CN103320371A - 一种与am真菌协同促生作用的细菌及在蔬菜促生的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种与AMF协同促生的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderiagladioli）CGMCCNo.6492在蔬菜促生中的应用。通过在新疆农田中采取土壤样品进行促生菌的筛选，获得具有较强抑菌活性的的菌株，经过进一步筛选、驯化选育，并通过对所获菌株进行形态特征及16SrRNA序列测定及***发育分析，初步确定了其分类地位；是一种优良的促生菌，与AM真菌协同在蔬菜中具有明显突出的促生作用，特别是该LJ20菌株对于黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜具有突出的促生作用，获得良好的技术效果，具有广泛的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及农业微生物应用技术领域，具体说，本发明涉及一种与AM真菌协同促生作用的细菌及其在对蔬菜促生协同作用中的应用技术领域。
背景技术
人们对植物根际促生菌的应用已有数百年的历史，为豆科植物接种根瘤菌剂其实就是对根际促生菌的应用，这项技术在一百多年前就已经为人们所应用，并在世界范围内对农作物产量产生了重大影响。20 世纪30年代以来，许多学者都发现在植物根际范围内生存着许多细菌，它们在生长代谢过程中，会通过某种途径促进植物生长，例如，东欧地区曾大规模的在田间联合接种非共生细菌,如固氮菌和芽孢杆菌，开启了人们深入研究促生菌的历史。近些年来，随着人们对根际促生菌研究的深入和重视，越来越多的促生菌被筛选和应用到科研和生产中，并逐步深入到对促生菌作用机制、生理效应、制剂产品的研究。人们对应用微生物来代替化肥和农药寄予了很大的希望。
植物根围促生细菌(Plant growth-promoting rhizobacteria，简称PGPR)，生存于植物根际、根表，能够直接或间接地促进或调节植物以及作物生长。近年来，PGPR菌株的筛选利用及其促生机制的研究已成为一个热点。
PGPR菌株产生的植物激素可促进植物根系生长、增强根系吸收矿物营养和水分的能力，从而促进植物生长，同时PGPR在根围的定殖能力在一定程度上抑制病原物的定殖和传播。更重要的是有些PGPR能够诱导植物产生***抗性(Induced systemic resistance，ISR)，从而提高植物整体的抗病能力。
AM真菌（Arbuscular Mycorrhizal Fungi，丛枝菌根真菌）能与植物根系形成共生体－丛枝菌根，是菌根中分布最广泛、最普遍的一类。AM真菌对于宿主植物具有诸多有益作用，促进根对磷、氮和微量元素的吸收和植物的生长发育、增加产量；减轻病原菌和线虫对植物的危害，提高植物的抗病性；改善土壤生物性质，提高土壤生产力；减轻重金属对植物的毒害，分解有机污染物，降低农药残留；并且对土壤修复和生态重建有明显的促进作用等。
研究表明，PGPR与AM真菌共同可以协同改善植物营养和生长的效应、增强生防效果、协同修复土壤。因此，研究与AM真菌有协同促生作用的细菌应用农业领域具有重要的现实意义。
发明内容
针对现有技术中与AM真菌协同促生作用的拮抗菌，特别是细菌的研究的现状，本发明旨在提供一种与AM真菌有协同促生作用的细菌及其作为拮抗菌在蔬菜促生协同中获得良好作用，通过试验验证，采用本发明提供的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）是一种具有拮抗作用的细菌，对于黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜具有突出的促生作用，获得良好的技术效果，作为防治蔬菜拮抗菌具有广泛而适用的价值。
本发明采用主要的技术方案：
通过在新疆乌鲁木齐县六十户乡大棚和大田中采取土壤样品进行拮抗菌的筛选，获得具有较强抑菌活性的的菌株，经过进一步筛选、驯化选育，获得一株编号为LJ20。通过对所获菌株进行形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列测定及***发育分析，初步确定了其分类地位；同时对该细菌LJ20的发酵液的抑菌率、促生性、稳定性等特性进行了深入研究，通过与AM真菌具有协同促生作用的细菌及其作为拮抗菌在蔬菜促生协同中获得良好作用，具有突出的技术效果。
