CN112210516A - 一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌l1258及其组合物 - Google Patents
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌l1258及其组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于微生物技术领域,提出了一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258,该菌株于2020年9月8日在中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,其保藏号为CGMCCNo.20611,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号其组合物包括5‑10份瑞士乳杆菌L1258,4‑8份嗜酸乳杆菌La28,6‑9份植物乳杆菌LP45。该组合物用于制备调节肠道,改善肠道功能紊乱的食品;通过上述技术方案,解决了现有技术中微生态制剂调节肠道菌群紊乱效果不够好的问题。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域,涉及一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258及其组合物。
背景技术
肠道功能紊乱是一组胃肠综合征的总称,严重影响患者的生活质量。有些患者甚至因腹痛腹泻频繁而不敢或者是无法正常上班。反复的腹泻刺激肠粘膜可以引起肠粘膜的病变,如转变为溃疡性结肠炎,甚至恶变。它还可以导致贫血、营养吸收不良及维生素缺乏。能量供给不足,使人感到头昏眼花、四肢疲乏、口干舌燥、心慌气短。维生素缺乏会出现皮肤头发干燥,头发失去正常光泽和滋润,脱发,产生早秃现象。造血原料的吸收减少,可引起贫血,头晕耳鸣,出现疲倦乏力,注意力不集中等症状。肠道功能紊乱还会造成便秘的发生,有研究对成人慢性便秘患者的粪便进行培养,发现双歧杆菌属和乳酸杆菌属数量均显著减少,而潜在致病菌数量增加。近年来有研究利用16S rRNA高通量测序技术发现,慢性便秘儿童的粪便菌群多样性与健康儿童不同,慢性便秘儿童的厚壁菌门/拟杆菌门(F/B)值较健康儿童升高,慢性便秘组的普雷沃氏菌属数量显著减少,厚壁菌门的几个属的数量显著增加。肠道功能紊乱与暂时性或持久性的菌群失调有很大的关系,人类肠道栖息着400多种细菌,这些肠道正常菌群主要由有益菌,有害菌和中性菌组成。而所谓的菌群失调,就是说肠道里的菌群平衡偏离了潜在的有益或者能够促进健康的有益菌,而是转向有害菌的增加。
现有的肠道调节采用的方法包括(1)微生态制剂:如金双歧、丽珠肠乐等微生态制剂可调节人体肠道微生态的平衡,改造失调的菌群结构,提高机体非特异免疫功能,及抑制肠道细菌过度增殖及内毒素产生和释放,增加机体耐受力,且能在肠道合成多种维生素和有机酸,促进人体对蛋白质、维生素的吸收,补充多种氨基酸和微量元素,改善营养状况,增进食欲,帮助消化;(2)抗生素:抗生素可以杀死细菌,现在仍有很多人在使用抗生素来调理肠道。但是它也可致菌群失调,引起维生素B族和K缺乏;也可引起二重感染,如伪膜性肠炎、急性出血肠炎、念珠菌感染等。林可霉素和氯林可霉素引起的伪膜性肠炎最多见,其次是先锋霉素Ⅳ和Ⅴ。急性出血性肠炎主要由半合成青霉素引起,以氨苄青霉素引起的发病率最高;(3)生长抑素类似物能增强胃肠道吸收功能及抑制有强烈致腹泻作用的胃肠道激素(胃动素),能有效的减少腹泻的次数和量,改善营养吸收障碍。
微生态制剂因其具有突出的优势被人们广泛用于调节肠道,但是现有的菌株仍存在肠道调节肠道菌群紊乱效果不够好的不足。
发明内容
本发明提出一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258及其组合物,解决了现有技术中微生态制剂调节肠道菌群紊乱效果不够好的问题。
本发明的技术方案是这样实现的:一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258,该菌株于2020年9月8日在中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,其保藏号为CGMCCNo.20611,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物,按质量份数计,包括5-10份瑞士乳杆菌L1258,4-8份嗜酸乳杆菌La28,6-9份植物乳杆菌LP45。
进一步地,按质量份数计,所述组合物包括8份瑞士乳杆菌L1258,7份嗜酸乳杆菌La28,8份植物乳杆菌LP45。
