CN111620852B - 一种5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种5‑氯‑嘧啶‑2,4‑二胺类化合物及其制备方法和应用，所述5‑氯‑嘧啶‑2,4‑二胺类化合物的如式(I)或式(II)所示：
Figure DDA0002432782220000011
所述R1选自苯基、取代苯基、苄基、取代苄基、苯乙基、取代苯乙基或呋喃‑2‑基甲基中的任一种基团；所述R2选自脂肪环、苯环、取代苯环、苄基、取代苄基、苯乙基、取代苯乙基、吡啶环、取代吡啶环或呋喃环中的任一种基团；所述R2’选自苯环或吡啶环；所述R3选自N‑甲基吡啶、N‑乙基吡啶、吡啶、哌啶、吗啉或N‑甲基高哌嗪中的任一种基团。本发明的有益效果在于：通过本发明筛选出的化合物表现出良好的体内外抗肿瘤和细胞凋亡诱导活性，周期依赖性激酶选择性抑制活性。

Description

一种5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及药物化学和药物治疗学技术领域，具体涉及一种5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
随着肿瘤治疗理论的发展和治疗技术的进步，精准治疗尤其是靶向治疗以其副作用小、疗效显著成为肿瘤治疗的发展趋势。靶向药物尤其是小分子靶向药物以其理论成熟、成本低、使用方便等优势成为靶向治疗中的重要工具。2001年首个蛋白激酶抑制剂伊马替尼被FDA批准用于治疗慢性粒细胞白血病，表现出了优越的效能，从此掀起了小分子蛋白激酶抑制剂研究的热潮。众多的蛋白激酶研究之中，对细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)抑制剂的研究是一个热门领域。
细胞周期蛋白依赖性激酶属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族，它们在调节细胞周期、细胞凋亡、转录、分化和神经功能中具有关键功能。大多数细胞周期蛋白依赖性激酶在独立存在时是不发挥作用的，只有和特定的周期蛋白结合后才能发挥作用。细胞周期蛋白依赖性激酶的表达水平在整个细胞周期中保持稳定，同时又依靠蛋白质合成和蛋白酶降解双重作用使细胞周期蛋白水平在细胞周期的不同阶段波动，以确保只有在需要时才能激活。由于细胞周期蛋白依赖性激酶在调控细胞生理进程中发挥重要作用，而且在大多数人类癌症中被过度激活，使得细胞周期蛋白依赖性激酶成为极具潜力的抗肿瘤生物学靶标。
细胞周期蛋白依赖性激酶活性的调节是个较为复杂的磷酸化和去磷酸化过程，大多数细胞周期蛋白依赖性激酶在独立存在时是不发挥作用的，只有和特定的周期蛋白结合后才能发挥作用。例如在有丝***前期CDK4/6和Cyclin D结合形成功能复合物，启动Rb蛋白的磷酸化进程，部分pRb与转录因子E2F-DP结合诱导Cyclin E表达，该蛋白与CDK2结合形成功能复合物进一步磷酸化Rb，促使有丝***从G1期进入S期。随后在S期早期，Cyclin D和Cyclin E降解，CDK2和Cyclin A结合继续推动S期进展和DNA合成。但某些细胞周期蛋白依赖性激酶不仅被周期蛋白活化，还会被其他细胞周期蛋白依赖性激酶亚型活化(CDK8/9)。
细胞周期蛋白依赖性激酶的氨基酸序列高度保守，个体间同源性程度较高。大多数细胞周期蛋白依赖性激酶家族成员具有Wee1和Myt1磷酸化的抑制性磷酸化位点(例如CDK1和CDK2中的T14和Y15)；与细胞周期蛋白直接相互作用的PSTAIRE样细胞周期蛋白结合结构域；活化区段(也称为T环)，其用于阻断无活性的不含细胞周期蛋白的单体中蛋白质底物的结合；T环中的活化磷酸化位点(例如CDK1中的T161和CDK2中的T160)，其被CAK磷酸化可以进一步增加细胞周期蛋白依赖性激酶-细胞周期蛋白活性并改善底物结合。已经证实，细胞周期蛋白依赖性激酶之间的一些微妙的结构差异存在于几个关键区域，这种微小差异是为了确保识别特定的细胞周期蛋白和底物，利用这个特点可以提高抑制剂的选择性。此外，最近对细胞周期蛋白依赖性激酶的结构解剖和拓扑分析已经解析了细胞周期蛋白依赖性激酶的ATP口袋中的差异，利用这些差异可以增加特定细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CDKI)的效力。
首个选择性作用于CDK4的药物palbociclib，由辉瑞公司研发，已经在2015年由FDA批准上市，与来曲唑联合应用作为治疗ER+/HER-的绝经后妇女转移性乳腺癌的一线用药。紧随其后，在2017年3月和9月，美国食品药品监督管理局分别批准了诺华公司的Ribocilib和礼来公司的abemaciclib。接二连三的CDK4/6抑制剂类药物的上市，证明其作为新的癌症治疗靶点是成功的。然而靶向CDKs抑制剂的研究并非一帆风顺，大多数选择性CDKs抑制剂小分子由于成药性差而被剔除；治疗过程中频繁出现的耐药性也让人不得不思考过于单一的靶向选择性的合理性。实际上，由于癌症发生发展过程的复杂性，寻找低毒高效的多靶点药物一直是药物研究领域的重点。
最近五年，CDKI的分子结构没有出现更加新颖有效的骨架，而对于经典靶点的关键残基和经典分子结构的构效关系研究也越来越透彻，这使得科学家们得以有精力转向多靶点抑制剂的研究。目前研究最多的是同时靶向细胞周期控制性CDKs和非细胞周期控制性CDKs的抑制剂如CDK2/9、CDK4/9、CDK1/2/5、CDK2/5和CDK4/5等。这些靶点的共同特点就是已报道有晶体解析数据或蛋白质-小分子共晶结构数据，并且对它们的作用机制的了解较为清楚，这为基于靶蛋白结构的药物设计提供了充分的理论依据。
通过对CDK4/6和CDK9抑制剂进行SAR分析，归纳总结靶蛋白关键氨基酸残基和小分子抑制剂之间的相互作用关系，结合部分前期研究结果，确立了以5-氯-嘧啶-2,4-二胺为核心的结构骨架进行多靶点CDKI的研发，以期发现具有更佳治疗收益的CDK抑制剂并扩展靶向CDK抑制剂的小分子库。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物作为一类CDK6/9激酶抑制剂，用于预防或***疾病的药物中的用途。
本发明所述肿瘤疾病可以选自乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤或白血病。
本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：本发明的一种5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物，所述5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物的如式(I)或式(II)所示：
Figure GDA0004062406670000021
Figure GDA0004062406670000031
所述R1选自苯基、取代苯基、苄基、取代苄基、苯乙基、取代苯乙基或呋喃-2-基甲基中的任一种基团；所述R2选自脂肪环、苯环、取代苯环、苄基、取代苄基、苯乙基、取代苯乙基、吡啶环、取代吡啶环或呋喃环中的任一种基团；
所述R2’选自苯环或吡啶环；所述R3选自N-甲基吡啶、N-乙基吡啶、吡啶、哌啶、吗啉或N-甲基高哌嗪中的任一种基团。
所述5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物、其药学上可接受的衍生物或其药学上可接受的衍生物盐的结构式如下：
Figure GDA0004062406670000032
Figure GDA0004062406670000041
Figure GDA0004062406670000051
Figure GDA0004062406670000061
Figure GDA0004062406670000071
本发明的一种所述的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将2,4,5-三氯嘧啶和伯胺在四丁基碘化铵催化下发生亲核取代反应，得中间体(II)；
(2)中间体(II)和伯胺经布赫瓦尔德-哈特维希反应，得到结构通式(I)所述的化合物，制得5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物。