本发明具体提供的一种与AM真菌协同促生作用的拮抗菌唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli），通过在新疆乌鲁木齐县六十户乡大棚和大田的农田土壤中分离、筛选和培养，获得一批作为防治蔬菜土传病害的微生物菌株，从中筛选出一株编号为LJ20的菌株，经微生物学分类与鉴定，属于唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）。
本发明提供一株与AM真菌有协同促生作用的细菌，此细菌编号为LJ20。此细菌属克霍尔德氏菌属(Burkholderia)，命名为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）
具体的，本发明提供的一种与AM真菌协同促生作用的拮抗菌唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli），菌株编号为LJ20。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。保藏日期是2012年 9月3日，保藏号是CGMCC No. 6492。经微生物学鉴定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）。该菌株最适生长条件为：温度35°C, 培养基采用固体LB培养基，培养条件：pH 7.0,时间16h;菌落中等大小、扁平，表面干燥、有褶皱，边缘整齐，不透明；显微观察其菌体呈短杆状，芽孢中生，不膨大；依照第九版《伯杰氏***细菌学鉴定手册》（《Bergey,s Manual of Systematic Bacterio-logy》）和《常用细菌***鉴定手册》对LJ20菌株进行形态学测定，生理生化检测确定LJ20菌株为克霍尔德氏菌属(Burkholderia)中的成员。通过BLAST同源比对，菌株LJ20的16S rDNA序列在NCBI数据库中进行BLAST分析后,构建***进化树，该菌株LJ20与Burkholderia gladioli AY268167处于最小分支, 是其近似种；进而将该菌株LJ20确定为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）。
进一步，本发明提供唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同在蔬菜中的促生的应用。该细菌LJ20菌株对于黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜具有突出的促生作用，获得良好的技术效果。
本发明进一步提供了菌种唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492的保存条件，采用LB培养基成分：蛋白胨 1%（W/V），酵母膏 0.5%（W/V），氯化钠 1% （W/V），琼脂 2%（W/V），pH 7.0，121°C灭菌30分钟。LB培养基培养条件：在其LB培养基斜面上35°C条件下，培养16小时，后采用无菌的脱脂牛奶为保护剂，真空冷冻干燥后低温保存；平时使用保存在LB培养基的斜面上，4°C 冰箱保存备用。
通过实施本发明具体的发明内容，可以达到以下有益效果:
本发明分离筛选提供的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492,是一种优良的拮抗菌，与AM真菌协同在蔬菜中具有明显突出的促生作用，特别是该LJ20菌株对于黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜具有突出的促生作用，获得良好的技术效果。
附图说明
图1显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492 的菌落形态图。
图2显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492 的生长曲线图。
图3显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492 的16S rDNA***发育树图。
图4显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同对于黄瓜的促生作用体现的根长结果图。
图5显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同对于黄瓜的促生作用体现的植株高度结果图。
图6显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同对于番茄的促生作用体现的根长结果图。