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物的应用,用于制备调节肠道,改善肠道功能紊乱的食品。
进一步地,按质量份数计,所述食品包括A组分和B组分;所述A组分包括5-10份瑞士乳杆菌L1258,4-8份嗜酸乳杆菌La28,6-9份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括柑橘纤维和菊粉。
进一步地,按质量份数计,所述食品包括A组分和B组分;所述A组分包括5-10份瑞士乳杆菌L1258,4-8份嗜酸乳杆菌La28,6-9份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括柑橘纤维、菊粉,还包括乳糖醇和/或水苏糖。
进一步地,按质量份数计,所述食品包括A组分和B组分;所述A组分包括5-10份瑞士乳杆菌L1258,4-8份嗜酸乳杆菌La28,6-9份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括0.5-1.0份乳糖醇,1-2份水苏糖,10-20份柑橘纤维,4-10份菊粉。
进一步地,按质量份数计,所述食品包括质量比为1:6的A组分和B组分;所述A组分包括8份瑞士乳杆菌L1258,7份嗜酸乳杆菌La28,8份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括0.7份乳糖醇,1.5份水苏糖,16份柑橘纤维,9份菊粉。
进一步地,所述A组分和B组分的质量比为1:(5-8)。
本发明的工作原理及有益效果为:
1、本发明提供了一种瑞士乳杆菌L1258,该菌株于2020年9月8日在中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,其保藏号为CGMCCNo.20611,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,抑制肠道集聚性大肠埃希氏菌EAEC的抑菌圈直径在16.63mm,抑制脱硫弧菌的抑菌圈直径在19.65mm,该瑞士乳杆菌L1258通过与植物乳杆菌LP45、嗜酸乳杆菌La28的复配设计,结合B组分的辅助搭配,用于改善便秘,服用7天,总有效率达80%,服用14天,总有效率达96.67%,用于治疗小鼠腹泻,第一次腹泻治愈平均时间在6.0h,再次腹泻的发病率在0%,不仅见效快,还明显提高了改善腹泻和便秘的效果,有效改善调节了肠道菌群。
2、本发明中A组分中瑞士乳杆菌L1258、植物乳杆菌LP45、嗜酸乳杆菌La28的复配设计,三者协同,抑制肠道集聚性大肠埃希氏菌EAEC的抑菌圈直径在21.03-21.11mm,抑制脱硫弧菌的抑菌圈直径在26.43-26.58mm,提高了瑞士乳杆菌L1258对大肠埃希菌和脱硫弧菌的抑制效果。
3、本发明中通过对A组分的复配设计,结合B组分中乳糖醇、水苏糖、柑橘纤维、菊粉的辅助搭配,服用7天,总有效率达80%,服用14天,总有效率达96.67%,用于治疗小鼠腹泻,第一次腹泻治愈平均时间在6.0h,再次腹泻的发病率在0%,其中B组分中采用乳糖醇、水苏糖与柑橘纤维、菊粉复配,协同提高了益生菌改善了便秘和腹泻的的服用效果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。嗜酸乳杆菌La28的保藏编号是CGMCCNo.11506,保藏单位为:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,保藏日期2015年10月15日;植物乳杆菌LP45于2013年8月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心进行了保藏,保藏号为:CGMCC No.8072,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号;瑞士乳杆菌L1258,分类命名为瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus),该菌株于2020年9月8日在中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,其保藏号为CGMCCNo.20611,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
一、实施例
实施例1
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物,按质量份数计,包括8份瑞士乳杆菌L1258,7份嗜酸乳杆菌La28,8份植物乳杆菌LP45。
实施例2
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物,按质量份数计,10份瑞士乳杆菌L1258,4份嗜酸乳杆菌La28,9份植物乳杆菌LP45。
