CN112029779A - 拟南芥中介体成员med14和/或med16基因在抗旱中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因在抗旱中的应用，所述MED14基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述MED16基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，本发明利用农杆菌介导的方法转入Columbia拟南芥(Col‑0)中验证目的基因的功能，有利于从分子机制上阐明MED14和MED16在ABA和植物干旱反应中的作用，为作物抗逆分子育种提供理论基础和基因资源。对于一些需要提高抗旱性的作物而言，可以通过转基因方式异源表达MED14和/或MED16基因，为作物抗逆育种提供新的途径。

Description

拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因在抗旱中的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因在抗旱中的应用。

背景技术

非生物胁迫胁迫是当前限制农业生产的重要因素。干旱作为一种常见非生物胁迫，每年造成大量农作物减产。适度的干旱有助于植物根系发育，而过度干旱将造成植物发育不良和作物减产等危害。因此，植物如何感受和响应环境胁迫是一个根本性的生物学问题，提高植物抗逆对提高作物产量具有重要作用。中介体作为转录复合物中的关键组分，其如何参与植物响应逆境应答机制还需要不断探索和解析。

普遍认为ABA信号在植物对干旱、低温和高盐胁迫的适应中有重要作用。此外，ABA还调节植物整个生命周期的许多发育过程，包括种子成熟和休眠、种子萌发、营养发育、根瘤发育和衰老。目前ABA信号的感知、转导和转录后的调控作用研究比较清楚，简而言之，当ABA存在时，ABA受体PYL与ABA结合导致其构象发生变化，并于蛋白磷酸酶PP2Cs结合，解除了对SnRK2s激酶活性的抑制，进而SnRK2s激活对下游转录因子和ABA响应基因的正向调控作用。

拟南芥(Arabidopsis thaliana)是重要的模式植物，因具有生长周期短、形态特征明显、基因组小等特点被广泛研究。中介体是转录因子与RNA聚合酶II(Pol II)之间的分子桥梁。研究发现，中介体的功能重要集中在调控植物的生长发育、代谢稳态和免疫防御，而在非生物胁迫尤其是在干旱胁迫中的作用还不清楚。随着全基因组测序兴起，早在2004年拟南芥全基因组测序被完成。这又进一步掀起了模式植物拟南芥功能解析的高潮。因此揭示中介体参与调节胁迫应答的关键成员，这为作物分子育种提供丰富的基因资源和理论基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因在抗旱中的应用。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因，所述MED14基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示；所述MED16基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述基因具有增强植物抗旱性的功能。

含有上述拟南芥MED14和/或MED16基因的表达载体p35S::MED16-YFP也落入本发明的保护范围之内。

本发明最主要的目的是公开了上述拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因以及表达载体在培育转基因抗旱植物中的应用。并且在分子水平上对拟南芥MED14和/或MED16进行克隆和鉴定，从而为解析拟南芥中介体成员在干旱调控中的作用提供理论基础。

其中，拟南芥MED14和MED16的编码框核苷酸序列来自于TAIR官网(https://www.arabidopsis.org/index.jsp)，MED14基因ID为AT3G04740，MED16基因ID为AT4G04920。MED14基因全长编码框核苷酸序列长度为5112bp，由1704个氨基酸组成，分子量大小约为185.5kD；MED16基因全长编码框核苷酸序列长度为3837bp，由1279个氨基酸组成，分子量大小约为138.2Kd。

并且含有上述基因的表达载体、重组载体或转基因细胞系以及含有所述载体的宿主细胞的获得方法也落入本发明的保护范围之内。

作为本发明的一种实施方式，作为本发明的一种实施方式，本发明还将所述的带有外源基因的重组载体导入到可表达所述MED14和/

或MED16蛋白的植物细胞中，使所述的植物细胞表达MED14和/或MED16蛋白。利用农杆菌转化法将MED14和/或MED16蛋白的编码基因转入植物中。获得过量表达MED14和/或MED16蛋白的植物。

本发明还公开了拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因在ABA信号和干旱胁迫反应中的应用。通过利用遗传学分析了其T-DNA***突变体的ABA和干旱应答表型，得出：