图7显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同对于番茄的促生作用体现的植株高度结果图。
图8显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同对于辣椒的促生作用体现的根长结果图。
图9显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同对于辣椒的促生作用体现的植株高度结果图。
图10显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同对于茄子的促生作用体现的根长结果图。
图11显示为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同对于茄子的促生作用体现的植株高度结果图。
具体实施方式
下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。
本发明中涉及到的主要原辅材料、试剂和仪器设备：
本发明选用的AM真菌，即丛枝菌根（Arbuscular mycorrhiza，简称AM），本领域技术人员都可以通过公众渠道获得，是一种常见的菌株，也是分布最为广泛的一类菌根，以其在根系皮层细胞内形成“丛枝”结构（arbuscule）而得名。能与植物根系形成丛枝菌根的真菌就被称为丛枝菌根真菌（Arbuscular mycorrhizal fungi，以下简称AMF或AM真菌）。AM真菌分布极为广泛，在极地、温带和热带地区都可以与绝大多数被子植物的根共生，也可以与苔藓、蕨类、裸子植物共生形成菌根，只有少数科，如十字花科（Cruciferae）、石竹科（Caryophyllaceae）、藜科（Chenopodiaceae）、蓼科（Polygonaceae）、灯心草科（Juncaceae）、莎草科（Cyperaceae）等例外。除野生植物外，大多数的农作物、果树、蔬菜、观赏植物和花卉等也都能形成丛枝菌根。
培养基及其它材料：培养基选用： LB固体培养基：蛋白胨 1%（W/V），酵母膏 0.5%（W/V），氯化钠 1% （W/V），琼脂 2%（W/V）；LB液体培养基：蛋白胨 1%（W/V），酵母膏 0.5%（W/V），氯化钠 1% （W/V）；蔬菜研究对象以作物种子采用番茄、黄瓜、辣椒为代表；
主要仪器与试剂：MSSPX-250型生化培养箱，MLS-3020高压蒸汽灭菌锅，SW-CJ-1F B型单人双面净化工作台，E360K离心机，恒温摇床HWY-100。PCR仪 Eppendorf No:5345，电泳仪Bio-Rad Mode 200/2.0，凝胶成像仪United-Bio,GK-330C plus，PCR预混液(TaKaRa Biotechnology)，其余试剂均为分析纯。
本发明中选用的所有菌种和原辅材料，以及选用的菌种培养条件和方法都为本领域熟知选用的，本发明中涉及到的%都为重量百分比，除非特别指出除外。
实施例一：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492的分离、筛选及鉴定
（1）拮抗菌的分离和筛选
从土样中通过梯度稀释法分离出多株细菌，采用平板对峙法，根据有无抑菌圈判断其是否具有拮抗作用，初步筛选出对蔬菜具有一定拮抗能力的菌株。对具有拮抗促生作用的菌株进行进一步实验，筛选出拮抗能力较强的菌株以备后续实验。
复筛获得一株与AM真菌协同在蔬菜中具有明显突出的促生作用的细菌分离物，命名为LJ20，对于黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜具有突出的促生作用。
参见附图1，获得的LJ20菌在培养基培养，该菌株最适生长条件为：温度 35 °C, 培养基为LB固体培养基，培养条件： pH7.0,温度35°C条件下培养16h;菌落中等大小、扁平，表面干燥、有褶皱，边缘整齐，不透明；显微观察其菌体呈短杆状，芽孢中生，不膨大，参见附图1；依照第九版《伯杰氏***细菌学鉴定手册》（《Bergey,s Manual of Systematic Bacterio-logy》）和《常用细菌***鉴定手册》对LJ20菌株进行形态学测定，生理生化检测确定LJ20菌株为克霍尔德氏菌属(Burkholderia)中的成员。通过上述对LJ20菌株进行形态学测定，并对菌株LJ20的形状、大小、生理生化反应进行检测，本发明的LJ20菌株生物学特性如表1所示。
表 1：菌株LJ20的生理生化特性
| 项目 | 结果 | 项目 | 结果 |
| 葡萄糖 | + | 精氨酸双水解 | – |