进一步地，在步骤(1)中，将2,4,5-三氯嘧啶和伯胺在四丁基碘化铵催化下发生亲核取代反应，得中间体(II)；
在步骤(2)中，5-溴-2-硝基吡啶或对溴硝基苯和杂环胺反应，得硝基化合物，硝基化合物进行加氢反应得到中间体(III)；
在步骤(3)中，中间体(II)和中间体(III)经布赫瓦尔德-哈特维希反应，得到结构通式II所述的化合物。
本发明所述的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物在制备调控蛋白激酶催化活性制剂中的应用。
进一步地，所述蛋白激酶为周期依赖性激酶。
本发明所述的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物作为一类CDK6/9激酶抑制剂，用于预防或***疾病的药物中的用途。
进一步地，所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤或白血病。
本发明的优点在于：
(1)本发明的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物可用于生物学或药理学现象，周期依赖性激酶参与的信号通路传导研究，以及对于新型周期依赖性激酶抑制剂的评价；
(2)本发明的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物经体外抗肿瘤活性筛选，结果显示其对人卵巢癌、ER+/Her-乳腺癌、三阴性乳腺癌、急性淋巴细胞白血病均表现出较强的抑制活性，同时毒性较低；
(3)本发明制备的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物激酶活性测试表明该系列化合物多数对CDK6有较强抑制作用，部分对CDK9有较强抑制作用；
(4)本发明所述的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物结构新颖、合成工艺简单、产品纯度高，对肿瘤细胞表现出较强的抑制活性，具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明的化合物59、对照组、玻玛西林与瘤体积对ICR小鼠体内活性测试结果图；
图2为本发明的化合物59、对照组、玻玛西林对ICR小鼠体内活性测试结果图，结果表明化合物59具有良好的体内抗肿瘤活性同时毒性较低。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中所用的试验材料和试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例中未注明具体技术或条件者，均可以按照本领域内的文献所描述的技术或条件或按照产品说明书进行。
本发明5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物的制备流程如下所示：
Figure GDA0004062406670000081
R1选自苯基、取代苯基、苄基、取代苄基、苯乙基、取代苯乙基、呋喃-2-基甲基中的任一种基团；
R2选自脂肪环、苯环、取代苯环、苄基、取代苄基、苯乙基、取代苯乙基、吡啶环、取代吡啶环或呋喃环中的任一种基团；
R3选自N-甲基吡啶、N-乙基吡啶、吡啶、哌啶、吗啉或N-甲基高哌嗪。
实施例1
目标化合物27的合成：5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-苯基嘧啶-2,4-二胺
1.1中间体II-1的制备：2,5-二氯-N-苯基嘧啶-4-胺
称取0.5克的2,4,5-三氯嘧啶(2.73mmol)加入到50毫升圆底烧瓶中，并以5毫升的二甲基亚砜溶解，然后加入催化量的四丁基碘化铵，搅拌5分钟。待溶液由无色变为黄色后加入0.28克的苯胺(3.00mmol)和0.3克的三乙胺(3.00mmol)，在室温下搅拌3小时。用薄层色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝20:1)检测反应终点。待反应结束后，用25毫升的冰水淬灭反应并搅拌30分钟后，用乙酸乙酯萃取(3次，每次30毫升)混合物。合并萃取的乙酸乙酯层，用饱和氯化钠溶液洗涤三次。乙酸乙酯层用无水硫酸钠上干燥24小时后过滤并浓缩乙酸乙酯层，得到的残留物用自动化中压色谱纯化***进行纯化分离。产物为白色固体；产率为89％(0.58g)。Mp 83-84℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.19(s,1H),7.62(d,J＝7.8Hz,2H),7.41(t,J＝7.9Hz,2H),7.27(s,1H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H).
Figure GDA0004062406670000091
(a)四丁基碘化铵，三乙胺，二甲基亚砜，常温反应。
1.2中间体III-1的制备：5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺
称取15克的5-溴-2-硝基吡啶(73.9mmol)加入到250毫升圆底烧瓶中，并以100毫升的二甲基亚砜溶解，然后加入碳酸钾15.3克(110.7mmol)，在70℃的油浴锅上搅拌10分钟。随后加入12.7克的1-甲基-哌嗪(126.1mmol)，并继续反应5小时。用薄层色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)检测反应终点。待反应结束后，用300毫升的冰水淬灭反应并搅拌30分钟后，用乙酸乙酯萃取(3次，每次200毫升)混合物。合并萃取的乙酸乙酯层，用饱和氯化钠溶液洗涤三次。乙酸乙酯层用无水硫酸钠上干燥24小时后过滤并浓缩乙酸乙酯层，得到的黄色残留固体用乙醇重结晶即可获得纯的1-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪。将1-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌嗪2克(9.0mmol)重新完全溶解在甲醇中，加入10％Pd/C(0.2g)作为催化剂，在高压反应釜中或在氢气氛围的圆底烧瓶中进行催化加氢反应。待高压反应釜中压力不再降低或溶液颜色变得澄清，反应即为结束。将反应液过滤除去催化剂，浓缩液体即可得到纯品中间体III。中间体III在密闭的惰性气体中保存或现制现用。
Figure GDA0004062406670000092
其中反应条件：(a)碳酸钾，二甲基亚砜，70℃。(b)Pd/C 10％,H2。
1.3目标化合物27的合成
取25毫升的封管以氩气进行气体置换。取0.2克中间体II-1(0.83mmol)、0.2克中间体III-1(1.00mmol)、38毫克的Pd2(dba)3(0.042mmol)、83毫克的BINAP(0.083mmol)和1.2克的NaOtBu(1.25mmol)加入到封管中，以10毫升的超干二氧六环搅拌溶解。密封封管并在110℃下反应12小时。反应毕，冷却至室温，将反应液过滤，减压下除去溶剂，并用水/乙酸乙酯体系分配萃取。乙酸乙酯层用无水硫酸钠上干燥24小时后过滤并浓缩乙酸乙酯层，得到的残留物。用自动化中压色谱纯化***进行纯化分离，获得白色粉末；产率59％(0.19g)。Mp197-198℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.20(s,1H),8.14(s,1H),8.07(d,J＝9.1Hz,1H),8.01(d,J＝2.9Hz,1H),7.59(d,J＝7.7Hz,2H),7.38(t,J＝7.9Hz,2H),7.20(d,J＝3.2Hz,1H),7.18(d,J＝7.3Hz,1H),7.07(s,1H),3.19–3.15(m,4H),2.64–2.61(m,4H),2.38(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C20H23ClN7:396.1698；found:396.1697.