(1)med14和med16突变体具有ABA反应不敏感；

(2)med14和med16突变体具有干旱不耐性；

(3)35S:MED16-YFP过表达系具有干旱耐受性；

上述应用通过ABA反应实验和模拟干旱实验得出结论。

本发明具有如下优点：

本发明通过基因合成和植物基因组克隆获得拟南芥MED14和MED16基因。发明人利用农杆菌介导的方法转入Columbia拟南芥(Col-0)中验证目的基因的功能，有利于从分子机制上阐明MED14和MED16在ABA和植物干旱反应中的作用，为作物抗逆分子育种提供理论基础和基因资源。对于一些需要提高抗旱性的作物而言，可以通过转基因方式异源表达MED14和/或MED16基因，为作物抗逆育种提供新的途径。

附图说明

图1是MED14和MED16基因PCR扩增产物；

图2是MED14和MED16重组质粒的PCR扩增产物电泳图；

图3是med14和med16突变体纯合鉴定PCR电泳图；

图4是野生型拟南芥株系(WT)、med14和med16突变体在ABA和干旱中的表型；

(A)图是野生型拟南芥株系(WT)、med14和med16突变体在1μM ABA处理下的萌发情况(B)图是野生型拟南芥株系(WT)、med14和med16突变体在50μM ABA处理下的根长表型。(C)图是野生型拟南芥株系(WT)、med14和med16突变体在干旱处理下的表型(D)图是野生型拟南芥株系(WT)、med14和med16突变体是甲苯胺蓝染色后的表型。

图5是是野生型拟南芥株系(WT)和p35S::MED16-YFP转基因拟南芥在ABA和干旱中的表型；

(A)图是野生型拟南芥株系(WT)和p35S::MED16转基因植株在1μMABA处理下的萌发情况(B)图是野生型拟南芥株系(WT)和p35S::MED16转基因植株在50μM ABA处理下的根长表型(C)图是野生型拟南芥株系(WT)，med16突变体和p35S::MED16转基因植株在干旱处理下的表型(D)图是野生型拟南芥株系(WT)，med16突变体和p35S::MED16转基因植株是甲苯胺蓝染色后的表型。

具体实施方式

下面将通过具体实施例对本发明进行详细的描述。提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。如无特殊说明，所采用的试剂及材料，均可以从市场中购买获得。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

发明人利用生物信息学技术在拟南芥基因组基础上得到中介体成员MED14和MED16基因序列。通过分子克隆分别克隆了MED14和MED16基因的编码框序列。另外利用遗传学分析了其T-DNA***突变体的ABA和干旱应答表型。本发明还将其与植物过表达载体连接后导入野生型拟南芥进行功能验证。

实施例

1.拟南芥中介体因子MED14和MED16基因的分离

基于TAIR官网(http://www.arabidopsis.org/)公布的拟南芥全基因组测序，获得拟南芥MED14和MED16的核苷酸序列信息。MED14基因全长编码框核苷酸序列长度为5112bp，由1704个氨基酸组成，分子量大小约为185.5kD；MED16基因全长编码框核苷酸序列长度为3837bp，由1279个氨基酸组成，分子量大小约为138.2Kd。而MED14和MED16基因利用Primer Premier 5软件设计序列特异性引物(F：5'–CGGAATTCATGAATCAGCAAAACCCAGAAGAAG-3'；R：5'-GCGTCGACTACAACACGGACCCACGTTCCACCA-3')。Col-0生态型拟南芥幼苗总RNA的提取按照Trizol提取试剂(Takara)说明进行，第一链cDNA合成按照反转录试剂盒PrimerScriptTM II 1st StrandcDNA Synthesis Kit(Takara)说明进行。以拟南芥的cDNA为模板，使用Primer STAR Max高保真酶扩增(Takara)，退火温度为55℃。基因克隆结果如图1所示。

2.MED14和MED16基因的功能鉴定

为了研究MED14和MED16基因在拟南芥ABA和抗旱中的作用，通过突变体和过表达转基因来鉴定其功能。

2.1过表达材料的构建

将PCR获得的目的片段通过Gateway重组克隆技术BP反应(Gateway^TM BPClonase^TMEnzyme Mix，Thermo Fisher)连接到pDONR-20。再通过LR反应(Gateway^TM LR Clonase^TMEnzyme Mix，Thermo Fisher)克隆到p35S::YFP植物过表达载体，命名为p35S::MED16-YFP。并转化大肠杆菌。37℃摇菌过夜后提取质粒。随后对重组载体进行PCR鉴定(图2)。挑选正确的质粒送测序。

