CN112022871A - 金诺芬在制备用于治疗去势抵抗性***癌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了金诺芬在制备用于治疗去势抵抗性***癌药物中的应用，属于生物医药技术领域。本发明首次提出了一种利用Aura制备治疗CRPC药物，以及基于Enza和Aura药物联用的新策略，并进行了多角度、多层次的验证研究。金诺芬能用于治疗去势抵抗性***癌，并显著提高恩杂鲁胺的抑制去势抵抗性***癌作用，实现老药新用，可大大缩短药物发现到临床转化的时间，具有重要临床治疗意义。

Description

金诺芬在制备用于治疗去势抵抗性***癌药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及金诺芬在制备用于治疗去势抵抗性***癌药物中的应用。

背景技术

***癌(Prostate Cancer,PCa)已成为男性发病人数第二、死亡人数第五的肿瘤。在美国，男性发病率第一、死亡率仅次于肺癌；在中国，发病率低于欧美，但增长速度越来越快，对男性生存构成严重的威胁。雄激素剥夺治疗(Androgen deprivation therapy，ADT)是目前治疗晚期***癌病人最有效方法，对85％以上的患者有效，但通常经过18-24个月的中位时间后不可避免地进展为去势抵抗性***癌(Castration-resistantprostate cancer，CRPC)阶段。

多种治疗方式在尝试解决此问题，比如化疗：选用多西他赛、卡巴他塞、放射性药物镭223二氯化物等；雄激素受体(Androgen receptor，AR)通路抑制剂：恩杂鲁胺、阿比特龙等；以及处于试验阶段的PARP抑制剂：奥拉帕尼、EPI-001等。但最终也均难以彻底逆转CRPC。因此寻找有效的联合用药治疗策略是医药界研究的热点。联合用药，通过药物联用以降低单药用药剂量，同时由于药物作用机制各异，是一种克服耐药并降低毒副反应的有效方式，广泛应用于临床。但是联合用药的方案选择是非常不容易的。

EPI-001(EPI)是正在等待临床开发的、有可能用于治疗CRPC的AR及AR-剪接变体(AR-Vs)抑制剂。EPI抵抗CRPC的靶点主要针对N-末端结构域(NTD)，总所周知，NTD对于AR的转录活性是必需的，因此EPI-001与NTD结合，可以抑制AR及AR-Vs转录活性所必需的蛋白-蛋白相互作用、减少异种移植物中CRPC的生长、及阻止NTD反式激活。但EPI最终也难以彻底逆转CRPC。

恩杂鲁胺(Enzalutamide，Enza)是第一个获得批准的第二代AR拮抗剂，对AR亲和力较传统抗雄激素高5-8倍。2012年，美国FDA据此批准Enza用于CRPC患者。Enza具有三重机制：有效结合AR LBD以防止配体结合和AR激活；抑制AR易位进入细胞核；防止AR与DNA结合，从而有效抑制靶基因的转录。但Enza对CRPC的治疗最终会产生对药物的原发性或获得性耐药。急需其他手段去克服耐药，延缓CRPC，比如联合用药。

金诺芬(Auranofin，Aura)是一种金类衍生物，1985年被批准用于风湿性关节炎的治疗，其分子靶点为Peroxiredoxin-5,mitochondrial；Inhibitor of nuclear factorkappa-B kinas e subunit beta，作用机制尚未明确，可能作为kappab激酶和硫氧还蛋白还原酶抑制剂，从而减少免疫应答和自由基产物。近来研究发现金诺芬对多种肿瘤细胞，如卵巢癌细胞，血液性肿瘤细胞，肺癌细胞和肺Lewis肉瘤细胞，肝癌细胞和胶质母细胞瘤细胞，都具有细胞毒作用。但是金诺芬单用体内抗肿瘤效果不明显，不足以用于临床***，极需提高其疗效的方法。因此，寻找能与金诺芬联合用药的方案具有很大的应用价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有药物存在的耐药性，提供一种有效治疗CRPC的药物，即Aura，或者Aura和雄激素受体拮抗剂联用，实现对CRPC的疗效得到显著的提升，发挥优异的协同增效作用。

本发明的第一个目的是提供金诺芬在制备用于治疗去势抵抗性***癌药物中的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述应用包括：将金诺芬与药用辅料混合制备治疗去势抵抗性***癌药物。