实施例3
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物,按质量份数计,5份瑞士乳杆菌L1258,8份嗜酸乳杆菌La28,6份植物乳杆菌LP45。
实施例4
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物,按质量份数计,9份瑞士乳杆菌L1258,5份嗜酸乳杆菌La28,7份植物乳杆菌LP45。
实施例5
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物,按质量份数计,9份瑞士乳杆菌L1258,7份嗜酸乳杆菌La28,8份植物乳杆菌LP45。
实施例6
与实施例1相比,区别仅在于,只包括瑞士乳杆菌L1258。
比较例1
与实施例1相比,区别仅在于,只包括植物乳杆菌LP45。
比较例2
与实施例1相比,区别仅在于,只包括嗜酸乳杆菌La28。
比较例3
与实施例1相比,区别仅在于,不包括嗜酸乳杆菌La28。
比较例4
与实施例1相比,区别仅在于,不包括植物乳杆菌LP45。
大肠埃希菌是腹泻病原谱的最主要病原体,占全部腹泻病例的40.31%,脱硫弧菌与便秘状态的发生高度相关,肠道紊乱包括这两种有害菌,因此以实施例1-5及比较例1~4的乳杆菌为目标菌,进行如下目标菌体外抑菌实验:
脱硫弧菌活化三代后,用1×108CFU/mL浓度的脱硫弧菌涂布到新鲜的哥伦比亚血平板上,立即放入牛津杯,加入各待测目标菌100μL,微需氧条件下固定1h。培养72h后,测量抑菌环直径;大肠埃希菌活化三代后,用1×108CFU/mL浓度的大肠埃希菌涂布到新鲜的不含抗生素TBS培养基血平板上,立即放入牛津杯,加入各待测目标菌100μL,微需氧条件下固定1h。培养72h后,测量抑菌环直径结果如下表1。
表1实施例1-6及比较例1~4的乳杆菌体外抑菌实验
从上表中数据可以看出,目标菌体外抑菌实验加入的目标菌总量是相同的,实施例6仅仅采用瑞士乳杆菌L1258,比较例1-2单独采用植物乳杆菌LP45或嗜酸乳杆菌La28,比较例1-2抑菌圈的直径减小,比较例3-4采用瑞士乳杆菌L1258与植物乳杆菌LP45或嗜酸乳杆菌La28复配,与实施例6抑菌圈的直径相差不大,可见采用瑞士乳杆菌L1258与植物乳杆菌LP45或嗜酸乳杆菌La28复配并不能协同提高瑞士乳杆菌L1258的抑菌效果。
而与比较例1-2采用两种菌种复配相比,实施例1-5采用三种菌种复配抑菌圈的直径明显增大,抑制肠道集聚性大肠埃希氏菌EAEC的抑菌圈直径在21.03-21.11mm,抑制脱硫弧菌的抑菌圈直径在26.43-26.58mm,可见本发明三种菌种复配协同提高了瑞士乳杆菌L1258的抑菌效果。
二、应用实施例
应用实施例1
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物用于制备调节肠道,改善肠道功能紊乱的食品;
按质量份数计,食品包括质量比为1:6的A组分和B组分;所述A组分包括8份瑞士乳杆菌L1258,7份嗜酸乳杆菌La28,8份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括0.7份乳糖醇,1.5份水苏糖,16份柑橘纤维,9份菊粉。
该食品的剂型可根据需要制备成粉剂、颗粒剂、乳剂、片剂、块状、棒状、口服液或胶囊剂中的任一种,具体剂型制备方法可采用常规手段;本应用实施例食品剂型采用喷粉干燥,具体条件为高压泵压力13-19Mpa、进风温度162-171℃、排风温度77-82℃、塔内温度88-95℃、塔内负压109-148pa。
应用实施例2
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物用于制备调节肠道,改善肠道功能紊乱的食品;
按质量份数计,食品包括质量比为1:5的A组分和B组分;所述A组分包括10份瑞士乳杆菌L1258,4份嗜酸乳杆菌La28,9份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括0.5份乳糖醇,2份水苏糖,10份柑橘纤维,10份菊粉。
本应用实施例食品剂型制备成颗粒剂,具体剂型制备方法可采用常规手段。
应用实施例3
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物用于制备调节肠道,改善肠道功能紊乱的食品;
按质量份数计,食品包括质量比为1:8的A组分和B组分;所述A组分包括5份瑞士乳杆菌L1258,8份嗜酸乳杆菌La28,6份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括1.0份乳糖醇,1份水苏糖,20份柑橘纤维,4份菊粉。
本应用实施例食品剂型制备成乳剂,具体剂型制备方法可采用常规手段。