2.2转基因拟南芥阳性株的筛选

将构建好正确的重组质粒利用液氮冻融法转入农杆菌GV3101中，过夜摇菌，转接摇至OD＝0.8，使用转基因缓冲液重悬，侵染Col-0拟南芥花序，避光一天，在长日照光照培养箱中培养收种，收获的种子在含有除草剂(Basta)(50mg/L)的1/2MS固体培养基上进行筛选。筛选过程如下：用10％次氯酸钠溶液进行表面消毒15min，无菌水漂洗5次干净后，4℃春化三天。将种子播种于pH＝5.8，含有终浓度50μg/mL的1/2MS培养基中。16h/8h光暗，25℃，70％相对湿度的光照培养箱中培养。以野生型拟南芥作为对照，筛选出抗Basta的小苗7d后移至土中(营养土：蛭石＝1：1)在上述条件下进行培养。待抽薹后提取DNA，常规PCR鉴定阳性植株。收获T0代种子后，继续在含有除草剂的1/2MS培养基上筛选阳性植株。直至T3代纯合。

2.3突变体纯合检测

基于拟南芥T-DNA***突变体的序列号，在突变体查询网站下载并合成测序序列(http://signal.salk.edu/tdnaprimers.2.html)。med14-2(SAIL_373_C07)为LP:5'–GCTGCAACCAGACTTGATCTC-3'，RP：5'–TTTGCTCAAAATGATTCCTGG-3'；med16-2(SALK_048091)为LP:5'–TTGTACCAGAACTTGGCTTGG-3'，RP：5'–CTCATCTCTTGCAGCTCCAAG-3'。通过PCR进行纯合鉴定(图3)。

2.4突变体和转基因株系表型分析

图4是野生型拟南芥株系(WT)、med14和med16突变体在ABA和干旱中的表型分析图。在种子萌发实验中，在正常1/2MS培养基上，野生型WT、med14和med16突变体种子萌发相同，且子叶绿化率也大致相同，几乎为100％；在1μABA处理下，与野生型WT相比，med14和med16突变体种子具有更好萌发率，并且子叶绿化面积也高于野生型WT(图4A)。在根长分析中，在正常1/2MS培养基上，野生型WT、med14和med16突变体植株根长大致相同；在50μABA处理下，与野生型WT相比，med14和med16突变体植株具有较长的主根(图4B)。干旱模拟实验发现，干旱处理后，与野生型WT相比，med14和med16突变体植株干旱敏感，叶片萎焉程度较大。并且复水后，med14和med16突变体植株几乎不能恢复至正常状态(图4C)。进一步使用甲苯胺蓝染色分析发现，与野生型WT相比，med14和med16突变体植株叶片具有较深的颜色，这表明med14和med16突变体植株叶片渗透性更强(图4D)。

图5是野生型拟南芥株系(WT)和p35S::MED16转基因植株在ABA和干旱中的表型分析图。在种子萌发实验中，在正常1/2MS培养基上，野生型WT和p35S::MED16转基因植株种子萌发相同，且子叶绿化率也大致相同几乎为100％；在1μABA处理下，与野生型WT相比，p35S::MED16转基因植株的萌发率较差，并且子叶绿化面积也低于野生型WT(图5A)。在根长分析中，在正常1/2MS培养基上，野生型WT和p35S::MED16转基因植株根长大致相同；在50μABA处理下，与野生型WT相比，p35S::MED16转基因植株的主根长度没有明显的差异(图5B)。干旱模拟实验发现，干旱处理后，与野生型WT相比，med16突变体植株干旱敏感，叶片萎焉程度较大。而p35S::MED16转基因植株表型几乎和野生型WT一样(图5C)。进一步使用甲苯胺蓝染色分析发现，与野生型WT相比，med16突变体植株叶片具有较深的颜色，而p35S::MED16转基因植株叶片和野生型WT一样(图5D)。这些结果表明MED14和MED16基因均正向调控ABA介导的干旱反应。

以上所述之实施例，只是本发明的较佳实施例而已，仅仅用以解释本发明，并非限制本发明实施范围，对于本技术领域的技术人员来说，当然可根据本说明书中所公开的技术内容，通过置换或改变的方式轻易做出其它的实施方式，故凡在本发明的原理上所作的变化和改进等，均应包括于本发明申请专利范围内。