本发明的另一目的是提供一种治疗去势抵抗性***癌药物，包括金诺芬、药用辅料。

在本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。

在本发明的一种实施方式中，所述制剂的剂型包括注射液、注射用冻干粉针、控释注射剂、脂质体注射剂、混悬剂、植入剂、栓塞剂、胶囊剂、片剂、丸剂和口服液。

在本发明的一种实施方式中，所述药物还可以包括药物载体。

在本发明的一种实施方式中，所述药物载体包括微囊、微球、纳米粒和脂质体。

本发明的第三个目的是提供一种金诺芬和雄激素受体拮抗剂联合在制备抗CRPC药物方面的应用。

本发明再一目的是提供一种抗CRPC的联用药物组合物，所述联用药物组合物包括：雄激素受体拮抗剂和金诺芬。

在本发明的一种实施方式中，雄激素受体拮抗剂与金诺芬质量比为(1～10)：1。

在本发明的一种实施方式中，雄激素受体拮抗剂包括如下任意一种或多种：恩杂鲁胺、EPI-001、阿比特龙、奥拉帕尼。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明经过大量的研究探索，找到了治疗CRPC的药物，即Aura，或者Enza和Aura。研究结果显示，通过建立耐EPI、Enza的***癌LNCaP-drug-tolerant persisters(L-DTP)细胞株，此时LNCaP细胞对EPI、Enza产生可恢复性的耐药，通过对此细胞模型进行蛋白质组学分析及DrugBank数据库匹配找到潜在联合用药方案，接着经药筛最终得到联合用药Enza和Aura可显著抑制细胞生长，通过CCK8细胞增殖分析对药物联用效果进行评估，并通过CI值确定其协同作用。同时构建C-MYC过表达***癌小鼠模型，比较动物体内Enza和Aura单用及联用的治疗CRPC作用差异，药物联用所产生的协同作用大大提高了单独Enza药物对CRPC的抑制作用，两者协同作用得到体内外验证。基于此，本发明进一步阐明Enza和Aura的协同作用机理，通过western blot发现，Enza和Aura联用显著抑制TXNRD、GPX4表达，使得CRPC细胞模型产生脂质过氧化损伤进而发生铁死亡，因此发挥协同抗肿瘤作用。因此，Enza和Aura联用在制备治疗CRPC药物方面的应用，应在本发明的保护范围之内。

其中优选地，Enza和Aura的质量比为1～2:1。

本发明通过建立L-DTP可恢复性耐药细胞株，采用CCK8方法及Calcusyn软件计算CI值，结果显示在此细胞株中，相比单独给Enza和Aura，Enza和Aura体外联用具有协同抗CRPC作用。通过建立C-MYC过表达***癌小鼠模型，在手术***抵抗和长期用药Enza产生抗性的条件下确定动物体内Enza和Aura联用组，较单药组，具有更显著的体内抗CRPC模型作用。最后，通过western blot检测发现Enza和Aura联用显著抑制TNXRD及GPX4表达，使得CRPC细胞模型产生脂质过氧化损伤进而发生铁死亡，因此发挥协同抗肿瘤作用。不仅从体内外验证Enza和Aura联用均具有明显的协同抗CRPC作用。还阐明了两者协同抗CRPC作用的机制，应用基础理论扎实。基于此，Enza和Aura联用可作为一种新的抗CRPC药物联用组合进行开发。

本发明具有以下有益效果：

本发明首次提出了一种利用Aura制备治疗CRPC药物，以及基于雄激素受体拮抗剂和Aura药物联用的新策略，并阐明其作用机制，将推动雄激素受体拮抗剂和Aura在***癌临床治疗中的应用，具有重要意义。

众所周知，药物研究从化合物分子到真正走上临床平均需8-10年的时间，且需要大量的人力物力支持，时间成本和经济成本巨大。本发明的方案可实现“老药新用”，可大大缩短药物发现到临床转化的时间。

附图说明

图1是***癌细胞系LNCaP分别对EPI-001(EPI)、Enzalutamide(Enza)的药物敏感性和IC50值变化趋势图；其中，图1A为不同浓度的EPI处理LNCaP细胞之后的量效曲线；图1B为不同浓度的Enza处理LNCaP细胞之后的量效曲线。