| L-***糖 | + | 硝酸盐还原 | + |
| D-木糖 | + | 甲基红 | – |
| L-鼠李糖 | + | V-P实验 | – |
| 半乳糖 | + | H2S产生 | – |
| 麦芽糖 | + | 吲哚产生 | – |
| 氧化酶 | - | 淀粉水解 | – |
| 接触酶 | + | 明胶液化 | – |
| 赖氨酸脱羧酶 | + | 42℃ | – |
| 柠檬酸钠 | + | – | |
| 丙二酸 | - |
注：“+”表示阳性；“-表示阴性。
（2） PCR 扩增拮抗菌16S rDNA 序列及其测序
挑取少量LJ20菌的单菌落， 放入盛有 25μL 无菌水的 EP 管中，100°C 煮沸 8-10 min，后迅速放入冰水混合物中 5 min。离心10000 r/min、5 min，4°C 保存，用时取上清。PCR 扩增乳酸菌 16S rDNA 序列。
引物 1(27F)：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′；
引物 2(1492R)：5′-CAAACTTGGTCATTAGAGGA-3′。
PCR 扩增反应体系为50 μL，含有24μL premix Taq，引物1为1μL，引物2为1μL，模板 2μL，无菌水 22μL。扩增条件：94°C 4 min；94°C 30 s，55°C 90 s，72°C 30 s，30 个循环；72°C 7 min。扩增产物(约 1500 bp)经 1%琼脂糖凝胶电泳分离鉴定，PCR 产物直接进行双向测序，菌种LJ20的基因序列参见附后的基因序列表。
（3）16S rDNA 序列比对及***发育分析
将测序得到的16S rDNA序列与GenBank数据库中的核苷酸序列进行BLAST分析，从中获取相近的16S rDNA序列，用Clustal X软件和MEGA 4.1Neighbor-joining 法构建***进化树，参见附图3。
将LJ20的16S rDNA序列在NCBI数据库中进行BLAST分析后,构建***进化树。参见附图3所示,菌株LJ20与Burkholderia gladioli AY268167之间进化距离最短，是Burkholderia gladioli的近似种。结合LJ20的形态结构特征及生理生化特性，确定其为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）。
结合LJ20的形态结构特征及生理生化特性，确定其为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492。
实施例二：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No.6492的生长因子
参见如下方式，但是应根据本发明提供的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492特性确定其具体的生长因子，把菌株LJ20接种培养。结果见表2。
表2：温度、pH、盐、抗生素对菌株LJ20生长的影响
| 温度（℃） | 4 | 15 | 25 | 30 | 32 | 35 |
| 生长情况 | — | + | + | +++ | ++++ | +++ |
| 温度（℃） | 38 | 45 | 50 | |||
| 生长情况 | ++ | + | — | |||
| pH | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 生长情况 | — | — | — | — | + | ++ |
| pH | 7 | 8 | 9 | 10 | ||
| 生长情况 | +++ | + | — | — | ||
| NaCl浓度 | 0.5％ | 1％ | 2％ | 3％ | 4％ | 5％ |
| 生长情况 | + | ++ | +++ | +++ | +++ | + |
| NaCl浓度 | 6％ | 7％ | 8％ | 9％ | 10％ | |
| 生长情况 | — | — | — | — | — | |
| 氨苄青霉素μg/ml | 50 | 60 | 70 | 80 | 90 | 100 |
| 生长情况 | — | — | — | — | — | — |
2.6.1生长曲线及培养条件
按照如上方式将唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492进行培养，菌种的培养条件为：培养基为LB固体培养基，培养条件： pH7.0,温度35°C条件下培养16h，其生长曲线参见附图2.