序列表

<110> 河南大学

<120> 拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因在抗旱中的应用

<130> 2020

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 5112

<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 1

atggcggaat tagggcaaca gacggtggat ttctctgctc ttgttggtcg agccgcagag 60

gaatcgttcc tttcttttaa ggaacttgtg gataagtcta agtcgacgga gctttctgat 120

actgagaaga aggttagcct ccttaagtat gtcgctaaga ctcagcaacg gatgctccgc 180

ctcaatgccc tcgccaagtg gtgtaaacag gttcctctta taaactactt tcaagacctt 240

gggagtacat tatcagctca tgacatatgc ttcacacaag ctgcggattc gctgtttttt 300

atgcatgaag gtctacagca agctcgcgct cctgtctatg acgttccctc tgctgttgag 360

attttgctga caggttctta tcagcgcctg ccaaagtgtc tagatgatgt gggcatgcag 420

agctctttgg atgagcatca acagaaacca gctctaagaa agctggaggt acttgtacgt 480

tccaaactgc ttgaaatcac acttccaaaa gaaataacag aggtgaaaat ttctaaaggt 540

acagttacct tatctgtcga tggggaattt aaagttcttg ttactcttgg ttaccgaggg 600

cacctatcca tgtggcggat attgcatttg gatctacttg ttggtgaaag aagtggcccc 660

attaaacttg aagtgacaag acggcatatc cttggagatg atttagagcg tcgaatgtcc 720

gtggcagaaa atccattcac aattttatat gcggtgctcc atgagctgtg cgttgccatt 780

gtcatggaca cagtcataag acaggtccga gctcttctgc aggggagatg gaaagatgca 840

attcgcttcg acttaatttc agatactggt accacaccag cgaaccaaga aggagaggca 900

gattctgtta gtcttcgaac gccaggaatg aaactttttt actggtcaga ttctgataaa 960

aattctggcc catttattaa aattgaacca gggtcagatc tccagattaa atgttctcac 1020

agcacatttg taattgaccc acttactggc aaggaagctg agttttctct cgaccagagc 1080

tgcattgacg tggagaagct tctgcttaaa gctatatgct gtaatagata tacccgtctt 1140

cttgaaattc agaaagagct tttgaggaat actcgtattt gtcgaactcc aagtgatgtg 1200

atccttcaag ccctcctgga tgagcctggt attgagggag ataacatggt agactctaaa 1260

gagcgagtag agccagaggt cttacgagtg cgagcctatg gatcttcatt tttcacactg 1320

gggataaata taaggactgg tcggtttctt ctacagtcat ccaagagtat cttgacctcc 1380

tccatcttgg aggaatttga agatgcgtta aaccaaggaa gtatatctgc agttgatgcc 1440

tttatcaact tgagaagcaa aagtattttg catttttttg ctgctattgg caaatttttg 1500

ggtcttgagg tctatgaaca tggttttggt ataaacaaag ttcctaaaag cctcttggat 1560

gggtcaagca ttctgacttt gggattccct gactgtgaaa gctctcacct tttgctaatg 1620

gagctcgaaa aggacttcac accattgttt aaattactgg aaactcagat ggatggttcg 1680

ggaaaacctc agtctttcaa tgatccaagc aatattttgc gagctaagaa aattgatata 1740

gggcagatac ggattctcga agatgatctt aacttgatta catccgatgt ggttaaattt 1800

gtatcttcat tctcggatgc tgagggcata aatcaagcat ctggacaccg tcagcctgga 1860

ttggttgacg aggctttgac agaaatgagt ggaagccagt tgagtttctc tagtgtcgta 1920

gatggagtgt ttggacttca gaaagtgaca tctgctctta tgtcaattga tggacatggt 1980

ttagttccca aaaatctctc tgctgttacc ggccatggaa aagctccaat gttgactagc 2040

tatcattcag attccttgta taatcgacag ggtcccttac aatctagctc ttataatatg 2100

ttatcatctc cccctgggaa gggttcagct atgaagaaga tagccatctc taactctgac 2160

caggagttat ccctgatact gtctccatcc ctctctactg ggaatggagt ctctgagtca 2220