图2是耐EPI、Enza的***癌LNCaP-drug-tolerant persisters(L-DTP)细胞株的建立及相应生物检测图谱；其中，图2A为LNCaP-parent细胞及耐EPI的8个克隆细胞随EPI浓度增加的生存百分比曲线；图2B为L-parent细胞及耐Enza的8个克隆细胞随Enza浓度增加的生存百分比曲线；图2C为产生耐EPI、Enza的L-DTP细胞照片图及Giemsa染色图。

图3是EPI、Enza分别与Aura联合用药在L-DTP细胞中的体外药效图；其中，图3A为L-parent细胞、L-DTP-EPI、L-DTP-Enza细胞上联合用药细胞相对存活率折线图；图3B为EPI、Enza分别与Aura联用分别在L-DTP-EPI、L-DTP-Enza细胞上的CI值柱状图。

图4是Enza、Aura及其联合用药对C-MYC过表达***癌小鼠模型在***抵抗后联合用药***重量变化效果图；其中，图4A为随给药进行各组小鼠***重量变化图；图4B为剥取各组小鼠***拍照对比图；图4C为随给药进行各组小鼠体重变化图。

图5是Enza、Aura及其联合用药方案对C-MYC过表达***癌小鼠模型在***抵抗后联合用药作用效果图；其中，图5A为各组小鼠***组织切片的HE染色图；图5B为各组小鼠***组织切片的AR、C-MYC免疫组化图及阳性细胞量化柱状图。

图6是Enza、Aura及其联合用药对C-MYC过表达***癌小鼠模型在持续用药Enza产生抗性后联合用药***重量变化效果图；其中，图6A为随给药进行各组小鼠***重量变化图；图6B为剥取各组小鼠***拍照对比图；C图为随给药进行各组小鼠体重变化图。

图7是Enza、Aura及其联合用药方案对C-MYC过表达***癌小鼠模型在持续用药Enza产生抗性后联合用药作用效果图；其中，图7A为各组小鼠***组织切片的HE染色图；图7B为各组小鼠***组织切片的AR、C-MYC免疫组化图及阳性细胞量化柱状图。

图8是Enza、Aura及其联合用药方案对C-MYC过表达***癌小鼠模型在PCa阶段联合用药的作用；其中，图8A为随给药进行各组小鼠***重量变化图；图8B为剥取各组小鼠***拍照对比图；图8C为随给药进行各组小鼠体重变化图；图8D为各组小鼠***组织切片的HE染色图。

图9是Enza、Aura及其联合用药方案产生协同增效作用的机制研究；其中，图9A为GPX4、TXNRD蛋白表达量；图9B为铁死亡抑制剂Ferrostatin-1加入后的细胞存活率影响；图9C为WB检测小鼠***组织的GPX4蛋白表达量。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1细胞对EPI、Enza的药物敏感性实验

检测人***癌细胞LNCaP对EPI、Enza的药物敏感性。

1、实验方法：

LNCaP细胞铺96孔板，贴壁过夜之后，配制一系列从高到低浓度的EPI、Enza，并设置对照组，加入孔中，每个浓度设置3个复孔。在细胞培养箱中孵育48h之后，加入CCK8，4h后利用全波长多功能酶标仪检测450nm波长的细胞OD值，计算EPI、Enza作用于LNCaP细胞的IC50(half maximal inhibitory concentration)值。

2、结果如图1所示，图1中，A图为不同浓度的EPI处理LNCaP细胞之后的量效曲线；B图为不同浓度的Enza处理LNCaP细胞之后的量效曲线。

结果显示，LNCaP细胞Enza的敏感性较EPI更强，Enza的IC50值为50uM，EPI的IC50值为60uM。另外，可根据IC50值确定产生耐药细胞的用药浓度及单药组的用药浓度。

实施例2耐EPI、Enza的***癌LNCaP-drug-tolerant persisters(L-DTP)细胞株的建立

建立耐EPI、Enza的***癌LNCaP-drug-tolerant persisters(L-DTP)细胞株L-DTP-EPI、L-DTP-Enza，此时LNCaP细胞对EPI及Enza产生可恢复性的耐药，从而在细胞水平上模拟CRPC。

1、实验方法：

LNCaP细胞中在10cm皿中，贴壁过夜之后分别加入EPI(60uM)、Enza(50uM)处理细胞9天，每3天更换加药的新鲜培养基，之后这两种耐药细胞各取8个克隆，种在96孔板中贴壁后，配制一系列从高到低浓度的EPI、Enza，并设置对照组，加入孔中，每个浓度设置3个复孔。在细胞培养箱中孵育48h之后，加入CCK8，4h后利用全波长多功能酶标仪检测450nm波长的细胞OD值，计算EPI、Enza的浓度梯度分别作用于LNCaP-parental(L-parent)、EPI-clones、Enza-clones细胞的生存率。对应L-DTP细胞的染色：细胞用PBS洗三次后，甲醇固定，加吉姆萨染色液染色2min，后洗去染色液，晾干用倒置显微镜拍照。

