CN111925973B - 一株荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌及其在防治荔枝炭疽病和荔枝霜疫病中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物病害生物防治技术领域，公开了一株荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌及其在防治荔枝炭疽病和荔枝霜疫病中的应用。该菌株名称为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)SZPT16，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏号为GDMCC No:61168，保藏时间为2020年8月25日。本发明菌株来源于荔枝内生细菌，该菌株及其生物制剂均对荔枝炭疽病菌和荔枝霜疫霉病菌具有强烈的抑制作用，具有优异的生防作用；且来源环保无毒性，对荔枝的食用及其加工产品更加安全可靠，具有很好的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明属于植物病害生物防治技术领域，特别涉及一株荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌及其在防治荔枝炭疽病和荔枝霜疫病中的应用。
背景技术
荔枝(Litchi chinensis Sonn)是重要的亚热带经济作物，果实味佳、色美、营养丰富，素有“中华之珍果”的美称，其经济价值高，是我国在国际市场上最有竞争力的果品之一。荔枝生产上的两大重要病害炭疽病和霜疫病严重影响了荔枝的产量和质量，荔枝炭疽病主要由暹罗炭疽菌Colletotrichum siamense引起，荔枝霜疫病由荔枝霜疫霉Peronophythora litchii引起。然而目前，生产上对这两种病害的控制主要以化学药剂防治为主，大量化学农药的使用不仅破坏生态环境，降低果品品质，提升病原菌抗药性等诸多问题。为探寻安全、有效的荔枝病害防治方法，利用生防微生物防治的方法可有效弥补化学防治的不足。
植物内生细菌长期与植物互惠共生，定殖在植物细胞间隙或细胞内，能够有效克服根际细菌定殖力差的缺陷。作为一种新的微生物资源，因植物内生细菌***的分布于植物体内，生存环境良好，更易发挥生防效果，在生物防治、生物降解及促进植物生长领域有良好的应用前景。伯克霍尔德菌物种对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)等病原菌引起的植物病害均有显著防效。专利(CN201510315978.1)公布了一株野生稻内生唐菖蒲伯克霍尔德菌能有效抑制水稻纹枯病菌、小麦赤霉病菌、车前草核盘病菌等。伯克霍尔德菌属的细菌广泛分布于植物体内和根际土壤中，一些伯克霍尔德菌物种已经与其植物宿主互惠共生。因此，从荔枝中分离筛选得到的对荔枝病原菌有拮抗作用的内生细菌，回接于宿主植物，更易定殖生效，为荔枝病害的绿色防控和荔枝产业的良性发展提供科学基础和技术支持。
发明内容
为了克服上述现有技术防治荔枝炭疽病和霜疫病的缺点与不足，开发唐菖蒲伯克霍尔德菌的应用，本发明的首要目的在于提供一株以荔枝内生微生物为筛选对象，分离得到的对荔枝炭疽病菌和霜疫霉病菌有显著抑制作用的荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌，命名为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)SZPT16，为荔枝炭疽病和霜疫病的生物防治奠定基础；另外，本发明从荔枝枝条筛选到的拮抗内生菌，与荔枝长期互作共生，将其用于荔枝病害的防治，对荔枝的食用及其加工产品来说安全可靠。
本发明另一目的在于提供一种基于上述荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌制备得到的生物制剂。
本发明又一目的在于提供上述荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌在防治荔枝炭疽病和霜疫病中的应用。
本发明的目的通过下述方案实现：
一株荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌，将其命名为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)SZPT16，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏号为GDMCC No:61168，保藏时间为2020年8月25日。
所述的荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌在LB培养基上28℃培养24h，菌落呈乳脂色，湿润光滑。
一种生物制剂，基于上述荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌制备得到。
所述的生物制剂由上述荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌经液体发酵制备得到，优选包含以下步骤：将上述荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌接种至LB液体培养基中培养即可获得生物制剂。
所述LB液体培养基的pH值为6.8-7.0。
所述的培养指在28-30℃，摇床震荡速率为180-200rpm下培养24h。
本发明还提供上述生物制剂在防治荔枝炭疽病中的应用。
本发明还提供上述生物制剂在防治荔枝霜疫病中的应用。