ggctctagac tggtcactga atcctcattg tcacctcttc ccctatctca aacagctgat 2280

cttgcaacat catctgctgg tcctttgtta aggaaagatc agaagccccg gaaacgttca 2340

gcttcagatt tgctaagatt gatcccatcc ctccaggtag tggaaggtgt tgctagtccc 2400

aataagagaa gaaaaacctc tgaactggta cagagtgaat tagtgaagag ttggagccct 2460

gcatcacaga ccttatccac tgccgtgtca acatcaacaa aaactatagg atgcagctat 2520

gggaatctca tagctgaagc aaacaagggg aatgcacctt caagcgtttt tgtttatgct 2580

cttctccatg tggtcaggca ttcttcgttg tccataaagc atgccaaact aactagtcag 2640

atggaggcat tggatattca atatgttgag gaaatgggac taagagatgc attttcagat 2700

atatggttca ggcttccatt tgctcaaaat gattcctggc aacatatatg cttgcagctt 2760

ggtagacctg gaagcatgtg ttgggatgtg aaaataaatg accaacactt tagggatctc 2820

tgggaacttc aaaagggaag taaaaccaca ccatggggtt ctggagttca cattgcgaat 2880

tcatctgatg ttgattctca tatccgttat gaccctgaag gtgttgttct gagctatcag 2940

tctgtggaag ccgatagtat aaagaagctt gtggccgaca tacaaaggct ttcaaatgct 3000

agaatgttct cccttggtat gcggaaacta cttggcataa agccagatga aaaaacagaa 3060

gagtgcagtg ctaattccac tatgaaagga tctactggag gaaaaggcag tggtgagcca 3120

gtagataggt ggagagcttt caagattgag gctgtgggat taacaagcct gtggtttagc 3180

tttggttcag gcgttttggc gcgttttgtt gtcgagtggg aatcaggtaa agatggatgc 3240

accatgcatg tctctcctga ccaactatgg ccacatacaa agttcttgga ggatttcata 3300

aacggagcag aggtagaatc ccttttggat tgcattcgcc ttactgctgg gcctttgcat 3360

gcattagctg ccgctactcg ccctgcccga gctagtactg ccactggcat gcctgttgta 3420

cctgctacag cgtcttcaag acaatcaaat cagatacaac aaactcaagg aatcattgcc 3480

ccttcaactt tagcagctcc taatgctact ggccagtctg cctcagcaac ttcaggaaat 3540

actgttgctt cttctgctcc aagcccactt ggtggaggtt tccatggagt tgcaatgcta 3600

gcagctgcag ggagaagcgg acctggcatc gttccaagct ctctcttgcc catcgatgtc 3660

tctgtagtac tccgtggacc ctattggata aggatcatat accgtaaacg ttttgcagta 3720

gacatgagat gttttgctgg agatcaagtc tggttgcagc cagcaactcc acccaagggt 3780

ggtgcttcta ttggaggctc cttgccatgt ccccaattca gacctttcat catggagcat 3840

gttgctcaag aattgaacgg tttagaacca aatttgacag gtagccaagg agcaacaaat 3900

cccaacagtg gaaacccaac tgttaacggt gtgaacagag ttaacttttc cccttctagt 3960

gcaagagctg caatgaatcg agtagccagt gttgcttcag gatctttagt ggttagctca 4020

ggattgcctg tgcgtagaac accaggcact gctgtaccag cgcatgtaag aggtgaatta 4080

aacacagcga taatcggttt aggtgatgac ggtggctatg gcggaggatg ggttcctctt 4140

gtggctctta aaaaggtttt gcgtggtatc cttaaatatc ttggagtact gtggctattt 4200

gctcagttac cagatctctt aagagagatc ttgggttcca tcttgaagga taacgaaggc 4260

gctctcttga atttagacca agaacaacca gccttacgct tctttgtcgg tggctatgtg 4320

tttgcggtga gtgtccatag agttcagctc cttcttcaag tccttagcgt aaggcgattc 4380

catcaccaag cacaacaaaa tggttcttct gctgcggctc aagaggagtt aacccaatcc 4440

gagattggag aaatctgcga ttatttcagc cgccgtgtcg catcagaacc gtatgatgcc 4500

tcaagagttg cctctttcat aacactcctc acgttaccca tatcggtctt gagagagttt 4560

ctgaaactga tagcttggaa aaaaggatta tcccaatcac aacaagctgg agagattgct 4620