Figure GDA0004062406670000101
反应条件如下：(a)Pd2(dba)3，BINAP，NaOtBu，二氧六环，110℃，氩气保护。(b)Pd2(dba)3，XANTPHOS，碳酸铯，二氧六环，110℃,氩气保护。
实施例2
目标化合物1的合成：5-氯-N2-(吡啶-3-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35(2,5-二氯-N-(邻甲苯基)嘧啶-4-胺,步骤同II-1，仅以苯胺替换为邻甲基苯胺)，以中间体III-1替换为3-氨基吡啶。Mp152-153℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.47(d,J＝2.5Hz,1H),8.19(d,J＝4.7Hz,1H),8.08(s,1H),8.02(d,J＝8.3Hz,1H),7.70(d,J＝7.8Hz,1H),7.34–7.27(m,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),7.12(s,1H),7.08(dd,J＝8.4,4.7Hz,1H),6.92(s,1H),2.30(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C16H15ClN5:312.1010；found:312.1011.
实施例3
目标化合物2的合成：5-氯-N2-环丙基-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(2).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为环丙胺。Mp 131-132℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.00(s,1H),7.26(s,1H),7.22(t,J＝7.0Hz,2H),7.06(t,J＝7.4Hz,1H),6.91(s,1H),5.16(s,1H),2.69(qd,1H),2.33(s,3H),0.77(q,J＝6.7Hz,2H),0.64–0.42(m,2H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C14H16ClN4:275.1058；found:275.1060.
实施例4
目标化合物3的合成：5-氯-N2-环己基-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(3).
实验步骤同实施例1，以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为环己胺。Mp 128.3-129.5℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.07(s,1H),7.93(s,1H),7.22(d,J＝7.7Hz,2H),7.06(t,J＝7.4Hz,1H),6.85(s,1H),4.86(s,1H),3.66(s,1H),2.32(s,3H),2.01(d,J＝9.7Hz,2H),1.73(d,J＝13.6Hz,2H),1.62(d,J＝13.6Hz,1H),1.35(d,J＝12.4Hz,2H),1.26–1.10(m,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C17H21ClN4:317.1528；found:317.1531.
实施例5
标化合物4的合成：5-氯-N2-苯基-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(4).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为苯胺。Mp 165-166℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.06(s,1H),7.81(d,J＝7.9Hz,1H),7.44(d,J＝7.8Hz,2H),7.29–7.25(m,2H),7.21(t,J＝7.9Hz,2H),7.17(t,J＝7.4Hz,1H),6.99(s,1H),6.97(t,J＝7.4Hz,1H),6.90(s,1H),2.32(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd forC17H16ClN4:311.1058；found:311.1062.
实施例6
目标化合物5的合成：5-氯-N4-(邻甲苯基)-N2-(对甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(5).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为对甲苯胺。Mp 136-137℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.04(s,1H),7.83(d,J＝7.9Hz,1H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),7.26(t,J＝8.3Hz,2H),7.16(t,J＝7.4Hz,1H),7.02(d,J＝8.2Hz,2H),6.90(d,J＝9.1Hz,2H),2.32(s,3H),2.29(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd forC18H18ClN4:325.1215；found:325.1215.
实施例7
目标化合物6的合成：N2-苄基-5-氯-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(6).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为苄胺。Mp 149-150℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ7.94(s,1H),7.85(d,J＝7.9Hz,1H),7.28(m,5H),7.20(d,J＝7.5Hz,1H),7.15(t,J＝6.9Hz,1H),7.05(t,J＝7.4Hz,1H),6.85(s,1H),4.51(d,J＝5.3Hz,2H),2.29(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C18H18ClN4:325.1215；found:325.1215.
实施例8
目标化合物7的合成：5-氯-N2-苯乙基-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(7).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为苯乙胺。Mp 99-100℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ7.96–7.91(s,1H),7.28(t,J＝7.5Hz,2H),7.26(s,1H),7.25–7.21(m,2H),7.20(d,J＝7.4Hz,1H),7.14(d,J＝5.8Hz,2H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),6.87(s,1H),5.02(s,1H),3.56(d,J＝6.3Hz,2H),2.84(t,J＝7.1Hz,2H),2.33(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C19H20ClN4:339.1371；found:339.1373.
实施例9
目标化合物8的合成：5-氯-N2-(呋喃-2-基甲基-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(8).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为糠胺。Mp 129.2-131.3℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ7.96(s,1H),7.94(d,J＝7.8Hz,1H),7.33(s,1H),7.22(t,J＝7.1Hz,2H),7.08(t,J＝7.4Hz,1H),6.86(s,1H),6.28(dd,J＝2.8,1.8Hz,1H),6.13(s,1H),5.26(s,1H),4.49(d,J＝5.4Hz,2H),2.31(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C16H15ClN4O:315.1007；found:315.1011.
实施例10
目标化合物9的合成：5-氯-N2-(吡啶-2-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(9).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为2-氨基吡啶。Mp 144-145℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.62(s,1H),8.27(d,J＝4.7Hz,1H),8.19(s,1H),7.98(d,J＝8.5Hz,1H),7.73(d,J＝7.9Hz,1H),7.42(t,J＝7.8Hz,1H),7.28(t,J＝7.2Hz,2H),7.20(t,J＝7.4Hz,1H),6.91(s,1H),6.87–6.74(m,1H),2.31(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C16H15ClN5:312.1010；found:312.1010.
实施例11
目标化合物10的合成：5-氯-N2-(4-氯吡啶-2-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(10).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为5-氯-2氨基吡啶。Mp 164-166℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ9.02(s,1H),8.23(s,1H),8.18(d,J＝5.3Hz,1H),8.09(s,1H),7.68(d,J＝7.8Hz,1H),7.37–7.29(m,2H),7.21(t,J＝7.5Hz,1H),6.94(s,1H),6.82(dd,J＝5.3,1.7Hz,1H),2.32(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdfor C16H14Cl2N5:346.062；found:346.0621.
实施例12
目标化合物11的合成：5-氯-N2-(吡啶-4-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(11).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为4-氨基吡啶。Mp 182-184℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.28(d,J＝6.3Hz,2H),8.11(s,1H),7.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.32(d,J＝6.3Hz,4H),7.25(s,1H),7.18(s,1H),6.95(s,1H),2.28(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C16H15ClN5:312.1010；found:312.1011.
实施例13
目标化合物12的合成：5-氯-N2-(2-甲氧基吡啶-4-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(12).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为3-甲氧基-4氨基吡啶。Mp 163-164℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.10(s,1H),7.88(d,J＝5.8Hz,1H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.30(d,J＝7.3Hz,2H),7.21(t,J＝7.4Hz,1H),7.13(s,1H),6.98(s,1H),6.94(s,1H),6.87(d,J＝5.8Hz,1H),3.87(s,3H),2.31(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C17H16ClN5O:341.5288；found:341.5289.
实施例14
目标化合物13的合成：5-氯-N2-(吡啶-4-基甲基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(13).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为吡啶-4-基甲胺。Mp 137-138℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.49(d,J＝5.4Hz,2H),7.94(s,1H),7.20(d,J＝7.6Hz,1H),7.14(s,2H),7.07(t,J＝7.2Hz,2H),6.84(s,1H),5.53(s,1H),4.48(s,2H),2.24(s,3H),1.80(s,1H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C17H16ClN5:325.5377；found:325.5379.
