CN107632078A

CN107632078A - 一种测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法

Info

Publication number: CN107632078A
Application number: CN201710693255.4A
Authority: CN
Inventors: 陈东英; 刘雪薇; 张文鹏
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date: 2017-08-14
Filing date: 2017-08-14
Publication date: 2018-01-26

Abstract

本发明涉及一种测定药物中的对甲苯磺酸甲酯含量的方法，具体涉及一种采用顶空衍生化气相色谱‑质谱联用法来检测药物中的对甲苯磺酸甲酯含量的方法。该衍生化方法采用含有维生素C和碘化钠的混合水溶液作为衍生化溶液，其适用的平衡温度和平衡时间范围广，灵敏度和精密度高、准确性强、耐用性好且操作方便，可实现药物中的对甲苯磺酸甲酯的准确测定，从而保证药物的安全性。

Description

一种测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种采用顶空衍生化气相色谱-质谱联用法来测定药物中的对甲苯磺酸甲酯含量的方法。

背景技术

基因毒性杂质是一种DNA反应性物质，能够造成DNA损伤从而引起突变，并且有可能对人产生致癌性。基于给药周期和毒理学安全角度，需要对基因毒性杂质予以特别关注。

磺酸酯是一种潜在的基因毒性杂质，它通常来源于低分子的醇与磺酸或磺酸卤化物的副反应，它的化学结构多样，包括甲磺酸酯如甲磺酸甲酯、乙酯、丙酯，苯磺酸酯如苯磺酸甲酯、乙酯、丙酯和对甲苯磺酸酯如对甲苯磺酸甲酯、乙酯和丙酯等等。

对甲苯磺酸甲酯在水相环境中容易水解，而且具有热不稳定的特性，容易在检测过程中发生分解。此外，在药物基质共存的条件下，还会出现对甲苯磺酸甲酯在线生成的现象。由于对甲苯磺酸甲酯容易在线分解和在线生成的化学活泼特性，不容易实现药物中对甲苯磺酸甲酯的准确测定。

发明内容

针对上述问题，本申请发明人基于对甲苯磺酸甲酯容易在线分解和在线生成的化学活泼特性，建立了一个简便的顶空衍生化气相色谱-质谱联用法，将对甲苯磺酸甲酯在线衍生转化为相应的挥发性物质从而实现检测。该衍生化方法的适用平衡温度和平衡时间范围广，可实现药物中对甲苯磺酸甲酯的准确检测。

本发明的目的是提供一种顶空衍生化气相色谱-质谱联用法，从而实现药物中对甲苯磺酸甲酯(一种基因毒性杂质)的含量测定。

本发明采用顶空衍生化气相色谱-质谱联用法检测药物中对甲苯磺酸甲酯的含量，其中采用含有维生素C和碘化钠的混合水溶液作为衍生化溶液。碘化钠的作用是将对甲苯磺酸甲酯衍生为碘甲烷，通过检测碘甲烷的含量来反映对甲苯磺酸甲酯的含量；维生素C起还原剂的作用，防止碘化钠被氧化。所述衍生化反应过程如下：

本发明提供了一种测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法，使用顶空衍生化气相色谱-质谱联用法进行检测，其中，衍生化溶液为含有维生素C和碘化钠的混合水溶液。

在本发明中，检测器采用质谱检测器，定量模式可选择离子监测(SIM)模式，以m/z127作为辅助定性离子、m/z 142作为对甲苯磺酸甲酯衍生产物碘甲烷的定量离子。

所述顶空衍生化气相色谱-质谱联用法采用顶空气相色谱-质谱联用仪进行检测，色谱柱可以采用中等极性色谱柱(如DB-624)或极性色谱柱(如DB-WAXetr)，检测过程中以35～45℃为起始柱温，保持1～5min，然后程序升温至50～100℃，再程序升温至色谱柱的最高使用温度，保持1～10min。

所述衍生化溶液的组成可以为每50mL溶液中含碘化钠50.5～60.5g，维生素C0.0005～0.005g。

具体地，本发明提供了一种测定对甲苯磺酸甲酯含量的方法，其包括如下步骤：

(1)准备每50mL溶液中含碘化钠50.5～60.5g，维生素C 0.0005～0.005g的混合水溶液作为衍生化溶液；

(2)准备乙腈与衍生化溶液体积比1:4～4:1的混合溶液作为空白溶液；

(3)准备浓度为0.25～1.0μg/mL的对甲苯磺酸甲酯的乙腈溶液；将对甲苯磺酸甲酯的乙腈溶液与衍生化溶液体积比1:4～4:1的混合溶液作为对甲苯磺酸甲酯衍生化对照溶液；