应用实施例4
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物用于制备调节肠道,改善肠道功能紊乱的食品;
按质量份数计,食品包括质量比为1:6的A组分和B组分;所述A组分包括9份瑞士乳杆菌L1258,5份嗜酸乳杆菌La28,7份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括0.6份乳糖醇,1.2份水苏糖,15份柑橘纤维,5份菊粉。
本应用实施例食品剂型制备成片剂,具体剂型制备方法可采用常规手段。
应用实施例5
一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物用于制备调节肠道,改善肠道功能紊乱的食品;
按质量份数计,食品包括质量比为1:8的A组分和B组分;所述A组分包括9份瑞士乳杆菌L1258,7份嗜酸乳杆菌La28,8份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括0.7份乳糖醇,1.8份水苏糖,16份柑橘纤维,4份菊粉。
本应用实施例食品剂型制备成口服液,具体剂型制备方法可采用常规手段。
应用实施例6
与应用实施例1相比,区别仅在于未包括B组分。
应用实施例7
与应用实施例1相比,区别仅在于未加入乳糖醇。
应用实施例8
与应用实施例1相比,区别仅在于未加入水苏糖。
应用实施例9
与应用实施例1相比,区别仅在于未加入乳糖醇和水苏糖。
便秘试服
以应用实施例1、应用实施例6-9作为样品进行试服,试服方法:
1、一般资料:选取符合入组条件的人群150人,其中病程最长11年,最短半年,随机分为五组:实验组一30例,予以患者应用实施例1制备的粉剂,实验组二30例,予以患者应用实施例6制备的粉剂,实验组三30例,予以患者应用实施例7制备的粉剂,实验组四30例,予以患者应用实施例8制备的粉剂,实验组五30例,予以患者应用实施例9制备的粉剂。
2、入选标准:年龄18-60岁;符合便秘罗马III标准;病程最少半年;近一周内未服用影响胃肠道动力药物;诊断IBS依据不足;结肠镜或结肠造影检查排除肠道器质性病变及由全身性疾病引起的便秘;近三月满足以下两项或两项以上症状:①至少25%的排便感到费力②至少25%的排便为干球状便或硬便③至少25%的排便有不尽感④至少25%的排便有***直肠的阻塞感⑤排便次数每周少于3次。
3、排除标准:因其他疾病及药物导致的便秘,如帕金森氏综合症,巨结肠及长期服用止痛药患者;部分功能性便秘,如直肠前膨出,盆地痉挛综合症等;因嗜酒、滥用药物及精神因素依从性差者;长期滥用泻剂者。如观察期间出现患者自行使用胃肠道动力药(如开塞露),自行放弃观察等情况,则终止观察。
4、给药方案:
实验组一、实验组二、实验组三、实验组四、实验组五,分别服用应用实施例1、6-9样品,受试者每天早饭前温水冲服样品,每次5g粉剂,连续服用14天。
5、观察指标及评分
试服期间要求受试者每天根据自身情况填写试服情况记录表。以患者自身试服前后症状作为对照,比较患者排便情况的改善程度,根据患者排便情况进行量化打分。
观察指标:比较患者治疗前后排便次数、排便指标、排便时间、粪便硬度、排便感觉评分标准见表2。
表2评分标准
6、试服结果
本次研究完成试服人数150人,除实验组五中2人未坚持服用,其余148人均坚持服用。
有效率=(治疗前积分-治疗后积分)/治疗前积分*100%
显效标准:有效率≥60%
有效标准:20%<有效率<60%
无效标准:有效率≤20%
总有效率=显效率+有效率。
表3便秘疗效
由上表3可知,本发明应用实施例1、6-9制备的粉剂服用7天,总有效率达66.67-80%,服用14天,总有效率达73.33-96.67%,可见本发明制备的粉剂见效快,服用效果好。3个月后随访,实验组一的显效人群的便秘情况并未恶化,实验组二到实验组五均有不同程度的复发恶化情况。可见本发明应用实施1粉剂的改善便秘的效果更好;
应用实施例6未加入B组分,与应用实施例6相比,应用实施例一的总有效率更高,可见本发明B组分促进了益生菌在肠道的定植,有效调节了肠道菌群的平衡。
应用实施例1中B组分采用乳糖醇、水苏糖、柑橘纤维、菊粉复配,应用实施例7中B组分未采用乳糖醇,应用实施例8中B组分未采用水苏糖,应用实施例9中B组分未采用乳糖醇和水苏糖,而本发明应用实施例1与应用实施例7-9制备的粉剂服用效果相比,7天总有效率提高,14天总有效率提高,可见本发明应用实施例1中乳糖醇、水苏糖与柑橘纤维、菊粉复配,协同提高了益生菌菌剂的服用效果。
腹泻试验
将本发明应用实施例1-9的样品,进行小鼠急性腹泻的治疗及预防实验。