实施例15
目标化合物14的合成：5-氯-N2-(2-(吡啶-2-基)乙基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(14).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为3-(吡啶-2-基)丙-1-胺。Mp 116.2-117.2℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.53(d,J＝4.8Hz,1H),8.04(s,1H),7.93(s,1H),7.56(dd,J＝7.6,6.3Hz,1H),7.22(t,J＝6.8Hz,2H),7.11(dd,J＝7.3,5.1Hz,1H),7.07(t,J＝7.4Hz,2H),6.86(s,1H),5.40(s,1H),3.72(dd,J＝12.8,6.3Hz,2H),3.03(t,J＝6.7Hz,2H),2.32(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd forC18H18ClN5:340.1323；found:340.1319.
实施例16
目标化合物15的合成：5-氯-N2-(2-(吡啶-3-基)乙基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(15).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为3-(吡啶-3-基)丙-1-胺。Mp 107.1-108.3℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.45(d,J＝4.8Hz,1H),8.40(s,1H),7.94(s,1H),7.92(d,J＝7.3Hz,1H),7.40(s,1H),7.25–7.22(m,2H),7.18(dd,J＝7.5,4.9Hz,1H),7.11(t,J＝7.4Hz,1H),6.86(s,1H),5.08(s,1H),3.53(d,J＝5.2Hz,2H),2.83(t,J＝7.0Hz,2H),2.32(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd forC18H18ClN5:340.1323；found:340.1319.
实施例17
目标化合物16的合成：5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(16).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35。Mp 172-173℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.30(s,1H),8.14(s,1H),7.98(d,J＝2.9Hz,1H),7.87(d,J＝9.1Hz,1H),7.76(d,J＝7.9Hz,1H),7.31–7.26(m,2H),7.18(t,J＝7.5Hz,1H),7.06(dd,J＝9.1,2.9Hz,1H),6.90(s,1H),3.15–3.11(m,4H),2.62–2.57(m,4H),2.36(s,3H),2.30(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H25ClN7:410.1854；found:410.1853.
实施例18
目标化合物17的合成：5-氯-N2-(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(17).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-2(5-(4-乙基哌嗪-1-基)吡啶-2-胺,实验步骤同III-1，仅以N-甲基哌嗪替换为N-乙基哌嗪)。Mp 226.3-227.6℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.10(s,1H),7.91(s,1H),7.89(s,1H),7.76(d,J＝7.7Hz,1H),7.67(s,1H),7.33–7.27(m,2H),7.19(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(d,J＝8.9Hz,1H),6.90(s,1H),3.93–3.79(m,4H),3.18–2.97(m,4H),2.31(s,3H),1.65–1.53(m,3H),1.31–1.25(m,2H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H26ClN7:423.6788；found:423.6789.
实施例19
目标化合物18的合成5-氯-N2-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(18).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-3(4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯,实验步骤同III-1，仅以N-甲基哌嗪替换为哌嗪-1-羧酸叔丁酯)。Mp 197.8-198.6℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.11(s,1H),7.94(d,J＝2.5Hz,1H),7.89(d,J＝9.1Hz,1H),7.86(s,1H),7.75(d,J＝7.8Hz,1H),7.32–7.26(m,2H),7.19(t,J＝7.4Hz,1H),7.07(d,J＝9.0Hz,1H),6.89(s,1H),3.69–3.54(m,4H),3.12–2.98(m,4H),2.35–2.20(m,3H),1.54–1.42(m,9H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdfor C25H30ClN7O2:496.2222；found:496.2228.
实施例20
目标化合物19的合成：5-氯-N2-(5-吗啉代吡啶-2-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(19).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-4(5-吗啉并吡啶-2-胺,实验步骤同III-1，仅以N-甲基哌嗪替换为吗啉)。Mp167.8-168.5℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.23(s,1H),8.11(s,1H),7.94(d,J＝2.5Hz,1H),7.86(d,J＝9.0Hz,1H),7.76(d,J＝7.8Hz,1H),7.27(t,J＝10.5Hz,2H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),7.06(dd,J＝9.1,2.5Hz,1H),6.89(s,1H),3.32–3.00(m,4H),2.77–2.58(m,4H),2.30(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C20H21ClN6O:396.6088；found:396.6089.
实施例21
目标化合物20的合成：5-氯-N2-(5-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(20).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-5(5-(哌啶-1-基)吡啶-2-胺,实验步骤同III-1，仅以N-甲基哌嗪替换为哌啶)。Mp175.1-176.4℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.10(s,1H),7.94(d,J＝2.6Hz,1H),7.85(d,J＝9.1Hz,1H),7.83(s,1H),7.78(d,J＝7.9Hz,1H),7.29–7.27(m,2H),7.18(t,J＝7.4Hz,1H),7.08(dd,J＝9.2,2.3Hz,1H),6.88(s,1H),3.13–2.86(m,4H),2.31(s,3H),1.76–1.68(m,4H),1.56(dt,J＝11.3,5.8Hz,2H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H23ClN6:395.1745；found:395.1740.
实施例22
目标化合物21的合成：5-氯-N2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(21).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-6(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯胺,实验步骤同III-1，仅以5-溴-2-硝基吡啶替换为对溴硝基苯)。Mp 163.4-164.5℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.01(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(d,J＝9.0Hz,2H),7.25–7.20(m,2H),7.13(td,J＝7.4,1.1Hz,1H),6.91(s,1H),6.89(s,1H),6.83(d,J＝8.9Hz,2H),3.17–3.06(m,4H),2.63–2.56(m,4H),2.35(s,3H),2.31(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H26ClN6:409.1902；found:409.1903.
实施例23
目标化合物22的合成：5-氯-N2-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(22).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-7(4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯胺,实验步骤同III-1，仅以5-溴-2-硝基吡啶替换为对溴硝基苯，以N-甲基哌嗪替换为N-乙基哌嗪)。Mp 171.3-172℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.02(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.33(d,J＝8.9Hz,2H),7.25–7.20(m,2H),7.14(t,J＝7.4Hz,1H),6.89(s,1H),6.85(s,1H),6.84(d,J＝8.9Hz,2H),3.20–3.07(m,4H),2.67–2.59(m,4H),2.50(q,J＝7.3Hz,2H),2.32(s,3H),1.14(t,J＝7.2Hz,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C23H28ClN6:423.2058；found:423.2059.
实施例24
目标化合物23的合成：4-(4-((5-氯-4-(邻甲苯基氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(23).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-8(4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯,实验步骤同III-1，仅以5-溴-2-硝基吡啶替换为对溴硝基苯，以N-甲基哌嗪替换为哌嗪-1-羧酸叔丁酯)。Mp 162.8-163.3℃；1HNMR(600MHz,cdcl3)δ8.03(s,1H),7.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.34(d,J＝8.9Hz,2H),7.25(dd,J＝17.8,7.6Hz,2H),7.15(t,J＝7.4Hz,1H),6.90(s,2H),6.82(d,J＝8.8Hz,2H),3.65–3.54(m,4H),3.05(s,4H),2.32(s,3H),1.49(s,9H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd forC26H32ClN6O2:495.2270；found:495.2270.
实施例25
目标化合物24的合成：5-氯-N2-(4-吗啉代苯基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(24).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-9(4-吗啉代苯胺,实验步骤同III-1，仅以5-溴-2-硝基吡啶替换为对溴硝基苯，以N-甲基哌嗪替换为吗啉)。Mp 248.7-249.6℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(s,1H),8.56(s,1H),7.98(s,1H),7.40–7.13(m,6H),6.58(d,J＝8.7Hz,2H),3.78–3.54(m,4H),3.05–2.77(m,4H),2.13(s,3H).HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H23ClN5O:396.1586；found:396.1586.