本发明还提供上述荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌在防治荔枝炭疽病中的应用。
本发明还提供上述荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌在防治荔枝霜疫病中的应用。
本发明的荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌来源于荔枝内生细菌，对人体和荔枝健康安全。本发明的荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌及其生物制剂均对荔枝炭疽病菌和霜疫霉病菌具有强烈的抑制作用，具有优异的防治荔枝炭疽病和霜疫病的生防作用，而且该生物来源环保无毒性，将其喷施到荔枝表面用于荔枝炭疽病和霜疫病的防治，对生态环境影响小，对荔枝的食用及其加工产品来说更加安全可靠；培养条件要求低，具有很好的开发应用前景。
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：
1、本发明得到的唐菖蒲伯克霍尔德菌来源于荔枝枝条的内生细菌，对人体和荔枝健康安全；将其用于荔枝炭疽病和霜疫病的防治，对荔枝的食用及其加工产品来说更加安全可靠；
2、本发明的唐菖蒲伯克霍尔德菌及其生物制剂均对荔枝炭疽病菌和霜疫霉病菌具有强烈的抑制作用，具有优异的防治荔枝炭疽病和霜疫病的生防作用，而且该生物来源环保无毒性，对生态环境影响小；
3、本发明得到的唐菖蒲伯克霍尔德菌，培养条件要求低，具有很好的开发应用前景。
附图说明
图1为唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16在LB培养基上的单菌落图。
图2为唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16与荔枝炭疽病菌的平板对峙培养，其中T为荔枝炭疽病菌(Colletotrichum siamense)，a为空白对照，b为实验组。
图3为唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16与荔枝霜疫霉的平板对峙培养，其中F为荔枝霜疫霉病菌(Peronophythora litchii)，a为空白对照，b为实验组。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例中涉及的试剂均可从商业渠道获得。
实施例1：荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌的分离、纯化和保藏
(1)LB培养基的配置：称取胰蛋白胨(Tryptone，Oxoid LTD LP0042，England)10g，酵母提取物(Yeast extract，Oxoid LTD LP0021，England)5g，氯化钠(NaCl，国药集团化学试剂有限公司，10019318)10g，加水1000mL搅拌均匀，再加15g琼脂，充分加热溶解后分装，121℃灭菌20min后贮存备用。LB液体培养基的制备除不加琼脂，其他与LB固体培养基的配方相同，将称得的药剂充分溶解后分装于锥形瓶(每瓶100mL)，加塞、包扎，121℃灭菌20min，冷却后贮存备用。
(2)荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌的分离、纯化：
2019年6月在深圳西丽果场荔枝基地采集样品，采集的样品迅速装入塑料袋中于4℃下带回实验室进行分离。
剪取枝条组织块，用70％酒精浸1min，3％的次氯酸钠浸3-5min，无菌水清洗3次。(取最后一次清洗的溶液0.1mL涂LB培养基，或取0.1mL最后一次清洗液加入LB液体培养基，30℃振荡培养，若48h后无微生物生长则认为表面消毒干净)。取表面消毒后的组织块在LB平板上培养，定时观察菌落生长情况，然后采用平板划线法，纯化分离得到的菌株，-80℃，30％甘油保存备用。
将纯化得到的菌株进行16S rDNA序列分析，其中一株分离自荔枝枝条的菌株序列(如下所示)与GenBank中登陆号为AY268163的Burkholderia gladioli同源性达99.72％，证实其分类命名为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)，命名为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)SZPT16。序列片段如下：
CTGACGGCATGCTTAACATGCAGTCGAACGGCAGCACGGGTGCTTGCACCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACATGTCCTGTAGTGGGGGATAGCCCGGCGAAAGCCGGATTAATACCGCATACGATCTACGGATGAAAGCGGGGGACCTTCGGGCCTCGCGCTATAGGGTTGGCCGATGGCTGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCCACCAAGGCGACGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGtGAAGAaGgCcTtCGGGtTGTAAAGCACTTTtGTCCGGAAaGAAaTCcTGAgGGCTAATATCCTTCGGGGATGACGGTACCGGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTTTGTTAAGACCGