CN111965267A - 一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法 - Google Patents

一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法。本发明利用衍生化顶空气相色谱法分析检测苯磺酸氨氯地平中芳基磺酸酯类，采用气相色谱法峰面积外标法测定碘化钠与苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸异丙酯衍生化反应生成的碘甲烷、碘乙烷、碘异丙烷来确定苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸异丙酯的含量，增加了药品的质量的可控性，是一种分离度好，专属性强、灵敏度高的测定其芳基磺酸酯类的方法，为苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质的检测提供了更直接、更稳定的分析方法。

Description

一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测 方法
技术领域
本发明属于药物质量检测技术领域，特别涉及一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法。
背景技术
苯磺酸氨氯地平(amlodipine besylate)化学名称为3-乙基-5-甲基-2-(2-氨乙氧甲基)-4-(2-氯苯基)-1,4-二氢-6-甲基-3,5-吡啶二羧酸酯苯磺酸盐，是第三代长效双氢吡啶类钙拮抗药，是心绞痛和高血压等心血管疾病治疗的常用临床药物。与其他同类型药物相比，该药具有有生物利用度高、口服吸收好、不受食物影响、服药量低、药效维持时间长等特点。目前，苯磺酸氨氯地平已被人们作为心绞痛和高血压临床治疗的一线药。芳基磺酸酯类苯磺酸甲酯(MBS)、苯磺酸乙酯(EBS)、苯磺酸异丙酯(IBS)为苯磺酸氨氯地平中可能存在的基因毒性杂质。
近几年基因毒性杂质成为人们关注的焦点，苯甲磺酸、甲磺酸等磺酸类物质与微量的低级醇在合成反应中生成芳基磺酸酯如苯磺酸甲酯(MBS)、苯磺酸乙酯(EBS)、苯磺酸异丙酯(IBS)，以及烷基磺酸酯如甲磺酸甲酯(MMS)、甲磺酸乙酯(EMS)、异丙基甲磺酸酯(IMS)、正丁基甲磺酸酯(NBMS)，这些物质可与DNA 发生烷基化反应，从而可能成为引发癌症的诱因，故这类物质作为一种潜在性基因毒性杂质，控制该类杂质的毒理学关注阈值(TTC)水平非常重要，欧洲医药评价署(EMEA)，美国食品和药物管理局(FDA)及国际药品注册协调会议(ICH)先后对该类基因毒性杂质做出严格的规定。
由于苯磺酸氨氯地平原料和制剂中芳基磺酸酯类的检测方法及限度还未有国家标准，有必要对样品中的苯磺酸甲酯(MBS)、苯磺酸乙酯(EBS)、苯磺酸异丙酯(IBS)的残留量进行检测，本方法采用碘化钠衍生化反应，通过检测碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷来确定苯磺酸甲酯(MBS)、苯磺酸乙酯(EBS)、苯磺酸异丙酯(IBS)的含量。
发明内容
本发明的目的在于提供一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法，该方法对苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺异丙酯各杂质专属性强、灵敏度高、方法精密度良好，溶液在24小时内稳定，检测灵敏快速、结果准确可靠，从而实现苯磺酸氨氯地平中芳基磺酸酯类的测定，实现其原料和制剂的质量控制。
所述的苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法为：利用衍生化顶空气相色谱法分析检测苯磺酸氨氯地平中芳基磺酸酯类，具体步骤为：
(1)供试品溶液的配制：用乙腈溶解样品，超声5-10min，定容后苯磺酸氨氯地平浓度为5-20mg/ml，优选10mg/ml，过滤；精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的配制：用乙腈分别配制浓度为0.5-2ug/ml，优选1ug/ml的苯磺酸甲酯对照品储备溶液、苯磺酸乙酯对照品储备溶液和苯磺酸异丙酯对照品储备溶液；分别精密量取各对比片储备溶液2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为对照品溶液；
(3)测量：分别取供试品溶液与对照品溶液依法顶空进样，采集色谱图以峰面积外标法计算结果；计算公式：Ci＝Cs*Ai/As；式中Ai为供试品中各杂质的峰面积；As为杂质对照品的峰面积；Cs为杂质对照品的浓度；Ci为供试品的浓度。
所述衍生化顶空气相色谱法采用的仪器设备为Agilent7890B气相色谱仪、Agilent7697A顶空进样器。
所述衍生化顶空气相色谱法的色谱条件如下：
色谱柱：以聚乙二醇PEG-20M交联聚合物为固定相的色谱柱；