实施例26
目标化合物25的合成：5-氯-N2-(4-(哌啶-1-基)苯基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(25).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-10(4-(哌啶-1-基)苯胺,实验步骤同III-1，仅以5-溴-2-硝基吡啶替换为对溴硝基苯，以N-甲基哌嗪替换为哌啶)。Mp 147-148.6℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.00(s,1H),7.87(d,J＝7.9Hz,1H),7.30(d,J＝8.9Hz,2H),7.23(dd,J＝12.9,6.9Hz,2H),7.12(td,J＝7.5,0.9Hz,1H),6.88(s,1H),6.87(s,1H),6.83(d,J＝8.9Hz,2H),3.12–2.95(m,4H),2.30(s,4H),1.75–1.64(m,6H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H25ClN5:394.1793；found:394.1794.
实施例27
目标化合物26的合成：5-氯-N2-(4-(1-甲基氮杂-4-基)苯基)-N4-(邻甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(26).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-35，以中间体III-1替换为中间体III-11(4-(4-甲基-1,4-二氮杂-1-基)苯胺,实验步骤同III-1，仅5-溴-2-硝基吡啶替换为对溴硝基苯，以N-甲基哌嗪替换为N-甲基高哌嗪)。Mp 119.1-120.2℃；1H NMR(400MHz,cdcl3)δ8.00(s,1H),7.92(d,J＝8.1Hz,1H),7.28(d,J＝9.0Hz,2H),7.24–7.18(m,2H),7.11(td,J＝7.4,1.2Hz,1H),6.90(s,1H),6.83(s,1H),6.59(d,J＝9.0Hz,2H),3.66–3.60(m,2H),3.47(t,J＝6.5Hz,2H),2.90–2.84(m,2H),2.79–2.69(m,2H),2.51(s,3H),2.32(s,3H),2.21–2.11(m,2H).
实施例28
目标化合物28的合成：N4-苄基-5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(28).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为II-2(N-苄基-2,5-二氯嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为苄胺)。Mp 177-178℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.04(d,J＝9.1Hz,1H),8.00(s,1H),7.99(d,J＝2.3Hz,1H),7.96(s,1H),7.38–7.34(m,4H),7.33–7.29(m,1H),7.20(dd,J＝9.1,2.7Hz,1H),5.60(t,J＝4.9Hz,1H),4.71(d,J＝5.7Hz,2H),3.16–3.12(m,4H),2.60–2.56(m,4H),2.35(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd forC20H23ClN7:409.6588；found:409.6589.
实施例29
目标化合物29的合成：5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-(4-(三氟甲基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(29)
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-3(2,5-二氯-N-(4-(三氟甲基)苄基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为4-三氟甲基苄胺)。Mp 181-182℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.91(s,1H),8.09(s,1H),8.05(d,J＝2.9Hz,1H),7.89(d,J＝9.1Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,2H),7.45(d,J＝8.1Hz,2H),7.10(dd,J＝9.1,2.9Hz,1H),5.75(t,J＝5.9Hz,1H),4.76(d,J＝5.9Hz,2H),3.18–3.08(m,4H),2.62–2.55(m,4H),2.35(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C20H23ClFN7:477.6488；found:477.6489.
实施例30
目标化合物30的合成：5-氯-N4-(4-甲基苄基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(30).
实验步骤同实施例1，仅仅以中间体II-1替换为中间体II-4(2,5-二氯-N-(4-氟苄基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为4-氟苄胺)。Mp 181-182℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.09(d,J＝9.0Hz,1H),8.08(s,1H),8.00(s,1H),7.99(s,1H),7.25(d,J＝7.9Hz,2H),7.22(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),7.17(d,J＝7.8Hz,2H),5.56(t,J＝5.5Hz,1H),4.66(d,J＝5.6Hz,2H),3.27–3.06(m,4H),2.74–2.51(m,4H),2.36(s,3H),2.35(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H26ClN7:424.2010；found:424.2010.
实施例31
目标化合物31的合成：5-氯-N4-(4-氟苄基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(31).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-5(2,5-二氯-N-(4-甲基苄基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为4-甲基苄胺)。Mp 177-178℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.25(s,1H),8.04(d,J＝9.1Hz,1H),8.02(s,1H),8.01(d,J＝2.9Hz,1H),7.36–7.30(m,2H),7.20(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),7.04(t,J＝8.6Hz,2H),5.59(t,J＝5.6Hz,1H),4.67(d,J＝5.7Hz,2H),3.39–3.02(m,4H),2.83–2.55(m,4H),2.36(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H24ClFN7:428.1760；found:428.1760.
实施例32
目标化合物32的合成：5-氯-N4-(4-甲氧基苄基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(32).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-6(2,5-二氯-N-(4-甲氧基苄基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为4-甲氧基苄胺)。Mp 146-147℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.42(s,1H),8.12(d,J＝9.1Hz,1H),8.04(d,J＝2.9Hz,1H),8.02(s,1H),7.29(d,J＝8.6Hz,2H),7.23(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),6.89(d,J＝8.6Hz,2H),5.53(t,J＝5.5Hz,1H),4.64(d,J＝5.5Hz,2H),3.80(s,3H),3.24–3.02(m,4H),2.68–2.49(m,4H),2.36(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H26ClN7O:440.1960；found:440.1960.
实施例33
目标化合物33的合成：5-氯-N4-(3-甲氧基苄基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(33).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-7(2,5-二氯-N-(3-甲氧基苄基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为3-甲氧基苄胺)。Mp 162-163℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.24(s,1H),8.02(m,3H),7.28(t,J＝7.9Hz,1H),7.21(dd,J＝9.1,2.9Hz,1H),6.95(d,J＝7.6Hz,1H),6.91(s,1H),6.84(d,J＝9.7Hz,1H),5.63(t,J＝5.6Hz,1H),4.68(d,J＝5.7Hz,2H),3.79(s,3H),3.20–3.10(m,4H),2.65–2.56(m,4H),2.37(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H26ClN7O:440.1960；found:440.1960.
实施例34
目标化合物34的合成：5-氯-N4-(2-甲氧基苄基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(34).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-8(2,5-二氯-N-(2-甲氧基苄基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为2-甲氧基苄胺)。Mp 156-157℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.16(d,J＝9.1Hz,1H),7.99(d,J＝2.9Hz,1H),7.94(s,1H),7.82(s,1H),7.33–7.22(m,3H),6.95–6.87(m,2H),5.83(t,J＝5.8Hz,1H),4.70(d,J＝5.9Hz,2H),3.90(s,3H),3.32–3.10(m,4H),2.91–2.55(m,4H),2.36(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdfor C22H26ClN7O:440.1960；found:440.1960.
实施例35
目标化合物35的合成：5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-苯乙基嘧啶-2,4-二胺(35).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-9(2,5-二氯-N-苯乙基嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为苯乙胺)。Mp 208-210℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.19(d,J＝9.1Hz,1H),8.00(d,J＝2.6Hz,1H),7.95(s,1H),7.87(s,1H),7.33(t,J＝7.5Hz,2H),7.25(s,1H),7.24(d,J＝3.2Hz,1H),7.22(d,J＝7.3Hz,2H),5.35(t,J＝5.8Hz,1H),3.76(dd,J＝13.6,6.8Hz,2H),3.19–3.09(m,4H),2.95(t,J＝7.2Hz,2H),2.64–2.54(m,4H),2.36(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H27ClN7:424.2011；found:424.2011.
