CN111920843A - 一种黄芪－蝉拟青霉发酵物、其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及一种黄芪‑蝉拟青霉发酵物、所述发酵物的干粉、水提物、其制备方法和应用。所述黄芪‑蝉拟青霉发酵物为以蝉拟青霉作为发酵菌种对黄芪进行发酵的产物，其可通过以蝉拟青霉作为发酵菌种对黄芪进行发酵的步骤得到。所述发酵物、干粉、水提物可用于制备预防或治疗糖尿病肾病的药物，优选用于制备预防或治疗糖尿病肾病足细胞损伤的药物，以及用于制备保健品或功能性食品。
Description
技术领域：
本发明属于中药领域，涉及一种黄芪-蝉拟青霉发酵物、其制备方法和应用。所述黄芪-蝉拟青霉发酵物为以蝉拟青霉作为发酵菌种对黄芪进行发酵的产物。
背景技术：
糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是目前糖尿病最为常见的一种并发症，同时也是造成终末期慢性肾病肾功能衰竭的最主要因素。肾小球脏层上皮细胞，即足细胞，是肾小球滤过膜的最后一道屏障。足细胞是高血糖作用的直接靶细胞，其损伤改变不仅在糖尿病肾病患者早期微量蛋白尿的产生和发展起重要作用，还与肾小球组织学病变及肾功能损害显著相关。
黄芪的药用历史迄今已有2000多年,其味甘、性温,具有补气固表、利水消肿、托毒生肌等功效。黄芪临床上主要用于治疗心血管疾病、泌尿***疾病、血液肿瘤疾病等，因其疗效显著而被历代医家所用，目前关于黄芪治疗肾脏疾病的研究较为***。蝉拟青霉是麦角菌科拟青霉属真菌，其寄生于蝉的若虫后形成的复合体即为我国传统中药蝉花，蝉花作为一种传统中药含丰富的肝糖、虫草酸、多种生物碱及麦角甾醇等，具有免疫调节和抗肿瘤活性，近年来药理研究也主要集中在糖尿病肾病的治疗中，临床应用广泛。
将蝉拟青霉作为发酵菌种，对中药材黄芪进行发酵，一方面可以利用黄芪中的营养为蝉拟青霉的生长提供营养要素，另一方面可利用蝉拟青霉的生长代谢对黄芪所含成分进行转化，从而实现增效作用，同时发挥蝉拟青霉与中药黄芪的协同作用。
发明内容：
本发明的一个目的在于提供了一种黄芪-蝉拟青霉发酵物，该黄芪-蝉拟青霉发酵物为以蝉拟青霉作为发酵菌种对黄芪进行发酵的产物。
本发明的另一目的在于提供了一种制备所述黄芪-蝉拟青霉发酵物的方法。
本发明的再一目的在于提供了一种黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉，其通过对所述黄芪-蝉拟青霉发酵物进行干燥、研磨得到。
本发明的再一目的在于提供了一种黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物，其通过将所述黄芪-蝉拟青霉发酵物或其干粉置于水中提取得到。
本发明再一目的在于提供了所述黄芪-蝉拟青霉发酵菌质水提物的制备方法。
本发明再一目的在于提供了所述黄芪-蝉拟青霉发酵物、黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉或黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物在制备预防或治疗糖尿病肾病的药物中的应用，优选在制备预防或治疗糖尿病肾病足细胞损伤的药物中的应用，以及用于制备保健品或功能性食品的应用。
技术方案：
本发明一方面提供了一种黄芪-蝉拟青霉发酵物，该黄芪-蝉拟青霉发酵物为以蝉拟青霉作为发酵菌种对黄芪进行发酵的产物。
本发明另一方面提供了一种制备所述黄芪－蝉拟青霉发酵物的方法，该方法包括以蝉拟青霉作为发酵菌种对黄芪进行发酵的步骤。在优选的实施方式中，所述方法包括：将蝉拟青霉作为发酵菌种接种到无菌黄芪粉中进行培养5天以上得到黄芪－蝉拟青霉发酵物。
在一个实施方式中，所述方法如下步骤：
(1)取蝉拟青霉菌丝无菌接种于灭菌的马铃薯葡萄糖固体培养基上培养，从马铃薯葡萄糖固体培养基上取蝉拟青霉菌丝体，接入灭菌的马铃薯葡萄糖液体培养基中，于22～30℃、100～160r/min摇床培养3～10天，优选26℃、160r/min摇床培养5天，得蝉拟青霉种子液备用；
(2)称取灭菌后的黄芪粉5g，将蝉拟青霉种子液接到黄芪粉中，在温度为26℃～30℃，湿度为70％～90％的环境下，培养7～20天，优选放置于28℃，相对湿度为80％的恒温恒湿箱中培养16天，制得黄芪-蝉拟青霉发酵物。
在根据本发明的制备所述黄芪－蝉拟青霉发酵物的方法中，蝉拟青霉在黄芪粉中的接种量可以为3-7mL，优选为5mL。
本发明中，所述蝉拟青霉的菌株为中国林业微生物保藏中心编号cfcc81169的菌株。