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTGGTGACTGGCAAGCTAGAGTATGGCAGAGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCCCCTGGGCCAATACTGACGCTCATGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAACTAGTTGTTGGGGATTCATTTCCTTAGTAACGTAGCTAACGCGTGAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGAAAAACCTTACCTACCCTTGACATGGTCGGAATCCTGGAGAGATCCGGGAGTGCTCGAAAGAGAACCGATACACAGgTGCTGCATgGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCTACGCAAGAGCACTCTAGGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGTAGGGCTTCACACGTCATACAATGGTCGGAACAGAGGGTCGCCAACCCGCGAGGGGGAGCTAATCCCAGAAAACCGATCGTAGTCCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTTTACCAGAAGTGGCTAGTCTAACCGCAAGGAGGACGGTCACCACGGTAGATAG
唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16在LB培养基上28℃培养，培养24小时，菌落呈乳脂色，湿润光滑。(见图1)。
(3)唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16的保藏：将该菌株于2020年8月25日，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏号为GDMCC 61168。
实施例2：对峙培养法测定唐菖蒲伯克霍尔德菌的活性
(1)LB培养基、LB液体培养基的制备同实施例1；
(2)PDA培养基的制备：称取200g马铃薯，切条煮沸后用16层纱布过滤，滤液补足水分至1000mL，再加15g琼脂，充分加热溶解后分装于锥形瓶(每瓶200mL)，121℃灭菌20min，冷却后贮存备用。
(3)PDA+胡萝卜培养基的制备：称取200g胡萝卜，用榨汁机充分榨汁后用16层纱布过滤，滤液补足水分至1000mL，再加15g琼脂，充分加热溶解后于上述制备的PDA培养基等体积混合，而后分装于锥形瓶(每瓶200mL培养液)，121℃灭菌20min，冷却后贮存备用。
(4)唐菖蒲伯克霍尔德菌单菌落的制备：将唐菖蒲伯克霍尔德菌划线接种至LB培养基平板上活化培养24h后，挑取单菌落进行划线保存。
(5)荔枝炭疽病原菌株的活化培养：将保存于4℃中的荔枝炭疽菌株接种至PDA培养基平板上活化，待真菌长满平板后用灭菌的打孔器从菌落外边缘均匀的打成直径为5mm的圆形菌饼。
(6)荔枝霜疫霉病原菌株的活化培养：将保存于20℃中的荔枝霜疫霉菌株接种至PDA+胡萝卜培养基平板上活化，待真菌长满平板后用灭菌的打孔器从菌落外边缘均匀的打成直径为5mm的圆形菌饼。
(7)唐菖蒲伯克霍尔德菌对荔枝炭疽病菌生长的抑制作用测定：将步骤(5)得到的菌饼接种至PDA培养基平板距边缘25mm处，在其对方向约50mm处接种步骤(4)活化的待测唐菖蒲伯克霍尔德菌菌株，以不接种唐菖蒲伯克霍尔德菌为对照，4个重复，置于25℃下恒温培养7d。在处理组中，测量炭疽病菌菌饼边缘至荔枝内生细菌线中心之间荔枝炭疽病菌的生长半径为处理生长半径；在对照组中，荔枝炭疽病菌的生长半径为对照生长半径。最后，根据以下公式，计算抑菌率。
抑制率(％)＝(对照生长半径-处理生长半径)/对照生长半径×100
(8)唐菖蒲伯克霍尔德菌对荔枝霜疫霉生长的抑制作用测定：将步骤(6)得到的菌饼接种至PDA+胡萝卜培养基平板距边缘25mm处，在其对方向约50mm处接种步骤(4)活化的待测唐菖蒲伯克霍尔德菌菌株，以不接种唐菖蒲伯克霍尔德菌为对照，4个重复，置于25℃下恒温培养7d。在处理组中，测量荔枝霜疫霉菌饼边缘至荔枝内生细菌线中心之间荔枝霜疫霉的生长半径为处理生长半径；在对照组中，荔枝霜疫霉的生长半径为对照生长半径。最后，根据以下公式，计算抑菌率。
抑制率(％)＝(对照生长半径-处理生长半径)/对照生长半径×100
(9)结果分析：由图2可知，荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16对荔枝炭疽病菌的生长具有明显的抑制作用，通过对峙培养法得到唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16对荔枝炭疽病菌的抑制率为52.9％。
(10)结果分析：由图3可知，荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16对荔枝霜疫霉病菌的生长具有明显的抑制作用，通过对峙培养法发现唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16对荔枝霜疫霉病菌的抑菌制率为61.1％。
实施例3：室内条件下荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16防治荔枝炭疽病和霜疫病
(1)LB培养基、LB液体培养基的制备同实施例1。PDA培养基、PDA+胡萝卜培养基的制备同实施例2。