柱温：起始温度为3555℃，优选40℃，维持10分钟，以每分钟10-25℃，优选20℃的速率升温至160℃，维持3分钟；
柱流速：1.0-3.0ml/min，优选1.5ml/min；
检测器：氢火焰离子化检测器，240-300℃，优选250℃；
进样口：分流或不分流，温度90-120℃，优选110℃；
分流比：20:1-1:1，优选10：1；
进样方式：顶空进样；
顶空条件：顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃，进样量1ml。
所述色谱柱为：Agilent DB-Wax，30m×0.320mm×0.5μm。
本方法的有益效果：本方法采用气相色谱法峰面积外标法测定碘化钠与苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸异丙酯衍生化反应生成的碘甲烷、碘乙烷、碘异丙烷来确定苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸异丙酯的含量，增加了药品的质量的可控性，是一种分离度好，专属性强、灵敏度高的测定其芳基磺酸酯类的方法，为苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质的检测提供了更直接、更稳定的分析方法。
附图说明
图1本发明实施例1溶剂的GC图。
图2本发明实施例1苯磺酸氨氯地平供试品溶液的GC图。
图3本发明实施例1芳基磺酸酯类对照品的GC图。
图4本发明实施例2芳基磺酸酯类对照品的GC图。
图5本发明实施例3芳基磺酸酯类对照品的GC图。
图6本发明实施例4芳基磺酸酯类对照品的GC图。
图7本发明实施例5芳基磺酸酯类对照品的GC图。
图8本发明实施例6芳基磺酸酯类对照品的GC图。
图9本发明实施例7芳基磺酸酯类对照品的GC图。
图10本发明实施例8溶剂的GC图。
图11本发明实施例8苯磺酸氨氯地平供试品溶液的GC图。
图12本发明实施例8对照品混合溶液的GC图。
图13本发明实施例8苯磺酸甲酯对照品溶液的GC图。
图14本发明实施例8苯磺酸乙酯对照品溶液的GC图。
图15本发明实施例8苯磺酸异丙酯对照品溶液的GC图。
图16本发明实施例8精密度试验对照品溶液的GC图。
图17本发明实施例8精密度试验对照品溶液的GC图。
图18本发明实施例8精密度试验对照品溶液的GC图。
图19本发明实施例8精密度试验对照品溶液的GC图。
图20本发明实施例8精密度试验对照品溶液的GC图。
图21本发明实施例8线性试验对照品溶液的GC图。
图22本发明实施例8线性试验对照品溶液的GC图。
图23本发明实施例8线性试验对照品溶液的GC图。
图24本发明实施例8线性试验对照品溶液的GC图。
图25本发明实施例8线性试验对照品溶液的GC图。
图26本发明实施例8线性试验对照品溶液的GC图。
图27本发明实施例8检测限试验对照品溶液的GC图。
图28本发明实施例8定量限试验对照品溶液的GC图。
图29本发明实施例8回收率试验加标(低浓度)供试品溶液的GC图。
图30本发明实施例8回收率试验加标(低浓度)供试品溶液的GC图。
图31本发明实施例8回收率试验加标(低浓度)供试品溶液的GC图。
图32本发明实施例8回收率试验加标(中浓度)供试品溶液的GC图。
图33本发明实施例8回收率试验加标(中浓度)供试品溶液的GC图。
图34本发明实施例8回收率试验加标(中浓度)供试品溶液的GC图。
图35本发明实施例8回收率试验加标(高浓度)供试品溶液的GC图。
图36本发明实施例8回收率试验加标(高浓度)供试品溶液的GC图。
图37本发明实施例8回收率试验加标(高浓度)供试品溶液的GC图。
图38本发明实施例8稳定性试验放置0小时对照品溶液的GC图。
图39本发明实施例8稳定性试验放置2小时对照品溶液的GC图。
图40本发明实施例8稳定性试验放置4小时对照品溶液的GC图。
图41本发明实施例8稳定性试验放置18小时对照品溶液的GC图。
图42本发明实施例8稳定性试验放置20小时对照品溶液的GC图。
图43本发明实施例8稳定性试验放置24小时对照品溶液的GC图。
图44本发明实施例8基因毒性杂质MBS线性试验线性关系图。
图45本发明实施例8基因毒性杂质EBS线性试验线性关系图。
图46本发明实施例8基因毒性杂质IBS线性试验线性关系图。
具体实施方式
实施例1：
(1)供试品溶液的配制：取样品适量，精密称定，用适量乙腈溶解，超声10min，定容后按苯磺酸氨氯地平计10mg/ml，过滤。精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的配制：取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈溶解稀释得苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯浓度均为1ug/ml的对照品贮备溶液。精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为对照品溶液；