2、结果如图2所示，图2中，A图为LNCaP-parent细胞及耐EPI的8个克隆细胞随EPI浓度增加的生存百分比曲线；B图为L-parent细胞及耐Enza的8个克隆细胞随Enza浓度增加的生存百分比曲线；C图为产生耐EPI、Enza的L-DTP细胞照片图及Giemsa染色图。

结果显示，形成L-DTP的单克隆细胞对EPI的IC50值达到了120uM，对Enza的IC50值达到了150uM的高浓度。形成的L-DTP细胞在形态上明显区别于L-parent细胞。

实施例3EPI、Enza分别与Aura药物联用作用。

进一步运用CCK8，在L-parent、L-DTP细胞中分别单用、联用，说明Aura药物在L-parent、L-DTP细胞中的体外抗肿瘤作用。

1、实验方法

将正常***癌细胞L-parent和耐药细胞L-DTP(包括L-DTP-EPI和L-DTP-Enza)种在96孔板中贴壁后，通过配制一系列从高到低的Aura药物的浓度，从而找到在L-parent细胞中单加Aura无生长抑制的最高浓度，每个浓度设置3个复孔，在细胞培养箱中孵育48h之后，加入CCK8，4h后利用全波长多功能酶标仪检测450nm波长的细胞OD值，计算Aura药物单加在L-parent细胞中的生存率。接着用此浓度联用【L-parent-combination(EPI+Aura)】、【L-parent-combination(Enza+Aura)】测定在L-parent细胞中的生存率。最后继续利用此浓度测定单用(L-DTP-Aura)、联用【L-DTP-EPI-combination(EPI+Aura)】、【L-DTP-Enza-combination(Enza+Aura)】分别在L-DTP中的生存率。最后利用Calcusyn软件，在L-DTP细胞中计算CI值。

2、结果如图3所示，图3中，A图为L-parent细胞、L-DTP-EPI、L-DTP-Enza细胞上联合用药细胞相对存活率折线图；B图为EPI、Enza分别与Aura联用分别在L-DTP-EPI、L-DTP-Enza细胞上的CI值柱状图。

结果显示，筛选Aura在L-parent细胞中无抑制作用的浓度，并应用于L-DTP，发现在持续加药EPI 9天产生耐药L-DTP-EPI细胞中，单加Aura可达到68.05％的抑制率，联用(EPT+Aura)可达到49.08％的抑制率；在持续加药Enza 9天产生耐药L-DTP-Enza细胞中，单加Aura可达到66.02％的抑制率，联用(Enza+Aura)可达到47.67％的抑制率。通过计算CI值，发现Aura在L-DTP-EPI细胞中可达到0.63的高协同作用；在L-DTP-Enza细胞可达到0.57的高协同作用。

实施例4Enza和Aura联合用药方案对C-MYC过表达***癌小鼠模型在***抵抗后联合用药的作用

进一步在***癌小鼠模型中说明去势抵抗(手术***后复发)的小鼠通过联合用药Enza和Aura后的效果。

1、实验方法

构建C-MYC(Hi-Myc)过表达的自发***癌小鼠模型，在6个月时，小鼠已经严重犯病，发展为Invasive cancer，此时麻醉小鼠并在无菌环境中结扎去掉双侧睾丸，做到去势，后常规饲养5个月，即鼠龄为11个月时小鼠***癌复发，此时将小鼠分为五组：NC对照组(没有***)、PC对照组(***抵抗后给予溶剂)、Enza单药组、Aura单药组以及Enza和Aura联合用药组，并进行相应给药处理，全部灌胃给药，每三天一次，Enza为10mg/Kg，Aura为6mg/Kg，共给药30天。之后断颈小鼠并取其***癌进行拍照、称重及免疫组化等实验。

2、结果如图4、图5所示，图4中，A图为随给药进行各组小鼠***重量变化图；B图为剥取各组小鼠***拍照对比图；C图为随给药进行各组小鼠体重变化图。图5种，A图为各组小鼠***组织切片的HE染色图；B图为各组小鼠***组织切片的AR、C-MYC免疫组化图及阳性细胞量化柱状图。