表3：pH优化结果
| 6.0 | 6.5 | 7.0* | 7.5 | 8.0 | |
| LJ20 | 0.230 | 0.794 | 0.864 | 0.612 | 0.001 |
由表3得出, 菌株LJ20最适合生长因子。
通过以上结果得出LJ20作为种子的最佳培养时间为20h，最适生长pH为7.0，大量产芽孢时间为24h。
实施例三：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492的发酵工艺研究
促生菌LJ20是杆菌，为了在生产实践中更好的应用和发挥其作用，我们期望能够通过培养基与培养条件的优化，能偶使其产生大量芽孢，不但有利于节省后处理成本，更有助于其活性的保持。通过碳、氮源、pH值等的优化来实现产芽孢的目的。
(1) 培养基pH的确定
按PH值6.0,6.5, 7.0, 7.5,8.0，在120 r/min，温度 35℃条件下发酵，得出最适生长。
(2) 碳源和氮源的优化
种子液体培养基：玉米粉2.0%，酵母膏0.5%，玉米浆7.5％，KH2PO40.1%，K2HPO4 0.1%，MgSO4·7H2O0.05%，在种子培养基的基础上继续优化；
A．碳源优化：
碳源分别为葡萄糖，蔗糖，玉米粉，可溶性淀粉，其他成分为KH2PO40.1%，K2HPO4 0.1%，MgSO4·7H2O0.05% PH7.0；
B. 氮源优化：
氮源分别为蛋白胨，酵母膏，（NH 4）2 SO 4，其他成分同碳源优化试验。试验均为 3 次重复。
通过不同碳源和氮源OD值检测，得出菌株的最适碳源和氮源。
OD值：取发酵液0.5mL，加2.5M HCL1mL，加13.5mL去离子水，混匀，用分光光度计，在540nm波长下测定。
2.6发酵工艺优化结果
2.6.2发酵培养基碳、氮源优化结果
表4：试验设计优化发酵培养基中最佳碳源—OD值
| 葡萄糖 | 蔗糖 | 玉米粉 | 可溶性淀粉 | |
| LJ20 | 0.693 | 0.837 | 0.903 | 0.961* |
表5：试验设计优化发酵培养基中最佳氮源—OD值
| 蛋白胨 | 酵母膏 | （NH 4）2 SO 4 | |
| LJ20 | 0.701 | 0.854* | 0.649 |
根据表4、5，以上结果确定最佳碳源为可溶性淀粉，最佳氮源为酵母膏。
2.6.3 10L发酵罐发酵结果
在以玉米浆和玉米粉为主要原料的培养基中，发酵条件为：温度32℃，转速250rpm，通气1:0.3，时间在24h。其结果见如下表6：
表6：10L发酵实验结果
| 菌株 | 发酵时间 | 稀释倍数 | OD 540nm |
| LJ20 | 24h | 30 | 0.575 |
发酵结束后镜检结果表明，几乎全部产芽孢，经热处理涂板计数表明，产芽孢率达到90%以上，经冻干处理，芽孢存活率高于80%。
实施例四：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492与AM真菌协同作用结果
1.促生菌与AM真菌协同实验设置
本实验设六个实验处理，一组为对照组，二组为只加AM菌的处理组，三组为加促生菌HG5和AM菌协同的处理组，四组为加促生菌LJ20和AM菌协同的处理组，五组为只加促生菌HG5的处理组，六组为只加促生菌LJ20的处理组。每20株苗为一个实验处理。在接种完的第50天进行统计调查。
2.促生菌和AM菌的接入
2.1前期育苗：番茄的不加AM菌的育100个营养钵（其中一组，五组，六组各选20个重复）；番茄加AM菌的再育100个营养钵（其中二组，三组，四组各选20个重复）；同上，黄瓜、茄子、辣椒都是个育200个营养钵，从中挑选长势一致的。
2.2待出苗数天后，可加入促生菌株，一般是播种后的两周开始接菌。
2.3准备接菌前，先将两种菌接入150ml的LB液体培养基中(需加3个)，过夜培养，次日取出将两种菌的OD值调至0.3左右，再在处理中每个营养钵加10ml，同时一组CK，二组加AM菌的两组加水10ml，进行对照。
2.4对黄瓜促生协同作用研究
黄瓜生长对比，检测的株高、株重（鲜/干）、根重（鲜/干）等数据都说明，筛选得到的PGPR菌与AM真菌对于黄瓜幼苗有明显的协同作用，发现接种促生菌的处理和双接种促生菌和AM真菌的处理都比对照长势较好，参见附图4和5。
2.5对番茄促生协同作用研究
番茄60天对比照片，明显地观察到各处理的番茄幼苗长势依次为：PGPR+AMF＞AMF＞PGPR＞CK，以及检测的株高、株重（鲜/干）、根重（鲜/干）等数据都说明，筛选得到的PGPR菌与AM真菌对于番茄幼苗有明显的协同作用；60天的时候调查番茄的植株高度和根长，发现接种促生菌的处理和双接种促生菌和AM真菌的处理都比对照长势较好，参见附图6和7。
2.6对辣椒促生协同作用研究
辣椒60天对比照片，明显地观察到各处理的辣椒幼苗长势依次为：PGPR＞PGPR+AMF＞AMF＞CK，以及检测的株高、株重（鲜/干）、根重（鲜/干）等数据都说明，筛选得到的PGPR菌与AM真菌对于辣椒幼苗有明显的协同作用，参见附图8和9。
2.7对茄子促生协同作用研究