cctgcacaga gacctcgaat cgagctatgt ctagagaacc attctggtac agatttagac 4680

aacaattgtg cagctaaaag caatatccat tacgaccggc cgcacaacac ggttgacttt 4740

gcgctaaccg ttgttcttga tcctgtgcac ataccccata taaacgcggc tggaggagca 4800

gcatggttgc cttactgtgt atcagttagg ttaagataca catttggcga aaatcctagc 4860

gtgacgtttc ttggaatgga aggaagtcat ggaggtcgag cttgttggca gcgagtggac 4920

gattgggaga aatgtaaaca gagagtgagc cgtacagtgg aagtcaacgg ttctgctgca 4980

ggagatttga ctcagggaaa actcaagttg gttgcagata gtgtccagag aacattgcat 5040

ctatgtcttc aaggtctgag agaaggtggt aataataata acaacactca tcaaaaggaa 5100

tttaccatat ag 5112

<210> 2

<211> 3837

<212> DNA

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 2

atgaatcagc aaaacccaga agaagaagtt tctttggtta ataatagcgg tggtggagga 60

atcatcgaag ctccagctat agtggaggag aaagaggaag aaggattaca gcagaagcag 120

gaagagacta ttgagtctac cgatccgatt ctcgtcgtcg ttgaggagaa attgttagag 180

aaatcagtag acggagagaa agaagacgat aatagtagta gtagtaacat ggagattgat 240

cctgtgagtc cggctacagt tttctgtgtt aagcttaagc agcccaattc caatttgctt 300

cataagatga gtgttcctga attgtgccgt aacttcagtg ctgttgcgtg gtgtggcaaa 360

ttgaatgcta ttgcttgtgc ttccgagacc tgtgccagga ttccaagctc caaggcaaat 420

acaccttttt ggataccaat acatatcttg atacctgagc gccctactga gtgtgcggtg 480

tttaatgttg tggcagactc tcctcgtgat tctgtccaat ttatcgaatg gtctcccact 540

tcttgtcctc gtgcgttact cattgctaat tttcatggac gtataactat ctggacgcag 600

cctactcagg gttcggctaa tttagtgcac gacgctacct cctggcagtg tgagcatgaa 660

tggcgtcagg acattgctgt tgttacaaag tggctgacag gggcttcccc atataggtgg 720

ttgtcctcca agccaagttc tggtacaaat gcaaagtcaa ctttcgagga gaaatttctc 780

tcgcagagct ctgaaagctc agctcggtgg cccaactttc tctgtgtatg ctctgttttc 840

tcatccggct ctgttcaaat tcattggtcc cagtggcctt ctaaccaggg aagcactgca 900

ccaaagtggt ttagtacaaa gaaaggtctt ttaggtgcag ggccaagtgg aattatggct 960

gctgatgcta ttataacaga cagtggtgcc atgcatgtag caggagttcc aattgtaaac 1020

ccttcaacaa ttgtagtatg ggaggtgacc cctggccctg gaaatggact ccaggcgact 1080

ccaaaaatct ctacaggcag tcgtgtgcca ccatccctta gttcttcttc ttggacaggt 1140

tttgctcctt tagctgcgta cttgtttagc tggcaagaat acttaatatc cgagataaag 1200

caagggaaga agccctcaga tcaagattcc agtgatgcta tatcgctaag ttgctcaccg 1260

gtttccaatt tttctgctta tgtaagtcca gaggctgcag ctcagtctgc agcaaccaca 1320

acatggggat ctggtgttac cgctgttgct tttgatccaa ctcgtggtgg ttcagtgata 1380

gcagttgtta tagttgaagg gcagtacatg tctccgtatg atccagatga aggtccttca 1440

atcacaggct ggagagtaca gcgctgggaa tcaagtgttc aacctgttgt actgcatcag 1500

atatttggaa acccaacttc aaattttgga ggacaggtcc ccacgcaaac tgtctgggta 1560

tccagagtgg atatgagcat accacctact aaagatttta agaatcatca agtagctgca 1620

gcaggaccaa gtgtggatgc accaaaggag cctgattctg gtgatgagaa ggctaacaag 1680

gttgtatttg atccttttga tttgccaagt gatattcgga cacttgcacg gattgtctat 1740

tctgctcatg gtggtgaaat tgcgattgct tttcttcgtg gtggagttca tatcttttct 1800