实施例36
目标化合物36的合成：5-氯-N4-(4-氟苯乙基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(36).
实验步骤同实施例1，仅仅以中间体II-1替换为中间体II-10(2,5-二氯-N-(4-氟苯乙基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为4-氟苯乙胺)。Mp 240-241℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.18(d,J＝9.1Hz,1H),7.98(d,J＝2.9Hz,1H),7.94(s,1H),7.59(s,1H),7.25(d,J＝3.0Hz,1H),7.18(dd,J＝8.5,5.5Hz,2H),7.07–6.96(m,2H),5.33(t,J＝5.7Hz,1H),3.79–3.67(m,2H),3.20–3.13(m,4H),2.93(t,J＝7.2Hz,2H),2.63–2.57(m,4H),2.38(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H26ClFN7:424.1917；found:424.1918.
实施例37
目标化合物37的合成：5-氯-N4-(2-氟苯乙基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(37).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-11(2,5-二氯-N-(2-氟苯乙基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为2-氟苯乙胺)。Mp 198-200℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.20(d,J＝9.1Hz,1H),8.06(s,1H),8.02(d,J＝2.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.28(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),7.25–7.17(m,2H),7.11–7.02(m,2H),5.41(t,J＝5.8Hz,1H),3.78(dd,J＝13.3,6.8Hz,2H),3.19–3.13(m,4H),3.01(t,J＝7.1Hz,2H),2.67–2.57(m,4H),2.36(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H26ClFN7:442.1917；found:442.1918.
实施例38
目标化合物38的合成：5-氯-N4-(4-甲氧基苯乙基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(38).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-12(2,5-二氯-N-(4-甲氧基苯乙基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为4-甲氧基苯乙胺)。Mp 205-206℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.20(d,J＝9.1Hz,1H),8.01(d,J＝2.7Hz,2H),7.95(s,1H),7.26(dd,J＝9.1,2.9Hz,1H),7.14(d,J＝8.5Hz,2H),6.87(d,J＝8.6Hz,2H),5.35(t,J＝5.7Hz,1H),3.80(s,3H),3.72(dd,J＝13.3,6.8Hz,2H),3.25–3.06(m,4H),2.90(t,J＝7.1Hz,2H),2.66–2.55(m,4H),2.37(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C23H29ClN7O:454.2117；found:454.2117.
实施例39
目标化合物39的合成：5-氯-N4-(呋喃-2-基甲基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(39).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-13(2,5-二氯-N-(呋喃-2-基甲基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为糠胺)。Mp 190-191℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.21(s,1H),8.15(d,J＝9.1Hz,1H),8.01(s,1H),7.99(s,1H),7.38(s,1H),7.33–7.24(m,1H),6.33(s,1H),6.27(s,1H),5.57(s,1H),4.68(d,J＝5.4Hz,2H),3.16(s,4H),2.60(s,4H),2.35(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C19H22ClN7O:400.1647；found:400.1647.
实施例40
目标化合物40的合成：5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-(对甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(40).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-14(2,5-二氯-N-(对甲苯基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为对甲基苯胺)。Mp 171-172℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.28(s,1H),8.10(s,1H),8.05(d,J＝9.1Hz,1H),8.00(d,J＝2.9Hz,1H),7.44(d,J＝8.3Hz,2H),7.19–7.14(m,3H),7.01(s,1H),3.21–3.08(m,4H),2.75–2.55(m,4H),2.36(s,3H),2.35(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H25ClN7:410.1854；found:410.1853.
实施例41
目标化合物41的合成：5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-(间甲苯基)嘧啶-2,4-二胺(41).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-15(2,5-二氯-N-(间甲苯基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为间甲苯胺)。Mp 191-192℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.12(s,2H),8.09(d,J＝9.1Hz,1H),8.01(d,J＝2.9Hz,1H),7.43(s,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(t,J＝7.8Hz,1H),7.19(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),7.03(s,1H),6.99(d,J＝7.5Hz,1H),3.23–3.02(m,4H),2.65–2.56(m,4H),2.38(s,3H),2.37(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H25ClN7:410.1854；found:410.1853.
实施例42
目标化合物42的合成：5-氯-N4-(4-乙基苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(42).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-16(2,5-二氯-N-(4-乙基苯基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为对乙基苯胺)。Mp 169-170℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.35(s,1H),8.11(s,1H),8.04(d,J＝9.1Hz,1H),8.01(d,J＝2.8Hz,1H),7.46(d,J＝8.3Hz,2H),7.19(d,J＝8.3Hz,2H),7.15(dd,J＝9.1,2.9Hz,1H),7.01(s,1H),3.19–3.07(m,4H),2.67(q,J＝7.6Hz,2H),2.61–2.55(m,4H),2.35(s,3H),1.26(t,J＝7.6Hz,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C22H26ClN7:424.2011；found:424.2011.
实施例43
目标化合物43的合成：5-氯-N4-(4-异丙基苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(43).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-17(2,5-二氯-N-(4-异丙基苯基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为对异丙基苯胺)。Mp 165-166℃；1HNMR(600MHz,cdcl3)δ8.30(s,1H),8.11(s,1H),8.03(d,J＝9.1Hz,1H),8.00(d,J＝2.7Hz,1H),7.46(d,J＝8.4Hz,2H),7.22(d,J＝8.4Hz,2H),7.13(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),7.01(s,1H),3.17–3.09(m,4H),2.93(dt,J＝13.8,6.9Hz,1H),2.71–2.53(m,4H),2.35(s,3H),1.28(d,J＝6.9Hz,6H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C23H29ClN7:438.2167；found:438.2167.
实施例44
目标化合物44的合成：5-氯-N4-(3-异丙基苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(44).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-18(2,5-二氯-N-(3-异丙基苯基)嘧啶-4-胺,实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为间异丙基苯胺)。Mp 159-160℃；1HNMR(600MHz,cdcl3)δ8.39(s,1H),8.14(s,1H),8.06(d,J＝9.1Hz,1H),8.02(d,J＝2.9Hz,1H),7.49(d,J＝7.9Hz,1H),7.32(s,1H),7.30(t,J＝7.8Hz,1H),7.16(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),7.05(d,J＝7.6Hz,2H),3.18–3.09(m,4H),2.90(dp,J＝13.8,6.8Hz,1H),2.63–2.53(m,4H),2.35(s,3H),1.26(d,J＝6.9Hz,6H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C23H29ClN7:438.2167；found:438.2167.
实施例45
目标化合物45的合成：5-氯-N4-(2-异丙基苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(45).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-19(2,5-二氯-N-(2-异丙基苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为邻异丙基苯胺)。Mp 184-185℃；1HNMR(600MHz,cdcl3)δ8.14(s,1H),8.12(s,1H),7.95(d,J＝2.9Hz,1H),7.78(d,J＝9.1Hz,1H),7.63(d,J＝7.6Hz,1H),7.38(d,J＝7.6Hz,1H),7.33–7.22(m,2H),7.00(dd,J＝9.1,2.7Hz,1H),6.92(s,1H),3.19–3.00(m,5H),2.64–2.52(m,4H),2.36(s,3H),1.23(d,J＝6.9Hz,6H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C23H29ClN7:438.2167；found:438.2167.