分别取上述溶剂、供试品溶液、对照品溶液依法顶空进样，采集色谱图(如图1、2、3)，以峰面积外标法计算结果。
色谱条件如下：
色谱柱：以聚乙二醇(PEG-20M)交联聚合物为固定相，推荐：Agilent DB-Wax，30m×0.320mm×0.5μm；
柱温：起始温度为40℃，维持10分钟，以每分钟20℃的速率升温至160℃，维持3分钟；
柱流速：2.0ml/min；
进样口温度：分流/不分流，温度110℃；
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，250℃；
分流比：10：1
进样方式：顶空进样
顶空条件：顶空瓶平衡温度为80C，平衡时间为30分钟，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃，进样量1ml。
其中图1为空白溶剂乙腈的溶剂峰；图2为供试品溶液色谱峰；图3为对照品溶液，其中苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺异丙酯与碘甲烷衍生化反应得到的碘甲烷、碘乙烷、碘异丙烷保留时间分别为：2.967、3.915、4.419min.根据对照品溶液与供试品溶液的出峰时间确定苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺异丙酯存在，根据出峰面积确定供试品溶液中苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺异丙酯的含量。
实施例2：
对照品溶液的配制：取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈溶解稀释得苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯浓度均为1ug/ml的对照品贮备溶液。精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为对照品溶液；
分别取上述对照品溶液依法顶空进样，采集色谱图(对照品溶液如图4)，以峰面积外标法计算结果。
色谱条件如下：
色谱柱：以聚乙二醇(PEG-20M)交联聚合物为固定相，推荐：Agilent DB-Wax，30m×0.320mm×0.5μm；
柱温：起始温度为40℃，维持10分钟，以每分钟20℃的速率升温至160℃，维持3分钟；
柱流速：2.0ml/min；
进样口温度：分流/不分流，温度105℃；
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，250℃；
分流比：10：1
进样方式：顶空进样
顶空条件：顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃，进样量1ml。
实施例3：
对照品溶液的配制：取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈溶解稀释得苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯浓度均为1ug/ml的对照品贮备溶液。精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为对照品溶液；
分别取上述对照品溶液依法顶空进样，采集色谱图(对照品溶液如图5)，以峰面积外标法计算结果。
色谱条件如下：
色谱柱：以聚乙二醇(PEG-20M)交联聚合物为固定相，推荐：Agilent DB-Wax，30m×0.320mm×0.5μm；
柱温：起始温度为40℃，维持10分钟，以每分钟20℃的速率升温至160℃，维持3分钟；
柱流速：2.0ml/min；
进样口温度：分流/不分流，温度115℃；
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，250℃；
分流比：10：1
进样方式：顶空进样
顶空条件：顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃，进样量1ml。
实施例4：
对照品溶液的配制：取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈溶解稀释得苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯浓度均为1ug/ml的对照品贮备溶液。精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为对照品溶液；
分别取上述对照品溶液依法顶空进样，采集色谱图(对照品溶液如图6)，以峰面积外标法计算结果。
色谱条件如下：
色谱柱：以聚乙二醇(PEG-20M)交联聚合物为固定相，推荐：Agilent DB-Wax，30m×0.320mm×0.5μm；
柱温：起始温度为40℃，维持10分钟，以每分钟20℃的速率升温至160℃，维持3分钟；