(4)将待测样品溶于乙腈与衍生化溶液体积比1:4～4:1的混合溶液，得到含0.005～0.1g/ml待测样品的供试品衍生化溶液；

(5)分别取等体积的空白溶液、对甲苯磺酸甲酯衍生化对照溶液和供试品衍生化溶液注入顶空气相色谱-质谱联用仪，按照外标法以扣除空白后的碘甲烷峰面积计算，得供试品衍生化溶液中对甲苯磺酸甲酯的含量。

其中，步骤(5)中等体积的空白溶液、对甲苯磺酸甲酯衍生化对照溶液和供试品衍生化溶液分别为1～5mL。

更为优选地，所述测定对甲苯磺酸甲酯含量的方法，包括如下步骤：

(1)准备每50mL水溶液中含碘化钠59.5～60.5g、维生素C 0.0006～0.0014g的混合水溶液作为衍生化溶液；

(2)准备乙腈与衍生化溶液体积比1:1的混合溶液作为空白溶液；

(3)准备浓度为0.5μg/mL的对甲苯磺酸甲酯的乙腈溶液；将该对甲苯磺酸甲酯的乙腈溶液与衍生化溶液以体积比1:1混匀得到浓度为0.25μg/mL的对甲苯磺酸甲酯衍生化对照溶液；

(4)将待测样品溶于乙腈与衍生化溶液体积比1:1的混合溶液，得到含0.01g/ml待测样品的供试品衍生化溶液；

在步骤(5)中，为达到气液平衡，各溶液需要在顶空气相色谱-质谱联用仪的顶空进样器中加热平衡一段时间，顶空进样器的平衡温度可选择40～80℃，平衡时间可选择10～90min。

附图说明

图1是空白溶液质谱图(m/z＝142)。

图2是对甲苯磺酸甲酯衍生化对照溶液质谱图(m/z＝142)。

图3是线性实验回归分析图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，需要说明的是下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。另外，如果没有明确说明，在实施例中采用的试剂均为市场上可以获得的。

实施例青蒿素类似物中对甲苯磺酸甲酯含量的测定

1、色谱条件

仪器：Agilent 7890B气相色谱仪-5977A质谱仪-7697A顶空进样器

色谱柱：DB-Waxetr(30m×0.32mm×0.50μm)

进样口温度：200℃

进样量：1000μL

分流比：50:1

载气：氦气(恒流2.0mL/min)

顶空条件：平衡温度70℃，定量环温度90℃，传输线温度130℃，平衡时间30min。

柱温：40℃保持1min，以10℃/min升温至100℃，然后以30℃/min升温至220℃，维持3min。

检测器：质谱检测器，离子源温度230℃，传输线温度250℃。

SIM模式(127，142)：m/z 127作为辅助定性离子、m/z 142作为对甲苯磺酸甲酯衍生化产物碘甲烷的定量离子。

2、实验步骤：

(1)精密称取碘化钠60.0g、维生素C 0.001g加纯水溶解并稀释至50mL，作为衍生化溶液；

(2)精密移取1mL乙腈与1mL衍生化溶液置于顶空瓶中，密闭摇匀，作为空白溶液；

(3)精密称取对甲苯磺酸甲酯0.025g，置于5mL容量瓶中，用乙腈溶解定容；继续用乙腈逐级稀释，得到浓度为0.50μg/mL的对甲苯磺酸甲酯溶液；移取1mL对甲苯磺酸甲酯溶液与1mL衍生化溶液于20mL顶空瓶，得到浓度为0.25μg/mL的对甲苯磺酸甲酯衍生化对照溶液；

(4)精密称取青蒿素类似物样品0.02g置于20mL顶空瓶中，加入1mL乙腈与1mL衍生化溶液，密闭摇匀，得供试品衍生化溶液；

(5)分别将空白溶液、对甲苯磺酸甲酯衍生化对照溶液和供试品衍生化溶液于顶空气相色谱-质谱联用仪，按照外标法以扣除空白后碘甲烷的峰面积计算供试品衍生化溶液中对甲苯磺酸甲酯的残留量。