实施例46
目标化合物46的合成：N4-(4-(叔丁基)苯基)-5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(46).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-20(N-(4-(叔丁基)苯基)-2,5-二氯嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为对叔丁基苯胺)。Mp 172-173℃；1HNMR(600MHz,cdcl3)δ8.37(s,1H),8.11(s,1H),8.04(d,J＝9.1Hz,1H),8.00(d,J＝2.8Hz,1H),7.47(d,J＝8.5Hz,2H),7.38(d,J＝8.5Hz,2H),7.13(dd,J＝9.1,2.7Hz,1H),7.01(s,1H),3.22–3.04(m,4H),2.63–2.51(m,4H),2.35(s,3H),1.35(s,9H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C24H31ClN7:452.2324；found:452.2324.
实施例47
目标化合物47的合成：5-氯-N4-甲磺酰基-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(47).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-21(2,5-二氯-N-间苯二甲嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为2,4,6,-三甲基苯胺)。Mp 209-210℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.24(s,1H),8.10(s,1H),7.92(d,J＝2.9Hz,1H),7.53(d,J＝8.9Hz,1H),6.98(s,2H),6.87(dd,J＝9.1,2.4Hz,1H),6.50(s,1H),3.18–2.98(m,4H),2.70–2.52(m,4H),2.36(s,3H),2.35(s,3H),2.17(s,6H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C23H28ClN7:438.2167；found:438.2166.
实施例48
目标化合物48的合成：5-氯-N4-(4-甲氧基苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(48).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-22(2,5-二氯-N-(4-甲氧基苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为对甲氧基苯胺)。Mp 174-176℃；1HNMR(600MHz,cdcl3)δ8.48(s,1H),8.12(s,1H),8.03(s,1H),8.02(d,J＝2.9Hz,1H),7.45(d,J＝8.9Hz,2H),7.15(dd,J＝9.1,2.9Hz,1H),6.96(s,1H),6.91(d,J＝8.9Hz,2H),3.84(s,3H),3.28–3.08(m,4H),2.73–2.54(m,4H),2.36(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcdfor C21H25ClN7O:426.1804；found:426.1806.
实施例49
目标化合物49的合成：5-氯-N4-(3-甲氧基苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(49).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-23(2,5-二氯-N-(3-甲氧基苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为间甲氧基苯胺)。Mp 162-163℃；1HNMR(600MHz,cdcl3)δ8.59(s,1H),8.14(s,1H),8.09(d,J＝9.1Hz,1H),8.03(d,J＝2.9Hz,1H),7.26(m,2H),7.19(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),7.08(dd,J＝7.9,1.4Hz,1H),7.05(s,1H),6.70(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),3.76(s,3H),3.27–3.04(m,4H),2.74–2.47(m,4H),2.35(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H25ClN7O:426.1804；found:426.1806.
实施例50
目标化合物50的合成：5-氯-N4-(2-甲氧基苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(50).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-24(2,5-二氯-N-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为邻甲氧基苯胺)。Mp 199-200℃；1HNMR(600MHz,cdcl3)δ8.43(dd,J＝8.0,1.1Hz,1H),8.30(s,1H),8.15(d,J＝9.0Hz,1H),8.14(s,1H),8.04(d,J＝2.9Hz,1H),7.81(s,1H),7.31–7.23(m,1H),7.07(td,J＝7.9,1.5Hz,1H),7.00–6.95(m,1H),6.94(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),3.93(s,3H),3.26–3.12(m,4H),2.67–2.52(m,4H),2.37(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H25ClN7O:426.1804；found:426.1806.
实施例51
目标化合物51的合成：5-氯-N4-(4-氟苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(51).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-25(2,5-二氯-N-(4-氟苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为对氟苯胺)。Mp 222-223℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.10(s,1H),8.00(d,J＝8.8Hz,1H),7.97(s,1H),7.76(s,1H),7.53(s,2H),7.18(d,J＝8.7Hz,1H),7.09(t,J＝8.0Hz,2H),7.00(s,1H),3.19(s,4H),2.65(s,4H),2.40(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C20H22ClFN7:414.1604；found:414.1605.
实施例52
目标化合物52的合成：5-氯-N4-(3-氟苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(52).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-26(2,5-二氯-N-(3-氟苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为间氟苯胺)。Mp 204-206℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.14(s,1H),8.04(d,J＝9.1Hz,1H),8.01(d,J＝2.7Hz,2H),7.68(dt,J＝11.1,2.2Hz,1H),7.30(td,J＝8.1,6.6Hz,1H),7.27–7.24(m,1H),7.18(dd,J＝9.1,2.7Hz,1H),7.12(s,1H),6.85(td,J＝8.2,2.0Hz,1H),3.19–3.13(m,4H),2.63–2.57(m,4H),2.37(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C20H22ClFN7:414.1604；found:414.1605.
实施例53
目标化合物53的合成：5-氯-N4-(2-氟苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(53).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-27(2,5-二氯-N-(2-氟苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为邻氟苯胺)。Mp 192-193℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.63(s,1H),8.29(t,J＝8.1Hz,1H),8.19(s,1H),8.07–8.02(m,2H),7.27(s,1H),7.21(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),7.18–7.07(m,3H),3.21–3.11(m,4H),2.68–2.56(m,4H),2.37(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C20H22ClFN7:414.1604；found:414.1605.
实施例54
目标化合物54的合成：5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-(4-(三氟甲基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(54).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-28(2,5-二氯-N-(4-(三氟甲基)苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为对三氟甲基苯胺)。Mp 210-211℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.65–8.59(m,1H),8.18(s,1H),8.04(d,J＝2.9Hz,1H),8.00(d,J＝9.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.5Hz,2H),7.57(d,J＝8.5Hz,2H),7.20(dd,J＝9.2,3.0Hz,1H),7.19(s,1H),3.18–3.14(m,4H),2.62–2.57(m,4H),2.36(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H22ClF3N7:464.1572；found:464.1572.
实施例55
目标化合物55的合成：5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-(4-(三氟甲氧基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(55).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-29(2,5-二氯-N-(4-(三氟甲氧基)苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为对三氟甲氧基苯胺)。Mp 206-207℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.21(s,1H),8.16(s,1H),8.02(d,J＝2.9Hz,1H),7.99(d,J＝9.1Hz,1H),7.61(d,J＝8.9Hz,2H),7.23(d,J＝8.5Hz,2H),7.17(dd,J＝9.1,2.9Hz,1H),7.07(s,1H),3.19–3.15(m,4H),2.65–2.59(m,4H),2.38(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H22ClF3N7O:480.1521；found:480.1521.
实施例56
目标化合物56的合成：5-氯-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-N4-(3-(三氟甲氧基)苯基)嘧啶-2,4-二胺(56).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-30(2,5-二氯-N-(3-(三氟甲氧基)苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为间三氟甲氧基苯胺)。Mp 225-226℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.23(s,1H),8.16(s,1H),8.09–7.94(m,2H),7.69(s,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,1H),7.35(t,J＝8.2Hz,1H),7.23(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),7.13(s,1H),7.01(d,J＝8.2Hz,1H),3.25–3.07(m,4H),2.65–2.53(m,4H),2.36(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H22ClF3N7O:480.1521；found:480.1521.