茄子60天对比照片，明显地观察到各处理的茄子幼苗长势依次不均衡，HG5+AM和单纯加AM菌长势较其他的都稍好些。以及检测的株高、株重（鲜/干）、根重（鲜/干）等数据都说明，筛选得到的PGPR菌与AM真菌对于茄子幼苗有明显的协同作用，参见附图10和11。
通过上述试验验证，本发明提供的在与AM真菌共同育苗研究来看，本发明分离筛选提供的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492,是一种优良的拮抗菌，与AM真菌协同在蔬菜中具有明显突出的促生作用，特别是该LJ20菌株对于黄瓜、番茄、辣椒和茄子等蔬菜具有突出的促生作用，获得良好的技术效果。
序列表
<110> 新疆农业科学院微生物应用研究所
<120> 一种植物根际促生菌LJ20 16SrDNA引物及16SrDNA序列
<130> 一种与AM真菌协同促生作用的细菌及其应用
<211> 20 菌株LJ20 16SrDNA上游引物序列
<212> DNA
<213> Burkholderia gladioli LJ20
<400>1
tcctccgcttattgatatgc 20
<211> 20 菌株LJ20 16SrDNA下游引物序列
<212> DNA
<213> Burkholderia gladioli LJ20
<400> 1
caaacttggtcattagagga 20
<211>1440 菌株LJ20 16SrDNA序列
<212>DNA
<213> Burkholderia gladioli LJ20
<400> 1
aaaccttgcg gggagcttta aatgcaagtc gaacggcagc acggacttcg gtctggtggc 60
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tgaccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt aaaactcaaa ggaattgacg gggacccgca 900
caagcggtgg atgatgtgga attaattcga tgcaacgcga aaaaccttac ctacccttga 960
catgtctgga atgccgaaga agatttgsta gtgctcgcaa garaaaccgg aacacaggtg 1020
gctgcatgrc tgtcgtcagc tcgtgwcgtg gagatgktgg rytaagtccc gcamcgagcg 1080
catamccttg kccattagtt gctacgaaag ggacactcta atgagactgc cggtgacaaa 1140
ccggaggaag gtggggatga cgtcaagtcc tcatggccct tatgggtagg gcttcacacg 1200
tcatacaatg gtcgggacag agggtcgcca acccgcgagg gggagccaat cccagaaacc 1260
cgatcgtagt ccggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg aagtcggaat cgctagtaat 1320
cgcggatcag catgtcgcgg tgaatacgtt cccgggtctt gtacacaccg cccgtcacac 1380
catgggagtg ggttttacca gaagtagtta gcctaaccgc aaggagggcg ataccaacgt 1440
Claims (6)
1.一种与AMF协同促生的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli），其特征在于，拮抗菌为唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492。
2.如权利要求1所述与AMF协同促生的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492在蔬菜促生中的应用。
3.如权利要求1所述与AMF协同促生的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492在黄瓜促生中的应用。
4.如权利要求1所述与AMF协同促生的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492在番茄促生中的应用。
5.如权利要求1所述与AMF协同促生的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492在辣椒促生中的应用。
6.如权利要求1所述与AMF协同促生的唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（Burkholderia gladioli）CGMCC No. 6492在茄子促生中的应用。
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