本发明再一方面提供了一种黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉，其通过对所述黄芪-蝉拟青霉发酵物进行干燥，优选冷冻干燥，得到。在一些实施方式中，还可以对干燥后的所述黄芪-蝉拟青霉发酵物进行研磨。在一些实施方式中，所述黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉通过如下步骤制备：对所述黄芪-蝉拟青霉发酵物进行冷冻干燥，然后进行研磨，得到黄芪-蝉拟青霉发酵物的冻干粉。所述冷冻干燥时间没有特别限制，例如可以为48h，真空度可以为15Pa，冷阱温度可以为-45℃～-50℃。所得黄芪-蝉拟青霉发酵物的冻干粉可以在-10℃以下保存，例如于-20℃保存。
本发明再一方面提供了一种黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物，其通过将所述黄芪-蝉拟青霉发酵物或其干粉置于水中提取得到。在实施方式中，所述水提物可以通过如下步骤制备：向黄芪-蝉拟青霉发酵物或其干粉中加入去离子水中进行提取，优选进行回流提取，将提取液干燥得到黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物。特别地，可以进行回流提取2小时以上，例如4h，然后以12000r/min离心20min分离出提取液，将提取液冷冻干燥，粉碎，得到黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物。所述黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物可以在-10℃以下保存，例如于-20℃保存。
本发明再一方面提供了上述黄芪-蝉拟青霉发酵物、黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉或黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物在制备预防或治疗糖尿病肾病的药物中的应用，优选在制备预防或治疗糖尿病肾病足细胞损伤的药物中的应用，以及用于制备保健品或功能性食品的应用。
上述的黄芪-蝉拟青霉发酵物、黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉或黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物可以用于减轻高糖诱导的足细胞损伤。实验结果表明，本发明制备的黄芪-蝉拟青霉发酵物水提物对足细胞有显著的保护作用，能够减轻足细胞的高糖损伤，且黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物对损伤足细胞的保护作用高于对黄芪直接进行水提得到的黄芪水提物。
有益效果：
(1)本发明的黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物制备工艺简单合理。
(2)利用黄芪-蝉拟青霉发酵物所特有的药性及功能成分，通过二者的深层次相互作用提升黄芪的药用功能。
(3)根据本发明的黄芪-蝉拟青霉发酵物、黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉或黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物可以作为保健品及功能性食品，例如开发成为黄芪-蝉拟青霉发酵干粉及口服液，或者作为保健品及功能性食品中的食品添加剂，应用前景良好。
附图说明：
图1为显示MTT测不同浓度高糖对足细胞活力的影响的图，其中，Control：对照组(5.5mmol/L葡萄糖)，MA:渗透压(5.5葡萄糖+34.5mmol/l甘露醇)，10、20、30、40mmol/L葡萄糖；与对照组相比，*P<0.05**p<0.01***p<0.001p<0.05表明具有显著统计学差异。
图2为显示MTT测黄芪发酵前后对高糖诱导足细胞活力的影响的图，其中，NG：5.5mmol/L葡萄糖，HG:30mmol/L葡萄糖，10、100、200、400、600、800、1000、1200、1500μg/mL：黄芪和菌质水提物给药浓度。
具体实施方式：
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。这些实施例仅用于说明本发明，但不以任何方式限制本发明。