首先挑选体重近似、健康状况近似的100只小鼠(5周龄)随机分成10组,使用肠道集聚性大肠埃希氏菌EAEC使10组小鼠感染产生腹泻症状,感染腹泻症状标准:小鼠精神沉郁,倦怠,饮食量减少,被毛逆立,腹式呼吸,眼睑红肿有分泌物,排黄色稀便。除正常进食外,前9组还分别喂养应用实施例1-9的样品与蒸馏水1:3混合后摇匀的9种营养液,第10组使用蒸馏水,作为对照组,各组每天喂养2次,观察腹泻治愈的时间(若小鼠死亡则治愈时间按照本实验中最长治愈时间的两倍计算),治愈标准:腹式呼吸消失,眼睑症状消失,粪便成型,活动量和饮食正常。将恢复后的小鼠再持续喂养1个月,观察小鼠***物,统计再次感染腹泻或其它疾病的发病率。其结果如下表4所示。
表4腹泻试验疗效
由上表4可知,本发明应用实施例1制备的粉剂用于治疗小鼠腹泻,第一次腹泻治愈平均时间在6.0h,再次腹泻的发病率在0%,与应用实施例7-9制备的粉剂服用效果相比,第一次腹泻治愈平均时间和再次腹泻的发病率均降低,可见本发明制备的粉剂调节肠道菌群见效快,在肠道内定植能力强,服用效果好。
而应用实施例1中B组分采用乳糖醇、水苏糖、柑橘纤维、菊粉复配,应用实施例7中B组分未采用乳糖醇,应用实施例8中B组分未采用水苏糖,应用实施例9中B组分未采用乳糖醇和水苏糖,应用实施例1与应用实施例7-9制备的粉剂服用效果相比,第一次腹泻治愈平均时间和再次腹泻的发病率均降低,可见本发明应用实施例1中乳糖醇、水苏糖与柑橘纤维、菊粉复配,协同提高了益生菌菌剂的服用效果。
此外应用实施例6未加入B组分,与应用实施例6相比,应用实施例1的第一次腹泻治愈平均时间和再次腹泻的发病率更低,可见本发明B组分促进了益生菌在肠道的定植,有效调节了肠道菌群的平衡。
以上仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258,其特征在于,该菌株于2020年9月8日在中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,其保藏号为CGMCCNo.20611,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物,其特征在于,按质量份数计,所述组合物包括5-10份瑞士乳杆菌L1258,4-8份嗜酸乳杆菌La28,6-9份植物乳杆菌LP45。
3.根据权利要求2所述的一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物,其特征在于,按质量份数计,所述组合物包括8份瑞士乳杆菌L1258,7份嗜酸乳杆菌La28,8份植物乳杆菌LP45。
4.根据权利要求2所述的一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物的应用,其特征在于,用于制备调节肠道,改善肠道功能紊乱的食品。
5.根据权利要求4所述的一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物的应用,其特征在于,按质量份数计,所述食品包括A组分和B组分;所述A组分包括5-10份瑞士乳杆菌L1258,4-8份嗜酸乳杆菌La28,6-9份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括柑橘纤维和菊粉。
6.根据权利要求5所述的一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物的应用,其特征在于,按质量份数计,所述食品包括A组分和B组分;所述A组分包括5-10份瑞士乳杆菌L1258,4-8份嗜酸乳杆菌La28,6-9份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括柑橘纤维、菊粉,还包括乳糖醇和/或水苏糖。
7.根据权利要求6所述的一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物的应用,其特征在于,按质量份数计,所述食品包括A组分和B组分;所述A组分包括5-10份瑞士乳杆菌L1258,4-8份嗜酸乳杆菌La28,6-9份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括0.5-1.0份乳糖醇,1-2份水苏糖,10-20份柑橘纤维,4-10份菊粉。
8.根据权利要求7所述的一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物的应用,其特征在于,按质量份数计,所述食品包括质量比为1:6的A组分和B组分;所述A组分包括8份瑞士乳杆菌L1258,7份嗜酸乳杆菌La28,8份植物乳杆菌LP45,所述B组分包括0.7份乳糖醇,1.5份水苏糖,16份柑橘纤维,9份菊粉。
9.根据权利要求5-7任意一项所述的一种具有肠道调节功能的瑞士乳杆菌L1258的组合物的应用,其特征在于,所述A组分和B组分的质量比为1:(5-8)。
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