结果显示，在***后10周小鼠***重均值为13mg，在***5个月后小鼠***癌复发，引起CRPC，此时***重均值为35mg，之后分组用药说明联合用药效果。分组联用和单用结果显示，单用Enza及单用Aura均有治疗作用，***重分别可降为41.17mg、47.172mg；Enza和Aura联用相比于Enza单用、Aura单用有更显著的治疗作用，***重可降为30.37mg，从组织切片HE染色结果可以看出：联合用药后去势抵抗的***肿瘤有明显的退化和纤维化。从免疫组化可看出Enza和Aura联用相比于Enza单用、Aura单用有显著的AR及C-MYC表达量的下降，同时，单用Enza、单用Aura也有AR及C-MYC表达量的降低。

实施例5Enza和Aura联合用药方案对C-MYC过表达***癌小鼠模型在持续用药Enza产生抗性后联合用药的作用

进一步在***癌小鼠模型中说明化学***(即持续用药Enza)后复发的小鼠通过联合用药Enza和Aura后的效果。

1、实验方法

构建C-MYC(Hi-Myc)过表达的自发***癌小鼠模型，在4个月时，小鼠发展为mPIN/Cancer transition，此时随机分组为NC对照组(灌胃溶剂)、Enza用药组，后每三天一次灌胃，Enza为10mg/Kg，共给药30天，后部分小鼠断颈并取其***癌进行拍照、称重，发现Enza可明显减轻病症，***重相比于NC对照组降低一半，后按上述方法继续用药剩余的小鼠30天，发现Enza组有复发，之后(即鼠龄为6个月)随机分组为：NC对照组(一直灌胃溶剂)、Enza单药组、Aura单药组以及Enza和Aura联合用药组，并进行相应给药处理，全部灌胃给药，每三天一次，每次保持Enza为10mg/Kg，Aura为6mg/Kg，共给药30天。之后断颈小鼠并取其***癌经行拍照、称重及免疫组化等实验。

2、结果如图6和图7所示，图6中，A图为随给药进行各组小鼠***重量变化图；B图为剥取各组小鼠***拍照对比图；C图为随给药进行各组小鼠体重变化图。图7中，A图为各组小鼠***组织切片的HE染色图；B图为各组小鼠***组织切片的AR、C-MYC免疫组化图及阳性细胞量化柱状图。

在持续用药Enza 30天的小鼠***重均值为40mg，此时NC对照组均值为85mg，继续用药，达到60天后发现Enza组小鼠***重均值变78mg，此时NC对照组均值为99mg说明已耐药复发，引起CRPC，此时立即分组用药说明联合用药效果。

分组联用和单用结果如表1所示：

表1不同给药(用药30d)对耐药复发后的用药效果

给药	小鼠***重均值
		NC对照组	106.5mg
耐药复发后持续Enza单药组	87.24mg
		耐药复发后Aura单药组	72.21mg
耐药复发后Enza和Aura联合用药组	44.02mg

结合图6和表1可见，Enza和Aura联用相比于Enza单用和Aura单用均有极显著作用，***重可降为44.02mg左右，同时可看出Aura单用比Enza单用效果更好，Aura有可能成为潜在CRPC临床用药。

从组织切片HE染色结果(图7)可以看出：联合用药后CRPC的***肿瘤有明显的退化和纤维化。从免疫组化可看出Enza和Aura联用相比于Enza单用和Aura单用均有显著的AR及C-MYC表达量的下降，同时，单用Aura也有降低AR及C-MYC表达量的作用。证明联用效果比单用显著。

分组联用和单用结果见表2：

表2不同给药(用药30d)对耐药复发后的用药效果

实施例6Enza和Aura联合用药方案对C-MYC过表达***癌小鼠模型在PCa阶段联合用药的作用

进一步在***癌小鼠模型中说明在6个月龄自发形成***癌(ProstateCancer，PCa)的小鼠通过联合用药Enza和Aura后的效果。

1、实验方法

构建C-MYC(Hi-Myc)过表达的自发***癌小鼠模型，在6个月时，小鼠发展为PCa，此时随机分组为NC对照组(灌胃溶剂)、Enza单药组、Aura单药组以及Enza和Aura联合用药组，并进行相应给药处理，全部灌胃给药，每三天一次，Enza为10mg/Kg，Aura为6mg/Kg，共给药30天。之后断颈小鼠并取其***癌经行拍照、称重及免疫组化等实验。