实验材料：
黄芪采购自安国药材市场
蝉拟青霉来源于中国林业微生物保藏中心，编号cfcc81169
实施例1
采用以下方法制备黄芪-蝉拟青霉发酵物
(1)黄芪药材预处理：将黄芪药材用粉碎机粉碎，置于80℃干燥箱内干燥24h，将干燥后的黄芪再一次用粉碎机粉粹，过60目筛，滤过物为实验所用黄芪粉末。
(2)蝉拟青霉菌种活化：用接种环挑取蝉拟青霉菌丝适量，无菌接种于灭菌的PDA固体培养基上，放入28℃、80％湿度的恒温恒湿培养箱中培养5天，从PDA固体培养基上用接种环挑取适量的蝉拟青霉菌丝体，接入灭菌的PDA液体培养基中，于26℃、160r/min摇床培养5天，得蝉拟青霉菌液备用。
(3)双向发酵培养基配制：分别称取5g过筛后的黄芪粉于玻璃平皿中平铺均匀，用牛皮纸包住玻璃平皿，121℃，灭菌30min。
(4)双向发酵：吸取活化好的蝉拟青霉液体菌5mL接入上述灭菌后培养基，于28℃、80％湿度的恒温恒湿箱中，通风黑暗固态发酵培养16天。
(5)发酵菌质的处理：当蝉拟青霉长满整个平皿，且外观浓密、洁白时，即为发酵结束；将发酵产物(包含菌丝及培养基质成分在内的混合物即菌质)用冻干机冷冻干燥至恒重。粉碎后过60目筛，滤过物即为最终产品。
实施例2
采用以下方法制备黄芪-蝉拟青霉发酵物水提物
(1)精确称取1g实施例1中得到的发酵物菌质于100mL圆底烧瓶中，加入20mL去离子水，轻轻震荡混匀，安装到回流提取装置上，回流提取。
(2)提取时间为4h，水浴温度为100℃；
(3)12000r/min，离心20min，取上清，滤纸过滤；
(4)冻干机中冷冻干燥，-20℃冰箱保存；
实施例3
采用以下方法对发酵物水提物进行生物活性测试
(1)从液氮中取MPC5细胞种子(购自国家实验细胞资源共享平台，编号：3111c0001ccc000230)，迅速投入预先加热到37℃的水中，待冻存液融化后，1000r/min离心3min，收集细胞，然后加入含10％胎牛血清、5.5mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养基3mL，在37℃、5％CO2培养箱分化培养14天。
(2)高糖诱导足细胞损伤：按照5×103个/孔的密度将分化成熟的足细胞接种于96孔板中，每孔100μL，24h细胞贴壁后用含1％FBS培养基充分饥饿细胞，使细胞同步化于G0期，分别用含不同浓度的葡萄糖(5.5、10、20、30、40mmol/L)或渗透压(5.5葡萄糖+34.5mmol/l甘露醇)RPMI 1640培养基培养细胞24h，每孔加入10μL浓度为5mg/mL的MTT，37℃孵箱中孵育4h，小心吸走上清液，每孔加入DMSO150μL，置于摇床上摇晃至甲臜完全溶解，用酶标仪检测板内细胞在490nm波长处的吸光度值。与对照组(5.5mmol/L葡萄糖)相比，计算出其它各组细胞的成活率。
(3)黄芪-蝉拟青霉菌质水提物减轻高糖诱导的足细胞损伤：按照5×103个/孔的密度将分化成熟的足细胞接种于96孔板中，每孔100μL，24h细胞贴壁后用含1％FBS培养基充分饥饿细胞，使细胞同步化于G0期，分别用含不同浓度的黄芪，黄芪-蝉拟青霉水提物的高糖RPMI 1640培养基(30mmol/L葡萄糖+10、100、200、400、600、800、1000、1200ug/mL药物)培养细胞24h，每孔加入10μL浓度为5mg/mL的MTT，37℃孵箱中孵育4h，小心吸走上清液，每孔加入DMSO150μL，置于摇床上摇晃至甲臜完全溶解，用酶标仪检测板内细胞在490nm波长处的吸光度值。与对照组相比，计算出其它各组细胞的成活率。
高糖诱导足细胞损伤见图1。
由图1可见，在不同糖浓度培养的足细胞中，足细胞活力呈梯度下降，以正常糖组(5.5mmol/L)对照，各组之间差异显著，有统计学意义(p<0.05)。结果表明高糖可以使足细胞存活率显著降低，且损伤程度呈浓度依赖效应，浓度越高，损伤越严重，当糖浓度达到30和40mmol/L时细胞活力下降最为显著。
黄芪发酵前后对高糖诱导足细胞的保护作用见图2
由图2可知，MTT法检测结果表明，和对照组相比，高糖组的细胞活力显著降低。与HG组相比，各剂量药物组细胞活力呈依次上升趋势，说明黄芪和菌质水提物都能缓解高糖对足细胞的损伤，进而保护足细胞；菌质和黄芪相比较，10～1500ug/mL的给药量缓解高糖抑制足细胞活力的性能比黄芪水提物要高，说明黄芪发酵后对高糖诱导损伤足细胞的保护作用要高于黄芪，且菌质水提物浓度为800ug/mL时能最大程度的缓解高糖抑制足细胞的活力。