ggtccaactt tttcacctgt tgaaaactat caaataaatg ttggatctgc aattgctgca 1860

cccgcatttt caccaacaag ctgttgttcg gcttctgtat ggcatgatgc tgctaaggac 1920

tgcgcaatgt tgaaaatcat ccgtgttctt cctcctgctc ttccgcgtaa ccaatcaaag 1980

gttgatcaat caacatggga gcgggcgatc gctgagagat tctggtggag tcttttggtc 2040

ggagttgatt ggtgggatgc agttggctgc acacagagtg ctgcagagga tgggatagtt 2100

tcattgaaca gcgtgattgc tgtcatggat gctgattttc actcccttcc ttcaacacag 2160

cacagacaac aatatggccc taacctagat aggatcaaat gtcggttact tgaaggaacc 2220

aatgctcaag aggttcgtgc catggtttta gatatgcaag caaggttgtt gttggacatg 2280

cttggaaaag gtattgaatc agctcttgtg aatccttcgg cgttggtttt tgagccatgg 2340

cgagtagatg gggagacaat aacaggcatc aatccggagg caatggctgt tgatcctgct 2400

cttgtttcca gtattcaggc ttatgtggat gctgttcttg atcttgcttc tcatttcatc 2460

acacgtttaa ggcgttatgc gagtttttgt cggactcttg caagccatgc tgcttctgct 2520

ggaactggca gtaatcgcaa caatgttacc agtcccacac aaaatgcatc atctcctgca 2580

acacctcagg tttttcctga caagtcactg tatcttgcag taggtcaacc tactactact 2640

actactacta ctgctacgac aaactccagc ggaagctcac atgtgcaagc ttggatgcag 2700

ggggccatag cgaaaattag tagctcgaat gatggatcca actctactgc aagcccaatc 2760

agtggttcac ctaccttcat gccaataagc atcaatacag gaacatttcc aggaacacct 2820

gctgttcggc tcattgggga ttgtcatttc cttcatcggt tatgccagct gttgctcttc 2880

tgttttctcc agcggtcttc acgatttcca cagcgaaatg ctgatgttag ttcacaaaaa 2940

cttcaaacgg gggctaccag caaattggaa gaagtcaact ctgctaaacc aacccctgcc 3000

ttgaacagga tagaggacgc ccagggattc cggggtgccc agttgggtac tggagtgaaa 3060

gggattgatg aaaattctgc tcgtacaaca aagatgggtt ctgggaatgc cggtcaagga 3120

tatacttatg aggaggtgag agttcttttc catatactaa tggatctctg caagcgaaca 3180

tctggtcttg cgcatccctt acctggctct caggtaggta gtggaaacat tcaagttcga 3240

ctgcattata ttgatggaaa ttacactgtg ttacccgagg tggtagaagc ggctcttgga 3300

ccacatatgc agaacatgcc tcgcccaaga ggagctgatg ctgctggtct tctacttcgg 3360

gagttagagc ttcatccgcc ttccgaagaa tggcatagaa gaaatttatt tggtggtccc 3420

gggtcagagc ctgaggatat gatcttgaca gacgatgttt ccaagctgag taattcctta 3480

gatctgcctg atacaaactt ttccggaata tgtgatggat acaacagagt ccatagtctt 3540

tggccaagaa aacgcaggat gtctgaaaga gatgcagctt ttggttcaaa tacttctgtg 3600

ggtttgggtg catatcttgg gatcatgggt tctcgtaggg atgttgtgac cgcgacatgg 3660

aaaactggtc ttgaaggagt ttggtacaag tgcataagat gcctaaggca gacatctgca 3720

tttgcttcac caggtgccac taagcagcca aatccgaatg aacgagaaac ctggtggaca 3780

agtcgttggg tttattgctg ccccatgtgt ggtggaacgt gggtccgtgt tgtatag 3837

Claims (4)

1.拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因，其特征在于，所述MED14基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述MED16基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述基因具有增强植物抗旱性的功能。

2.一种含有权利要求1所述拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因的表达载体p35S：：MED16-YFP。

3.权利要求1所述的拟南芥中介体成员MED14和/或MED16基因在培育转基因抗旱植物中的应用。

4.权利要求2所述的表达载体在转化植物获得转基因抗旱植物中的应用。

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