柱流速：1.95ml/min；
进样口温度：分流/不分流，温度110℃；
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，250℃；
分流比：10：1
进样方式：顶空进样
顶空条件：顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃，进样量1ml。
实施例5：
对照品溶液的配制：取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈溶解稀释得苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯浓度均为1ug/ml的对照品贮备溶液。精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为对照品溶液；
分别取上述对照品溶液依法顶空进样，采集色谱图(对照品溶液如图7)，以峰面积外标法计算结果。
色谱条件如下：
色谱柱：以聚乙二醇(PEG-20M)交联聚合物为固定相，推荐：Agilent DB-Wax，30m×0.320mm×0.5μm；
柱温：起始温度为40℃，维持10分钟，以每分钟20℃的速率升温至160℃，维持3分钟；
柱流速：2.05ml/min；
进样口温度：分流/不分流，温度110℃；
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，250℃；
分流比：10：1
进样方式：顶空进样
顶空条件：顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃，进样量1ml。
实施例6：
对照品溶液的配制：取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈溶解稀释得苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯浓度均为1ug/ml的对照品贮备溶液。精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为对照品溶液；
分别取上述对照品溶液依法顶空进样，采集色谱图(对照品溶液如图8)，以峰面积外标法计算结果。
色谱条件如下：
色谱柱：以聚乙二醇(PEG-20M)交联聚合物为固定相，推荐：Agilent DB-Wax，30m×0.320mm×0.5μm；
柱温：起始温度为40℃，维持10分钟，以每分钟20℃的速率升温至160℃，维持3分钟；
柱流速：2.0ml/min；
进样口温度：分流/不分流，温度110℃；
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，245℃；
分流比：10：1
进样方式：顶空进样
顶空条件：顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃，进样量1ml。
实施例7：
对照品溶液的配制：取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈溶解稀释得苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯浓度均为1ug/ml的对照品贮备溶液。精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为对照品溶液；
分别取上述对照品溶液依法顶空进样，采集色谱图(对照品溶液如图9)，以峰面积外标法计算结果。
色谱条件如下：
色谱柱：以聚乙二醇(PEG-20M)交联聚合物为固定相，推荐：Agilent DB-Wax，30m×0.320mm×0.5μm；
柱温：起始温度为40℃，维持10分钟，以每分钟20℃的速率升温至160℃，维持3分钟；
柱流速：2.0ml/min；
进样口温度：分流/不分流，温度110℃；
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)，255℃；
分流比：10：1
进样方式：顶空进样
顶空条件：顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃，进样量1ml。
实施例8：方法学验证试验以实施例1为例，分别从专属性、精密度、线性、检测限和定量限、加样回收率、稳定性方面进行了方法学验证，结果如下：
(1)专属性
分别取乙腈、供试品溶液(苯磺酸氨氯地平)、对照品混合溶液(MBS、EBS、IBS)、MBS对照品溶液、EBS对照品溶液、IBS对照品溶液，依次进样。由结果表明(附图10-15)，溶剂与对照品混合溶液(MBS、EBS、IBS)分离良好，苯磺酸氨氯地平与各个杂质对照品不产生干扰，此方法专属性强。
(2)精密度
取对照品混合溶液(MBS、EBS、IBS)依法进样6次，计算精密度(见附图16-20)：
Figure BDA0002563539600000101