上述例子仅作为说明的目的，本发明的范围并不受此限制。对本领域的技术人员来说进行修改是显而易见的，本发明仅受所附权利要求范围的限制。
Claims (9)
1.一种黄芪-蝉拟青霉发酵物，所述黄芪-蝉拟青霉发酵物为以蝉拟青霉作为发酵菌种对黄芪进行发酵的产物。
2.权利要求1所述黄芪－蝉拟青霉发酵物，其通过如下步骤得到：
(1)取蝉拟青霉菌丝无菌接种于灭菌的马铃薯葡萄糖固体培养基上培养，从马铃薯葡萄糖固体培养基上取蝉拟青霉菌丝体，接入灭菌的马铃薯葡萄糖液体培养基中，于22～30℃、100～160r/min摇床培养3～10天，优选26℃、160r/min摇床培养5天，得蝉拟青霉种子液备用；
(2)称取灭菌后的黄芪粉，将蝉拟青霉种子液接种到黄芪粉中，在温度为26℃～30℃，湿度为70％～90％的环境下，培养7～20天，优选放置于28℃，相对湿度为80％的恒温恒湿箱中培养16天，制得黄芪-蝉拟青霉发酵物。
3.一种黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉，其通过对权利要求1或2所述的黄芪-蝉拟青霉发酵物进行干燥、研磨得到。
4.根据权利要求3所述的黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉，其通过对所述黄芪-蝉拟青霉发酵物进行冷冻干燥，对干燥后的所述黄芪-蝉拟青霉发酵物进行研磨而得到；优选地，所述冷冻干燥为48h，真空度为15Pa，冷阱温度为-45℃～-50℃。
5.一种黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物，其通过将权利要求1或2所述的黄芪-蝉拟青霉发酵物或权利要求3或4所述黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉置于水中提取得到。
6.根据权利要求5所述的黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物，其通过如下步骤制备：向黄芪-蝉拟青霉发酵物或其干粉中加入去离子水中进行提取，优选进行回流提取，将提取液干燥得到黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物，特别地，可以进行回流提取2小时以上，例如4h，然后以12000r/min离心20min分离出提取液，将提取液冷冻干燥，粉碎，得到黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物。
7.根据权利要求1或2所述的黄芪-蝉拟青霉发酵物在制备预防或治疗糖尿病肾病的药物中的应用，优选在制备预防或治疗糖尿病肾病足细胞损伤的药物中的应用，以及用于制备保健品或功能性食品的应用。
8.根据权利要求3或4所述的黄芪-蝉拟青霉发酵物的干粉在制备预防或治疗糖尿病肾病的药物中的应用，优选在制备预防或治疗糖尿病肾病足细胞损伤的药物中的应用，以及用于制备保健品或功能性食品的应用。
9.根据权利要求5或6所述的黄芪-蝉拟青霉发酵物的水提物在制备预防或治疗糖尿病肾病的药物中的应用，优选在制备预防或治疗糖尿病肾病足细胞损伤的药物中的应用，以及用于制备保健品或功能性食品的应用。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101766678A (zh) * | 2008-12-26 | 2010-07-07 | 广州康臣药物研究有限公司 | 黄芪总黄酮在制备防治糖尿病肾病药物中的应用 |
| CN104046570A (zh) * | 2014-06-13 | 2014-09-17 | 浙江省林业科学研究院 | 一种提高蝉拟青霉液体发酵产物产量及产物活性的方法 |
| CN105861614A (zh) * | 2016-05-12 | 2016-08-17 | 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 | 黑曲霉在制备黄芪甲苷中的应用 |
| US20160340703A1 (en) * | 2015-05-20 | 2016-11-24 | Cosisbio Co., Ltd. | Astragalus membranaceus fermentation product and method of producing the same |