实施例57
目标化合物57的合成：5-氯-N4-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)-N2-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)嘧啶-2,4-二胺(57).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-31(2,5-二氯-N-(4-氟-3-(三氟甲基)苯基)嘧啶-4-胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为4-氟-3-(三氟甲基)苯胺)。Mp177-178℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.61(s,1H),8.19(s,1H),8.05(d,J＝2.8Hz,1H),7.92(d,J＝9.0Hz,1H),7.86(dd,J＝6.0,2.6Hz,1H),7.73–7.70(m,1H),7.21(d,J＝9.3Hz,1H),7.19(dd,J＝9.0,2.8Hz,1H),7.10(s,1H),3.20–3.14(m,4H),2.65–2.59(m,4H),2.38(s,3H)；HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C21H21ClF4N7:482.1478；found:482.1478.
实施例58
目标化合物58的合成：N-(4-((5-氯-2-((5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺(58).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-32(N-(4-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为N-(4-氨基苯基)乙酰胺)。Mp252-253℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.31(s,1H),8.81(s,1H),8.11(s,1H),7.94(d,J＝2.9Hz,1H),7.79(d,J＝9.1Hz,1H),7.62(d,J＝8.9Hz,2H),7.55(d,J＝9.0Hz,2H),7.20(dd,J＝9.1,3.0Hz,1H),3.11–2.99(m,4H),2.48–2.43(m,4H),2.22(s,3H),2.05(s,3H).
实施例59
目标化合物59的合成：N-(3-((5-氯-2-((5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺(59).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-33(N-(3-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为N-(3-氨基苯基)乙酰胺)。Mp220-221℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.19(s,1H),8.94(s,1H),8.16(s,1H),7.95(d,J＝3.0Hz,1H),7.94(s,1H),7.87(d,J＝9.1Hz,1H),7.42(d,J＝7.6Hz,1H),7.32(d,J＝8.2Hz,1H),7.29(d,J＝7.8Hz,1H),7.14(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),3.12–2.99(m,4H),2.49–2.43(m,4H),2.23(s,3H),2.05(s,3H).
实施例60
目标化合物60的合成：N-(2-((5-氯-2-((5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺(60).
实验步骤同实施例1，仅以中间体II-1替换为中间体II-34(N-(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺，实验步骤同II-1，仅以苯胺替换为N-(2-氨基苯基)乙酰胺)。Mp245-246℃；1H NMR(600MHz,cdcl3)δ8.10(s,1H),7.93(d,J＝2.8Hz,1H),7.84(d,J＝9.3Hz,2H),7.75(s,1H),7.74(s,1H),7.67–7.64(m,1H),7.50–7.46(m,1H),7.30–7.27(m,2H),7.09(dd,J＝9.3,2.8Hz,1H),3.17–3.10(m,4H),2.61(s,4H),2.38(s,3H),2.17(s,3H).
实施例61
化合物抗肿瘤活性评价
体外抗肿瘤活性评价采用CCK-8法。肿瘤细胞培养使用含有10％胎牛血清(FBS)的DMEM或RPMI-1640培养基。将对数期的肿瘤细胞接种于96孔板，5000个细胞/孔，培养12-16小时后替换成不同浓度梯度的待测化合物溶液(使用培养基配置)，继续培养48小时后每孔加入10％体积的CCK-8溶液，培养箱中再孵育2小时，测定450nm处的吸光度值，所有实验设3个平行孔并重复3次。激酶活性测试使用Promega公司的ADP-GloTM试剂盒，以上检测结果用SPSS17.0计算IC50值，结果如下表：
Figure GDA0004062406670000241
Figure GDA0004062406670000251
注：“_”表示其IC50＞100μM。
需要说明的是因为测试中加药后的孵育时间为48小时，而palbociclib的抗增殖作用需要更长时间才能表现出来，几种测试细胞在给药浓度100μM时，增值抑制率均小于50％，未测出IC50。同作为阳性对照药的abemaciclib因其靶点专一性不如palbociclib，可能存在更复杂的作用机制，具有更明显的抗增殖和杀细胞作用。
其中优选了化合物59进行了体内活性测试，其对ICR小鼠的急性毒性测试结果为LD50>500mg/kg；体内抗肿瘤测试模型为MDA-MB-231裸鼠荷瘤模型，裸鼠品系为BALB/c-nu，单侧腋下荷瘤，造模成功后，分为5组。每组6只，每天灌胃给药1次，结果如图1和图2所示。结果表明化合物59具有良好的体内抗肿瘤活性同时毒性较低。
体外活性评价显示本发明所述的化合物1-60中多数对人卵巢癌细胞skov-3、ER+/HER-乳腺癌细胞MCF-7，三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231、急性淋巴细胞白血病细胞Jurkat表现出较好的抑制活性，多个化合物表现出较强的对癌细胞的杀伤作用。其中活性较好的43、45、53、59，体外抗肿瘤测试结果明显优于帕博西林(palbociclib)与玻玛西林(abemaciclib)相当，是非常有潜力的抗肿瘤化合物。激酶活性测试表明该系列化合物多数对CDK6有较强抑制作用，部分对CDK9有较强抑制作用，其中59号化合物对CDK6/9双靶点都有较好抑制活性，并且在小鼠荷瘤试验中也表现出较强抗肿瘤活性。另外由实施例可知，该类化合物具有制备方法简单，原料廉价易得，产品纯度高等优点。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (8)

1.一种5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物，其特征在于：所述5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物的如式(I)或式(II)所示：
Figure FDA0004051889560000011
所述R1选自苯基、苄基、苯乙基或呋喃-2-基甲基中的任一种基团；所述R2选自苯环、苄基、苯乙基、吡啶环或呋喃环中的任一种基团；
所述R2’选自苯环或吡啶环；所述R3选自哌啶基、吗啉基或N-甲基哌嗪基中的任一种基团。
2.5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物或其药学上可接受的盐：结构式如下：
Figure FDA0004051889560000012
Figure FDA0004051889560000021
Figure FDA0004051889560000031
Figure FDA0004051889560000041
Figure FDA0004051889560000051
3.如权利要求1所述的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将2,4,5-三氯嘧啶和伯胺在四丁基碘化铵催化下发生亲核取代反应，得中间体(II)；
Figure FDA0004051889560000052
(2)中间体(II)和伯胺经布赫瓦尔德-哈特维希反应，得到结构通式(I)所述的化合物，制得5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物；
Figure FDA0004051889560000061
4.根据权利要求1所述的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物的制备方法，其特征在于：
(1)将2,4,5-三氯嘧啶和伯胺在四丁基碘化铵催化下发生亲核取代反应，得中间体(II)；
Figure FDA0004051889560000062
(2)5-溴-2-硝基吡啶或对溴硝基苯，和哌啶、吗啉或N-甲基哌嗪反应，得硝基化合物，硝基化合物进行加氢反应得到中间体(III)；
Figure FDA0004051889560000063
(3)中间体(II)和中间体(III)经布赫瓦尔德-哈特维希反应，得到结构通式II所述的化合物。
5.如权利要求1所述的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物在制备调控蛋白激酶催化活性制剂中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述蛋白激酶为周期依赖性激酶。
7.如权利要求1所述的5-氯-嘧啶-2,4-二胺类化合物在制备治疗癌症药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述癌症选自乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤或白血病。
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