CN105125646B - 一种绿色木霉在提高枫蓼组方药材中槲皮素提取率中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种绿色木霉在提高枫蓼组方药材中槲皮素的提取率的应用，其技术方案为：将牛耳枫、辣蓼粉碎，经灭菌后接种绿色木霉进行发酵培养。经本发明方法的发酵，可使发酵后的枫蓼制剂中的槲皮素含量大幅提高，进而提高药材的生物利用度，同时还能减少药材的使用量，降低药渣的污染，实验中药的保护性开发，具有很好的应用前景。

Description

一种绿色木霉在提高枫蓼组方药材中槲皮素提取率中的应用

技术领域

本发明涉及中药提取领域，更具体地，涉及一种绿色木霉在提高枫蓼组方药材中槲皮素提取率中的应用。

背景技术

枫蓼组方是海南民间验方，由牛耳枫和辣蓼两味中药组成，具有恢复胃肠道的生理功能。临床用其治疗急性胃肠炎、食滞胃痛等症，具有良好效果。研究表明牛耳枫与辣蓼提取物具有很好的抗炎、解痉及抗乙醇引起的胃粘膜损伤作用，对胃肠道有很好的保护作用。

黄酮类化合物是枫蓼组方的主要有效成分，而槲皮素是黄酮类化合物的一种，具有广泛的生物学作用。近年来，国内外医药工作者对槲皮素的研究日益增多，发现其具有许多药理活性，研究表明槲皮素具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，此外还有抗氧化及清除氧自由基、抗纤维化、抗肿瘤作用、抗病毒、降血压、镇痛及止泻等作用。

中药作为我国的宝贵资源，一直存在着有效成分提取率低、药材的生物利用度有限的情况，而微生物具有丰富的酶***，有强大的分解及转化物质的能力，近年来，利用微生物发酵中药的应用越来越广泛。通过微生物与中药共发酵来进行中药炮制，可能获得药效更强的药物，并提高药物制剂中有效成分的含量，经提取后更容易被人类利用。

发明内容

本发明的目的是针对采用常规方法提取枫蓼组方药材中槲皮素过程中存在的提取率低的缺陷，提供一种绿色木霉在枫蓼组方药材中槲皮素提取中的应用，其特征在于将绿色木霉对枫蓼组方药材进行固体发酵，其中，枫蓼组方为牛耳枫和辣蓼。

该提取方法的工艺和步骤为：将枫蓼组方药材粉碎，称取混合均匀的枫蓼粉末，加水灭菌后，加入培养基，绿色木霉菌悬液，混匀。恒温恒湿条件下培养箱发酵培养5天。取发酵后样品，干燥后研碎，称取粉末，加溶剂提取，超声，取清液，得提取液。

其中，牛耳枫、辣蓼原药材粉碎过20目筛；

牛耳枫：辣蓼按重量比4～1:1混合；优选为牛耳枫：辣蓼按重量比2：1混合；

培养基为马铃薯培养基；

培养箱的温度为25～30℃，湿度60～90％；优选为28℃，湿度80％；

所述溶剂优选为乙醇。

本发明具有以下优点：

1.通过微生物与中药共发酵来进行中药炮制，可能获得药效更强的药物，并提高药物制剂中有效成分的含量；

2.可在治疗过程中降低中药的用量，并减少药渣污染。

具体实施方式

下面给出实施例以对本发明做出进一步说明，但所给出的实施例不能理解为对本发明保护范围的限制。

实施例1

培养基的配制：综合马铃薯培养基：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，KH2PO4，硫胺素8mg，MgSO4·7H2O 1.5g，pH6。配制方法：马铃薯去皮，切成小块，加水1000mL煮沸20min，然后滤去马铃薯块，再加葡萄糖等物质，溶化后补足水至1000mL，pH6。经121℃(15磅/英寸2)灭菌15min。

菌种的复苏及扩大培养：用无菌吸管吸取0.5mL适宜的液体培养基，滴入安瓿瓶内，轻轻振荡，使冻干菌种溶解呈悬浮状，吸取100uL菌体悬浮液，移植于斜面培养基上，并在28℃相应的温度下培养。配制综合马铃薯液体培养基100mL，在无菌操作台上，将已活化的菌种接入培养基中，于28℃，转速为105r/min的恒温振荡培养箱进行扩大培养3d，即得绿色木霉的菌悬液。

将牛耳枫、辣蓼粉碎，过20目筛，按牛耳枫：辣蓼(2:1)混合。称取混合均匀的枫蓼组方药材粉末100g，加水100mL，放置2h，121℃(15磅/英寸2)灭菌15min，加入综合马铃薯培养基100mL，绿色木霉菌悬液5mL，混匀。于28℃，湿度80％的恒温恒湿培养箱发酵培养5天。取小样，60℃干燥两小时。将发酵烘干品研碎，称取1.00g粉末，加60％乙醇10mL，称重，超声30min，称重并补足至之前的重量，离心，倒出上清液，滤渣继续加10mL 60％乙醇，其余操作同上，合并两次的上清液，得到20mL/每克生药的乙醇提取液。

采用紫外分光光度法测了发酵前后的枫蓼中总黄酮含量，发酵后总黄酮含量在发酵第5天时达到最大值。因此选择第五天为最佳发酵时间，发酵1-9天总黄酮含量变化如表1。

表1发酵后不同时间总黄酮含量检测

实施例2

枫蓼组方药材发酵和提取方法同实施例1，取未发酵的枫蓼组方药材原粉末作为对照，处理过程同实施例1。采用高效液相色谱检测了发酵前后枫蓼组方药材粉末中槲皮素的含量，平行五次实验测得发酵前槲皮素含量为205.55ug/ml，发酵后其含量为515.67ug/ml，为发酵前的2.5倍。具体数据见表2。枫蓼经绿色木霉发酵后，于不同时间点测槲皮素含量，平行操作五次取平均值。结果表明绿色木霉对槲皮素的增量效果明显，第七天达到峰值。发酵3～5天后能够保证提取到的槲皮素的提取率高于未处理的枫蓼。发酵5天与7天槲皮素含量相差不大，为缩短发酵时间，节约成本，故选择第五天为最佳发酵时间。具体数据见表3。

表2枫蓼发酵前后槲皮素含量的变化(n＝5) 单位：ug/g

表3枫蓼发酵前后槲皮素含量的变化(n＝5) 单位：ug/g

Claims (6)

1.一种绿色木霉在提高枫蓼组方药材中槲皮素的提取率中的应用，其特征在于，将绿色木霉对枫蓼组方药材进行固体发酵，所述的枫蓼组方药材为牛耳枫和辣蓼；具体方法为：

S1. 将枫蓼组方药材粉碎成粉末，称取混合均匀的粉末，加水灭菌后，加入培养基和绿色木霉菌悬液，混匀，恒温恒湿条件下培养箱发酵培养1~9天；

S2. 取发酵后样品，干燥后研碎，称取粉末，加60%乙醇提取，超声，取清液，得提取液；

S1中培养箱的温度为25~30℃，湿度60~90%；培养基为马铃薯培养基。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在所述的枫蓼组方药材粉碎成粉末后过20目筛。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，牛耳枫：辣蓼按重量比为4~1:1混合。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，牛耳枫：辣蓼按重量比为2:1混合。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，培养箱的温度为28℃，湿度80%。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，恒温恒湿条件下培养箱发酵培养5天。