图1是空白溶液质谱图(m/z＝142)。图2是对甲苯磺酸甲酯衍生化对照溶液质谱图(m/z＝142)。结果显示供试品衍生化溶液中未检出对甲苯磺酸甲酯。

色谱方法的方法验证

1.线性和范围

将对照品浓溶液用乙腈逐级稀释，得到浓度为5μg/mL的对甲苯磺酸甲酯储备液；继续逐级稀释对甲苯磺酸甲酯储备液，得到浓度分别为0.008μg/mL、0.15μg/mL、0.30μg/mL、0.40μg/mL、0.50μg/mL、0.60μg/mL和0.70μg/mL的一系列线性溶液。分别移取1mL上述线性溶液与1mL衍生化溶液于6个20mL顶空瓶，密闭摇匀，得到浓度分别为0.004μg/mL、0.075μg/mL、0.15μg/mL、0.20μg/mL、0.25μg/mL、0.30μg/mL和0.35μg/mL的对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液。另外移取1mL乙腈与1mL衍生化溶液于顶空瓶，密闭摇匀，作为空白溶液。分别将对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液与空白溶液注入色谱***，以m/z＝142作为定量离子，经扣除空白，分别计算对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液相应的碘甲烷峰面积(下述实验结果均为扣除空白所得)。以对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液的浓度(μg/mL)为横坐标(X)，以碘甲烷峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归。结果表明对甲苯磺酸甲酯在0.004μg/mL～0.35μg/mL范围内，峰面积与浓度呈现良好的线性关系，回归方程为Y＝42010X-144.82，R²＝0.9997。线性实验回归分析图见图3。

2.重复性

平行配制6份浓度为0.25μg/mL的对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液，连续测定，分别记录质谱图。实验数据显示，6份对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液碘甲烷峰面积的相对标准偏差为0.37％，由此表明该方法的重复性良好。

3.中间精密度

第一天平行配制6份浓度为0.25μg/mL的对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液，第二天和第三天均平行配制三份，依照上述测定方法进行检测，结果显示12份对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液碘甲烷峰面积的相对标准偏差为1.32％，由此表明该方法的中间精密度良好。

4.回收率

精密称取待测样品约0.02g于20mL顶空瓶，分别加入浓度为0.40μg/mL、0.50μg/mL、0.60μg/mL的对甲苯磺酸甲酯线性溶液各1mL，并分别与1mL衍生化溶液进行混合，密闭摇匀，配制成以25ppm为检测关注浓度的80％、100％和120％的溶液。每个浓度平行配制三份，作为回收率测试溶液。按外标法以m/z＝142碘甲烷峰面积计算回收率，计算结果如下表所示。可以看到回收率接近100％，由此表明本方法回收率良好。

表1回收率测试结果

5.耐用性

取浓度为0.25μg/mL的对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液，通过微小改变起始柱温(+2℃)和载气流速(+0.2mL/min)来评估测定方法的耐用性。结果显示起始柱温和载气流速的微小变动不影响对甲苯磺酸甲酯的测定结果，所测得的碘甲烷峰面积相对标准偏差为1.14％，由此表明方法的耐用性良好。

6.检测限

逐级稀释对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液，记录质谱图，当信噪比(S/N)约为2～3时，此时的浓度为最低检测浓度。最低检测浓度为1ng/mL。

7.定量限

逐级稀释对甲苯磺酸甲酯线性衍生化溶液，记录质谱图，当信噪比(S/N)约为10～15时，此时的浓度为最低定量浓度。最低定量浓度为4ng/mL。方法学验证结果总结见下表2。

表2方法学验证结果总结

Claims

1.一种测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法，使用顶空衍生化气相色谱-质谱联用法进行检测，其特征在于：衍生化溶液为含有维生素C和碘化钠的混合水溶液。

2.根据权利要求1所述测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法，其特征在于：衍生化溶液的组成为每50mL溶液中含碘化钠50.5～60.5g，维生素C 0.0005～0.005g。

3.根据权利要求1所述测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求3或4所述测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法，其特征在于：步骤(5)中等体积的空白溶液、对甲苯磺酸甲酯衍生化对照溶液和供试品衍生化溶液分别为1～5mL。

6.根据权利要求3或4所述测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步骤(5)中，平衡温度为40～80℃，平衡时间为10～90min。

7.根据权利要求3或4所述测定药物中对甲苯磺酸甲酯的方法，其特征在于：检测器采用质谱检测器。