(2)种子菌液的培养：将荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16接种到LB液体培养基中，于28℃下200rpm振荡培养24h培养，16h后在超净工作台中每隔3h取样测600nm处的OD值，测定过程中以未接菌的培养液来调零，直到种子菌液OD值均在0.5-0.8之间时结束培养，获得种子菌液；
(3)唐菖蒲伯克霍尔德菌菌悬液(生物制剂)的制备：将步骤(2)制得的种子菌液以1：500体积比于LB液体培养基中发酵培养，28℃下200rpm振荡培养36h，获得生防菌剂，活菌浓度为2-3×107-108CFU/mL。
(4)荔枝炭疽病菌孢子悬浮液的制备：荔枝炭疽病菌的培养同实施例2步骤(5)，培养9d后，在平板中加入无菌水冲洗配制成孢子悬浮液，浓度为105个/mL。
(5)荔枝霜疫霉病菌孢子囊悬浮液的制备：荔枝霜疫霉病菌的培养同实施例2步骤(6)，培养7d后，在平板中加入无菌水冲洗孢子囊配制成孢子囊悬浮液，浓度为104个/mL。
(6)唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16对荔枝炭疽病的室内防效评价：挑取成熟度一致、大小均匀的健康荔枝果实(品种“妃子笑”，来自广东深圳西丽果场的健康“妃子笑”果实，成熟度约为85％)，在流水中冲洗干净后，晾干。对健康荔枝果实进行如下处理：A组将步骤(3)制得的唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16菌悬液(生物制剂)喷雾果实；B组(对照组)利用同等稀释倍数的LB液体培养基喷雾果实。每处理设3个重复，每个重复处理30颗果实，菌液和对照组每个处理(3个重复)喷施300mL。喷雾处理24h后，喷雾接种步骤(4)制得的荔枝炭疽病菌孢子悬浮液，在平均温度25℃、相对湿度80％的条件下培养5d后开始调查病情指数，计算生防效果，结果见表1。
(7)病害调查方法：0级：无病症；1级：接种点有轻微病斑，坏死面积5％以下；3级：坏死面积5％-10％；5级：坏死面积10％-25％；7级：坏死面积25％-50％；9级：坏死面积超过50％。病情指数和生防效果统计计算方法：病情指数(％)＝∑(病级数×该病级果数)/(最高病级×总果数)×100；生防效果(％)＝(对照病情指数-处理组病情指数)/对照病情指数×100。
(8)结果分析：由表1可知，唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16生物制剂处理过的荔枝果实的病情指数比只接荔枝霜疫霉病菌的对照低，对荔枝果实均表现较好防效，平均防效达到56.54％，表明本发明的唐菖蒲伯克霍尔德菌生物制剂对荔枝采后炭疽病具有明显的防治作用。同时，以仅接有生防唐菖蒲伯克霍尔德菌生物制剂、不喷雾荔枝炭疽病菌孢子悬浮液的处理进行对照观察，其并不会引起荔枝发病，说明唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16菌株不是荔枝的病原菌，可以作为防治荔枝炭疽病的采后施用菌株。
表1唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16对荔枝果实炭疽病室内防治效果
| SZPT16 | 对照 | |
| 病情指数(％) | 31.52±1.35 | 72.54±1.34 |
| 防效(％) | 56.54 | -- |
(9)唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16对荔枝霜疫病的室内防效评价：荔枝果实的来源及生防菌处理同步骤(6)。喷雾处理24h后，喷雾接种步骤(5)制得的荔枝霜疫霉病菌孢子囊悬浮液，在平均温度25℃、相对湿度80％的条件下培养48h后开始调查病情指数，计算生防效果，结果见表2。
(10)病害调查方法：0级：无病症；1级：接种点有轻微病斑，坏死面积5％以下；3级：坏死面积5％-10％；5级：坏死面积10％-25％；7级：坏死面积25％-50％；9级：坏死面积超过50％。病情指数和生防效果统计计算方法：病情指数(％)＝∑(病级数×该病级果数)/(最高病级×总果数)×100；生防效果(％)＝(对照病情指数-处理组病情指数)/对照病情指数×100。
(11)结果分析：由表2可知，唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16生物制剂处理过的荔枝果实的病情指数比只接荔枝霜疫霉病菌的对照低，对荔枝果实均表现较好防效，平均防效达到71.21％，表明本发明的唐菖蒲伯克霍尔德菌生物制剂对荔枝采后霜疫病具有明显的防治作用。
表2唐菖蒲伯克霍尔德菌SZPT16对荔枝果实霜疫病室内防治效果
| SZPT16 | 对照 | |
| 病情指数(％) | 24.62±2.43 | 85.52±2.89 |
| 防效(％) | 71.21 | -- |
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 深圳职业技术学院
<120> 一株荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌及其在防治荔枝炭疽病和荔枝霜疫病中的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1431
<212> DNA
<213> 唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)
<220>
<223> 唐菖蒲伯克霍尔德菌（Burkholderia gladioli）SZPT16的16S rDNA序列
<400> 1