如表格所得：对照品混合溶液进样6次，MBS、EBS、IBS峰面积的相对偏差分别为7.6％、8.6％、6.1％，符合外标法计算要求，故该色谱条件精密度良好。
(3)线性
取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯和苯磺酸异丙酯各约50mg，精密称定，置100ml量瓶中，用乙腈溶解稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，为线性对照品储备液；取线性对照品储备液用乙腈稀释成约0.25ug/ml、0.5ug/ml、1.0ug/ml、1.25ug/ml、1.5ug/ml浓度系列溶液，各精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为系列对照品溶液，依法顶空进样，测得浓度线性关系(附图21～26)
结论：由图44～46可知基因毒性杂质MBS、EBS、IBS在浓度0.25ug/ml～1.5ug/ml范围内线性良好，R值分别为0.9937、0.9892、0.9898。
(4)检测限和定量限(附图27-28)
取对照品混合储备液用乙腈逐步稀释系列浓度溶液，各精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为系列对照品溶液，依法顶空进样，测得各基因毒性杂质检测限定量限如下表格：
杂质名称 检测限(ug/ml) 定量限(ug/ml)
苯磺酸甲酯 0.10 0.26
苯磺酸乙酯 0.10 0.24
苯磺酸异丙酯 0.10 0.24
(5)加样回收率
取对照品混合储备液，分别加入供试品中，制成低、中、高三种加标浓度溶液，依法测得结果(附图29～37)
Figure BDA0002563539600000111
结果表明，基因毒性杂质MBS、EBS、IBS在三种浓度下测得的加样回收率分别在88％～106％、87％～107％、84％～105％，符合气相顶空法回收率计算要求(80％～120％)，
证明该方法准确可控。
(6)溶液稳定性
取对照品混合溶液放置24小时，分别取不同时段内样品进样，结果如下(附图38-43)
Figure BDA0002563539600000121
由结果可知，基因毒性杂质MBS、EBS、IBS对照品溶液稳定性相对标准偏差分别为5.2％、8.2％、4.1％，溶液24小时稳定。

Claims (4)

1.一种苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法，其特征在于，利用衍生化顶空气相色谱法分析检测苯磺酸氨氯地平中芳基磺酸酯类，具体步骤为：
(1)供试品溶液的配制：用乙腈溶解样品，超声5-10min，定容后苯磺酸氨氯地平浓度为5-20mg/ml，优选10mg/ml，过滤；精密量取2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的配制：用乙腈分别配制浓度为0.5-2ug/ml，优选1ug/ml的苯磺酸甲酯对照品储备溶液、苯磺酸乙酯对照品储备溶液和苯磺酸异丙酯对照品储备溶液；分别精密量取各对比片储备溶液2ml置20ml顶空瓶中，精密加水3ml，碘化钠6g，密封，振荡摇匀，作为对照品溶液；
(3)测量：分别取供试品溶液与对照品溶液依法顶空进样，采集色谱图以峰面积外标法计算结果；计算公式：Ci＝Cs*Ai/As；式中Ai为供试品中各杂质的峰面积；As为杂质对照品的峰面积；Cs为杂质对照品的浓度；Ci为供试品的浓度。
2.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法，其特征在于，所述衍生化顶空气相色谱法采用的仪器设备为Agilent7890B气相色谱仪、Agilent7697A顶空进样器。
3.根据权利要求1所述的苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法，其特征在于，所述衍生化顶空气相色谱法的色谱条件如下：
色谱柱：以聚乙二醇PEG-20M交联聚合物为固定相的色谱柱；
柱温：起始温度为3555℃，优选40℃，维持10分钟，以每分钟10-25℃，优选20℃的速率升温至160℃，维持3分钟；
柱流速：1.0-3.0ml/min，优选1.5ml/min；
检测器：氢火焰离子化检测器，240-300℃，优选250℃；
进样口：分流或不分流，温度90-120℃，优选110℃；
分流比：20:1-1:1，优选10：1；
进样方式：顶空进样；
顶空条件：顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30分钟，定量环温度为90℃，传输线温度为100℃，进样量1ml。
4.根据权利要求3所述的苯磺酸氨氯地平中基因毒性杂质芳基磺酸酯类的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为：Agilent DB-Wax，30m×0.320mm×0.5μm。
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