2、结果如图8所示，图8中，A图为随给药进行各组小鼠***重量变化图；B图为剥取各组小鼠***拍照对比图；C图为随给药进行各组小鼠体重变化图；D图为各组小鼠***组织切片的HE染色图。

结果显示，用药30天后的小鼠***重均值分别为：NC对照组92.01mg，Enza单药组69.18mg、Aura单药组76.19mg，Enza和Aura联合用药组68.93mg，联合用药组相比Enza组并无明显差异，说明PCa阶段联合用药药效不明显。但是单独用药Enza和Aura，发现均有显著的***肿瘤缩小的效果，证明在小鼠***癌阶段，单独用药Enza和Aura均能不同程度的抑制***癌的发展。从组织切片HE染色结果可以看出：联合用药组和Enza单药组***肿瘤退化程度相当，说明联合用药效果不明显。联合用药在PCa阶段不能发挥协同增效作用。

实施例7Western Blot检测Enza和Aura联合用药方案产生协同增效作用的机制

为了研究联合用药促使耐药细胞产生生长抑制及死亡的机制。

1、实验方法

设置LNCaP细胞DMSO处理9天为NC对照组，加Enza处理9天产生L-DTP-Enza的耐药细胞为处理组，此处理组在第10天分别加入50uM Enza、0.5uM Aura+50uM Enza，刺激24h后将三组细胞收集，经细胞裂解、蛋白提取定量、SDS-PAGE电泳凝胶、转膜、封闭、孵育一抗、孵育二抗、显影后观察GPX4及TXNRD的蛋白表达量变化。同时，此三组细胞进行细胞增殖能力测定，选用CCK-8在OD450测定吸光度来表征细胞存活率。最后，加入铁死亡抑制剂Ferrostatin-1后观察是否可抑制细胞死亡。实施例5、6的小鼠***组织做WB实验，方法同上，检测GPX4的表达量变化。

2、结果如图9所示，图9中，A图为GPX4、TXNRD蛋白表达量；B图为铁死亡抑制剂Ferrostatin-1加入后的细胞存活率影响；C图为WB检测小鼠***组织的GPX4蛋白表达量。

结果显示，L-DTP-Enza的耐药细胞GPX4高表达，联合用药Aura可抑制TXNRD及GPX4的表达，从而引发铁死亡机制，导致CRPC的细胞死亡。当同时加入铁死亡抑制剂Ferrostatin-1后发现可回补Aura对L-DTP细胞的杀伤作用，从而抑制细胞死亡。正反面均说明此联合用药的协同增效机制是通过诱导脂质过氧化从而引发铁死亡机制所产生的。将实施例5、6的小鼠***组织进行WB分析，发现实施例5的PC组和Enza组GPX4蛋白高表达，而Aura及Enza+Aura组则表达量下降，说明产生去势抵抗的CRPC后GPX4蛋白表达量会显著升高，当用药Aura或联合用药Enza和Aura时均能降低GPX4的表达，导致细胞发生铁死亡；实施例6的Enza组GPX4蛋白高表达，而Aura及Enza+Aura组则表达量下降，说明产生对Enza耐药性抵抗的CRPC后GPX4蛋白表达量会显著升高，当用药Aura或联合用药Enza和Aura时均能降低GPX4的表达，导致细胞发生铁死亡。

Claims (10)

1.金诺芬在制备用于治疗去势抵抗性***癌药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括：将金诺芬与药用辅料混合制备治疗去势抵抗性***癌药物。

3.一种治疗去势抵抗性***癌药物，其特征在于，包括金诺芬、药用辅料。

4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述药用辅料包含任意一种或多种：抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂以及释放阻滞剂。

5.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述制剂的剂型包括口服片剂或口服胶囊。

6.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述药物还可以包括药物载体。

7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物载体包括微囊、微球、纳米粒或者脂质体。

8.金诺芬在与雄激素受体拮抗剂联合制备治疗去势抵抗性***癌药物方面的应用。

9.一种治疗去势抵抗性***癌的联用药物组合物，所述联用药物组合物包括：雄激素受体拮抗剂和金诺芬。

10.根据权利要求9所述的联用药物组合物，其特征在于，雄激素受体拮抗剂与金诺芬的质量比为(1～10)：1。

Images