경옥고를 포함하는 화장료용 조성물의 미백 효과가 훨씬 큼을 알 수 있다.

실험예 8. 화장료용 조성물의 인간 피부에 대한 주름 개선 효과

30 내지 40대 여성 20명을 2개조로 분류한 다음, 실리콘을 이용하여 레플리카를 뜨고, 비지오메타(visiometer: SV500, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용한 화상 분석을 통하여 각 조의 피검자의 피부 주름 깊이를 측정하였다. 또, 피부 탄력을 측정할 수 있는 큐토메타(cutometer; SEM474, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 각 조의 피검자의 얼굴 부위 탄력을 측정하였다. 또한, 코네오메타 (coneometer: CM820, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 각 조의 피검자의 보습력을 측정하였다.

이어서, 상기 각 조별로 피검자에게 상기 제조예 2, 비교제조예 1에 따른 화장료용 조성물을 제공하였다. 그리고, 각 피검자에게 제공된 화장료용 조성물을 매일 1회씩 1개월간 피부에 도포하도록 하였다. 1개월이 지난 후, 상기 각 조별 피검자의 피부 주름 깊이, 얼굴 부위 탄력, 보습력을 측정하였다. 상기 측정 결과들을 이용하여 각 화장료용 조성물별로 도포 전과 후의 평균 주름 감소율, 평균 피부 탄력 개선도, 및 평균 보습력 증가율을 각각 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.

실험군	평균주름감소율(%)	평균피부탄력개선도(%)	평균피부보습력(%)
제조예 2	73	84	84
비교 제조예 1	38	46	49

표 9으로부터 알 수 있는 바와 같이, 제조예 2에 따른 방법으로 제조된 화장료용 조성물이 비교제조예 1에 따른 경우보다 주름 감소율, 피부 탄력 개선도, 및 보습력 증가 측면에서 모두 우수한 것으로 나타났다. 따라서, 경옥고 발효 생성물을 포함하는 화장료용 조성물의 인간 피부에 대한 주름 개선 효과가 더 우수함을 알 수 있다.

실험예 9. 화장료용 조성물의 안정성 검사

상기 제조예 2, 비교제조예 1에 따른 화장료용 조성물의 안전성을 확인하기 위하여 인체 피부 누적자극 시험을 실시하였다. 구체적으로, 건강한 20명의 성인 남여를 대상으로 상기 제조예 2, 비교제조예 1에 따른 화장료용 조성물 각각에 대해, 윗 팔뚝 부위에 격일로 총 9회의 24시간 누적 첩포를 수행하였다. 상기 첩포 방법으로는 핀 챔버(Finn chamber) 방법이 이용되었으며, 챔버당 15㎕의 화장료용 조성물을 적하한 후 첩포를 실시하였다. 매회 피부에 나타난 반응도를 그 정도에 따라 ±, +, ++로 나누어 나타냈으며, 각각에 대하여 1점, 2점, 및 4점(최고점수)을 부여하였다. 또한, 하기 수학식 6에 따라 평균 반응도를 계산하였으며, 상기 반응도의 결과와 함께 하기 표 10에 나타내었다. 하기 표 10에서 평균 반응도가 3 미만일 때 안전한 조성물로 판정된다.

수학식 6

평균 반응도=(반응자수×반응도/총피검자수×최고점수×100)/총검사횟수

시험 물질	반응이 나타난 피검자 수																											평균 반응도
	1주									2주									3주
	1차			2차			3차			4차			5차			6차			7차			8차			9차
	±	+	++	±	+	++	±	+	++	±	+	++	±	+	++	±	+	++	±	+	++	±	+	++	±	+	++
제조예 2	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	0.00
비교제조예 1	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	0.00

상기 표 10에서 "-"는 해당하는 인원이 없음을 나타낸다. 상기 표 11로부터 알 수 있는 바와 같이, 제조예 2에 따른 방법으로 제조된 화장료용 조성물은 상기 비교제조예1에 따른 화장료용 조성물과 마찬가지로 누적자극 양상이 전혀 나타나지 않았다. 따라서, 상기 제조예 2에 따른 화장료용 조성물은 안전성이 우수함을 알 수 있다.

Claims

홍삼, 백복령, 생지황, 백밀, 맥문동, 천문동 및 지골피를 포함하는 복합생약추출물을 유효성분으로 함유하는 피부의 주름, 보습, 미백의 예방 및 미용 생약 조성물.
제 1항에 있어서,
홍삼, 백복령, 생지황, 백밀, 맥문동, 천문동 및 지골피의 개개 중량 조성비가 1~10 : 1~10 : 1~10 : 1~10 : 0.1~1 : 0.1~1 : 0.1~1인 한방 미용 생약 조성물.
본 발명의 미담경옥고를 함유하는 피부 주름 개선, 보습 및 미백 개선 및 예방을 위한 미용 생약조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량 % 포함한다.
미담경옥고를 포함하는 화장료용 조성물로서, 상기 미담경옥고를 상기 조성물의 총중량에 대하여 0.0001 내지 30중량%의 함량을 갖는 화장료용 조성물.
제 3항에 있어서,
상기 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 및 분무제로 이루어진 제형군으로부터 선택된 하나의 제형으로 이루어지는 화장료용 조성물.
제 3항에 있어서,
알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제 및 향료로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 하나를 더 포함하는 화장료용 조성물.
미담경옥고을 포함하는 비누용 조성물로서, 상기 미담경옥고는 상기 조성물의 총중량에 대하여 0.0001 내지 30중량%의 함량을 갖는 비누용 조성물.
제 6항에 있어서,
비누 기재, 피부 보습제, 유화제 및 경수연화제 중 적어도 하나를 더 포함하는 비누용 조성물.