ctgacggcat gcttaacatg cagtcgaacg gcagcacggg tgcttgcacc tggtggcgag 60
tggcgaacgg gtgagtaata catcggaaca tgtcctgtag tgggggatag cccggcgaaa 120
gccggattaa taccgcatac gatctacgga tgaaagcggg ggaccttcgg gcctcgcgct 180
atagggttgg ccgatggctg attagctagt tggtggggta aaggcccacc aaggcgacga 240
tcagtagctg gtctgagagg acgaccagcc acactgggac tgagacacgg cccagactcc 300
tacgggaggc agcagtgggg aattttggac aatgggcgaa agcctgatcc agcaatgccg 360
cgtgtgtgaa gaaggccttc gggttgtaaa gcacttttgt ccggaaagaa atcctgaggg 420
ctaatatcct tcggggatga cggtaccgga agaataagca ccggctaact acgtgccagc 480
agccgcggta atacgtaggg tgcgagcgtt aatcggaatt actgggcgta aagcgtgcgc 540
aggcggtttg ttaagaccga tgtgaaatcc ccgggctcaa cctgggaact gcattggtga 600
ctggcaagct agagtatggc agaggggggt agaattccac gtgtagcagt gaaatgcgta 660
gagatgtgga ggaataccga tggcgaaggc agccccctgg gccaatactg acgctcatgc 720
acgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccc taaacgatgt 780
caactagttg ttggggattc atttccttag taacgtagct aacgcgtgaa gttgaccgcc 840
tggggagtac ggtcgcaaga ttaaaactca aaggaattga cggggacccg cacaagcggt 900
ggatgatgtg gattaattcg atgcaacgcg aaaaacctta cctacccttg acatggtcgg 960
aatcctggag agatccggga gtgctcgaaa gagaaccgat acacaggtgc tgcatggctg 1020
tcgtcagctc gtgtcgtgag atgttgggtt aagtcccgca acgagcgcaa cccttgtcct 1080
tagttgctac gcaagagcac tctagggaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg 1140
atgacgtcaa gtcctcatgg cccttatggg tagggcttca cacgtcatac aatggtcgga 1200
acagagggtc gccaacccgc gagggggagc taatcccaga aaaccgatcg tagtccggat 1260
tgcactctgc aactcgagtg catgaagctg gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc 1320
gcggtgaata cgttcccggg tcttgtacac accgcccgtc acaccatggg agtgggtttt 1380
accagaagtg gctagtctaa ccgcaaggag gacggtcacc acggtagata g 1431
Claims (9)
1.一株荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌，其特征在于将其命名为唐菖蒲伯克霍尔德菌(Burkholderia gladioli)SZPT16，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏号为GDMCC No:61168，保藏时间为2020年8月25日。
2.一种生物制剂，其特征在于基于权利要求1所述的荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌制备得到。
3.根据权利要求2所述的生物制剂，其特征在于由包含以下步骤方法制备得到：将权利要求1所述的荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌接种至LB液体培养基中培养，获得生物制剂。
4.根据权利要求3所述的生物制剂，其特征在于：所述LB液体培养基的pH值为6.8-7.0。
5.根据权利要求3所述的生物制剂，其特征在于：所述的培养指在28-30℃，摇床震荡速率为180-200rpm下培养24h。
6.权利要求1所述的荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌在防治荔枝炭疽病中的应用。
7.权利要求1所述的荔枝内生唐菖蒲伯克霍尔德菌在防治荔枝霜疫病中的应用。
8.权利要求2-5任一项所述的生物制剂在防治荔枝炭疽病中的应用。
9.权利要求2-5任一项所述的生物制剂在防治荔枝霜疫病中的应用。
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