| CN106434380A (zh) * | 2016-10-14 | 2017-02-22 | 锬酃藏虫草生物科技(深圳)有限公司 | 一种利用黄芪培养冬虫夏草菌的方法及其应用 |
| CN108498566A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-09-07 | 陕西科技大学 | 一种黄芪提取物在治疗镉致糖尿病肾病中的应用 |
-
2019
- 2019-05-13 CN CN201910395827.XA patent/CN111920843A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101766678A (zh) * | 2008-12-26 | 2010-07-07 | 广州康臣药物研究有限公司 | 黄芪总黄酮在制备防治糖尿病肾病药物中的应用 |
| CN104046570A (zh) * | 2014-06-13 | 2014-09-17 | 浙江省林业科学研究院 | 一种提高蝉拟青霉液体发酵产物产量及产物活性的方法 |
| US20160340703A1 (en) * | 2015-05-20 | 2016-11-24 | Cosisbio Co., Ltd. | Astragalus membranaceus fermentation product and method of producing the same |
| CN105861614A (zh) * | 2016-05-12 | 2016-08-17 | 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 | 黑曲霉在制备黄芪甲苷中的应用 |
| CN106434380A (zh) * | 2016-10-14 | 2017-02-22 | 锬酃藏虫草生物科技(深圳)有限公司 | 一种利用黄芪培养冬虫夏草菌的方法及其应用 |
| CN108498566A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-09-07 | 陕西科技大学 | 一种黄芪提取物在治疗镉致糖尿病肾病中的应用 |
Non-Patent Citations (12)
| Title |
|---|
| 余传隆 等: "《中国临床药物大辞典》", vol. 1, 31 August 2018, 中国医药科技出版社, pages: 891 - 892 * |
| ***后勤部***: "《中草药学 中草药化学》", 31 January 1973, ***后勤部***, pages: 153 * |
| 张艳聪等: "蝉拟青霉/甘草渣发酵菌质多糖对免疫功能的影响", 《药物生物技术》 * |
| 张艳聪等: "蝉拟青霉/甘草渣发酵菌质多糖对免疫功能的影响", 《药物生物技术》, vol. 24, no. 02, 15 April 2017 (2017-04-15), pages 129 - 132 * |
| 张艳聪等: "蝉拟青霉-甘草渣双向发酵过程中成分含量变化的研究", 《中华中医药学刊》 * |
| 张艳聪等: "蝉拟青霉-甘草渣双向发酵过程中成分含量变化的研究", 《中华中医药学刊》, vol. 35, no. 07, 10 July 2017 (2017-07-10), pages 1902 - 1904 * |
| 王贺祥 等: "《食用菌栽培手册》", vol. 1, 31 January 2015, 中国农业大学出版社, pages: 78 - 79 * |
| 赵崇妍 等: "蝉拟青霉/黄芪双向发酵体系建立及成分研究", 《世界中医药》 * |
| 赵崇妍 等: "蝉拟青霉/黄芪双向发酵体系建立及成分研究", 《世界中医药》, vol. 13, no. 12, 31 December 2018 (2018-12-31), pages 3195 - 3198 * |
| 陈祝安 等: "《金蝉花》", vol. 1, 30 April 2014, 中医古籍出版社, pages: 294 * |
| 韦朝阳 等: "不同中药水提物对蝉拟青霉液体深层发酵和产物活性的影响", 《食品工业科技》 * |
| 韦朝阳 等: "不同中药水提物对蝉拟青霉液体深层发酵和产物活性的影响", 《食品工业科技》, no. 3, 31 December 2015 (2015-12-31), pages 168 - 177 * |
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